Protein ve hücre Etrafının İki Boyutlu Desenli Yüzeyler Oluşturma

Bioengineering

Your institution must subscribe to JoVE's Bioengineering section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Uzun zincirli altın Alkan tiyoller oluşan Kendinden monte mono tabakaları (SAMs), protein desen ve hücre hapsi oluşumu için iyi tanımlanmış substratları sağlar. Microcontact baskı ile dolgu takip polidimetilsiloksan (PDMS) damga kullanarak hexadecanethiol glikol-sonlandırılır Alkan tiyol monomer damgalı hexadecanethiol bölgede sadece protein ve hücreler adsorbe bir desen üretir.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Johnson, D. M., LaFranzo, N. A., Maurer, J. A. Creating Two-Dimensional Patterned Substrates for Protein and Cell Confinement. J. Vis. Exp. (55), e3164, doi:10.3791/3164 (2011).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Microcontact baskı doğrudan moleküllerin proteinler, 2 DNA'nın, 3 ve silan, 4 benliğin oluşumu da dahil olmak üzere çok sayıda yazdırmak için istihdam edilebilir Microcontact baskı iyi tanımlanmış desenli yüzeylerin oluşturulması için hızlı, yüksek oranda tekrarlanabilir bir yöntem sağlar 1 monte altın uzun zincirli Alkan tiyoller mono tabakaları (SAMs) proteinleri ve hücreleri özel desenler içeren yapışkan ve dirençli bölgelerde sınırlandırmak için basit bir yol sağlar. Bu hapsi hücre morfolojisi kontrol etmek için kullanılan ve bir dizi protein ve hücre biyolojisi soruları incelemek için yararlı olabilir. Burada, biz hücresel çalışmalar için iyi tanımlanmış bir protein kalıplarının oluşturulması için genel bir yöntem açıklayacağız 5 Bu işlemi üç adımdan oluşur: fotolitografi kullanarak desenli ana üretim, bir PDMS damgası oluşturma ve microcontact baskı altın kaplamalı substrat. Bir kez desenli, bu hücre kültürü substratlar hapsetmesi proteinleri ve / veya desen hücreleri (birincil hücreler veya hücre hatları) yeteneğine sahiptir.

Kendinden montajlı tek tabaka kimya protein / hücre desenli yapışkanlı bölgeler ve yapışkan olmayan bölgeler üzerinde tam kontrol sağlar; doğrudan protein damgalama kullanılarak elde edilemez. Hexadecanethiol, microcontact baskı adımda kullanılan uzun zincirli Alkan tiyol, kolayca çözüm protein adsorbe hidrofobik bir yüzey oluşturur. Yüzey baskılı olmayan bölgelerde asfaltlanması için kullanılan glikol-sonlandırılır tiyol, protein adsorpsiyonu dayanıklı ve büyüme bu nedenle hücre bir tek tabaka oluşturur. 6 tiyol Bu monomerler tam destek substrat bölgeleri tanımlamak oldukça yapılandırılmış mono tabakaları üretmek protein adsorpsiyon ve hücre büyümesi. Sonuç olarak, bu yüzeylerin oluşturulması mikroelektronik hücrelerarası davranış 7 çalışmanın geniş bir uygulama yelpazesi için yararlıdır. 8

Tek tabaka kimya diğer türleri trichlorosilanes kullanarak doğrudan cam yüzeylerde desenleri oluşturmak için grup çalışmaları da dahil olmak üzere hücre kültürü çalışmaları için kullanılmış olmasına rağmen, altın Alkan tiyoller oluşan 9 desenli mono tabakaları hazırlamak için düz ileri. Ayrıca, tek tabaka hazırlanması için kullanılan monomerlerin ticari, kullanılabilir istikrarlı ve inert atmosfer altında depolama veya işleme gerek yoktur. Alkan tiyoller hazırlanan Desenli substratlar da hücre hapsi korumak, birkaç kez geri dönüşümlü ve yeniden olabilir. 10

Protocol

1. Desenli Master (Şekil 1) hazırlanması

  1. Merkezi Silikon spin-lak gofret gofret ve Tablo 1'de iki zamanlı spin programının ilk adımı sırasında aseton ile durulayın. Aseton, temiz, kuru bir gofret terk spin programının ikinci adımı sırasında buharlaşır.
  2. Yaklaşık 1 ml uygulayın AZ9245 Tablo 1'de açıklanan şartlar kullanarak gofret ve spin-kat fotorezist / (çapı).
  3. Yumuşak fırında 110 fotorezist kaplı gofret ° C yüksek bir tekdüzelik ocak kullanarak 2 m.
  4. Photopattern ya doğrudan yazma fotolitografi sistemi ya da bir maske hizalama sistemi ve uygun maske kullanarak substrat. Maskeler bir dizi ticari kaynaklardan satın alınabilir. Ayrıca, optik bir düz bantlanmış UV emici mürekkep ile basılmış saydamlar büyük özellikleri ile kalıplarını üretmek için kullanılıyor olabilir.
  5. 1 m 45 s yavaşça sallanarak yarı-iletken sınıfı deiyonize su: 01:02 400K geliştirici desenli gofret geliştirin. Yarı-iletken sınıfı deiyonize su ve azot (N 2) gaz akışı kuru ile iyice durulayın. Desen geliştirme UV filtresi ile bir mikroskop kullanılarak kontrol edilebilir. Desen tam gelişmiş değilse, gofret, ek süre için gelişmekte olan çözüm iade edilebilir.

Not: En iyi sonuç için, temiz bir ortamda photopatterning yürütülen olmalıdır.

2. PDMS Damga hazırlanması (Şekil 2)

  1. 10:1 kilo reçine sertleştirici karışım hazırlayın: Sylgard 182 (PDMS) ve tamamen tek bir petri karışımı ile master (photopatterned gofret) kapsayacak.
  2. De-gaz PDMS kaplı kabarcıklar görülebilir ve damga 1,5 saat boyunca 65 ° C'de fırında tedavisi için izin kadar usta bir vakum desikatöre Kür için, önce ana çanak alt yüzeyi de gazla adım sırasında artabilir emin olun önemlidir.
  3. Ana dışarı damga PDMS kesin ve uygun boyutu ile düzeltin. Pul, toz ve enkaz korumak için kapalı bir kap (up özelliği tarafı) saklayın.

3. Desenli Altın Yüzey Hazırlama (Şekil 3)

  1. No 25 mm hazırlayın. 10 m. oksijen plazma ile onları tedavi için 1 yuvarlak cam metal birikimi lamelleri N 2 gaz akışı ile her adım arasında kurutma, etanol ile iki kez 18.2 M deiyonize su ile iki kez durulayın.
  2. Elektron demeti biriktirme sistemi kullanarak bir çok cep 150 Å altın, mevduat 50 Å titanyum izledi. Titanyum tabakası birikimi ve altın tabakası arasındaki evaporatör havalandırma etmeyin. Alternatif olarak, altın kaplı lamelleri bir tedarikçi çeşitli satın alınabilir, ancak, metal katmanlar, elektron ışını, buharlaşma ve termal değil buharlaşma tarafından hazırlanan olduğu önemlidir. Kullanmadan önce 11: dışında bir kaynaktan satın aldıysanız, altın substratlar plazma oksidasyon veya "piranha" (% 30 H 2 O 2 07:03 Conc H 2 SO 4) tarafından temizlenebilir olabilir.

Not: "Piranha" çözüm organik bileşiklerin varlığını patlayıcı.

  1. Damgalama çözüm, mutlak etanol içinde 10 mM hexadecanethiol, ve dolgu çözüm, mutlak etanol içinde 1 mM glikol sonlandırılmış tiyol hazırlayın.
  2. Etanol ile damga N 2 gazı ile durulayın ve iyice kurulayın. Tamamen kaplı kadar PDMS damga damla damla çözüm damgalama uygulayın. N 2 gaz damga ile iyice kurulayın. 5a ve 5b PDMS damga özelliklerine göre uygun olarak devam edin.
    1. Altın yüzey üzerine hafifçe damga basın ve tek tabaka oluşturmak için izin vermek için 15 sn
    2. Yüzey batık sağlanması, altın substrat 18.2 M deiyonize su içeren bir petri kaplarına yerleştirin. Altın yüzey üzerine hafifçe damga basın ve tek tabaka oluşturmak için izin vermek için 15 sn
  3. N 2 gazı ile kurutma, her yıkayın ve bir petri substrat yerleştirdikten sonra etanol ile damgalı yüzey iki kez durulayın .
  4. Çözüm dolgu Kapak Yüzey ve buharlaşmasını önlemek için parafilm çanak mühür.
  5. Arka plan tek tabaka, 12-14 saat süreyle karanlıkta form izin ver
  6. Dolgu çözüm desenli lamel çıkarın ve her durulama sonra N 2 gazı ile kurutma, etanol ile iki defa yıkayınız .

4. Desenli Yüzey Protein ve Hücreler uygulanması

  1. 500 mcL 1 Dulbecco'nun Fosfat ml ile küçük bir petri veya hücre kültür odası ve kapak desenli lamel Place (DPBS) Tuzlu Tamponlu. DPBS tamamen hatta protein kapsamı sağlamak için protein inkübasyon sırasında yüzey kapsamalıdır.
  2. DPBS protein konsantre bir çözüm ekleyin ve boru çözüm karıştırmakting birkaç kez. Yüzey protein karışımı 37 ° C'de için 1 saat Final laminin ve fibronektin konsantrasyonu tipik olarak sırasıyla 12 mcg / mL ve 20 mcg / ml. Protein kolay desen görünüm için izin amin reaktif floresan boya ile etiketli olabilir. Ancak, protein etiketli, etiketsiz protein ile protein etiketleme 01:01 biyolojik aktivite ile müdahale karıştırılmalıdır.
  3. Inkübasyondan sonra, Yüzey kuru veya hava-su arayüzü üzerinden getirmek için özen bağlanmamış protein kaldırmak için DPBS (4 5x) ile yüzey iyice durulayın. Ilk üç durular sonra, ıslak bir zemin korumak için tam bir hücre büyümesi medya yaklaşık 500 mcL ekleyin.
  4. Taze medya ile yüzey durulama için kullanılan büyüme ortamı değiştirin.
  5. Ilgimiz yüzeye kaplama için hücreleri saymak. CHO-K1 hücreleri gibi hipokampal nöron, ya da hücre hatları ölümsüzleştirdi Ya ayrışmış, birincil hücreler kullanılabilir.
  6. Plaka ayrışmış hücreler yüzeye. Genellikle 30 ila 200 hücre / mm 2 kullanılır.

5. Temsilcisi Sonuçlar:

Şekil 1
Şekil 1 desenli ana fotolitografik hazırlanması için genel şematik. Bu süreçte, bir silikon yonga, aseton ile temizlenir, ilgi desen maruz fotorezist ile kaplı ve model geliştirilmiştir.

Şekil 2
Şekil 2 PDMS pul hazırlanması için Genel şematik. Bu süreçte, desenli ana Sylgard (10:1 reçine sertleştirici) ile kaplıdır, 60 yaşında bir fırın tedavi bir vakum desikatörde ° C de gaz verilerek ve büyüklüğüne göre kesilmemiş.

Şekil 3
Şekil 3 substrat desenlendirme için genel şematik. Bu süreçte, cam yüzeyler bir elektron ışını glikol sonlandırılır Alkan tiyoller yeniden toprakla PDMS damga kullanarak microcontact baskı hexadecanethiol tarafından desenli evaporatör, ve floresan etiketli protein ile kaplı titanyum (50A) ve altın (150A) ile kaplıdır.

Şekil 4
Şekil 4 Desenli ana (A) ve (B) PDMS damga açıklanan yöntemler kullanılarak hazırlanmıştır. Ölçeği bar 100μm.

Şekil 5
Şekil 5 Desenli SAMs AlexaFluor 647 etiketli fibronektin (A) ve CHO-K1 hücre hapsi (B) ile görüntülendi. Ölçeği çubuklar 100 mikron.

Şekil 6
Şekil 6 E18 in vitro 4 gün fare hipokampal nöronlar Desenli laminin numaralı seribaşı. AlexaFluor, 350-konjuge anti-laminin antikor desen görselleştirme (A) için kullanılır ve E18 fare hipokampal nöronlar MitoTracker Red 580 (B) ile boyandı. Ölçeği çubuklar 100 mikron.

Şekil 7
Şekil 7 desenli yüzey hazırlığının potansiyel tuzaklar AlexaFluor fibronektin adsorpsiyon 647-konjuge tarafından görüntülendi. Düzensiz protein adsorpsiyonu (A) Yetersiz karıştırma yol açar. (B) kısmi patten transferi yol açar damgalama sırasında basınç Düzensiz uygulama. (C) damgalama sırasında aşırı basınç çöküşü damga yol açabilir. (D), durulama sırasında hava ile su yüzeyi desenli yüzey Pozlama arka plan protein adsorpsiyonu neden olabilir. Ölçeği çubuklar 100 mikron.

Şekil 8
Şekil 8 - Batık desenlendirme, hava geleneksel microcontact baskı yazdırmak için zor küçük özellikleri ile desen üretebilir. Görüntüler (A) ve (B), aynı desenin farklı bölgelerinde hava aynı PDMS damgası (A) veya deiyonize su (B) ile yazdırılan göstermek. Surround desen (damgası çöküşü önlemeye yardımcı eklendi) 10μm çapında destek hatları (A), ancak resimde gösterildiği gibi küçük nokta özellikleri (B) görmedim. Görülür. Bu hava bu baskı daha geniş özellikler için iyi çalışır, ancak su basarken küçük özelliklere sahip modelleri için gerekli olabilir göstermektedir. Ölçek çubuklar 20 mm.

Devir Hızlandırma Oranı (dev / s) Nihai Hızı (rpm) Zaman (s)
1 500 1000 5
2 3800 3800 30

Tablo 1.İki döngüsü spin program bir silikon yonga üzerinde AZ9245 4,5 mikron kalınlığında kaplama oluşturmak için kullanılır.

Desenli yüzeyler, paslanmaz çeliğin bir ana oluşumu için PDMS pulları hazırlamak için ilk olarak imal edilir (Şekil 1 ve 4A). Ana pulu ters ve ya doğrudan yazma litografi sistemi ya da bir maske hizalama kullanılarak oluşturulur. Gibi AZ9245 olarak olumlu fotorezist, ana üretim için kullanıldığında, karşı kaplı gofret son substrat görünecektir aynı deseni ile ışığa maruz kalmaktadır. Her zaman mümkün olmasa da, PDMS pul ustaları için ideal boy oranı (kalınlığı direnmeye özelliği boyutu) 01:02 olduğu rapor edilmiştir. 13 niteliğine bağlı olarak, 1:40 boy oranları mümkün olduğunu bulduk desen. Burada açıklanan koşullar altında AZ9245 kaplı silikon gofret nominal kalınlığı 4.5 mm ile paslanmaz çeliğin vermek. AZ9245 bu kalınlığı> 100 mm 2 mikron arasında değişen özellikleri ile PDMS ustaları üretmek için kullanılan olabilir bulduk.

PDMS pulları fotorezist (Şekil 2) fabrikasyon ana kullanarak Sylgard 182 (veya Sylgard 184) dökme. Rezist ustaları aynı damga birçok kopyalarını oluşturmak için birden çok kez kullanılabilir. Sertleştirme PDMS sonra, pullar, bir tıraş bıçağı ve damga pulu özelliği yan cam lamel (Şekil 4B) koyarak mikroskop altında görüntülenebilmekte kullanarak ana kaldırılır

Floresan etiketli protein (Şekil 3 ve 5) uygulaması ile görülebilmesi keskin, net protein desen Uygun damgalama sonuçlanır. Alternatif olarak, immünhistokimya hücre sabitleme sonra protein deseni (Şekil 6) görselleştirmek için kullanılıyor olabilir. Hücre büyümesi ölümsüzleştirdi hücre hatları ve birincil hücreler (Şekil 5 ve 6) hem de protein desen de sınırlı.

Bu tekniği kolayca hakim olmakla birlikte, bazı ortak sorunlar ortaya çıkabilir. DPBS konsantre bir protein solüsyonu yeterli karıştırma olmadan protein uygulaması düzensiz protein desenleri (Şekil 7A) yol açabilir. Yanlış damgalama kısmi desen transfer veya damga çöküşü (Şekil 7B-C) yol açabilir. Buna ek olarak, hava adsorbe protein içeren arka planda azalmış direnç (Şekil 7D) neden tek tabaka bozabilir desenli substrat ortaya. Çok küçük (<5 mm) ve yüksek boy oranları oluşan desenler çoğu batık microcontact baskı kullanılmasını gerektirir. Bu prosedürü (3.5b) su (Şekil 8) desen dışında yüzeye yatırma hexadecanethiol önlemek için bir bariyer olarak kullanılan 14

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Litografik PDMS damgası yaratılması için kullanılan ana üretim sorunları çok sayıda ortaya çıkabilir. Yetersiz pozlama muğlak ve belirsiz desenler ve genişlemiş ya da eksik özelliklere karşı kaplı gofret sonuçlarının aşırı maruz kalma dirençli kaplamalı gofret sonuçları. Genel olarak, küçük özelliklere sahip ustaların photopatterning ve gelişme parametreleri geniş optimizasyonu (fotorezist üretici tarafından önerilen parametrelerin dışına) gerektirebilir büyük özelliği boyutları (> 10 mikron) ustaları desen nispeten kolay ve geliştirmek. Üretmek için en zor ustaların büyük ve küçük özellikler birleştirir.

Fabrikasyon bir ustadan PDMS damga 2. bölümünde açıklanan yordamı kullanarak basittir. Ancak, tamamen iki bileşenden Sylgard 182 karıştırmak için dikkat edilmelidir. Arıza bileşenleri tam bir karışım elde etmek için, sertleşmesine mühür ve ana muhtemel imha bir yetersizlik neden olur. Ayrıca, aşırı güç kullandı ya da büküm ayrılması sırasında ortaya çıkan ise PDMS damga ayıran ana paramparça. Ana damga kaldırılması sürecinde sonu gelmez, yine de etanol ile temizlendikten sonra pul kullanmak mümkün olabilir. Ancak, bu damga kusur siteleri ile kalıplarını üretmek.

SAMs PDMS damga kullanarak microcontact baskı, çok yönlü ve birçok uygulama yararlı olsa da, önemli adımları bir dizi başarılı bir protein ve hücre hapsi ulaşmak için takip edilmelidir. Iyi bir protein ve hücre hapsi elde etmek için, termal buharlaşma uygun tek tabaka oluşumu desteği olmayan kaba altın yüzeylere beri altın substratlar, elektron ışını birikimi ile hazırlanmış olmalıdır. Ayrıca, biz nasıl cam substrat, aynı zamanda altın yüzey ve monolayer istikrar kalitesini etkiler, titanyum ve altın birikimi için hazır olduğunu bulduk. , Cam yüzeyler teknikleri, elimizde kaynar metanol, "piranha", 11 ve "şahin" çözüm, 12 plazma oksidasyon tarafından hazırlanan, diğer yöntemler kullanılarak temizlenmelidir lamelleri çok daha üstün lamelleri dahil olmak üzere geniş bir yelpazede kullanarak birikimi temizlenmelidir. Biz, solvent, asit ve baz tabanlı temizleme yöntemleri azalmış temporal istikrar ve artan bir sayıda kusur siteleri ile mono tabakaları verdiğini gözlemledik.

Optimal protein ve hücresel desenleri üretmek için gerekli kesin damgalama tekniği damgalı özellikleri ve damga boy oranı büyüklüğü ve şekline göre değişir. Tipik olarak, her yeni damga tam damgalama tekniği optimize edilmiş ve damgalama tekniği, birkaç denemeden sonra iyileşir olmalıdır. Damgalama sırasında fazla basınç uygulanması, büyük boy oranları (Şekil 7C) içeren pulları ile gerçekleşmesi eğilimli çöküşü, damga yol açacaktır. Alternatif olarak, kısmi desen aktarımı (Şekil 7B) çok az basınç uygulayarak. Bu desen özellikleri biraz değiştirmek için damgalama tekniği yararlanmak da mümkündür. Örneğin, özellikleri biraz zaman ve diğerlerinin daha uzun süreler için damgalama bazı özellikleri boyutları batık microcontact baskı teknikleri kullanılarak azaltılabilir olduğunu bildirmişlerdir. 15 Genellikle hava kabarcıkları damga altındaki tuzak haline boyutu artmış olabilir ki bulduğunuzda batık damgalama yapmak; Ancak, bu tekniğin büyük boy oranları ile birlikte küçük özellikler istenilen en iyi sonucu verebilir.

Kendinden montajlı tek tabaka kimyası ile birlikte microcontact baskı kullanarak pek çok avantajı vardır. Proteinlerin substratlar üzerine doğrudan baskı yaparken, konformasyonel değişiklikler meydana proteinler damgalama işlemi sırasında kurutulur adım atfedilebilecek 16 gösterilmiştir. Bu kuruma adım protein agregasyonu ve protein işlevini etkiler denatürasyon yol açabileceği düşünülmektedir. SAM sistemi, substratlar genellikle hücre kültürü için nasıl hazırlanır aynı tamponlu sulu çözeltisi, substrat proteinleri adsorbe. Buna ek olarak, proteinler microcontact baskı, hücre hapsi, protein dayanıklı arka plan moleküllerin eksikliği nedeniyle uzun süre elde değildir. 17 Buna karşılık, mükemmel hapsi glikol arka plan tek tabaka sağlar. 5 durumlarda kullanımı ya mümkün veya istenmeyen bir altın substrat, trichlorosilane monomerlerin protein ve hücre hapsi için izin vermek yerine kullanılmaktadır olabilir. 9 proteinleri ve hücreleri microcontact baskı güvenmeyin hapsi için yöntemler olmakla birlikte, bu yöntemler olma eğilimindedir daha yoğun emek ve genellikle aynı yüzeylerin büyük sayılar üreten vermeyen biyolojik çalışmalar için gereklidir. 18,19

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Çıkar çatışması ilan etti.

Acknowledgments

Washington Üniversitesi'nde toplu bilgi Bu protokol mümkün kıldı tüm Maurer grubu tanımak istiyoruz. Ulusal Akıl Sağlığı Enstitüsü (1R01MH085495) tarafından bu iş için finansman sağlanır.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Silicon wafer Wafer Reclaim Services 2 inch
Spin coater/hot plate Brewer Science, Inc. Cee 200CB Spin-Bake System
AZ9245 Photoresist Mays Chemical Company 105880034-1160
Direct-write photolithography system Microtech s.r.l. LW325 LaserWriter System
Mask Aligner HTG 3HR
AZ 400K Developer Mays Chemical Company 105880018-1160
Sylgard 182 Silicone Elastomer Kit Dow Corning
25 mm no. 1 round glass coverslips VWR international 16004-310
Plasma Oxidizer Diener Femto
Titanium piecesKamis Incorporated 99.95% pure
Gold pellets Kamis Incorporated 99.999% pure
Electron-beam evaporator Kurt J. Lesker PVD 75 Thin Film Deposition System with electron-beam accessory
Hexadecanethiol Alfa Aesar A11362
1-mercaptoundec-11-yl)tetra(ethyleneglycol) Sigma-Aldrich 674508
Ethanol Pharmco-AAPER 111000200 200 proof, absolute
Parafilm VWR international 52858-000
DPBS VWR international 4500-434 Without calcium and magnesium
Mouse Laminin I VWR international 95036-762
Human Plasma Fibronectin Invitrogen 33016-015
AlexaFluor® 647 carboxylic acid, succinimidyl ester Invitrogen A-20006
MitoTracker Red 580 Invitrogen M22425
AlexaFluor® 350 carboxylic acid, succinimidyl ester Invitrogen A-10168
Anti-laminin antibody Fisher Scientific AB2034MI

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Wilbur, J., Kumar, A., Biebuyck, H., Kim, E., Whitesides, G. Microcontact printing of self-assembled monolayers: Applications in microfabrication. Nanotechnology. 7, 452-457 (1996).
  2. Chang, J., Brewer, G., Wheeler, B. A modified microstamping technique enhances polylysine transfer and neuronal cell patterning. Biomaterials. 24, 2863-2870 (2003).
  3. Lange, S., Benes, V., Kern, D., Horber, J., Bernard, A. Microcontact printing of DNA molecules. Analytical Chemistry. 1641-1647 (2004).
  4. Xia, Y., Mrksich, M., Kim, E., Whitesides, G. Microcontact printing of octadecylsiloxane on the surface of silicon dioxide and its application in microfabrication. J. Am. Chem. Soc. 9576-9577 (1995).
  5. Mrksich, M., Dike, L., Tien, J., Ingber, D., Whitesides, G. Using microcontact printing to pattern the attachment of mammalian cells to self-assembled monolayers of alkanethiolates on transparent films of gold and silver. Experimental Cell Research. 305-313 (1997).
  6. Prime, K. L., Whitesides, G. M. Adsorption of proteins onto surfaces containing end-attached oligo(ethylene oxide) - a model system using self-assembled monolayers. J. Am. Chem. Soc. 115, 10714-10721 (1993).
  7. Raghavan, S., Desai, R., Kwon, Y., Mrksich, M., Chen, C. Micropatterned Dynamically Adhesive Substrates for Cell Migration. Langmuir. 17733-17738 (2010).
  8. Rogers, J., Bao, Z., Baldwin, K., Dodabalapur, A., Crone, B., Raju, V. R., Kuck, V., Katz, H., Amundson, K., Ewing, J. Paper-like electronic displays: Large-area rubber-stamped plastic sheets of electronics and microencapsulated electrophoretic inks. Proc Natl Acad Sci U S A. 98, 4835-4840 (2001).
  9. Yanker, D., Maurer, J. Direct printing of trichlorosilanes on glass for selective protein adsorption and cell growth. Molecular Biosystems. 4, 502-504 (2008).
  10. Johnson, D., Maurer, J. Recycling and reusing patterned self-assembled monolayers for cell culture. Chemical Communications. 520-522 (2011).
  11. Herne, T., Tarlov, M. Characterization of DNA probes immobilized on gold surfaces. J. Am. Chem. Soc. 8916-8920 (1997).
  12. Hanson, E., Schwartz, J., Nickel, B., Koch, N., Danisman, M. Bonding self-assembled, compact organophosphonate monolayers to the native oxide surface of silicon. J. Am. Chem. Soc. 16074-16080 (2003).
  13. Johannes, M., Cole, D., Clark, R. Atomic force microscope based nanofabrication of master pattern molds for use in soft lithography. Applied Physics Letters. (2007).
  14. Bessueille, F., Pla-Roca, M., Mills, C. A., Martinez, E., Samitier, J., Errachid, A. Submerged microcontact printing (SμCP): An unconventional printing technique of thiols using high aspect ratio, elastomeric stamps. Langmuir. 12060-12063 (2005).
  15. Xia, Y., Whitesides, G. Extending microcontact printing as a microlithographic technique. Langmuir. 2059-2067 (1997).
  16. Biasco, A., Pisignano, D., Krebs, B., Pompa, P. P., Persano, L., Cingolani, R., Rinaldi, R. Conformation of microcontact-printed proteins by atomic force miroscopy molecular sizing. Langmuir. 5154-5158 (2005).
  17. Shen, K., Qi, J., Kam, L. C. Microcontact printing of proteins for cell biology. J Vis Exp. (22), e1065-e1065 (2008).
  18. Piner, R., Zhu, J., Xu, F., Hong, S., Mirkin, C. "Dip-pen" nanolithography. Science. 283, 661-663 (1999).
  19. Ryan, D., Parviz, B. A., Linder, V., Semetey, V., Sia, S. K., Su, J., Mrksich, M., Whitesides, G. M. Patterning multiple aligned self-assembled monolayers using light. Langmuir. 9080-9088 (2004).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics