Обогащение NK клетки из человеческой крови Kit RosetteSep от StemCell Технологии

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Естественных клеток-киллеров в небольшой популяции лимфоцитов. Здесь мы показываем, как изолировать эти клетки из человеческой крови путем отрицательного отбора, используя набор из StemCell Technologies. Клетки, полученные жизнеспособны и нетронутой антитела, и, следовательно, готов к использованию в течение нескольких процедур.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Beeton, C., Chandy, K. G. Enrichment of NK Cells from Human Blood with the RosetteSep Kit from StemCell Technologies. J. Vis. Exp. (8), e326, doi:10.3791/326 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Естественных киллеров (НК) клетки больших гранулярных цитотоксических лимфоцитов, которые принадлежат к системе врожденного иммунитета и играют важную роль в борьбе против рака и инфекций, но они также участвовали в ранних стадиях беременности и отторжения трансплантата. Эти клетки присутствуют в периферической крови, из которых они могут быть изолированы. Клетки могут быть изолированы с использованием либо положительного или отрицательного отбора. Для положительного отбора мы используем антитела, направленные к поверхности маркер присутствует только на клетки интерес, тогда как для отрицательного отбора мы используем коктейли антител, направленных на поверхностные маркеры присутствуют на всех клетках, но клетки интерес. Последний метод представляет преимущество оставляя клетки беспроцентный антител, тем самым снижая риск нежелательного активации клеток или differenciation. В этом видео-протокола мы покажем, как отделить NK клетки из человеческой крови путем отрицательного отбора, используя RosetteSep комплект от StemCell технологий. Процедура включает в себя получение периферической крови человека (в соответствии с институциональными наблюдательного совета, утвержденные протоколом для защиты человека в качестве субъекта) и смешивая его с коктейль из антител, которые связываются с маркерами отсутствует на киллеров, но присутствует на всех других мононуклеарных клеток в периферической крови (например, Т-лимфоциты, моноциты ...). Антител, присутствующих в коктейль сопрягаются с антителами, направленных на гликофорина на эритроцитах. Все нежелательных клеток и красных кровяных клеток, таким образом, оказаться в ловушке комплексов. Сочетание коктейля крови и антител, затем разбавляют, наложенных на Histopaque градиента, и центрифугировали. NK клеток (> 80% чистоты) могут быть собраны на границе Histopaque и разбавленной плазмы. Подобные коктейли доступны для обогащения других популяций клеток, например, человеческий Т-лимфоцитов.

Protocol

Подробный протокол входит в состав каждой изоляции коктейль Розетка сентября и доступна в Интернете на веб-сайте StemCell технологий 1.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Клеток, выделенных с помощью этой техники можно дополнительно разделить на различные группы населения с использованием других комплектов разделения клетки.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Rosette Sep cocktail for human NK cells Reagent Stem Cell Technologies 15065
PBS, steile, 1x Reagent GIBCO, by Life Technologies 14040-058
Fetal calf serum (FCS, FBS) Reagent GIBCO, by Life Technologies 16140-071
Histopaque-1077 Reagent Sigma-Aldrich 10771
PBS supplemented with 2% FCS and Histopaque solutions must be brought to room temperature before the begining of the procedure.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Procedures and instruction manuals. http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx Forthcoming.

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics