無傷の感覚器官の前駆細胞の生細胞イメージングショウジョウバエ

Neuroscience
 

Summary

このビデオでは、我々は非対称的に無傷で感覚器官の前駆細胞と表皮細胞を割っての生細胞イメージングのための方法を説明します。

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Zitserman, D., Roegiers, F. Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae. J. Vis. Exp. (51), e2706, doi:10.3791/2706 (2011).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

緑色蛍光タンパク質(GFP)の発見以来、基本的な生物学的メカニズムを理解するためのツールと​​してのライブセルイメージングの利用に革命的な変化があった。印象的な進歩は、その豊富なツールキット変異体とトランスジェニック系統のショウジョウバエ、で特に顕著されている進化的に保存の発達と細胞生物学的メカニズムを研究するのに便利なモデルを提供します。我々はショウジョウバエの成体末梢神経系(PNS)の制御の細胞運命の仕様はカバー頭部、胸部、腹部、脚と成人のハエの羽は、個々のmechanosensory器官であることが剛毛、と検討されていることのメカニズムを理解することも検討されてノッチ依存性細胞の運命決定のメカニズムを理解するためのモデル系として。 microchaetes(または小の毛)の感覚器官の前駆体(SOP)細胞は、蛹の胸部の上皮に分布している、とpupariationの発症後の最初の12時間の間に指定されています。指定の後に、SOP細胞は有糸分裂中に1つの娘細胞へのNumbの細胞の運命決定因子を分離、分割し始める。 Notchシグナル伝達経路の細胞自律的阻害剤としての麻痺の機能。

ここで、我々は、組織特異的Gal4のドライバとGFP -タグ融合タンパク質の1,2の組み合わせを使用して、そのまま蛹の胸郭内SOP細胞とその子孫に蛋白質のダイナミクスを追跡する方法を示しています。この手法は、固定組織上の利点や培養を持っている植それは、私たちは神経前駆体の仕様から成長し、臓器の分化への臓器の全体の開発を追跡することができるため。そこで、直接分化の変化に細胞挙動の変化を相関させることができます。さらに、変異体​​または野生型の条件下で有糸分裂のSOPでタグ付けされたタンパク質のダイナミクスを評価するために、抑制性細胞のマーカー(MARCM)システムでモザイク解析とライブイメージング技術を組み合わせることができます。このテクニックを使用して、我々と他の人は、非対称細胞分裂の調節およびSOPセル(例では、参照1-6,7、8を含む)におけるNotchシグナル伝達活性化の制御に新たな洞察を明らかにした。

Protocol

Discussion

Disclosures

利害の衝突は宣言されません。

Acknowledgements

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Scotch double stick tape
Glass slide
18mmX18mm coverslip
Forceps
Whatman paper
Silicone vacuum grease Dow Corning
5 ml syringe
Pipetter
Confocal or epifluorescence microscope

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Gho, M., Bellaiche, Y., Schweisguth, F. Revisiting the Drosophila microchaete lineage: a novel intrinsically asymmetric cell division generates a glial cell. Development. 126, 3573-3584 (1999).
  2. Roegiers, F., Younger-Shepherd, S., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Two types of asymmetric divisions in the Drosophila sensory organ precursor cell lineage. Nat Cell Biol. 3, 58-67 (2001).
  3. Bellaiche, Y., Gho, M., Kaltschmidt, J. A., Brand, A. H., Schweisguth, F. Frizzled regulates localization of cell-fate determinants and mitotic spindle rotation during asymmetric cell division. Nat Cell Biol. 3, 50-57 (2001).
  4. Emery, G., Knoblich, J. A. Endosome dynamics during development. Curr Opin Cell Biol. 18, 407-415 (2006).
  5. Roegiers, F., Younger-Shepherd, S., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Bazooka is required for localization of determinants and controlling proliferation in the sensory organ precursor cell lineage in Drosophila. Proc Natl Acad Sci U S A. 98, 14469-14474 (2001).
  6. Roegiers, F. Frequent unanticipated alleles of lethal giant larvae in Drosophila second chromosome stocks. Genetics. 182, 407-410 (2009).
  7. Tong, X. Numb independently antagonizes Sanpodo membrane targeting and Notch signaling in Drosophila sensory organ precursor cells. Mol Biol Cell. 21, 802-810 (2010).
  8. Jafar-Nejad, H. Sec15, a Component of the Exocyst, Promotes Notch Signaling during the Asymmetric Division of Drosophila Sensory Organ Precursors. Dev Cell. 9, 351-363 (2005).
  9. Karbowniczek, M. The evolutionarily conserved TSC/Rheb pathway activates Notch in tuberous sclerosis complex and Drosophila external sensory organ development. J Clin Invest. 120, 93-102 (2010).
  10. Coumailleau, F., Furthauer, M., Knoblich, J. A., Gonzalez-Gaitan, M. Directional Delta and Notch trafficking in Sara endosomes during asymmetric cell division. Nature. 458, 1051-1055 (2009).
  11. Emery, G. Asymmetric rab11 endosomes regulate delta recycling and specify cell fate in the Drosophila nervous system. Cell. 122, 763-773 (2005).
  12. Justice, N., Roegiers, F., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Lethal giant larvae acts together with numb in notch inhibition and cell fate specification in the Drosophila adult sensory organ precursor lineage. Curr Biol. 13, 778-783 (2003).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics