StemCell टेक्नोलॉजीज से RosetteSep किट के साथ मानव रक्त से एन.के. कोशिकाओं के संवर्धन

Biology

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Summary

प्राकृतिक हत्यारा कोशिकाओं लिम्फोसाइटों के एक छोटे से जनसंख्या हैं. यहाँ हम बताएंगे कि कैसे नकारात्मक चयन द्वारा मानव रक्त से इन कोशिकाओं को अलग करने के लिए, StemCell टेक्नोलॉजीज से एक किट का उपयोग. प्राप्त कोशिकाओं व्यवहार्य और एंटीबॉडी से अछूते हैं, और इसलिए प्रक्रियाओं के एक नंबर के लिए इस्तेमाल किया जा करने के लिए तैयार है.

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Beeton, C., Chandy, K. G. Enrichment of NK Cells from Human Blood with the RosetteSep Kit from StemCell Technologies. J. Vis. Exp. (8), e326, doi:10.3791/326 (2007).

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Abstract

प्राकृतिक हत्यारा कोशिकाओं (एन.के.) बड़े दानेदार साइटोटोक्सिक लिम्फोसाइटों कि सहज प्रतिरक्षा प्रणाली के लिए हैं और कैंसर और संक्रमण के खिलाफ लड़ने में प्रमुख भूमिका निभाते हैं, लेकिन गर्भावस्था और प्रत्यारोपण अस्वीकृति के प्रारंभिक दौर में भी फंसा है. इन कोशिकाओं परिधीय रक्त, जिसमें से वे अलग किया जा सकता में मौजूद हैं. कक्ष या तो सकारात्मक या नकारात्मक चयन का उपयोग कर अलग किया जा सकता है. सकारात्मक चयन के लिए हम एक सतह मार्कर के लिए निर्देश एंटीबॉडी का उपयोग जबकि ब्याज की नकारात्मक चयन के लिए कोशिकाओं हम सतह मार्करों के लिए लक्षित एंटीबॉडी के कॉकटेल का उपयोग सभी कोशिकाओं लेकिन ब्याज की कोशिकाओं पर मौजूद पर ही मौजूद है. यह बाद तकनीक एंटीबॉडी के मुक्त ब्याज की कोशिकाओं को छोड़ने के लाभ प्रस्तुत करता है, जिससे अवांछित सेल सक्रियण या differenciation के जोखिम को कम करने. हम इस वीडियो प्रोटोकॉल में प्रदर्शित कैसे नकारात्मक चयन द्वारा मानव रक्त से एन.के. कोशिकाओं को अलग करने के लिए, StemCell प्रौद्योगिकियों से RosetteSep किट का उपयोग कर. प्रक्रिया मानव परिधीय रक्त (एक संस्थागत समीक्षा बोर्ड अनुमोदित प्रोटोकॉल के लिए मानव विषयों की रक्षा के तहत) प्राप्त करने और यह एंटीबॉडी कि एन.के. कोशिकाओं पर अनुपस्थित मार्करों के लिए बाध्य करेंगे की एक कॉकटेल के साथ मिश्रण है, लेकिन अन्य सभी mononuclear परिधीय में मौजूद कोशिकाओं पर मौजूद शामिल खून (जैसे, टी lymphocytes, monocytes ...). कॉकटेल में उपस्थित एंटीबॉडी पर एरिथ्रोसाइट्स glycophorin निर्देशित एंटीबॉडी संयुग्मित हैं. सभी अवांछित कोशिकाओं और लाल रक्त कोशिकाओं इसलिए परिसरों में फंस जाएगा. तब रक्त और एंटीबॉडी के कॉकटेल के मिश्रण पतला है, एक Histopaque ढाल पर overlayed और centrifuged. एन.के. कोशिकाओं (> शुद्ध 80%) Histopaque और पतला प्लाज्मा के बीच इंटरफेस पर एकत्र किया जा सकता है है. इसी प्रकार की कॉकटेल मानव टी lymphocytes जैसे अन्य सेल आबादी के संवर्धन के लिए उपलब्ध हैं.

Protocol

एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रत्येक रोसेट सितम्बर अलगाव कॉकटेल के साथ शामिल है और StemCell प्रौद्योगिकियों एक वेबसाइट पर ऑनलाइन उपलब्ध है .

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Discussion

इस तकनीक का उपयोग अलग कक्षों और विभिन्न अन्य सेल जुदाई किट का उपयोग कर आबादी में अलग किया जा सकता है है.

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Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Rosette Sep cocktail for human NK cells Reagent Stem Cell Technologies 15065
PBS, steile, 1x Reagent GIBCO, by Life Technologies 14040-058
Fetal calf serum (FCS, FBS) Reagent GIBCO, by Life Technologies 16140-071
Histopaque-1077 Reagent Sigma-Aldrich 10771
PBS supplemented with 2% FCS and Histopaque solutions must be brought to room temperature before the begining of the procedure.

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References

  1. Procedures and instruction manuals. http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx Forthcoming.

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