眼疾患モデルを確立するための硝子体内注射

Biology

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Summary

硝子体内注射、眼の疾患のためのまたは局所治療の直接的な応用として、視覚科学の研究に広く使用されている技術です。このビデオでは、ガラスピペットで1ミリリットル注射器を使用して硝子体内注射のためのプロトコルを示した。大量出血し、レンズの損傷を避けることについての有用なヒントが与えられている。

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Chiu, K., Chang, R. C., So, K. Intravitreous Injection for Establishing Ocular Diseases Model. J. Vis. Exp. (8), e313, doi:10.3791/313 (2007).

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Abstract

硝子体内注射は、視覚科学の研究に広く使用されている技術です。それは、眼疾患、または局所治療の直接的な応用として動物モデルを確立するために使用することができます。このビデオでは、硝子体内注射の手順を完了するためのシンプルで安価なツールを使用する方法を紹介します。 、代わりにhemiltonシリンジの、1 mlの注射器の使用が使用されます。実用的な完璧なヒントをガラスピペットを用いて適切な注射針を作る方法のヒント、そしてどのように簡単にしっかりと一緒にガラスピペットと注射針を接続するためには、与えられている。

良い硝子の注入を行うために、観察される3つの側面があります:1)注射部位は、網膜の構造を破壊しないでください。2)出血は、感染のリスクを減らすために避けるべきである、3)レンズは、外傷性白内障を避けるために触れられすべきである。簡単に言えば、最も重要なポイントは、通常の眼の構造の中断を減らすことです。網膜の中断を避けるために、ラットの眼の優れた鼻の領域が選択されまし​​た。また、針の穿刺のポイントは、ラットの眼の角膜輪部地域から約1.5 mmであるパー​​平面、にあった。硝子体の少量を穏やかに注入する前に眼圧を軽減するために穿刺孔から押し出される。 45 °の射出角と、それはこのように、レンチキュラー要因から関連する合併症と影響を避け、ラッ​​トの眼の外傷性白内障が発生する可能性が低くなります。この操作では、結膜や眼筋のないカット、出血はありませんでした。迅速で軽傷で、成功した硝子体内注入は数分で行うことができます。

注入この特定のプロトコルに記載されている設定は、硝子体内注射のための固有のものです。しかし、ここで紹介する方法および材料はまた、脳、脊髄または小型哺乳類の他の臓器への薬物送達における他の注射の手順については、使用することができます。

Protocol

  1. ピペットプラーを使用してガラスピペットを準備し、1ミリリットル注射器に接続し、パラフィルムで接続をシール。ピペットの先端に溶液2 mlを撤回し、注射の準備をする。
  2. ケタミン(80mg/kg)とキシラジン(8mg/kg)(2:1体積比)の腹腔内注射によってラットをAnaesthetize。
  3. 硝子体内注射の前に局所麻酔薬としてラットの眼に0.5%alcaineの一滴を適用します。
  4. ラットを配置し、眼の優れた鼻の領域を公開する。
  5. 優れた鼻強膜はパープラナのレベルでの穿刺に30ゲージの針を使用してください。眼の筋肉や血管に触れないようにしてください。
  6. 後房からの穿刺孔から硝子体の少量を取り除くために眼球穏やかな圧力を与える。
  7. 硝子体内に強膜を介して45 °の角度で穿刺孔を介してガラスピペットの先端を挿入します。後チャンバーに溶液2 mlを注入し、数秒程度の場所に保管して、そっと針を取り除く。レンズや眼内血管に触れないようにしてください。
  8. 硝子体内注射後、感染を防ぐために、ラットの目に点眼Tobrexの軟膏を塗る。

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Discussion

良い硝子注射は、動物モデルだけでなく、直接眼の治療を確立するのに便利です。最初に、注射部位は、網膜の構造を破壊するではありません。第二に、出血、感染のリスクを減らすために避けるべきである。第三に、レンズは、外傷性白内障を避けるために触れられすべきである。最も重要なのは、通常の眼の構造の中断を減らすことです。

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Disclosures

動物は、ビジョンと眼科文で、香港の大学の教育と研究に生きている動物の使用(CULATR)に委員会で承認された研究における動物の使用と研究のための協会のためのプロトコルに従って処理されていました眼科とビジョン研究における動物の使用。

Acknowledgements

この研究室で緑内障の研究は、アメリカの健康アシスタント財団からの国立緑内障の研究によってサポートされています。

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Operating Microscope Olympus Corporation OME
Glass Pipettes World Precision Instruments, Inc.
Pipette Puller David Kopf Instruments
1ml syringes single use
30G needles single use
Ketamine Aldasan anesthetic
Xylazine Aldasan anesthetic
Alcaine Alcon 0.5% proparacaine hydrochloride
Tobrex Alcon ointment, 3% tobramyxin.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Chiu, K., Lam, T. T., Ying Ku, W. W., Caprioli, J., Kwong Kwong, J. M. Calpain and N-methyl-d-aspartate (NMDA)-induced excitotoxicity in rat retinas. Brain Research. 1046, 207-215 (2005).
  2. Fisher, D., Pavlidis, M., Thanos, S. Cataractogenic lens injury prevents traumatic ganglion cell death and promotes axonal regeneration both in vivo and in culture. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41, 3943-3954 (2000).
  3. Ji, J. -Z., Elyaman, W., Yip, H. K., Lee, V. W. H., Yick, L. -W., Hugon, J., So, K. -F. CNTF promotes survival of retinal ganglion cells after induction of ocular hypertension in rats: the possible involvement of STAT3 pathway. European Journal of Neuroscience. 19, 265-272 (2004).
  4. Lam, T. T., Abler, A. S., Kwong, J. M. K., Tso, M. O. M. N-Methyl-D-Aspartate (NMDA)-Induced Apoptosis in Rat Retina. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 40, 2391-2397 (1999).

Comments

16 Comments

  1. Hello ma'am,
    Video is really good.
    i want to ask the folll questions:
    1. After how much time interval we can do intravitreal injection
    ². what dose should be ideally given?
    3. How much vitreous is present in rat?
    As in few papers they have gven 60 microlitre and in some 1²0 microlitre of vitreous is present in rat.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 9, 2010 - 3:36 AM
  2. 1. Normally we do not do multiple injections. I believe time interval
    depends on your experiment design. However, frequent injections will
    lead to higher infection rate and there will be leaking of the
    vitreous.
    ². If you mean volume, I give ² microliter. This is the volume will
    not affect the IOP. About the dose you want to give, that depends on
    the concentration of the drug.
    3. I am not sure about the posterior chamber size of rats, but for
    sure more than 5 microliter injection will result in sudden increase
    in IOP and the outflow of the drug.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 25, 2010 - 10:02 PM
  3. Dear Madam,
    I would like to ask if this protocal is feasible in feline or rabit and whether this intravitreous injection can be used to establish a retinal detachment model for further trials of certain medical devices or drugs?
    Thank you.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 6, 2011 - 12:30 AM
  4. Hi, I believe this method is feasible in feline or rabbit. Dependents on the position and deepth of the injection site, you can use this method to establish the retinal detachment model.
    Good luck.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 6, 2011 - 9:07 PM
  5. Dear Madam,
    Thank you for your prompt reply, and a further question is how is the time for the retina to reattached after performing this procedure. Could the detached status be maintained for about 10 weeks?
    Thanks again sincerely,
    LS

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 7, 2011 - 2:07 AM
  6. Sorry that I just see your question today. I think that you need to do the sub- retinal injection instead of an intravitreous injection. The time of detech depends on the amount of solution you injected at the position and also ocular reaction of different animals.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 21, 2011 - 4:22 AM
  7. Hi Madam, I am trying to do intravitreous injection in mice with a 33 gauge needle, thus I am asking you whether it is possible for me acheive this just with this needle, and will 1.5 microlitter increase the IOP in sudden (for mice)? And one more question, are there any side effects when intravitreally inject DMSO as a solvent control?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 21, 2011 - 3:50 AM
  8. Hi, I think 33G needle should be OK for the injection. To avoid sudden increase in IOP, you should release some of the vitrous before the injection, and do the injection nice and slowly for a prolonged duration.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 21, 2011 - 4:28 AM
  9. For the DMSO, I believe you can try different dilution and then analyze the effect. Hope you can find an ideal dilution works well for your drug and do not affect the retinal as a solvent control.
    Good luck.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 21, 2011 - 4:32 AM
  10. Im very appreciated for your suggestion.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 22, 2011 - 1:29 AM
  11. Hi Madam, I am trying to do posterior chamber injections in rats with alpha-chymotrypsin. Do you have any recommended volumes and concentrations? Some papers showed ²0 microliter is an acceptable volume. I just failed the trail.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 30, 2011 - 6:21 AM
  12. Hi, normally I do the intravitrous injection at ² microliter, 3 microliter is the most. I do not want to cause any dramatic changes of the intraocular pressure. As you may know that high ocuar pressure either acute or chronic sustained, will damage the retinal neurons. The concerntration depends on the solubility and toxicity of your drug. Good luck.

    Reply
    Posted by: kin c.
    May 30, 2011 - 9:03 AM
  13. hi madam kin chiu, could you kindly provide me your email address? thanks..

    Reply
    Posted by: ooi y.
    June 30, 2011 - 3:14 PM
  14. hi, it is ckirisli@gmail.com

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 1, 2011 - 3:39 AM
  15. Sir/Mam,

    It would be greatly helpful for my thesis work if i get this protocol and video. This is my email id rupadevim@gmail.com.

    Thanking you with anticipation

    Reply
    Posted by: Rupadevi M.
    March 29, 2014 - 2:50 AM
  16. Hi, thanks for the video...it is really helpful.
    I am trying to do the same injections but in a neonatal mouse. What kind of needle would you recommend for that? And does 1ul injection of the drug sounds reasonable amount to you?
    It would really appreciate if you could please let me know,
    Thanks again.

    Reply
    Posted by: Arpita m.
    June 3, 2014 - 2:05 PM

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