Live-Cell-Imaging von Sinnesorgan Vorläuferzellen im Intact Drosophila Puppen

Neuroscience
 

Summary

In diesem Video, beschreiben wir eine Methode für Live Cell Imaging asymmetrisch geteilt Sinnesorgan Vorläuferzellen und epidermalen Zellen in intaktem

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Zitserman, D., Roegiers, F. Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae. J. Vis. Exp. (51), e2706, doi:10.3791/2706 (2011).

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Abstract

Seit der Entdeckung des grün fluoreszierenden Proteins (GFP), hat es eine revolutionäre Veränderung in der Verwendung von live-cell imaging als Werkzeug für das Verständnis grundlegender biologischer Mechanismen. Markante Fortschritte besonders deutlich in Drosophila, deren umfangreiche Toolkit von Mutanten und transgenen Linien bietet eine bequeme Modell evolutionär konservierte Entwicklungs-und zellbiologische Mechanismen zu studieren. Wir sind in das Verständnis der Mechanismen interessiert, die Borsten Kontrolle Zellschicksal Spezifikation in der erwachsenen peripheren Nervensystem (PNS) in Drosophila. Dass decken den Kopf, Brust, Bauch, Beine und Flügel der erwachsenen Fliege einzelnen mechanosensorischen Organe sind, und untersucht worden als Modellsystem für das Verständnis der Mechanismen des Notch-abhängigen Zell-Schicksal treffen. Sinnesorgan Vorstufe (SOP) Zellen des microchaetes (oder kleine Borsten), sind über das Epithel der Puppenstadium Thorax verteilt und werden während der ersten 12 Stunden nach Beginn der pupariation angegeben. Nach Spezifikation, beginnen die SOP-Zellen sich zu teilen, Trennung der Zelle Schicksal Determinante Numb einer Tochter Zelle während der Mitose. Numb fungiert als Zell-autonome Inhibitor des Notch-Signalwegs.

Hier zeigen wir eine Methode, um Protein-Dynamik in SOP Zelle und ihre Nachkommen folgen innerhalb der intakten Puppenstadium Thorax mit einer Kombination aus Gewebe-spezifische Gal4 Treiber und GFP-markierten Fusionsproteine ​​1,2. Diese Technik hat den Vorteil gegenüber fixiertem Gewebe oder kultivierten Explantate, weil es uns um die gesamte Entwicklung eines Organs von der Spezifikation der neuralen Vorläuferzellen zu Wachstum und terminale Differenzierung der Orgel folgen können. Wir können daher direkt korrelieren Veränderungen in Verhalten der Zelle auf Veränderungen in der terminalen Differenzierung. Darüber hinaus können wir die Live-Imaging-Technik mit Mosaik-Analyse kombiniert mit einer repressible Zell-Marker (MARCM)-System, um die Dynamik der markierten Proteine ​​in mitotischen SOPs Beurteilung unter mutierte oder Wildtyp Bedingungen. Mit dieser Technik haben wir und andere neue Erkenntnisse über Regelung der asymmetrischen Zellteilung und die Kontrolle der Notch-Signalweg-Aktivierung in SOP-Zellen (Beispiele enthalten Verweise 1-6,7, 8) ergab.

Protocol

Discussion

Disclosures

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Acknowledgements

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Scotch double stick tape
Glass slide
18mmX18mm coverslip
Forceps
Whatman paper
Silicone vacuum grease Dow Corning
5 ml syringe
Pipetter
Confocal or epifluorescence microscope

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References

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