电解下腔静脉静脉血栓形成的模型(EIM)

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Summary

电解诱导内皮激活的下腔静脉静脉血栓形成类型由于内皮细胞的活化和局部血液淤滞,魏尔啸的黑社会的两个组成部分的内部表面。

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Diaz, J. A., Wrobleski, S. K., Hawley, A. E., Lucchesi, B. R., Wakefield, T. W., Myers, Jr., D. D. Electrolytic Inferior Vena Cava Model (EIM) of Venous Thrombosis. J. Vis. Exp. (53), e2737, doi:10.3791/2737 (2011).

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Abstract

为了研究血栓形成,血栓形成的决议,并测试潜在的治疗化合物(1)动物模型为下肢深静脉血栓(DVT)的研究中的一个至关重要的作用。目前正在开发利用新的化合物在治疗和预防深静脉血栓形成。潜在的治疗拮抗剂化合物运送到受影响的血栓静脉一直是个问题。在治疗应用中,一个模型,采用局部瘀,始终生成内主要静脉血栓已于日前成立。电解下腔静脉模型(EIM)是允许在连续血流存在血栓形成的深静脉血栓形成的小鼠模型。这个模型允许治疗药物,在接触一个时尚动感的血栓,而且是比其他车型(1)深静脉血栓形成更为敏感。此外,这种血栓模型准确模拟血栓形成的临床情况,是理想的研究静脉内皮细胞激活,白细胞迁移,静脉血栓形成,治疗应用测试(1)。 EIM的模型是技术简单,容易复制,创建一致的血栓大小和允许大样本(即血栓和静脉壁),这是分析的目的所必需的。

Protocol

1。鼠标麻醉程序

  1. 动物从它们的笼子中删除,并放置在手术前麻醉诱导气体感应室在2%异氟醚和100%的氧气流量在每分钟0.5升(蒸发器控制)。
  2. 小鼠镇静麻醉诱导室,室拆除,剃腹腹部与电动快船,或室内保持一毛脱毛如果使用(1分)。
  3. 虽然仍在镇静,他们权衡,眼睛是无菌眼药膏,然后放置在一个温暖的循环水加热装置,在背recumbancy全身麻醉下用鼻子使用异氟醚和氧气锥,润滑。此时氧率降低到每分钟0.2升。
  4. 腹部洗必泰溶液喷洒(洗必泰双乙酸钠是迅速bacterialcidal和持久的),并用无菌纱布擦拭三次,直到手术部位是干净的。

2。鼠标显微手术和恢复过程

  1. 一个腹正中切口(2厘米),是用虹膜剪刀通过皮肤和腹壁,露出腹部。一个无菌生理盐水纱布浸泡的2x2是用来反映动物的左侧肠。鼠标限位到位,使下腔静脉(IVC)的可视化。
  2. 在这一点上,异氟醚减少到2%的维修水平,氧率保持在每分钟0.2升,其余的手术。
  3. 促进使用无菌敷贴拭子和额外的细腻光圈半弧形组织钳钝性分离。在处理鼠标组织,因为他们是极其脆弱的,必须小心。
  4. 所有的下腔静脉侧分支,从肾静脉至髂分叉,与7-0非活性普理灵缝线结扎。回到分支机构保持了专利。
  5. 在电解腔静脉模型(EIM),一个25G的不锈钢针连接到一个镀银铜线(KY - 30 - 1 - GRN,Electrospec,多佛尔港,新泽西州),插入暴露尾鳍下腔静脉(图1)对前壁(阳极)和定位。
  6. 另一条导线植入皮下完成电路(阴极)。
  7. 电流超过15分钟的250μAmps应用草苏昆方波刺激和恒定电流的单位(草技术,一个天文MED公司,西华威,扶轮社)。目前形成电解侵蚀下腔静脉内皮细胞表面,促进凝血的环境和随后的血栓形成的有毒产品的直接结果。
  8. 15分钟后,针被删除,棉签轻轻接触面积,以防止出血举行
  9. 在深水动物,放入下腔静脉针,然后取出,没有当前的应用程序。
  10. 开腹网站是封闭在两层的方式。我们的实验室使用5-0薇乔,合成缝合线,在连续模式,关闭腹壁。胶粘剂皮胶是用来关闭皮肤。有没有外部缝线拆除。
  11. 小鼠,然后在一个单独的鼠笼恢复,密切观察手术后的下一个加热灯(最小距离为24英寸,远离笼子)(45分钟到2小时),然后返回到原来的公屋单位。可以使用止痛药和消炎药,如果它不干预研究的目的。科学理由隐瞒止痛药,兽医学,和ICUCA审批是必要的。我们的实验室已经发现丁丙诺啡,0.05 - 0 .1毫克/公斤SQ是一个极好的前和手术后的小鼠的镇痛。此外,利多卡因在4mg/kg(1%溶​​液0.4毫升/公斤),可在切口部位注入的全身性镇痛药时,可能会混淆实验结果。
  12. 通常,我们没有经历过手术后由于深静脉血栓形成的不良影响。然而,不良的手术后效果可以包括自发死亡麻醉,手术失血,因神经损伤和局部麻痹。正在缓慢复苏的动物,可以喂海狸鼠凝胶或潮湿的议员笼的地板上,以方便动物的恢复。动物切断手术后的并发症,应人道安乐死。
  13. 在指定的时间点,安乐死是人道待遇,在按照安乐死美国兽医医疗协会的准则啮齿类动物中提出的建议。

3。代表性的成果

EIM解决方案是一个模型,在连续血流存在形成血栓。下面的数字显示在这种新颖的模式调查的参数。

图1
图1 definesthe解剖区域在一个25G的不锈钢插入针,连接到一个镀银铜线(KY - 30 - 1 - GRN,Electrospec,多佛尔港,新泽西州)。请注意,一个淋巴结是几乎目前,作为一个具有里程碑意义,有助于找到尾鳍下腔静脉。

图2
图2:在不同菌株的EIM后第2天的血栓重量。正如预期的那样,血栓重量降低PAI - 1的KO小鼠和高凝三角洲CT的小鼠(^ CT)的较大。

图3
图3:可溶性P -选择,深静脉血栓形成的制造商,测量在不同的菌株。被发现在PAI - 1的KO小鼠的最低水平,而最高级别的高凝三角洲CT小鼠。

图4
图4血栓重量和可溶性P -选择在不同菌株之间的相关。值得注意的是,在本集团产生较短的血栓的大小,可溶性P -选择素检测是最低的(PAI - 1的KO小鼠)。在本集团产生最大的血栓大小,可溶性P -选择素检测是最高的(高凝三角洲CT)。

图5
图5:为了证明存在的血流量,超声小鼠进行的EIM执行。图5显示了在鼠标后第2天的EIM进行超声。然后该标本的收获。注意血栓的形状表明,在流动存在血栓形成

Discussion

鼠标是一个优良的研究工具,在体内实验。因此,发展紧密地模仿疾病或病理状态下的小鼠模型,是必要的。几个静脉血栓形成的小鼠模型已被用来研究深静脉血栓形成,包括:光化学(2),瘀(3-4)和机械创伤(5-6)。然而,这些模型都使用内部的内皮细胞的刺激,在连续血流存在产​​生的血栓。 EIM解决方案,下腔静脉内使用电解刺激,促进血液流动的存在的内皮激活(1)静脉血栓形成。这在技术上是简单,容易复制和成活率高(99%)。尽管事实上,用于创建电解电流,不会产生热量(1)。 EIM的模型准确模拟临床深静脉血栓形成,因此,作为一个有价值的工具,用于研究血栓的形成和解决的内在机制服务。 EIM的模型也可用于防止血栓形成疾病的新治疗方法的进步。

Disclosures

没有利益冲突的声明。

Acknowledgments

支持由美国国立卫生研究院1P01HL089407 - 01A1(劳伦斯,PI),动物一个核心,美国国立卫生研究院1 K01 HL080962 - 01A2(迈尔斯,PI)。

Materials

Name Company Catalog Number Comments
DMEM Invitrogen ABCD1234

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References

  1. Diaz, J. A., Hawley, A. E., Alvarado, C. M. Thrombogenesis with continuous blood flow in the inferior vena cava. A novel mouse model. Thromb Haemost. 104, 366-375 (2010).
  2. Eitzman, D. T., Westrick, R. J., Nabel, E. G. Plasminogen activator inhibitor-1 and vitronectin promote vascular thrombosis in mice. Blood. 95, 577-580 (2000).
  3. Myers, D., Farris, D., Hawley, A. Selectins influence thrombosis in a mouse model of experimental deep venous thrombosis. J Surg Res. 108, 212-221 (2002).
  4. Myers, D. D., Hawley, A. E., Farris, D. M. P-selectin and leukocyte microparticles are associated with venous thrombogenesis. J Vasc Surg. 38, 1075-1089 (2003).
  5. Pierangeli, S. S., Barker, J. H., Stikovac, D. Effect of human IgG antiphospholipid antibodies on an in vivo thrombosis model in mice. Thromb Haemost. 71, 670-674 (1994).
  6. Pierangeli, S. S., Liu, X. W., Barker, J. H. Induction of thrombosis in a mouse model by IgG, IgM and IgA immunoglobulins from patients with the antiphospholipid syndrome. Thromb Haemost. 74, 1361-1367 (1995).

Comments

2 Comments

  1. "After 15 minutes, the needle is removed and a cotton swab is held gently in contact with the area to prevent bleeding. "
    How about bleeding in the PAI mice group?

    In sham animals, the needle is placed into the IVC and then removed, without application of the current.
    How many minutes keep the needle in IVC?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 4, 2011 - 3:19 PM
  2. No bleeding was observed in PAI-1 KO mice.
    In order to mimic the experimental group, a needle was placed within the IVC for 15 minutes, without current administration in shams.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 4, 2011 - 3:48 PM

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