Micro-dissecção de cérebro de um rato para RNA ou Extração de Proteína da região específica do cérebro

Published 8/30/2007
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Biology

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Summary

Micro dissecção de cérebro de rato em várias regiões é extremamente importante para o estudo de diferentes doenças neurodegenerativas. Este vídeo demonstra dissecção de micro-regiões do cérebro de quatro principais incluem bulbo olfatório, córtex frontal, estriado e hipocampo em tecido fresco de cérebro de rato. Dicas úteis para remoção rápida de respectivas regiões para evitar a degradação de proteínas e RNA do tecido são dadas.

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Chiu, K., Lau, W. M., Lau, H. T., So, K., Chang, R. C. Micro-dissection of Rat Brain for RNA or Protein Extraction from Specific Brain Region. J. Vis. Exp. (7), e269, doi:10.3791/269 (2007).

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Abstract

Micro dissecção de cérebro de rato em várias regiões é extremamente importante para o estudo de diferentes doenças neurodegenerativas. Este vídeo demonstra dissecção de micro-regiões do cérebro de quatro principais incluem bulbo olfatório, córtex frontal, estriado e hipocampo em tecido fresco de cérebro de rato. Dicas úteis para remoção rápida de respectivas regiões para evitar a degradação de proteínas e RNA do tecido são dadas.

Protocol

Passo 1

Sacrificar o rato de acordo com protocolos estabelecidos. Remover o cérebro do crânio e lave-o em gelo frio DEPC tratados água Milli Q para remover qualquer vestígio de sangue de superfície.

Passo 2

Coloque no prato de metal frio. Cortar o cérebro bi meio em hemisfério direito e esquerdo.

01-269_Figure

Figura 1. As posições de corte do ponto de vista medial do hemisfério rato

Passo 3

Recolher o bulbo olfatório logo após o primeiro corte. Flash congelar as amostras em nitrogênio líquido e armazenar a -80 ° C.

269_Figure-02

Figura 2. Dissecção bulbo olfatório

Passo 4

Recolher o córtex frontal direito, após o segundo corte, usando uma lâmina e um Dumont No. 5 fórceps. Flash congelar as amostras em nitrogênio líquido e armazenar a -80 ° C.

269_Figure-03

Figura 3. Dissecção córtex frontal

Passo 5

Recolher o striatum (núcleo caudado) logo após o terceiro corte com a ajuda de duas pinças de Dumont No.5. Flash congelar as amostras em nitrogênio líquido e armazenar a -80 ° C.

269_Figure-04

Figura 4. Estriado dissecção (núcleo caudado)

Passo 6

Para coletar o hipocampo, coloque o lado ventral do cérebro para cima e depois remover mesencéfalo para expor o hipocampo. Dissecar o hipocampo do córtex utilizando duas pinças Dumont No.5. Flash congelar as amostras em nitrogênio líquido e armazenar a -80 ° C.

269_Figure-05

Figura 5. Dissecção hipocampo

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Discussion

Diferentes regiões do cérebro associada com diferentes doenças neurodegenerativas. Por exemplo, córtex frontal e striatum se relacionam com a doença de Parkinson, enquanto o hipocampo se relaciona com a doença de Alzheimer. Micro-dissecção precisa do cérebro que nos permite detectar as alterações mRNA e proteína na região de doentes com mais precisão.

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Disclosures

Os animais foram tratados de acordo com o protocolo para o uso de animais em pesquisa aprovada pelo Comitê sobre o Uso de Animais Vivos em Ensino e Pesquisa (CULATR) na Universidade de Hong Kong e de acordo com os Institutos Nacionais de Saúde diretrizes para uso animal.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Microscope Olympus Corporation
Dissection tools Metal plate, forceps, blade, etc. Individually wrapped with aluminum foil and heated at 180oC for eight hours to eliminate RNase. Made ice cold before use.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Palkovits, M. Maps and guide to micro-dissection of the rat brain. Elsevier. New York. (c.1988).
  2. Swanson, L. W. Brain maps: structure of the rat brain. 3rd revised edition. Elsevier Academic Press. (2004).

Comments

9 Comments

  1. thank u very much. good protocol

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 8, 2009 - 4:37 AM
  2. very nice and great

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 11, 2009 - 1:27 PM
  3. Approximately how much time/rat from sacrifice to remove the frontal cortex and the hippocampus?  Thank you.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 16, 2009 - 10:59 AM
  4. Hi, can be done within 3 minutes. When you practice more, ² minutes will be enough.

    Reply
    Posted by: kin c.
    March 28, 2012 - 9:28 PM
  5. Great, Thanks for your sharing̀²; maybe it's better to have more brain regions to dissect  

    Reply
    Posted by: Anonymous
    April 1, 2009 - 8:47 AM
  6. How dŒs this protocol change if we were to attempting to dissect the striatum of embryonic rats or mice for culture?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 14, 2010 - 1:59 PM
  7. Yeah nicely done. Although I am using mice this seems to work just fine for me as well.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2012 - 6:23 AM
  8. Thanks. I think this is just a demostration that we can dissect the brain into regions. When we deal with different parts, normally we go back to the atlas first (you can use the atlas listed in the reference). Then we try to identify the region in the brain samples.

    Reply
    Posted by: kin c.
    March 28, 2012 - 9:26 PM
  9. Thanks. If we want to isolate some specific nuclei from brain to study them under microscope how we must do that?

    Reply
    Posted by: Jamal E.
    May 8, 2012 - 2:10 PM

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