Den Ex vivo Isoleret Skeletal mikrokardannelse Forberedelse til undersøgelse af vaskulær reaktivitet

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

En

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Butcher, J. T., Goodwill, A. G., Frisbee, J. C. The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity. J. Vis. Exp. (62), e3674, doi:10.3791/3674 (2012).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Den isolerede mikrokardannelse Præparatet er en ex vivo-præparat, der giver mulighed for undersøgelse af de forskellige bidrag af faktorer, der styrer skibet diameter, og dermed perfusion modstand 1-5. Dette er en klassisk eksperimentel præparat, som var i stor udstrækning, først beskrevet af Uchida et al. 15 flere årtier siden. Denne indledende beskrivelse dannede grundlag for de teknikker, der blev væsentligt ændret og forbedret, primært i laboratoriet af Dr. Brian Duling ved University of Virginia 6-8, og vi præsenterer en aktuel tilgang i de følgende sider. Dette præparat vil specifikt henviser til den gracilis arteriole i en rotte, da mikrokardannelse valg, men den grundlæggende forberedelse kan let anvendes på skibe isoleret fra næsten alle andre væv eller organ på tværs af arter 9-13. Mekaniske (dvs. dimensionelle) ændringer i den isolerede mikrokarrene kan nemt blive evalueretsom reaktion på en bred vifte af fysiologisk (f.eks hypoxi, intravaskulær tryk eller forskydning) eller farmakologiske udfordringer, og kan give indsigt i mekanistiske elementer omfatter integrerede reaktioner i en intakt, selv ex vivo væv. Betydningen af ​​denne fremgangsmåde er, at den tillader let manipulation af påvirkninger på den integrerede regulering af mikrokardannelse diameter, samtidig tillader kontrol af mange af de bidrag fra andre kilder, herunder intravaskulær tryk (myogene), autonom innervation, hæmodynamisk ( f.eks shear stress), endotelceller afhængige eller uafhængige stimuli, hormonelle og parenkym indflydelser, for at give en delvis liste. Under passende eksperimentelle betingelser og med passende mål, kan det danne en fordel i forhold til in vivo eller in situ væv / organ præparater, der ikke let giver mulighed for let styring af bredere systemiske variabler.

Det maJOR begrænsning af dette præparat er hovedsagelig en konsekvens af sine styrker. Pr. definition er den adfærd disse skibe blive undersøgt under forhold, hvor mange af de væsentligste bidragydere til regulering af vaskulær modstand er blevet fjernet, herunder neurale, humorale, metaboliske, osv. Som sådan er investigator advares for at undgå over- fortolkning og ekstrapolation af de data, der indsamles udnytte dette præparat. Den anden væsentlige område af interesse med hensyn til dette præparat er, at det kan være meget let at beskadige cellulære komponenter, såsom den endotele foring eller vaskulær glat muskulatur, kan en sådan, at variable fejlkilde indføres. Det anbefales kraftigt, at den enkelte investigator udnytte relevante målinger for at sikre kvaliteten af ​​præparatet, både ved indledningen af ​​forsøget, og periodisk under hele forløbet af en protokol.

Protocol

1. Forud for eksperimentet

  1. Forud for forsøget dag, glas kapillarrørene af passende dimensioner for den station, trækkes ind mikropipetter (enten vandret eller lodret aftrækker kan anvendes). Spidsen diameter kan let justeres afhængigt af det fartøj, der isoleres, skønt vi i almindelighed anvender en diameter i området mellem 50-150 um. Disse er så bøjet til den passende konfiguration for mikrokar station følgende opvarmning over en butan flamme. Mikropipette tips fysisk brudt til den omtrentlige diameter (med fine tang) for mikrokardannelse i spørgsmål og kan slebet eller poleret til de relevante konformationer, som er nødvendige for den konkrete anvendelse. For en omfattende og enestående gennemgang af disse procedurer, er læseren til Davis et al. 16. To mikropipetter anbringes derefter i modsætning til de pipetteholdere for mikrokar kammeret. Disse skal være orienteret således, at spidserneer i den samme vertikale og horisontale plan inden i beholderen kammeret.
    Det mikrokardannelse kammer, som anvendes i dette manuskript (figur 1 og 2) er én, der er specialbygget af Mr. David Eick ved Institut for Fysiologi ved Medical College of Wisconsin ( http://www.phys.mcw.edu/ og www . eicktech.com ). Men flere andre konfigurationer af mikrokardannelse kammer er let kommercielt tilgængelige, med dem, der er udviklet af levende systemer Instrumentation ( http://www.livingsys.com/ ) og IonOptix ( http://www.ionoptix.com/ ) er meget almindelig. Under anvendelse af disse andre systemer kan det være nødvendigt at anvende et omvendt mikroskop snarere end en konventionel opretstående en, selv om dette er afhængig af den specifikke eksperiment og udstyr. Anvendelse af inverterede mikroskoper vil være at foretrække for eksperimentel protokolOLS kræver fluorescerende eller konfokal billeddannelse.
  2. Fremstilling af en fysiologisk saltopløsning (PSS, beskrevet nedenfor), og at pH er indstillet til passende niveauer for de specifikke eksperimentelle betingelser (7,38-7,42 er typisk og falder inden for det fysiologiske interval). PSS opløsning kan fremstilles i forvejen og afkølet, men skal kontrolleres på passende temperatur for pH inden brug. PSS kan indeholde albumin, hvis forsøgslederen eller specifikke protokoller kræver det, selv om dette ikke er universelt obligatorisk.
  3. De digitale video calipre anvendes til at måle fartøj diameter bør kalibreres ved hjælp af et hæmocytometer eller mikroskopbordet mikrometer. For nøjagtig kalibrering, er det afgørende, at mikrometer blive placeret i samme plan som tilstrømningen / udstrømningen mikropipetter i skibet kammer.
  4. Tie sløjfer til fastgørelse af mikrokardannelse til pipetter skal være forberedt og være let tilgængelig for senere brug. Disse kan let fremstilles 8-0 eller mindre oftalmisk sFREMTIDIGE. Indre binding sløjfe kan fremstilles på forhånd og lagres i en dækket petriskål på en lille strimmel af revers tape omgiver et mikroskop-objektglas før brug (det vil holde dem i at blive tabt). (Figur 3).

2. Day of the Experiment

  1. Alt hjælpeudstyr skal være tændt og kontrolleres for korrekt funktion. Dette omfatter anti-vibration/floating bordet og det cirkulerende opvarmet vandbad (indstillet til at tilvejebringe den passende temperatur i beholderen badet - almindeligvis 37 ° C), alle tryktransducere og beholderen kammeret drænpumpen (fig. 1A og 1B). Tænd ligevægtstidspunktet gasser i skibet kammer og i perfusatet og superfusate reservoirer.
  2. Fylde alle reservoirer, rør og kamre med PSS opløsning. Perfusatet, der fører til indløbet pipetten skal fyldes fuldstændigt at undgå tilstedeværelsen af ​​luftbobler i denne linje, som kan løsne og beskadige VAscular endotel (figur 1C). Hvis det er nødvendigt, skal du bruge en sprøjte til forsigtigt at skubbe PSS hele vejen igennem pipetten for at sikre, at det er helt fuld, og uden nogen blokeringer, der kan hindre perfusat flow. Tilstrømningen tryk bør holdes inden for rimelige grænser for at undgå at beskadige tryktransducere.

3. Mikrokardannelse Høst

  1. Efter bedøvelse af dyr, som mikrokardannelse skal tages, skal det pågældende fartøj isoleres i overensstemmelse med de procedurer, der er mest hensigtsmæssigt at vaskulaturen, der skal undersøges. I nogle tilfælde kan dette kræve fjernelse af selve organet (f.eks cerebrale eller koronar mikrokar), mens andre kan fartøjer fjernes direkte fra bedøvede dyr (f.eks muskel). Et eksempel på orienteringen af beholderen i gracilismusklen er vist i figur 4. Estimere længden af fartøjet in vivo før fjernelse med forCEPS eller små calipre. Forud for fjernelse af skibet fra dyret / orgel, kan det være meget nyttigt at foretage en endelig kontrol for at sikre sig, at skibet kammeret er klar og fungerer korrekt (herunder alle slips sløjfer på plads).
  2. Fjerne beholderen fra dyret / organ ved at gribe den ydre side af beholderen på den ene ende med fine pincetter og skæring langs længden af ​​beholderen, indtil den er fri, idet meget omhyggelig med at undgå trækker eller trække fartøjet. Når befriet, straks placere den i en 1,7 ml centrifugerør fyldt med PSS, men lad ikke gå af fartøjet. Dette er at huske orientering, vil således at perfusat retning i badet være identisk med blodstrømmen retning i dyret.

4. Cannulating Vessel

  1. Anbring beholderen i den fyldte badet og kanyle den proximale ende af indstrømningen pipette. Dette kan bedst opnås med en beskeden perfusionshastigheden gennem kanylen (~ 50 mmHg tryk) oget par fine tænger anvendes til at holde hver side af den proximale karhulrummet væg (dvs. et par tænger i hver hånd). I vort laboratorium, bruger vi fine tænger fra fine Science Tools ( http://www.finescience.com/Home.aspx ), skønt enhver passende konstrueret pincet vil virke effektivt. Sæt skibet på kanylen tips og fremme skibet på spidsen til det punkt, hvor to slips sløjfer kan sikre skibet.
  2. Øge tilførsel tryk til ~ 75 mmHg yderligere oppustning af fartøjet og lette kanylering af den distale pipettespidsen. Strømmen gennem beholderen skal ses som en forvrængning i superfusate reservoir ved den distale udstrømning af beholderen (under mikroskop). Kanyle i den distale ende af skibet på udstrømning pipette og fastgør det med to slips løkker (disse sidste sløjfer skal være på plads forud for kanylering, figur 5).
  3. Juster kanylen, indtil i XYZ koordinater Needed, indtil der er minimal forvrængning i beholderen, og beholderen nærmer sig den in vivo længde. Øge indstrømningen tryk indtil det omtrentlige procentdel af det gennemsnitlige arterielle tryk normalt opleves af fartøjet segment (vores laboratorium anvender 80% af det gennemsnitlige arterielle tryk for stor modstand arterioler af gracilismusklen 8).
  4. Placer en lille boblende sten levere den passende gas blandingen i bad og plads plastic wrap eller et glas låg over kammeret for at undgå sprøjt mikroskopet linsen. Vi anvender en boblende sten, der er almindeligt tilgængelige på alle PET / akvarium lagrer og er cirka 1 cm i diameter, selv om en mindre størrelse vil fungere effektivt som godt. Tilstedeværelsen af ​​bobler sten sikrer passende gas tilgængelighed til beholderen på alle tidspunkter og vil udvide beholderen levedygtighed. Denne sten er fjernet i alle måleperioder (eller luftstrømmen gennem stenen midlertidigt afbrudt) for at forhindre forvrængning afbillede. Frigive klemmen på udstrømningen pipetten og tillade strømning gennem beholderen i 30 minutter. Periodisk, skal strømmen blive fastspændt ved udstrømningen slangen for at bestemme, om beholderen er under udvikling hvilende tone. Alle fartøjer skal kontrolleres for tryk lækager på dette punkt. Lækager vil være indlysende ved indføring af en kendt tryk i beholderen (vi almindeligvis anvender 100-120 mmHg) og fastspænding af udstrømningen, efterfulgt af indstrømning, linie. Hvis den intraluminale tryk er stabil, er der ingen mærkbare utætheder. Hvis trykket begynder at falde, en betydelig lækage er til stede, og skal lukkes. Utætheder på enten indstrømning eller udstrømning pipetter kan normalt afhjælpes ved at tilføje en ekstra sløjfe bundet rundt om skibet på pipetten. Alternativt, hvis et fartøj har en lille side gren, der gør det muligt for lækage, vil dette nedsætte evnen af ​​fartøjet til at indeholde pres effektivt og kan indføre en ekstra kilde til fejl. Hvis denne lækage er identificeret, kan den normalt hæftes wi'te en enkelt løkke af 10-0 ophthalmisk sutur. Alternativt kan et enkelt streng drillet 6-0 sutur for at gøre bindingen sløjfen er også meget effektive. Hvis lækagen ikke kan identificeres, eller kan ikke effektivt hæftes (f.eks, er der ingen stamme til sidegrenen og blot et hul i karvæggen), kan dette resultere i en for tidlig afslutning af forsøget og anvendelse af en alternativ bliver fartøjet nødvendigt (dette er generelt det samme fartøj i det andet ben eller - kontralaterale side om nødvendigt - for dyret).

    Beholderen skal have lov til at ækvilibrere under ingen strømning i mindst 30 minutter. Alle forsøg udføres under ingen strømning. Når fartøjet er udviklet tilfredsstillende, tone og er lydhør over for de inklusionskriterierne for eksperimentet i spørgsmålet, skibet er klar til den efterfølgende undersøgelse.

    Disse inklusionskriterier kan variere afhængigt af den specifikke eksperimentelle protokol og undersøger. I vores laboratorium, vi rutinemæssigt utilize følgende:
    1. Aktive tone på> 30% (beregnet som AD / D max x 100, hvor AD er stigningen i arteriolær indervæggen diameter fra værdierne under ækvilibrering tryk som respons på eksponering for Ca2 +-fri PSS og D max er den maksimale diameter målt ved ækvilibrering trykket i Ca2 +-fri PSS).
    2. Myogene aktivering (vedligeholdelse af, eller fortrinsvis en reduktion i arteriolær diameter med forøget intraluminale tryk) som et indeks for et levedygtigt vaskulær glat muskel lag.
    3. En levedygtig endotele foring, som det fremgår af en rask dilatator respons på acetylcholin (10-6M i badet).
    4. Yderligere inklusionskriterier kan tilsættes for at passe til særlige eksperimentelle protokol efter behov, herunder constrictor reaktioner adrenerge agonister, såsom phenylephrin (10-7M) og dilator svar på yderligere stimuli, såsom adenosin (10 -5 2 i ligevægt gas).
  5. Følgende afsnit er et eksempel på en "mock eksperiment". Alle nødvendige løsninger udarbejdes som er relevant, med særlig vægt på hensyntagen til den fortyndingsfaktor af PSS i skibet kammer. Som et eksempel, for nogle af vores udstyr volumenet af beholderen kammeret er 20 ml. Som sådan, 20 ul af en 10 -2 M stamopløsning resulterer i en effektiv koncentration af 10-5M i beholderen kammeret badet. Efter beholderen fjernelse kanylering, ækvilibrering og validering som beskrevet ovenfor, er forsøget klar til at påbegynde. Specifikt, såsom behandling af randomisering og effektivitet er eksperiment specifikke og ville forbruge meget plads til denne indsats. Som sådan er disse ikke i detaljer.

    Indledende kontrol reaktioner bestemmes. For eksempel fysiologisk stimulus såsom myogen aktivering (tryk-induceret konstriktion), intralumenal prEssure er tilfældigt ændret over det ønskede område, og skibet er mulighed for en passende periode til at reagere (i dette tilfælde, vil vi give en 5-7 minutters periode). For eksempel farmakologisk stimulus såsom udfordring med acetylcholin, er lægemidlet tilsættes til tilbage fra stamopløsninger i en tilfældig rækkefølge. I dette tilfælde ville man normalt anvender et område fra 10 -9 til 10-5M i badet med udvaskning er defineret som en genoprettelse af ækvilibrering diameter. Som acetylcholin er et hurtigt virkende middel, kan maksimale dilatatorfingrene svar let kan opnås på kun nogle få sekunder. Andre midler (såsom peptider) kan tage meget længere tid til at fremkalde en maksimal reaktion, og dette meget tages i betragtning, samt det tidsrum det tager for en effektiv udvaskning. Når kontrol Svarene er blevet indsamlet, kan specifikke interventioner pålægges systemet, herunder inkubation af fartøjet med receptoragonister / antagonister, agenter på specifikke ion-kanaler, anstiftelse afændret intraluminale tryk, forskelle i ækvilibreringstider gasser eller farmakologiske midler målrettet mod specifikke enzymatiske systemer, for at nævne et par af de mest almindelige indgreb.

    Efter en passende tid for indgreb for at være effektiv (der skal testes passende), kan en efterfølgende runde af dataindsamling initieres. Afhængigt af den specifikke forsøgsprotokollen, kan efterfølgende indgreb pålægges fartøjet eller det første kan fjernes (enten ved udvaskning - når det er muligt - eller simpel fjernelse af fysiologiske udfordring). Når skibet er vendt tilbage til sin ligevægt tilstand (som skal verificeres), kan efterfølgende indgreb kan anvendes efter behov med yderligere data, der indsamles. Denne generelle procedure fortsættes, indtil afslutning af forsøget, eller indtil kvaliteten af ​​beholderen præparatet falder under tidligere bestemte tærskelkriterierne (f.eks reaktion på en agonist eller evnen til at udvikle tilstrækkelig aktiv tone). På dette tidspunkt forsøget enten afsluttet eller undersøgeren måtte ønske at indsamle data der er uafhængig af reaktiviteten af ​​den isolerede beholder (såsom mekanismer til karvæggen, hvilket kan udføres ved anvendelse af identiske fremgangsmåden ifølge myogene aktivering, kun med et skib mangler alle aktive tone 14).
  6. Regelmæssig rengøring af alt det udstyr er afgørende for fjernelse af salt oprustning og forebyggelse af væksten af ​​uønskede biologiske enheder. Ved slutningen af ​​hvert forsøg dage, på et minimum, er alle linier og kamre fuldstændigt skylles med PSS med rigelige mængder af destilleret eller deioniseret vand og fik lov at tørre helt. Efter hver 2-3 dage i brug, en vask med ethylalkohol udført som godt og udstyret får lov at tørre helt. Ved slutningen af ​​hver uge konsekvente anvendelse er alle linier og kamre fyldt med 0,1 M saltsyre, tillades at "inkubere 'i 30 minutter og derefter vaskes grundigt med vand som ovenfor. Endelig, vedEfter 2-3 ugers træk anvendelse, er alle dele af rør erstattet med nye og kammeret og reservoirerne renses med 1,0 M HCI efterfulgt af en omfattende skylning med destilleret / deioniseret vand. Hvis nogen misfarvning af rør eller visuel fastlæggelse af en vækst i røret eller en del af kammeret / reservoirerne, er disse enten erstattes eller rengøres grundigt efter behov. Med regelmæssig rengøring og vedligehold, kan udstyret vare meget længe. I skrivende stund er vores fartøj kamre alle i deres 8 th eller 9-års rutinemæssig brug, og vi har oplevet nogen væsentlige problemer med dem.

5. Repræsentative resultater

Figur 1A
Figur 1A. Dette Figuren viser den grundlæggende mikrokardannelse station setup. A = tv til visning af fartøjet, B = digitale skydelærer, C = sprøjten ved at skubbe til superfusate through indstrømning pipette nødvendigt D = hydrostatisk søjle for at skifte perfusatet indstrømning tryk; E = mikroskop, F = mikrokar kammer; G = superfusate reservoir, H = trykmåler (multipel kan tilføjes efter behov) I = mikrokar kammer drænpumpen for superfusate; J = ligevægt gasblanding tanken; K = affald indeholdt (for superfusate), L = cirkulerende vandvarmer, M = anti-vibration/floating bordet.

Figur 1B
Figur 1B. Denne figur viser et tættere billede af mikrokardannelse kammer setup. I denne figur, E = mikroskop, F = mikrokar kammer, H = trykmåler (Vi viser kun en til enkelthed, kan multiple sættes til forskellige steder som nødvendigt); I = mikrokar kammer drænpumpen, N = slange er fastgjort til starten af ​​perfusatet indstrømningen pipetten (en fortsættelse af "D" i figur 1A), O = slange forbundet til perfusatet udstrømning pipette.


Figur 1C. Denne figur viser den nærmeste billede af mikrokardannelse kammeret. I denne figur, N = perfusatet linie (dvs. slange fastgjort direkte til perfusatet indstrømningen pipette); O = slange er fastgjort direkte til perfusatet udstrømningen pipetten, P = de vandrette og lodrette placering styringer til indstrømning pipetten, Q = den superfusate dræne i vandbadet (forbundet til "I" i figur 1A og 1B), R = tilstrømningen til vandbadet, der kommer fra reservoiret (forbundet til "G" i figur 1A).

Figur 2
Figur 2. Denne figur viser en skematisk repræsentation af strømmen af væsker og gasser i systemet. I denne figur er A = PSS superfusate linie strømning; B = PSS perfusatet linje indstrømning pipette, C = PSS superfusate drænet fra bad til spildbeholderen D = PSS perfusat udstrømning fra udløb pipette, E = opvarmet vand input i kammerets kappe; F = opvarmet vand output fra kammer jakke.

Figur 3
. Figur 3. Denne figur viser de enkelte bånd sløjfer fremstillet ophthalmisk sutur (betragtes gennem et dissektionsmikroskop med 10x okularer og en 4,5 x justerbar Zoomforstørrelse; panel A), der anvendes i vores fremstilling og opbevaring af flere bindelag sløjfer 8-0 og 10-0 sutur om omvendt tape rundt om et objektglas, der er lagret i en overdækket petriskål (for at undgå at miste dem Panel B).

Figur 4
Figur 4. Denne figur tilvejebringer et billede (set gennem en standard dissektionsmikroskop) af gracilismusklen resistens arteriole før kirurgisk isolering og fjernelse for at muliggøre korrekt rumlig orientering.

ve_content "> Figur 5
Figur 5. Denne figur tilvejebringer et repræsentativt billede af en kanyleret mikrokar. Panel A viser hele længden af ​​fartøjet med både indstrømning (A) og udstrømning (B) pipetterne samt forbindelsesstængerne sløjfer (C) er vist. Panel B viser et billede ved en høj forstørrelse, hvilket klart viser bestemmelse af arteriolær indre diameter med de digitale kalibre (i dette tilfælde diameter er 112 um).

Figur 6
Figur 6. Denne figur viser repræsentative billeder af en kanyleret mikrokar efter ækvilibrering. Den øverste billede af en beholder under kontrol, ustimuleret forhold på ækvilibrering tryk midten billede af den samme beholder efter dilatation challenge med acetylcholin (10-6M i badet), og den nederste billede af den beholder efter constriction challenge med phenylephrin (10-7M i badet).

Figur 7
. Figur 7. Denne figur opsummerer responser af et isoleret mikrokar som respons på udsættelse for: hypoxi (Panel A, en reduktion i perfusatet og superfusate PO2 i systemet fra ~ 135 mmHg til ~ 40 mmHg), stigende koncentrationer af acetylcholin (Panel B), ændringer i intravaskulær tryk under kontrolbetingelser og efter inkubation af beholderen med en calcium-frit PSS (panel C).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Den præsenterede protokol beskriver isoleringen, fjernelse og dobbelt kanylering af en skeletmuskel mikrokar, skønt dette generelle teknik let kan anvendes til de fleste væv. For den nuværende manuskriptet, har udtrykket "arteriole" blevet brugt af forfatterne til at beskrive en modstand fartøj på mellem 70-120 um i diameter under hvile aktiv tone, som også er en stor bidragyder til reguleringen af ​​perfusion modstand mod et organ eller væv.

Med nogle ændringer, kan dette system kan monteres på flere ansøgninger om specifikke investigator og let mulighed for at indarbejde yderligere teknikker til at give mere dybtgående eksperimenter (f.eks brug af transmembrane elektroder til bestemmelse af membranpotentialet 17). Et kritisk trin i den basale fremstilling altid hvilket sikrer, at indstrømningen og udstrømningen pipetter, der anvendes til kanyle beholderen passer godt sammen, forbliver klar og tilladeflow og tryk opretholdes i en let måde. Når pipetterne blive tilstoppet med små stykker affald, kan det være nødvendigt at afbryde meget små stykker af spidser at genoprette strømning. Hvis undersøgeren er omhyggelig, kan pipetter kan genanvendes flere gange, indtil de når et punkt, hvor de enten ikke kan unclogged eller diametrene tilstrækkeligt store, at kanylering af beholderen bliver yderst vanskeligt. Men med beherskelse af denne kirurgiske og eksperimenterende forberedelse, opmærksomhed for detaljer, og passende ændringer, der passer til særlige betingelser og krav, kan efterforskerne umiddelbart vurdere veje bestemmer vaskulær reaktivitet som reaktion på et utal af fysiologiske og farmakologiske udfordringer. Denne forberedelse vil også give investigator til at udføre grundlæggende analyser på ændringer i karvæggen mekanik under betingelser ikke aktiv tone 14. Dette er faktisk en meget kraftfuld og smidig teknik og det er en, derkan let anvendes til anvendelser som spænder over intervallet af detaljeret mekanistisk forsøg til high-throughput screeninger af flere basiske reaktioner.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Ingen interessekonflikter erklæret.

Acknowledgments

Dette arbejde blev støttet af American Heart Association (EIA 0740129N) og NIH T32 HL90610.

References

  1. Goodwill, A. G., Frisbee, S. J., Stapleton, P. A., James, M. E., Frisbee, J. C. Impact of Chronic Anticholesterol Therapy on Development of Microvascular Rarefaction in the Metabolic Syndrome. Microcirculation. 1-18 (2009).
  2. Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. Increased vascular thromboxane generation impairs dilation of skeletal muscle arterioles of obese Zucker rats with reduced oxygen tension. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 295, H1522-H1528 (2008).
  3. Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. Growth-dependent changes in endothelial factors regulating arteriolar tone. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292, H207-H214 (2007).
  4. Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. Hydrogen peroxide emerges as a regulator of tone in skeletal muscle arterioles during juvenile growth. Microcirculation. 15, 151-161 (2008).
  5. Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. Increased myogenic responsiveness of skeletal muscle arterioles with juvenile growth. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, 2344-2351 (2008).
  6. Dacey, R. G., Duling, B. R. A study of rat intracerebral arterioles: methods, morphology, and reactivity. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 243, H598-H606 (1982).
  7. Fredricks, K. T., Liu, Y., Lombard, J. H. Response of extraparenchymal resistance arteries of rat skeletal muscle to reduce PO2. Am. J. Physiol. 267, H706-H715 (1994).
  8. Durand, M. J., Raffai, G., Weinberg, B. D., Lombard, J. H. Angiotensin-(1-7) and low-dose angiotensin II infusion reverse salt-induced endothelial dysfunction via different mechanisms in rat middle cerebral arteries. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 299, H1024-H1033 (2010).
  9. LeBlanc, A. J., Cumpston, J. L., Chen, B. T., Frazer, D., Castranova, V., Nurkiewicz, T. R. Nanoparticle inhalation impairs endothelium-dependent vasodilation in subepicardial arterioles. J. Toxicol. Environ. Health A. 72, 1576-1584 (2009).
  10. Jernigan, N. L., LaMarca, B., Speed, J., Galmiche, L., Granger, J. P., Drummond, H. A. Dietary salt enhances benzamil-sensitive component of myogenic constriction in mesenteric arteries. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, H409-H420 (2008).
  11. Stapleton, P. A., Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. Altered mechanisms of endothelium-dependent dilation in skeletal muscle arterioles with genetic hypercholesterolemia. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 293, R1110-R1119 (2007).
  12. Goodwill, A. G., Stapleton, P. A., James, M. E., d'Audiffret, A. C., Frisbee, J. C. Increased arachidonic acid-induced thromboxane generation impairs skeletal muscle arteriolar dilation with genetic dyslipidemia. Microcirculation. 15, 621-631 (2008).
  13. Baumbach, G. L., Hadju, M. A. Mechanics and composition of cerebral arterioles in renal and spontaneously hypertensive rats. Hypertension. 21, 816-826 (1993).
  14. Uchida, E., Bohr, D. F., Hoobler, S. W. A method for studying isolated resistance vessel from rabbit mesentery and brain and their responses to drugs. Circ. Res. 4, 525-536 (1967).
  15. Davis, M. J., Kuo, L., Chilian, W. M., Muller, J. M. I. solated Chapter 23. Isolated, perfused microvessels. In: Clinically Applied Microcirculation Research. Barker, J. H., Anderson, G. L., Menger, M. D. 32, CRC Press, Inc. 435-456 (1995).
  16. Lombard, J. H., Liu, Y., Fredricks, K. T., Bizub, D. M., Roman, R. J., Rusch, N. J. Electrical and mechanical responses of rat middle cerebral arterieal to reduced PO2 and prostacyclin. Am. J. Physiol. 276, H509-H516 (1994).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics