NK细胞与干细胞技术的RosetteSep套件的人体血液的富集

Published 10/01/2007
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Biology

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Summary

自然杀伤细胞是淋巴细胞的人口少。在这里,我们展示如何隔离这些细胞从人体血液中阴性选择,使用干细胞技术的试剂盒。获得的细胞是可行的和不变的抗体,因此准备了一些程序使用。

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Beeton, C., Chandy, K. G. Enrichment of NK Cells from Human Blood with the RosetteSep Kit from StemCell Technologies. J. Vis. Exp. (8), e326, doi:10.3791/326 (2007).

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Abstract

自然杀伤(NK)细胞的大颗粒属于先天免疫系统发挥重要的角色,在对抗癌症和感染的细胞毒性淋巴细胞,但也牵连在怀孕和移植排斥反应的早期阶段。这些细胞是外周血中,从它们可以被隔离。细胞可以分离出积极或消极的选择。我们正选择使用表面标记的抗体只对目前的利益,而细胞阴性选择感兴趣的所有细胞,但细胞中存在,我们使用有针对性的表面标记抗体鸡尾酒。后者的技术,提出了离开的抗体的利息细胞的优势,从而减少了不需要的细胞的活化或differenciation的风险。在这个视频协议,我们将演示如何通过阴性选择分离从人体血液中的NK细胞,利用干细胞技术的RosetteSep套件。该过程包括获取人外周血(下一个机构审查委员会批准的协议,以保护人类受试者),将缺席对NK细胞标记结合的抗体,鸡尾酒混合,但目前所有其他周边目前的单核细胞血液(例如,T淋巴细胞,单核细胞...).在鸡尾酒中的抗体结合向血型糖蛋白A对红细胞的抗体。因此,将所有不需要的细胞和红细胞被困联合体。然后稀释血和抗体鸡尾酒混合,是上Histopaque梯度重叠,离心。 NK细胞(> 80%的纯),可以收集Histopaque和稀释后的血浆之间的接口。类似的鸡尾酒为其他的细胞群,如人类T淋巴细胞,浓缩。

Protocol

一个详细的协议,包括与每个玫瑰花九月隔离鸡尾酒,是对干细胞技术的网站 1可在网上。

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Discussion

使用这种技术孤立的细胞可进一步分为不同的人群,使用其他细胞分离试剂盒。

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Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Rosette Sep cocktail for human NK cells Reagent Stem Cell Technologies 15065
PBS, steile, 1x Reagent GIBCO, by Life Technologies 14040-058
Fetal calf serum (FCS, FBS) Reagent GIBCO, by Life Technologies 16140-071
Histopaque-1077 Reagent Sigma-Aldrich 10771
PBS supplemented with 2% FCS and Histopaque solutions must be brought to room temperature before the begining of the procedure.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Procedures and instruction manuals. http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx Forthcoming.

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