Enriquecimiento de las células NK a partir de sangre humana con el Kit de RosetteSep de Tecnologías de la StemCell

Biology

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Summary

Las células asesinas naturales son una pequeña población de linfocitos. Aquí se muestra la forma de aislar estas células de la sangre humana por selección negativa, utilizando un kit de StemCell Technologies. Las células obtenidas son viables y sin tocar por los anticuerpos, y por lo tanto, listo para ser utilizado para una serie de procedimientos.

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Beeton, C., Chandy, K. G. Enrichment of NK Cells from Human Blood with the RosetteSep Kit from StemCell Technologies. J. Vis. Exp. (8), e326, doi:10.3791/326 (2007).

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Abstract

Asesinas naturales (células NK) son linfocitos granulares grandes citotóxicos que pertenecen al sistema inmune innato y desempeñan un papel importante en la lucha contra el cáncer y las infecciones, pero también están implicados en las primeras etapas del embarazo y el rechazo al trasplante. Estas células están presentes en la sangre periférica, de la que se puede aislar. Las células pueden ser aisladas mediante la selección positiva o negativa. Para la selección positiva se utiliza anticuerpos dirigidos a un marcador de superficie presentes sólo en las células de interés, mientras que para la selección negativa que el uso de cócteles de anticuerpos dirigidos a los marcadores de superficie presentes en todas las células, pero las células de interés. Esta última técnica presenta la ventaja de que las células de interés libre de anticuerpos, lo que reduce el riesgo de activación de las células no deseadas o diferenciación. En este video-protocolo que demuestran cómo separar las células NK de la sangre humana por selección negativa, utilizando el kit de RosetteSep de las tecnologías de StemCell. El procedimiento consiste en la obtención de sangre periférica humana (en una revisión institucional aprobado por la Junta de protocolo para proteger a los seres humanos) y la mezcla con un cóctel de anticuerpos que se unen a los marcadores ausente en las células NK, pero presente en todas las demás células mononucleares presentes en periférico la sangre (por ejemplo, los linfocitos T, monocitos ...). Los anticuerpos presentes en el cóctel se conjugan con los anticuerpos dirigidos a la glicoforina A eritrocitos en el. Todas las células no deseadas y los glóbulos rojos por lo tanto, quedará atrapado en los complejos. La mezcla de cóctel de sangre y anticuerpos se diluye, superpuestas en un gradiente de Histopaque, y se centrifuga. Las células NK (> 80% de pureza) se pueden recoger en la interfaz entre el Histopaque y el plasma diluido. Cócteles similares están disponibles para el enriquecimiento de las poblaciones de células, como los linfocitos T humanos.

Protocol

Un protocolo detallado se incluye con cada cóctel aislamiento Rosette septiembre y está disponible en línea en el sitio web StemCell tecnologías 1.

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Discussion

Las células aisladas con esta técnica pueden ser divididos en diferentes poblaciones con otros equipos de separación de células.

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Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Rosette Sep cocktail for human NK cells Reagent Stem Cell Technologies 15065
PBS, steile, 1x Reagent GIBCO, by Life Technologies 14040-058
Fetal calf serum (FCS, FBS) Reagent GIBCO, by Life Technologies 16140-071
Histopaque-1077 Reagent Sigma-Aldrich 10771
PBS supplemented with 2% FCS and Histopaque solutions must be brought to room temperature before the begining of the procedure.

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References

  1. Procedures and instruction manuals. http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx Forthcoming.

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