StemCell 기술에서 RosetteSep 키트와 함께 인간의 피를에서 NK 세포의 농축

Biology

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Summary

자연 킬러 세포 lymphocytes의 작은 인구입니다. 여기 StemCell Technologies에서 키트를 사용하여 부정적인 선택에 의해 인간의 혈액에서 이러한 세포를 분리하는 방법을 보여줍니다. 얻은 세포 따라서 절차의 번호를 사용 준비가 가능한 및 항체에 의해 훼손되지 않은, 그리고.

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Beeton, C., Chandy, K. G. Enrichment of NK Cells from Human Blood with the RosetteSep Kit from StemCell Technologies. J. Vis. Exp. (8), e326, doi:10.3791/326 (2007).

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Abstract

자연 킬러 (NK) 세포가 본래 면역 체계에 소속하고 암 및 감염 싸우고 주요 역할을 큰 세분화된 세포 독성 lymphocytes 있지만, 또한 임신과 이식 거부 반응의 초기 단계에 연루됩니다. 이러한 세포들은 격리 수있는 주변 혈액에 존재한다. 전지는 긍정적이거나 부정적인 중 선택을 사용하여 격리 수 있습니다. 긍정적인 선택을 위해 우리는 우리 모두가 세포하지만 관심의 세포에 존재하는 표면 마커를 타겟으로하는 항체의 칵테일을 사용하는 부정적인 선택을위한 반면, 관심의 세포에 존재하는 표면 마커로 이동 항체를 사용합니다. 이 후자의 기술은이를 원치 않는 세포 활성화 또는 differenciation의 위험을 감소, 항체 무료로 관심의 세포를 떠나는 장점을 제공합니다. 이 비디오 프로토콜에서 우리는 StemCell 기술에서 RosetteSep 키트를 사용하여 부정적인 선택에 의해 인간의 혈액에서 NK 세포를 분리하는 방법을 보여줍니다. 절차는 인간의 말초 혈액을 (인간 과목을 보호하기 위해 기관 검토위원회의 승인을 프로토콜 이하)을 구하고 북한 세포에 결석 마커에 바인딩됩니다 항체의 칵테일로 혼합지만, 주변에있는 다른 모든 mononuclear 세포에있는 포함 혈액 (예, T의 lymphocytes, monocytes ...). 칵테일에있는 항체가에 적혈구를 glycophorin 이동 항체에 복합 있습니다. 모든 원치 않는 세포와 적혈구 따라서 단지에 갇혀있는 것입니다. 혈액과 항체 칵테일의 조합은 다음 희석 Histopaque 그라디언트에 overlayed하고, centrifuged입니다. NK 세포는 (> 80 % 순수) Histopaque과 희석 플라즈마 사이의 인터페이스에서 수집된하실 수 있습니다. 비슷한 칵테일은 인간의 T lymphocytes와 같은 다른 세포 집단의 농축 사용할 수 있습니다.

Protocol

자세한 프로토콜은 각 로제트 Sep 절연 칵테일과 함께 포함되어 있으며 StemCell 기술 웹사이트 1 온라인입니다.

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Discussion

이 기술을 사용하여 격리 세포는 더 이상 다른 세포 분리 키트를 사용하여 서로 다른 인구에 분리 수 있습니다.

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Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Rosette Sep cocktail for human NK cells Reagent Stem Cell Technologies 15065
PBS, steile, 1x Reagent GIBCO, by Life Technologies 14040-058
Fetal calf serum (FCS, FBS) Reagent GIBCO, by Life Technologies 16140-071
Histopaque-1077 Reagent Sigma-Aldrich 10771
PBS supplemented with 2% FCS and Histopaque solutions must be brought to room temperature before the begining of the procedure.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Procedures and instruction manuals. http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx Forthcoming.

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