सकल सामंजस्य के ऊतक भूतल Tensiometry द्वारा मापन

Bioengineering

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Summary

हम 3 डी ऊतक की तरह समुच्चय के भीतर कोशिकाओं के बीच बंधन ऊर्जा, ऊतक सतह तनाव के रूप में व्याख्या योग्य को मापने की एक विधि का वर्णन करता है. ऊतक सतह तनाव में अंतर करने के लिए फेफड़ों, मांसपेशियों और मस्तिष्क ट्यूमर के invasiveness के साथ सहसंबंधी प्रदर्शन किया गया है, और विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं के बीच स्थानिक संबंधों की स्थापना की मौलिक निर्धारक हैं.

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Butler, C. M., Foty, R. A. Measurement of Aggregate Cohesion by Tissue Surface Tensiometry. J. Vis. Exp. (50), e2739, doi:10.3791/2739 (2011).

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Abstract

कहनेवाला बंधन ऊर्जा के कठोर माप केवल प्रणालियों में thermodynamic के सिद्धांतों में संतुलन पर आधारित विधियों का उपयोग किया जा सकता है. हम ऊतक सतह tensiometry (TST) विशेष रूप से सतह कोशिकाओं के बीच बातचीत से मुक्त ऊर्जा को मापने के लिए विकसित किया है. biophysical TST अंतर्निहित अवधारणाओं के पहले विस्तार 1,2 में वर्णित किया गया है . विधि प्रेक्षण है कि पारस्परिक रूप से एकजुट कोशिकाओं, अगर संस्कृति मिलाते में बनाए रखा है, अनायास समूहों में इकट्ठा करेंगे पर आधारित है. समय के साथ, इन समूहों के दौर क्षेत्रों फार्म का होगा. यह व्यवहार गोलाई तरल सिस्टम के व्यवहार विशेषता mimics. कहनेवाला बाध्यकारी ऊर्जा कस्टम डिजाइन एक ऊतक सतह tensiometer में समानांतर प्लेटों के बीच गोलाकार समुच्चय compressing द्वारा मापा जाता है. एक ही गणितीय समीकरण के लिए एक तरल छोटी बूंद के सतह तनाव को मापने के लिए इस्तेमाल किया 3D ऊतक की तरह गोलाकार समुच्चय के सतह तनाव को मापने के लिए प्रयोग किया जाता है. तरल सतह तनाव के सेलुलर बराबर कहनेवाला बंधन ऊर्जा, या अधिक आम तौर पर, ऊतक cohesivity है. हमारी प्रयोगशाला से पिछले अध्ययनों से पता चला है कि ऊतक सतह तनाव (1) भविष्यवाणी की है कि भ्रूण कोशिकाओं के दो समूहों को एक 1-5 दूसरे के साथ बातचीत, (2) दृढ़ता से ऊतकों की क्षमता 6 biomaterials के साथ बातचीत को प्रभावित कर सकते हैं (3) cadherin आधारित कहनेवाला 7 सामंजस्य की प्रत्यक्ष हेरफेर के माध्यम से न केवल, लेकिन यह भी 8-11 FN और 4 के रूप में महत्वपूर्ण ECM अणुओं) में हेरफेर के द्वारा बदल फेफड़ों के कैंसर के 12, 13 fibrosarcoma, मस्तिष्क 14 ट्यूमर और प्रोस्टेट ट्यूमर के आक्रामक क्षमता के साथ संबद्ध सेल लाइनों 15. इस अनुच्छेद में हम तंत्र, विस्तार spheroids उत्पन्न करने के लिए आवश्यक कदम, tensiometer कक्ष में spheroids लोड, समग्र संपीड़न आरंभ करने के लिए, और विश्लेषण और ऊतक सतह तनाव उत्पन्न माप मान्य वर्णन करेंगे.

Protocol

1. सकल ऊतक सतह तनाव की माप के लिए तैयारी.

पक्षपाती कोशिकाओं के लिए, spheroids या तो फांसी ड्रॉप विधि का उपयोग करके या कोशिकाओं है कि फिर से 1 मिमी टुकड़ों में काट किया जा सकता है की एक सुसंगत पत्रक उत्पन्न करके गठित किया जा सकता है.

फांसी ड्रॉप विधि द्वारा सकल गठन:

  1. पास मिला हुआ पक्षपाती सेल संस्कृतियों 90% संगम हो जाना चाहिए, जिस monolayers पीबीएस के साथ दो बार rinsed चाहिए. अच्छी तरह से draining के बाद, 2 0.05% trypsin 1 मिमी EDTA के mls (100 मिमी प्लेटों के लिए) जोड़ने के लिए, और 37 पर सेते ° सी जब तक कोशिकाओं को अलग. 2 mls का पूरा मध्यम जोड़ने और धीरे से एक 5 मिलीलीटर विंदुक का उपयोग करने के लिए मिश्रण triturate जब तक कोशिकाओं को निलंबन में हैं trypsinization बंद करो. एक 15 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूब कोशिकाओं स्थानांतरण.
  2. एक 10 मिलीग्राम / एमएल DNase शेयर समाधान के 40 μl जोड़ें और आरटी पर 5 मिनट के लिए सेते हैं. भंवर और 5 मिनट के लिए 200 XG संक्षेप में अपकेंद्रित्र.
  3. सतह पर तैरनेवाला त्यागें और गोली के साथ एक मिलीलीटर पूरी तरह से टिशू कल्चर माध्यम धो. दोहराएँ, तो पूरा टिशू कल्चर के माध्यम से 2 mls में resuspend कोशिकाओं.
  4. Hemacytometer, या स्वचालित सेल काउंटर का उपयोग कोशिकाओं की गिनती और 2.5 x 10 6 कोशिकाओं / एमएल एकाग्रता समायोजित.
  5. एक 60 मिमी टिशू कल्चर पकवान और डिश के तल में पीबीएस की 5 mls जगह से ढक्कन हटाएँ. यह एक जलयोजन चैम्बर के रूप में कार्य करेगा.
  6. ढक्कन उलटें और एक 20 μl पिपेट का उपयोग करने के लिए ढक्कन के नीचे पर 10 μl बूँदें जमा. यकीन है कि बूंदों पर्याप्त अलग रखा जाता है ताकि के रूप में नहीं छूने के लिए. यह संभव है पकवान प्रति कम से कम 20 बूँदें जगह.
  7. पीबीएस भर नीचे कक्ष और 37 पर सेते ° सी / 5% सीओ 2 / 95% आर्द्रता पर ढक्कन उलटें की निगरानी, ​​दैनिक बूँदें और सेते हैं जब तक या तो सेल चादरें या समुच्चय का गठन किया है .
  8. एक बार चादरें फार्म, वे दौर नीचे कांच हिलनेवाला को हस्तांतरित किया जा सकता है युक्त बोतल 3 mls का पूरा मध्यम और 37 पर एक मिलाते हुए पानी के स्नान में incubated डिग्री सेल्सियस और spheroids फार्म तक 5% सीओ 2 .

सेल चादर विधि द्वारा सकल गठन:

  1. एकल कक्ष निलंबन तैयार कर रहे हैं के रूप में ऊपर वर्णित है, लेकिन एकाग्रता 1x10 6 कोशिकाओं / एमएल करने के लिए समायोजित है.
  2. 10 मिलीलीटर दौर नीचे बोतल (Belco, Vineland, न्यू जर्सी) के लिए सेल निलंबन के 3 मिलीलीटर स्थानांतरण.
  3. Gyratory पानी स्नान / 37 (नई ब्राउनश्विक वैज्ञानिक, एडीसन, न्यू जर्सी) हिलनेवाला ° सी, 4 के लिए 5% 2 120 rpm पर सीओ बोतल सेते हैं जब तक कोशिकाओं trypsinization से उबरने के लिए.
  4. एक गिलास दौर नीचे अपकेंद्रित्र ट्यूब और 200 एक्स जी पर एक पतली गोली में अपकेंद्रित्र कोशिकाओं स्थानांतरण. एक सुसंगत पत्रक रूपों तक एक और 24 घंटे के लिए सेते हैं.
  5. धीरे संस्कृति ट्यूब ज़ुल्फ़ शीट बेदखल करने के लिए और एक छोटी सी, बाँझ कांच ऊतक संस्कृति डिश में संस्कृति ट्यूब की सामग्री डाल.
  6. माइक्रो नलियां का प्रयोग विभिन्न आकार के टुकड़ों में चादरें कटौती.
  7. 37 ° सी 120 rpm पर gyratory waterbath हिलनेवाला पर 5% 2 से 3 दिनों के लिए सीओ 2 के तहत या जब तक वे गोलाकार हो जाते हैं टुकड़े सेते हैं.

2. कुल सतह तनाव का मापन

  1. ऊतक सतह tensiometer. तंत्र अंजीर में दिखाया गया है. 1 और 2. संपीड़न सेल (3 छवि) के दो कक्षों में से बना है. बाहरी कक्ष (OC) एक 37 डिग्री सेल्सियस परिसंचारी पानी पंप से जुड़ा है, और भीतरी कक्ष (आईसी) के तापमान को विनियमित करने के लिए कार्य करता है. कक्षों milled Delrin का निर्माण कर रहे हैं और कुल के दृश्य के लिए क्वार्ट्ज खिड़कियां होते हैं. 1 करने के लिए भीतरी चैम्बर के आधार में कम विधानसभा शिकंजा (ला) और प्रयोग किया जाता है) की स्थिति भीतरी कक्ष में कुल, 2) भीतरी चैम्बर के नीचे सील;) 3 कुल तरक्की करने के लिए संपीड़न आरंभ, और (4 ) समानांतर प्लेटें और इसलिए कुल के संपीड़न के बीच की दूरी को नियंत्रित. विधानसभा के केंद्रीय कोर (सीसी) समायोज्य है. केंद्रीय कोर (पेडस्टल) की नोक चिकनी Teflon से बना है और कम सम्पीडन प्लेट (LCP) के रूप में कार्य करता है. ऊपरी संपीड़न प्लेट (UCP) एक Teflon 15mm लंबे समय है कि (बी) एक लौ सीधा तार निकल क्रोमियम (NCW) के द्वारा संतुलन हाथ से लटक सिलेंडर है *. एक प्रयोग के दौरान, सेल कुल (ए) कम प्लेट पर तैनात है और उठाया जब तक यह ऊपरी प्लेट संपर्कों. ऊपरी प्लेट संतुलन हाथ (बी) से जुड़ा है. कुल संपीड़न संतुलन हाथ के विस्थापन का कारण बनता है. शेष एक Cahn / Ventron मॉडल 2000 रिकॉर्डिंग electrobalance, जो अशक्त संतुलन के सिद्धांत पर चल रही है. शेष हाथ के आधार एक स्थायी चुंबकीय क्षेत्र के भीतर एक कवच है. जब संतुलन काम कर रहा है, यह लगातार विद्युत विधानसभा है, जो बारी में क्षैतिज स्थिति में संतुलन हाथ रखता है के माध्यम से वर्तमान गुजर modulates. जब एक वस्तु संतुलन हाथ, वोल्टेज, जो संतुलन horizo ​​में हाथ रखने के लिए लागू होता है से निलंबित कर दिया हैntal स्थिति, ऑब्जेक्ट वजन करने के लिए आनुपातिक है. इस वोल्टेज बाहरी compressive कुल के लिए लागू बल के उपाय. कुल आकार एक 25 x Nikon SMZ10A एक फ्रेम धरनेवाला के साथ सुसज्जित एक कंप्यूटर करने के लिए मिलकर स्टिरियोस्कोप के माध्यम से दृश्य प्रेक्षण के द्वारा नजर रखी है. आदेश में सेल समुच्चय के संपीड़न प्लेटें आसंजन कम करने के लिए, दोनों निचले और ऊपरी संपीड़न प्लेटें (2 hydroxyethylmethacrylate) पाली {पाली (हेमा)}, एक polymeric सामग्री के लिए जो कोशिकाओं को 16 का पालन नहीं करते के साथ लेपित रहे थे .
    * तार है लौ सीधा एक मुंहतोड़ जवाब स्टैंड से तार की लंबाई 15 इंच फांसी और अंत करने के लिए एक छोटे से बांधने की मशीन क्लिप clamping के द्वारा. एक Bunsen बर्नर फिर चलाया जाता है और नीचे तार की लंबाई तक तार लाल चमकता है. सीधा तार तो उचित लंबाई में कटौती कर सकते हैं सकता है. एक छोटा सा हुक तार लगभग झुकने ¼ दो रेज़र ब्लेड का उपयोग करते हुए अंत से एक इंच के द्वारा बनाई है. दूसरे छोर तो कम संपीड़न प्लेट की नली में डाला जाता है.
  2. सकल संपीड़न.
    1. भीतरी कक्ष पूर्व गर्म सीओ 2 स्वतंत्र ऊतक संस्कृति मध्यम (Gibco / BRL, NY) के साथ भरा है .
    2. के बारे में 200-300 μ से आकार में लेकर समुच्चय कम संपीड़न प्लेट (4A छवि) पर तैनात हैं. समुच्चय ऊतक पाश्चर विंदुक के टिप के साथ एक सिलिकॉन बल्ब फिट अप संस्कृति के माध्यम आधे मार्ग में एक समग्र aspirating, भीतरी कक्ष में पिपेट स्थानांतरित, और LCP ऊपर पिपेट की नोक स्थिति से भरी हुई हैं. कुल फिर धीरे धीरे बल्ब फैलाएंगे द्वारा LCP पर निष्कासित कर दिया. वैकल्पिक रूप से, कुल LCP पर गंभीरता से गिर करने की अनुमति दी है.
    3. ऊपरी संपीड़न प्लेट (UCP) कुल ऊपर तैनात है और बस, एक पूर्व स्पष्ट UCP वजन आधारभूत संपीड़न की स्थापना की अनुमति दी.
    4. LCP तब तक कुल UCP (4B छवि) के खिलाफ संकुचित है उठाया है. कम तंत्र के भीतरी कोर की ऊंचाई समायोजित संपीड़न के विभिन्न डिग्री को नियंत्रित करेगा. संपीड़न एक विदारक माइक्रोस्कोप के माध्यम से एक सीसीडी वीडियो कैमरा के साथ सुसज्जित अवलोकन द्वारा नजर रखी है.
    5. सकल छवियों पर कब्जा कर लिया, डिजीटल, और ImageJ विश्लेषण का उपयोग कर. स्पष्ट UCP वजन परिवर्तन लगातार एक स्ट्रिप चार्ट रिकार्डर, आकार संतुलन की उपलब्धि Cahn संतुलन वोल्टेज उत्पादन का leveling बंद से चिह्नित किया जा रहा है पर दर्ज है. प्रत्येक कुल 2 संपीड़न के विभिन्न डिग्री के अधीन है.
  3. कुल सतह तनाव की गणना.
    आकृति संतुलन, समानांतर प्लेटें जो इसे का पालन नहीं करता है के बीच संकुचित कोशिकाओं के एक समुच्चय के cohesivity युवा Laplace के समीकरण (छवि 5), जहाँ σ से प्राप्त किया जा सकता है cohesivity है, एफ कुल सेक अभिनय बल है , 3 πr 2 कुल जिस पर बल एफ exerted है की सतह के क्षेत्र में है, और 2 आर और आर 3 रहे हैं, क्रमशः, संकुचित कुल की भूमध्य रेखा की त्रिज्या और इसकी सतह प्रोफ़ाइल सामान्य परिभाषित चाप की त्रिज्या प्लेटें compressing और उन्हें (छवि 6) के बीच विस्तार. आकार और संतुलन बल पर compressive शक्ति और ज्यामिति को मापने और युवा - Laplace के समीकरण को इन मापों आवेदन स्पष्ट ऊतक सतह तनाव के संख्यात्मक मान उत्पन्न करता है. होने पर संतुलन और 1 σ की गणना पर पहुँचने के बाद, समुच्चय decompressed और एक दूसरे संतुलन दृष्टिकोण और σ 2 ऊपर वर्णित के रूप में परिकलित किया जाता है की अनुमति दी हैं.
  4. कुल तरलता की पुष्टि.
    एक तरल कुल गणना की सतह तनाव, जब दो अलग compressions के अधीन स्थिर रहेगा. ऐसे समुच्चय का अनुपात 2 σ / σ 1 1 के बराबर किया जाएगा और प्रत्येक उत्तरोत्तर संपीड़न (2 / एफ एफ 1) पर लागू बल के अनुपात की तुलना में कम हो जाएगा. इसके विपरीत, एक लोचदार कुल गणना की सतह तनाव Hooke के कानून का पालन और लागू मजबूर करने के लिए अनुपात में वृद्धि करेंगे. लोचदार समुच्चय का अनुपात 2 σ / σ 1 1 के बराबर नहीं किया जाएगा लेकिन इसके बजाय एफ / एफ 2 1 के अनुपात दृष्टिकोण होगा. कुल 2,17 आकार के समुच्चय के तरल सतह तनाव भी स्वतंत्र हो जाएगा. केवल माप जिसमें सतह तनाव लागू शक्ति और आकार के स्वतंत्र है प्रत्येक कोशिका लाइन के लिए औसत σ की गणना करने के लिए किया जाता है.

3. प्रतिनिधि परिणाम:

नीचे चूहा प्रोस्टेट (आरपीएफ) fibroblasts और चूहा प्रोस्टेट चिकनी मांसपेशी कोशिकाओं (RPSMC) के समुच्चय के लिए विशिष्ट TST परिणामों की एक टेबल है. जैसा कि चित्र में देखा जा सकता है है. आरपीएफ कोशिकाओं के 7 समुच्चय 22.8 के एक सतह तनाव ± 1.1 dynes / सेमी है. इसके अलावा, मतलब सतह तनाव संपीड़न के बाद 1 और 2 संपीड़न के बाद मापा मूल्यों सांख्यिकीय अध्यक्ष थेराजनैतिक जब एक बनती टी - परीक्षण द्वारा की तुलना में. हम भी σ 2 / 1 और एफ 2 / एफ 1 σ के लिए सुनिश्चित करें कि इन समुच्चय Hooke के कानून का पालन नहीं किया, जैसा कि वे अगर वे लोचदार ठोस के रूप में व्यवहार के अनुपात की तुलना में. जैसा कि तालिका 1, 2 σ / 1 वास्तव में 1.0 दृष्टिकोण करता है σ के अनुपात में प्रदर्शन किया . इसके अलावा, एफ / 2 एफ 1 के अनुपात काफी अधिक से अधिक 2 σ / 1 σ (टी - परीक्षण, पी <0.05 बनती) था, आगे की पुष्टि है कि इन समुच्चय Hooke के कानून का पालन नहीं करते हैं और तरल पदार्थ के रूप में वास्तव में व्यवहार. इसके विपरीत RPSMCs में Hooke कानून का पालन. जैसा कि तालिका 1, 2 σ / 1 σ के अनुपात में स्पष्ट है 1 से काफी अधिक है और सांख्यिकीय एफ / एफ 2 1 के से अलग नहीं था . आगे तरल की तरह व्यवहार प्रदर्शित करने के लिए, हम सतह (σ) तनाव और कुल मात्रा के बीच संबंध का पता लगाया. जैसा कि चित्र में देखा जा सकता है है. 8, मात्रा आरपीएफ कोशिकाओं (लाल प्रतिगमन लाइन, r 2 = 0.002) के लिए सिग्मा के स्वतंत्र है, जबकि वहाँ RPSMCs (नीला प्रतिगमन लाइन, r 2 = 0.146) के लिए मात्रा पर सिग्मा के कुछ निर्भरता प्रतीत होता है. ये डेटा आगे पुष्टि करते हैं कि आरपीएफ समुच्चय तरल की तरह एक तरीके से व्यवहार करते हैं, जबकि RPSMCs के उन लोचदार ठोस के रूप में अधिक व्यवहार दिखाई देते हैं. केवल उन तरल पदार्थ के रूप में बर्ताव समुच्चय से प्राप्त mesurements सतह के तनाव की गणना के लिए इस्तेमाल किया जाएगा.

चित्रा 1
चित्रा 1 ऊतक सतह tensiometer के अवलोकन.

चित्रा 2
चित्रा 2 tensiometer कक्ष (सही पैनल) के एक अधिक विस्तृत दृश्य.

चित्रा 3
चित्रा 3. Tensiometer चैम्बर के योजनाबद्ध दृश्य.

चित्रा 4
चित्रा 4 असम्पीडित (ए) और संकुचित (बी) समुच्चय की छवियाँ.

चित्रा 5
चित्रा 5 Laplace समीकरण.

चित्रा 6
चित्रा 6 दो समानांतर आकार संतुलन पर जो यह खराब प्लेटें पालन करता है, के बीच एक तरल संकुचित छोटी बूंद के आरेख. 1 आर और आर 2 वक्रता के दो प्राथमिक radii हैं, छोटी बूंद भूमध्य रेखा पर और समरूपता के अपनी धुरी के माध्यम से एक विमान में क्रमशः. 3 आर या तो सम्पीडन की थाली के साथ संपर्क में छोटी बूंद के परिपत्र क्षेत्र की त्रिज्या है. एच ऊपरी और निचले संपीड़न प्लेटों के बीच की दूरी है. एक्स कर्ण आर के साथ एक सही - angled त्रिकोण के एक पक्ष है 2 छोटी बूंद सतह और भी संपीड़न प्लेट के बीच संपर्क का एक बिंदु करने के लिए विस्तार .

1 (/ dynes सेमी ± SEM) σ 2 σ (/ dynes सेमी ± SEM) 1 बनाम 2 σ 1,2 (dynes सेमी / ± SEM) σ σ 2 / 1 σ एफ / 2 1 एफ 1 / 2 σ और एफ एफ 1 2
आरपीएफ 22.6 ± 1.7 22.9 ± 1.4 0.05> * 22.8 ± 1.1 1.04 ± 0.04 1.47 ± 0.06 <0.05
RPSMC 15.0 ± 2.8 23.0 ± 3.2 0.039 NA 1.9 ± 0.3 1.6 ± 0.1 0.16 *

7 चित्रा TST माप और चूहा प्रोस्टेट fibroblasts और चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं के समुच्चय के लिए कुल तरलता की पुष्टि. .

8 चित्रा
8 चित्रा सिग्मा और आरपीएफ के समुच्चय के लिए मात्रा (लाल रेखा) और RPSMCs (नीली रेखा) के बीच संबंध .

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Discussion

TST द्वारा कुल सामंजस्य माप अपेक्षाकृत सरल है. वहाँ रहे हैं, तथापि, महत्वपूर्ण कदम है कि आदेश में महारत हासिल useable TST डेटा उत्पन्न होना चाहिए;) 1 समुच्चय "" स्वस्थ होना चाहिए. यह सुनिश्चित करना है कि कुल गठन कोशिकाओं है कि इष्टतम टुकड़ी के लिए पहले संगम पर हैं के साथ शुरू होता है द्वारा नियंत्रित किया जा सकता है. सकल आकार और संस्कृति में समय भी कुल भीतर परिगलित कोर के विकास को कम करने के लिए नियंत्रित होना चाहिए;) 2 एक अन्य पैरामीटर है कि TST माप प्रभावित कर सकते हैं कुल के आसंजन के ऊपरी या निचले संपीड़न प्लेटें डिग्री है. तदनुसार, पाली - हेमा के इष्टतम एकाग्रता कोट करने के लिए इस्तेमाल किया प्लेटें empirically कुल के प्रत्येक प्रकार के लिए निर्धारित किया जाना चाहिए; 3) जबकि यह बेहतर है कि पूर्व संपीड़न समुच्चय के रूप में संभव के रूप में गोलाकार होना चाहिए, यह सख्ती से आवश्यक नहीं है. कुछ समुच्चय, विशेष रूप से है कि एक साथ आयोजित कर रहे हैं कमजोर लोगों के लिए एकदम सही क्षेत्रों फार्म नहीं करते हैं. इस के लिए विवरण है कि क्रम में चलती है और पुनः - व्यवस्था द्वारा दौर पूरी तरह से कोशिकाओं के लिए ऊर्जा व्यय करना होगा. यदि ऊर्जा की राशि के एक क्षेत्र में दौर गोलाकार बनने की ऊर्जा न्यूनतम से अधिक की आवश्यकता है, समुच्चय कुछ उप गोलाकार आकृति में दुकान करते हैं जाएगा. हमारे अनुभव में, संकुचित बनने पर ऐसे समुच्चय, एक हद तक compressive बल का विरोध है कि समग्र रूप अर्द्ध हलकों, बिल्कुल के रूप में वे अगर एक आदर्श क्षेत्र से शुरू करना चाहते हैं के पक्ष;) 4 यह भी महत्वपूर्ण है कि संपीड़न प्लेटें एक दूसरे के समानांतर हैं. यह सबसे अच्छा सुनिश्चित करना है कि तार निकल क्रोमियम सीधे और साधन स्तर और साहुल है कि द्वारा पूरा किया है. यदि इन उपायों का पालन कर रहे हैं, ऊतक सतह tensiometry अपेक्षाकृत सरल है और ऊतकों और अपने अंतर्निहित आणविक निर्धारकों के यांत्रिक गुणों पर बहुत उपयोगी जानकारी उत्पन्न कर सकते हैं.

कुल सामंजस्य मौजूद मापने के लिए अन्य तरीकों, कुछ है कि Cahn electrobalance जैसे विशेष उपकरणों के लिए समाप्त करने की जरूरत है. ऐसा ही एक तरीका उपगोल की तुलना में बहुत छोटे व्यास के एक विंदुक में एक निरंतर चूषण दबाव के साथ एक उपगोल, रेस्पायरेट्रस. ऊतक के viscoelastic गुण तनाव की भिन्नता से deduced सेलुलर सामग्री के रूप में यह 18 विंदुक अंदर बहती की लंबाई में परिवर्तन को मापने के द्वारा कर रहे हैं. उपयोगी हालांकि, इस विधि की सतह तनाव है जो में इसे लागू किया जा सकता है की सीमा के रूप में सीमाओं को हो सकता है. बहुत कमजोर समुच्चय की संभावना के रूप में वे विंदुक में से aspirated हैं, समुच्चय है कि एक साथ आयोजित की जाती हैं जबकि बहुत दृढ़ता से सभी पर नहीं किया जा aspirated हो सकता है नष्ट कर दिया जाएगा. समानांतर थाली सम्पीडन की सतह तनाव कम के रूप में मापा गया है .33 के रूप में ± 0.02 / zebrafish रोगाणु परत बाह्य त्वक स्तर के लिए dynes सेमी ई cadherin morpholino 3 के साथ के रूप में 20.1 ± 0.5 / dynes भ्रूण लड़की अंग कली mesoderm 2 का समुच्चय के लिए सेमी के रूप में उच्च के रूप में इलाज, अपने प्रदर्शन कई भ्रूणीय प्रणालियों के लिए एक व्यापक सामंजस्य सीमा पर सामान्य उपयोगिता.

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Disclosures

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
water bath/shaker New Brunswick Scientific
10 ml round-bottom flasks Bellco Glass

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References

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