Abstract
PTMScan Technology ® de Señalización Celular Tecnología (CCT) combina metodologías propias para el enriquecimiento de péptidos basados en anticuerpos con el líquido de espectrometría de masas en tándem de cromatografía (LC-MS/MS) con el perfil cuantitativo modificaciones post-traduccionales (PTM), tales como la fosforilación (PhosphoScan ®) , ubiquitinación (UbiScan ®) y la acetilación (AcetylScan ®).
PTMScan ® Technology emplea CST ™ Anticuerpos adorno para separar grupos predefinidos de postraduccionalmente péptidos modificados a partir de péptidos modificados en extractos de células digieren. Esta técnica de purificación de inmunoafinidad se combina con LC-MS/MS para identificar y cuantificar los cambios en la abundancia de péptidos modificados. Anticuerpos motivo están disponibles para unirse específicamente fosfo (Tyr, Ser, Thr)-péptidos, los péptidos acetilados, o péptidos ubiquitina-etiquetados, lo que permite la elaboración de perfiles cuantitativos del estado de fosforilación, acetilación, o ubiquitinación de la célula.
MAPK, mTOR y las vías de señalización PI3K/Akt son las principales rutas de abajo activa de tirosina quinasas del receptor oncogénicos (RTK). Todas estas vías activar AGC miembros de la familia quinasa, incluyendo Akt, RSK y p70 quinasa S6, cuya proteína sustratos son fosforilados en el RxRxxS / T motivo.
En un reciente estudio elaborado por científicos phosphoproteomic en CST (Sci. señal (2010) 24, 3 (136):. Ra64), más de 300 sustratos putativo de estas quinasas de la familia AGC fueron identificados en tres líneas celulares, cada uno conducido por cualquiera de EGFR, c-Met, o PDGFR. El método experimental empleado PhosphoScan Technology ® con el RxRxxS / Motivo de anticuerpos T como un reactivo de afinidad selectiva immunoprecipitate sustratos fosforilados de Akt, RSK y p70 quinasa S6. El uso de medicamentos contra el cáncer con inhibidores específicos de PI3K, mTOR, MEK y permitido para el mapeo de la red de señalización aguas abajo de estos RTKs. Los sustratos las proteínas que participan en muchas funciones celulares, incluyendo andamios, estabilidad de las proteínas, el metabolismo, el tráfico y la movilidad.
