Live-cellula Imaging di cellule sensoriali Precursore in Organo intatto Drosophila Pupae

Neuroscience
 

Summary

In questo video, si descrive un metodo per l'imaging cellulare dal vivo di dividere asimmetricamente sensoriale cellule progenitrici organo e cellule epidermiche in intatte

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Zitserman, D., Roegiers, F. Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae. J. Vis. Exp. (51), e2706, doi:10.3791/2706 (2011).

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Abstract

Dal momento che la scoperta di una proteina fluorescente verde (GFP), c'è stato un cambiamento rivoluzionario nell'uso di live-cell imaging come uno strumento fondamentale per la comprensione dei meccanismi biologici. Progresso clamoroso è stato particolarmente evidente in Drosophila, il cui vasto kit di strumenti di mutanti e linee transgeniche fornisce un modello utile per lo studio evolutivamente conservato meccanismi di sviluppo e delle cellule biologiche. Siamo interessati a capire i meccanismi che la cellula specifica di controllo destino nell'adulto sistema nervoso periferico (SNP) in Drosophila. Setole che coprono la testa, torace, addome, gambe e le ali della mosca adulti sono singoli organi mechanosensory, e sono stati studiati come sistema modello per la comprensione dei meccanismi delle decisioni cellulare Notch-dipendente destino. Organo sensoriale precursore (SOP), le cellule del microchaetes (o piccole setole), sono distribuiti in tutto l'epitelio del torace pupa, e sono specificati nelle prime 12 ore dopo l'insorgenza della pupariation. Dopo le specifiche, le cellule cominciano a dividersi SOP, segregare il determinante il destino della cellula Numb ad una cellula figlia durante la mitosi. Numb funzioni come una cellula autonoma-inibitore della via di segnalazione Notch.

Qui mostriamo un metodo per seguire la dinamica delle proteine ​​in cellule SOP e la sua progenie all'interno del torace intatto pupa utilizzando una combinazione di tessuto-specifici GAL4 driver e GFP-tagged 1,2 fusione proteine. Questa tecnica ha il vantaggio rispetto tessuto fisso o coltivate espianti perché ci permette di seguire l'intero sviluppo di un organo da specifica del precursore neurale alla crescita e differenziazione terminale dell'organo. Possiamo quindi direttamente correlare i cambiamenti nel comportamento delle cellule ai cambiamenti nella differenziazione terminale. Inoltre, siamo in grado di combinare la tecnica di imaging dal vivo con l'analisi di mosaico con un marker delle cellule reprimibile (MARCM) sistema per valutare la dinamica delle proteine ​​taggato in SOP mitotico in condizioni mutante o di tipo selvatico. Utilizzando questa tecnica, noi e altri hanno messo in luce intuizioni romanzo in regolazione della divisione cellulare asimmetrica e il controllo di attivazione del segnale di Notch nelle cellule SOP (esempi includono riferimenti 1-6,7, 8).

Protocol

Discussion

Disclosures

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Acknowledgements

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Scotch double stick tape
Glass slide
18mmX18mm coverslip
Forceps
Whatman paper
Silicone vacuum grease Dow Corning
5 ml syringe
Pipetter
Confocal or epifluorescence microscope

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References

  1. Gho, M., Bellaiche, Y., Schweisguth, F. Revisiting the Drosophila microchaete lineage: a novel intrinsically asymmetric cell division generates a glial cell. Development. 126, 3573-3584 (1999).
  2. Roegiers, F., Younger-Shepherd, S., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Two types of asymmetric divisions in the Drosophila sensory organ precursor cell lineage. Nat Cell Biol. 3, 58-67 (2001).
  3. Bellaiche, Y., Gho, M., Kaltschmidt, J. A., Brand, A. H., Schweisguth, F. Frizzled regulates localization of cell-fate determinants and mitotic spindle rotation during asymmetric cell division. Nat Cell Biol. 3, 50-57 (2001).
  4. Emery, G., Knoblich, J. A. Endosome dynamics during development. Curr Opin Cell Biol. 18, 407-415 (2006).
  5. Roegiers, F., Younger-Shepherd, S., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Bazooka is required for localization of determinants and controlling proliferation in the sensory organ precursor cell lineage in Drosophila. Proc Natl Acad Sci U S A. 98, 14469-14474 (2001).
  6. Roegiers, F. Frequent unanticipated alleles of lethal giant larvae in Drosophila second chromosome stocks. Genetics. 182, 407-410 (2009).
  7. Tong, X. Numb independently antagonizes Sanpodo membrane targeting and Notch signaling in Drosophila sensory organ precursor cells. Mol Biol Cell. 21, 802-810 (2010).
  8. Jafar-Nejad, H. Sec15, a Component of the Exocyst, Promotes Notch Signaling during the Asymmetric Division of Drosophila Sensory Organ Precursors. Dev Cell. 9, 351-363 (2005).
  9. Karbowniczek, M. The evolutionarily conserved TSC/Rheb pathway activates Notch in tuberous sclerosis complex and Drosophila external sensory organ development. J Clin Invest. 120, 93-102 (2010).
  10. Coumailleau, F., Furthauer, M., Knoblich, J. A., Gonzalez-Gaitan, M. Directional Delta and Notch trafficking in Sara endosomes during asymmetric cell division. Nature. 458, 1051-1055 (2009).
  11. Emery, G. Asymmetric rab11 endosomes regulate delta recycling and specify cell fate in the Drosophila nervous system. Cell. 122, 763-773 (2005).
  12. Justice, N., Roegiers, F., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Lethal giant larvae acts together with numb in notch inhibition and cell fate specification in the Drosophila adult sensory organ precursor lineage. Curr Biol. 13, 778-783 (2003).

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