एक जाग माउस के तंत्रिका प्रतिक्रियाएँ रिकॉर्डिंग और tracers इंजेक्शन के लिए तैयार

Neuroscience

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Summary

इस neuronal प्रतिक्रियाओं का electrophysiological लक्षण वर्णन मस्तिष्क समारोह को समझने के लिए और मार्ग अनुरेखण के लिए रंगों के स्थान का मार्गदर्शन करने के लिए महत्वपूर्ण है. हालांकि, कई अध्ययन संवेदनाहृत पशुओं में प्रदर्शन कर रहे हैं. Anesthetics के बिना मस्तिष्क समारोह को समझते हैं, हम एक के लिए neuronal प्रतिक्रिया गुण रिकॉर्ड और जाग माउस में रंगों इंजेक्षन विधि विकसित की है.

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Muniak, M. A., Mayko, Z. M., Ryugo, D. K., Portfors, C. V. Preparation of an Awake Mouse for Recording Neural Responses and Injecting Tracers. J. Vis. Exp. (64), e3755, doi:10.3791/3755 (2012).

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Abstract

यह सर्वविदित है कि संज्ञाहरण मस्तिष्क के विभिन्न क्षेत्रों में तंत्रिका प्रतिक्रिया गुण बदल 13. श्रवण प्रणाली में मौलिक सीमा, आवृत्ति, विशिष्टता, और निरोधात्मक sidebands सहित brainstem न्यूरॉन्स की प्रतिक्रिया गुण 1-2 संज्ञाहरण के तहत महत्वपूर्ण तरीके में बदल रहे हैं. इन टिप्पणियों physiologists संज्ञाहरण के contaminating के प्रभाव के बिना एक न्यूरॉन्स से रिकॉर्ड करने के तरीकों की तलाश के लिए प्रेरित किया. एक परिणाम एक गहन निश्चेतना तैयारी, जहां brainstem पूरी तरह से 4 midbrain के स्तर पर transected था. इस तैयारी की कमियां एक दुर्जेय सर्जरी के, अग्रमस्तिष्क से उतरते अनुमानों के उन्मूलन, और संवेदी उत्तेजना का उपयोग को मध्यमस्तिष्क ऊपर संरचनाओं की जांच करने में असमर्थता हैं. एक अलग रणनीति के लिए इलेक्ट्रोड arrays के प्रत्यारोपण लंबे समय एकल न्यूरॉन्स और multiunit समूहों से रिकॉर्ड जानवर जाग और / या 5,6 बर्ताव किया गया है 7-9 चमगादड़ में 10-12 माउस के लिए तकनीक का इस्तेमाल किया अनुकूलित है. इस पद्धति का उपयोग करके, हम करने के लिए unanesthetized माउस में कई दिनों से अधिक electrophysiological रिकॉर्डिंग आचरण कर रहे हैं. रिकॉर्डिंग सत्र के अंत में, हम तो एक रंग इंजेक्षन करने के लिए इलेक्ट्रोड पदों और रिकॉर्डिंग साइटों के पुनर्निर्माण या एक अनुरेखक इंजेक्षन इतना है कि करने के लिए और रिकॉर्डिंग loci से रास्ते जा सकता है निर्धारित कर सकते हैं. इस पद्धति का उपयोग anesthetics के बिना कई दिनों से अधिक अच्छी तरह से अलग एक न्यूरॉन रिकॉर्डिंग के लिए अनुमति देता है.

Protocol

1. सिर - संयम अवलोकन

  1. एक कस्टम निर्मित सिर के बाद इकट्ठा करने के लिए, एक 1/16 स्टेनलेस स्टील रोल पिन लंबरूप में एक 3/32 में drilled छेद में डालने के लिए एक क्रॉस के रूप में स्टेनलेस स्टील रॉड. सिर पोस्ट के ऊर्ध्वाधर टुकड़ा के बारे में 20 मिमी और 15 मिमी के बारे में क्षैतिज पार टुकड़ा होना चाहिए. 1-72 # पेंच स्वीकार खड़ी छड़ी के एक छोर ठोकर. (1 छवि).
  2. सर्जरी और रिकॉर्डिंग के दौरान, सिर के बाद एक कस्टम निर्मित या एक पेंच 1-72 (छवि 2) के साथ पीतल और एल्यूमीनियम बढ़ते पट्टी में सुरक्षित है. बढ़ते पट्टी का एक लंबा टुकड़ा के बारे में 90 मिमी लंबा और 5-10 मिमी चौड़े होना चाहिए. सिर के बाद लंबे समय तक बार है कि 45 डिग्री पर angled है बंद एक 15 मिमी विस्तार में एक नाली कटौती में फिट बैठता है. बढ़ते पट्टी के नीचे एक छोटी सी नाली में सिर रोटेशन, सिर के बाद nestles की crosspiece को रोकने के लिए.
  3. बढ़ते में बार तो कस्टम एल्यूमीनियम बढ़ते गुट से जुड़ीकश्मीर (3 छवि). बढ़ते ब्लॉक लगभग 30 x 30 मिमी x 25 मिमी है. इस बढ़ते ब्लॉक micromanipulator के लिए जुड़ा हुआ है ताकि सिर के बाद की स्थिति सही midline के साथ और शीर्षस्थान पर रखा जा सकता है. ब्लॉक बढ़ते शिकंजा के साथ दो टुकड़े एक साथ फिट किया जाता है. एक ब्लॉक में कटौती बाहर बढ़ते पट्टी में स्लाइड और screws के साथ सुरक्षित करने के लिए अनुमति देता है. बढ़ते बार मेज की सतह के समानांतर है. रिकॉर्डिंग के दौरान, एक कस्टम stereotaxic फ्रेम छवि (4) में पट्टी सुरक्षित. stereotax बढ़ते ब्लॉक में सर्जरी के दौरान के रूप में एक ही स्थिति में बार माउंट करने के लिए डिज़ाइन किया गया है. यह व्यवस्था सुनिश्चित करता है कि माउस हमेशा प्रयोगात्मक सत्र भर stereotaxic फ्रेम के लिए गठबंधन किया जाएगा.
  4. लगभग 5 मिमी लंबाई करने के लिए एक टंगस्टन रॉड कटौती (.010 व्यास "), लगभग 1 मिमी 45 डिग्री पर तुला के साथ यह छड़ी जमीन पिन (1 छवि) के रूप में कार्य करता है.

2. Stereotaxic अलकपाल - उच्छेदन के लिए ignment

नोट: सभी प्रक्रियाओं मानक सड़न रोकनेवाला सर्जिकल तकनीक का पालन करें नीचे उल्लिखित है और वॉशिंगटन स्टेट यूनिवर्सिटी पशु की देखभाल और उपयोग समिति और Garvan संस्थान के पशु आचार समिति द्वारा अनुमोदित किया गया.

  1. 5% isoflurane साथ एक प्रेरण कक्ष में रखकर माउस असंवेदनता उत्पन्न करना. पूंछ और / या पैर की अंगुली चुटकी करने के लिए एक प्रतिक्रिया की कमी के कारण यह सुनिश्चित करता है कि पशु पूरी तरह संवेदनाहृत है.
  2. माउस एक कृंतक stereotaxic के में माउस अनुकूलक (Stoelting) के साथ outfitted फ्रेम में रखें. पूरबी को सही ढंग से माउस, काटने पट्टी के छेद के अंदर दांत की जगह और नाक दबाना कस तो यह सुखद है. माउस के रूप में काटने बार और नाक दबाना में संभव सीधे रखें. एक चेहरा मुखौटा माउस नाक पर लाटेकस दस्ताने का एक टुकड़ा से बना रखें, और 5% से कम जब तक माउस श्वसन दर लगभग 1 सांस / सेक isoflurane रखना. 1.5 isoflurane बारी - 2.0%. टी का उपयोग कर सिर सुरक्षितवह कान बार नहीं बीच में रोकना कान ड्रम के लिए सावधान किया जा रहा है. बार्स सुखद हो सकता है, लेकिन कान नहरों में नहीं मर्मज्ञ भी गहरा होना चाहिए.
  3. माउस नीचे एक हीटिंग पैड रखें.
  4. नेत्र मरहम लागू करने के लिए बाहर सुखाने से आंखों को रोकने के.
  5. एक छोटे शेवर या ठीक बिंदु कैंची के साथ आंखों के लिए कान के बीच से खोपड़ी दाढ़ी.
  6. स्वच्छ और साथ Chlor-(या betadine) - hexidine साफ़ शराब से बाद कुल्ला 3 बार दोहराया पोंछते द्वारा खोपड़ी बाँझ.
  7. खोपड़ी के शीर्ष पर त्वचा को हटाने के सिर के पीछे से आंखों को midline के साथ एक चीरा बनाते हैं.
  8. चीरा के किनारों को एक स्केलपेल के साथ periosteum नखरेखा. तो आवश्यक है (प्रयोगात्मक लक्ष्य पर निर्भर करता है), ध्यान से संदंश के साथ गर्दन के पीछे मांसलता वापस लेना, मांसपेशी fascicles लपकना खून बह रहा है कम से कम करने की इजाजत दी. खोपड़ी के ऊतकों के नीचे gelfoam नमी कम से कम और खोपड़ी से अधिक बढ़ने से त्वचा को रोकने के लिए लागू करें.
  9. सूखा कपास इत्तला दे दी applicator के साथ खोपड़ी सतह isopropyl शराब के साथ सिक्त खोपड़ी स्थलों के दृश्य को बढ़ाने.
  10. संरेखित: मानक stereotaxic निर्देशांक 13 खोपड़ी. इलेक्ट्रोड धारक में एक जांच ठीक बिंदु डालें और यह stereotaxic micromanipulator को देते हैं. एक तेज धातु की छड़ इस उद्देश्य छवि (5) के लिए अच्छी तरह से काम करता है.
  11. बिंदु का उपयोग करने के लिए खोपड़ी पर (छवि 5A) शीर्षस्थान और लैम्ब्डा (छवि 5 ब) की पहचान करने के लिए. जांच के पीछे और आगे इन बिंदुओं के बीच ले जाएँ जाँच है कि प्रत्येक स्थान के लिए पार्श्व औसत दर्जे का समन्वय कोई 50 से अधिक माइक्रोन से अलग है. सिर reposition के रूप में ध्यान से कान बार ढीला, सिर और कान बार laterally स्थानांतरण, और कान बार retightening द्वारा की जरूरत है.
  12. सत्यापित करें कि प्रत्येक स्थान पर पृष्ठीय - उदर ऊंचाई 50 से अधिक नहीं माइक्रोन से अलग है. नाक दबाना की ऊंचाई समायोजित करें, जो कान सलाखों के अक्ष के चारों ओर खोपड़ी घुमाएगी जाएगा,यदि आवश्यक खोपड़ी की पिच स्तर. कान बार की ऊंचाई को भी समायोजित किया जा आवश्यकता हो सकती है.
  13. एक 13 एटलस का उपयोग करने के लिए ब्याज का लक्ष्य (छवि 5C) शीर्षस्थान करने के लिए सापेक्ष निर्देशांक की पहचान. लक्ष्य से ऊपर खोपड़ी मार्क (उदाहरण के लिए, एक "एक्स" या डॉट वर्ग के चार कोनों के लिए भारत स्याही का उपयोग करने के लिए) जहां एक कपाल - उच्छेदन (छवि 5D) किया जाएगा.

3. हेड पोस्ट और ग्राउंड पिन स्थापना

  1. खोदना जेल का उपयोग करने के लिए खोपड़ी को साफ करने के लिए. Applicator के प्रयोग के लिए हाथ धोने के लिए और अधिक सतह (10 सेकंड) खोदना जेल फैल. पानी से धो और पूरी तरह से सूखे. खोपड़ी applicator के सतह का उपयोग करने के लिए दंत सीमेंट के लिए प्राइमर लागू करें. नया applicator के साथ चिपकने वाला बिखरा हुआ है. एक यूवी बंदूक प्रकाश (1 चक्र) के साथ चिपकने वाला इलाज.
  2. जमीन पिन है कि लक्ष्य साइट के लिए बाहर का है के लिए एक स्थान चुनें. ध्यान से टिप # 65 miniblade स्केलपेल जमीन पी के कम अंत के लिए विस्तृत पर्याप्त का उपयोग कर खोपड़ी में एक छोटा सा छेद बोरमें प्रवेश करने और तानिका पर आराम करो. जमीन पिन उन्मुख होना चाहिए इतना है कि यह दूर शीर्षस्थान और सिर के बाद भविष्य (6A छवि) से इशारा कर रहा है.
  3. बढ़ते बार सिर के बाद सुरक्षित और ब्लॉक और micromanipulator के लिए देते हैं. तीन आयामों में micromanipulator चलती, शीर्षस्थान पर सिर के बाद की स्थिति है, सिर्फ खोपड़ी (छवि 6B) को छू खोपड़ी पर सिर पोस्ट के आधार पर फ्लैट झूठ चाहिए.
  4. विच्छेदन जांच का प्रयोग, सिर के बाद और जमीन पिन (6C छवि) के चारों ओर दंत सीमेंट की एक छोटी राशि लागू होते हैं. सीमेंट प्रेस नीचे खोपड़ी के साथ अच्छे संपर्क सुनिश्चित करने के लिए. नोट: का उपयोग न करें या नहीं बहुत ज्यादा सीमेंट कठोर यह समान रूप से नहीं होगा. यूवी प्रकाश बंदूक (कई कोण से 3-4 चक्र) के साथ सीमेंट इलाज.
  5. सीमेंट के दूसरे चरण में लागू करते हैं और सिर पोस्ट के आसपास आधार बनाने के लिए और सिर के बाद के grooves (6D छवि) को कवर.

4. कपाल - उच्छेदन

  1. पता लगाएँ कपाल - उच्छेदन संदर्भ चिह्न, जो आंशिक रूप से भजन की पुस्तक के द्वारा अंधकार में चले जाएँगे. एक # 65 स्केलपेल का उपयोग करने के लिए एक 3 मिमी एक्स 3 मिमी इस साइट के चारों ओर वर्ग के निशान और lidocaine के प्रति संवेदनशीलता को कम करने और खून बह रहा है कम से कम की एक बूंद लागू होते हैं.
  2. (के रूप में कई के रूप में 10) वर्ग के प्रत्येक पक्ष पर कई स्कोर बनाने के लिए, हड्डी के माध्यम से और मस्तिष्क में कटौती नहीं (छवि 7A) सावधान किया जा रहा है.
  3. एक बार हड्डी प्रालंब ढीला हो जाता है, स्केलपेल के टिप का उपयोग करने के लिए इसे ऊपर ताक - झाँक करना, ड्यूरा मेटर बरकरार छोड़ (छवि 7B).
  4. हड्डी मोम के साथ कवर.

5. सर्जरी के बाद

  1. गैस संज्ञाहरण बंद करें और stereotaxic फ्रेम से माउस को हटा दें.
  2. का प्रयोग करें एक कपास इत्तला दे दी applicator के उजागर त्वचा के आसपास Lidocaine मरहम लागू करने के लिए घाव के आसपास सनसनी दबाना. एक और कपास इत्तला दे दी applicator के संपर्क में त्वचा के लिए Neosporin लागू का उपयोग करें. Ketoprofen इंजेक्षन (5 आईएम मिलीग्राम / किलो या आईपी व्यक्तिगत IACUC पशु चिकित्सकों की पसंद पर आधारित है) के रूप मेंएक के बाद सर्जरी एनाल्जेसिक. माउस आम तौर पर हो जाएगा और गैस बंद करने के मिनट के भीतर चल.
  3. एक गर्म पिंजरे और निगरानी में जगह माउस जब तक यह पशु आवास पर लौटने के लिए तैयार है.
  4. जानवर पर जाँच की जानी चाहिए कम से कम एक बार प्रति दिन के बाद यह सर्जरी से बरामद किया है. गरीब खाने और / या पीने और उदासीन व्यवहार के लक्षण के लिए देखो. यदि दर्द का संदेह है, हर 24 घंटे (के रूप में के बाद सर्जरी के अंत में एक ही खुराक) तक क्रमशः समाप्त ketoprofen प्रदान करते हैं. Lidocaine घाव अगर पशु scratching है के लिए स्थानीय रूप से लागू किया जा सकता है या असुविधा के लक्षण दिखाता है. पशु आम तौर पर जटिलताओं या दर्द के बिना सर्जरी से उबरने.

6. रिकॉर्डिंग और डाई के इंजेक्शन

  1. रिकॉर्डिंग के लिए माउस का उपयोग करने से पहले सिर के बाद सर्जरी के बाद कम से कम एक दिन रुको.
  2. फोम - निरोधक एक डिवाइस में जगह माउस माउस शरीर ढाला. माउस पहले से ही इस उपकरण के लिए अनुकूलित किया गया, जिससे इसकी चिंता को कम करने. विशिष्ट अनुकूलन हैमाउस हर दिन संभाल दूध छुड़ाने का वायु के बाद और लगभग एक सप्ताह के लिए सर्जरी और प्रयोगों से पहले, फोम डिवाइस में 1-5 मिनट के लिए माउस जगह है. Stereotaxic फ्रेम छवि (4) डिवाइस में निलंबित.
  3. सिर के बाद सुरक्षित बढ़ते बार, जो अब stereotaxic फ्रेम छवि (4) के लिए तय हो गई है.
  4. एक कुंद चमड़े के नीचे 22 गेज सुई टिप के साथ समाप्त तार के साथ जमीन पिन कनेक्ट.
  5. कपाल - उच्छेदन से अधिक हड्डी मोम निकालें. ड्यूरा निकालें यदि आवश्यक हो तो एक miniblade स्केलपेल के टिप का उपयोग कर.
  6. को उचित stereotaxic स्थान पर इलेक्ट्रोड ड्राइव और रिकॉर्डिंग शुरू छवि (8). केवल electrophysiological रिकॉर्डिंग के लिए, इलेक्ट्रोड की एक किस्म में इस्तेमाल किया जा सकता है. इलेक्ट्रोड की पसंद स्थान और आवश्यक रिकॉर्डिंग के प्रकार पर निर्भर करता है. जाग माउस रिकॉर्डिंग के लिए इलेक्ट्रोड की पसंद क्या एक शोधकर्ता एक संवेदनाहृत माउस का उपयोग करता है के रूप में एक ही हो जाएगा. संयुक्त electrophysiological रिकॉर्डिंग के लिए के साथइंजेक्शन / डाई ट्रेसर, एक micropipette इलेक्ट्रोड के 10 प्रयोग किया जाता है. micropipette पसंद की डाई / दरियाफ्त इतना है कि यह iontophoretically electrophysiological प्रयोगों के अंत में अंतःक्षिप्त किया जा सकता है के साथ भरा है. Multibarrel इलेक्ट्रोड भी इस्तेमाल किया जा सकता है कि औषधीय जोड़तोड़ बनाया जा सकता है. multibarrel इलेक्ट्रोड एक एकल रिकॉर्डिंग micropipette छवि (8) पर मुहिम शुरू की है. इन तकनीकों में साहित्य में मानक और anesthetized बनाम जाग रिकॉर्डिंग के लिए अलग अलग नहीं हैं.
  7. रिकॉर्डिंग 3-4 लगातार दिन में 4-5 घंटे के लिए किया जा सकता है.
  8. रिकॉर्डिंग सत्र के अंत में, डाई / ट्रेसर इंजेक्शन जा सकता है. क्योंकि दिमाग में कोई दर्द रिसेप्टर्स हैं, डाई या मस्तिष्क में दरियाफ्त की iontophoretic इंजेक्शन के लिए परेशानी पैदा करने की संभावना नहीं है. हालांकि, एक बार क्षेत्र है जहां इंजेक्शन के लिए बनाया जा रहा है electrophysiological प्रतिक्रिया गुण विशेषता है, पशु isoflurane च साथ संवेदनाहृत हो सकता हैया इंजेक्शन. यह किसी भी संभावित अवांछित उत्तेजना खत्म होगा. क्योंकि डाई / दरियाफ्त micropipette में पहले से ही है, सक्रिय और जमीन सुराग electrophysiological रिकॉर्डिंग से बंद किया जा सकता है वर्तमान जनरेटर iontophoretically डाई / दरियाफ्त इंजेक्षन करने के लिए सेट अप. डाई / इलेक्ट्रोड में ट्रेसर के लिए उचित प्रोटोकॉल का उपयोग करें. Headpost संयम और शरीर संयम से पशु निकालें और अपने घर पिंजरे में वापस.
  9. प्रयोग के अंत में, इच्छामृत्यु और ऊतक के प्रसंस्करण के लिए इंजेक्शन साइट और लेबलिंग की वसूली के लिए उचित प्रोटोकॉल का पालन करें.

7. प्रतिनिधि परिणाम

सिर की सफल स्थापना के बाद experimenter के कई दिनों से अधिक एक unanesthetized, जाग माउस से एक और multiunit प्रतिक्रियाओं को रिकॉर्ड करने की अनुमति देता है. संयम प्रणाली मस्तिष्क में न्यूरॉन्स की एक स्थिर electrophysiological रिकॉर्डिंग के लिए अनुमति देता है. एक यूनिट और मजबूत प्रतिक्रिया टी उत्कृष्ट अलगावओ उत्तेजनाओं को कई दिन से अधिक एक ही मस्तिष्क संरचना से दर्ज किया जा सकता है माउस अवर colliculus (छवि 9A, एक दिन, 9b चित्रा, दो दिन) में उदाहरण के लिए,. स्थापना सिर के बाद एक अच्छा के साथ, प्रत्येक माउस लगातार stereotaxic तंत्र और माउस stereotaxic एटलस, 13 विशेष रूप से मस्तिष्क नाभिक विश्वसनीय स्थानीयकरण में जिसके परिणामस्वरूप के लिए गठबंधन किया जाएगा. यह विश्वसनीय स्थानीयकरण रंगों और tracers के कई दिनों के बाद रिकॉर्डिंग विशिष्ट संरचनाओं में इंजेक्शन के लिए अनुमति देता है. उदाहरण के लिए, श्रवण brainstem को श्रवण मध्यमस्तिष्क से अनुमानों अवरोही आकलन, dextran amine की (chromagen के रूप में कल्पना का उपयोग diaminobenzidine) biotinylated की माउस अवर colliculus (10A छवि) में electrophysiologically इंजेक्शन के स्थल पर neuronal प्रतिक्रिया गुणों की पहचान करने के बाद अंतःक्षिप्त किया जा सकता है (चित्र. 10A में, एक न्यूरॉन के 51 kHz के एक आवृत्ति के साथ दर्ज की गई थी), और ऊतक प्रसंस्करण के बाद,contralateral पृष्ठीय cochlear नाभिक में nterograde लेबलिंग और किया गया है कल्पना कर सकते हैं साजिश रची (10B छवि). उच्च संकल्प पर photomicrographs भी anterogradely लेबल axons और टर्मिनलों (10C छवि) को देखने के लिए प्राप्त किया जा सकता है.

चित्रा 1
आकृति 1.

चित्रा 2
चित्रा 2.

चित्रा 3
चित्रा 3.

चित्रा 4
चित्रा 4.

चित्रा 5
चित्रा 5.

चित्रा 6

7 चित्रा
7 चित्रा.

संख्या 8
संख्या 8.

9 चित्रा
9 चित्रा.

10 चित्रा
10 चित्रा.

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Discussion

माउस में electrophysiological और neuroanatomical प्रयोगों के लिए सिर के बाद संयम प्रणाली का लाभ यह है कि प्रयोगों unanesthetized, जाग चूहों के साथ आयोजित किया जा सकता है, संभावित प्रतिक्रिया चतनाशून्य करनेवाली औषधि दवाओं के कारण संदूषण को नष्ट करने. इसके अलावा, सेट अप कई दिनों से अधिक इस्तेमाल किया जा सकता करने के लिए और अधिक कुशल पशु उपयोग के लिए अनुमति.

सिर पोस्ट के लिए हाल घटक उपलब्ध बंद-the-शेल्फ हैं. केवल सिर के बाद और बढ़ते तंत्र कस्टम हैं, जो दोनों के अपेक्षाकृत सीधा कर रहे हैं का निर्माण करने और पुन: प्रयोज्य हैं. यदि एक मशीन की दुकान के एक संस्थान में उपलब्ध नहीं है, शोधकर्ता होने की संभावना का उपयोग कर सकते हैं http://www.emachineshop.com/ आवश्यक घटक बनाना है.

कुशल शल्य कौशल आवश्यक हैं. सर्जन ठीक शल्य चिकित्सा तकनीक, जिनमें से कुछ सबसे अच्छा एक खुर्दबीन के नीचे किया जाता है के साथ कुशल होना चाहिए. सर्जरी सड़न रोकनेवाला की शर्तों के तहत किया जाना चाहिए. खोपड़ी प्रालंब हटाने की प्रक्रिया का सबसे नाजुक बिंदु है. ध्यान से और धीरे आयत के चार पक्षों के साथ एक स्केलपेल जबकि एक ऑपरेटिंग माइक्रोस्कोप के माध्यम से देख के साथ कई स्कोर बनाने से, खोपड़ी प्रालंब "बंद popped है" कम से कम खून बह रहा है के साथ कर सकते हैं, ड्यूरा मेटर बरकरार जा रही है. अंतर्निहित vasculature के साथ परिचित के लिए आवश्यक है, बनाने के रूप में एक प्रमुख रक्त वाहिका के ऊपर एक कट अवांछनीय रक्तस्राव का खतरा पैदा करता है. क्योंकि हमारे अनुसंधान श्रवण प्रणाली पर केंद्रित है, हम craniotomies प्रदर्शन के क्रम में हड्डी आयोजित भीतरी कान आघात के लिए संभावित को कम करने के लिए अभ्यास का उपयोग से परहेज है.

यह विमान पूर्वकाल पीछे और सिर के बाद संलग्न करने से पहले stereotaxic संरेखण में स्तर प्राप्त करने के लिए महत्वपूर्ण है. इस एहतियात सुनिश्चित करता है कि सिर प्रयोगात्मक परीक्षण के पार स्तर रहेगा और मस्तिष्क मस्तिष्क एटलस का उपयोग loci के स्थान की सुविधा.

> तम्बू रिकॉर्डिंग के लिए, यह सर्जरी से पहले कुछ दिनों के लिए एक दैनिक आधार पर माउस को संभालने के लिए उपयोगी है बस हो रही संभालने और फोम युक्ति में संयम उजागर करने के लिए माउस बहुत कम और तनाव के आंदोलन के साथ अब रिकॉर्डिंग सत्रों की सुविधा है. माउस कुंजी के लिए माउस फोम सैंडविच में snugly फिट है यदि जरूरत से ज्यादा पशु ले जा सकते हैं, यह करने के लिए लगातार संघर्ष जाता है. अगर माउस के लिए संघर्ष शुरू होता है, यह सबसे अच्छा है रिकॉर्डिंग सत्र समाप्त करने के लिए और फिर अगले लेने रिकॉर्डिंग है कि stimuli द्वारा नहीं पैदा कर रहे हैं में बड़े biopotentials में माउस परिणामों के दिन. आंदोलन ये आम तौर पर अधिक से अधिक आयाम हैं कि कार्रवाई क्षमता और आंतरायिक आंदोलन कलाकृतियों को भी रिकॉर्डिंग के तारों को छू जानवर के द्वारा उत्पन्न किया जा सकता है. यह महत्वपूर्ण है करने के लिए सुनिश्चित करें कि कोई जानवर को छू तारों कुल मिलाकर कर रहे हैं., इस तकनीक के हमें anesthetics के उपयोग के बिना श्रवण प्रसंस्करण और शरीर रचना पर कई अध्ययन का संचालन करने के लिए अनुमति दी गई है.

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Disclosures

हम खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.

Acknowledgments

NSF के अनुदान 0920060, एनआईएच DC004395 अनुदान, में NHMRC 1,009,482 अनुदान, विज्ञान और चिकित्सा अनुसंधान के कार्यालय एनएसडब्ल्यू, और Garnett गायब हो चुकी है और रॉडने विलियम्स मेमोरियल फाउंडेशन द्वारा समर्थित है.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Etch gel for cleaning skull prior to dental cement Henry Schein 101-5396 12/pk with 1.2 mL syringes
Primer for dental cement Kerr Optibond 25881 8 mL bottle
Adhesive for dental cement Kerr Optibond 25882 8 mL bottle
Applicators for dental cement Kerr Optibond 24680 200/pk
Dental Cement Charisma, Heraeus Kulzer 66000085 4gm Syringe Refill
Tungsten Rod (Ground Pin) A-M Systems 717200 0.010" diameter
Economy UV Curing Light Henry Schein CU-80
Head-post Built in-house
Mounting bar Built in-house
Mounting block Built in-house
Stereotaxic Frame David Kopf Instruments 902
Mouse and Neonatal Rat Adaptor Stoelting Co. 51625
Deltaphase Isothermal Pad Braintree Scientific, Inc. 39DP

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Evans, E. F., Nelson, P. G. The responses of single neurones in the cochlear nucleus of the cat as a function of their location and the anaesthetic state. Exp. Brain Res. 17, 402-427 (1973).
  2. Joris, P. X. Response classes in the dorsal cochlear nucleus and its output tract in the chloralose-anesthetized cat. J. Neurosci. 18, 3955-3966 (1998).
  3. Populin, L. C. Anesthetics change the excitation/inhibition balance that governs sensory processing in the cat superior colliculus. J. Neurosci. 25, 5903-5914 (2005).
  4. Young, E. D., Brownell, W. E. Responses to tones and noise of single cells in dorsal cochlear nucleus of unanesthetized cats. J. Neurophysiol. 39, 282-300 (1976).
  5. Donoghue, J. P. Contrasting properties of neurons in two parts of the primary motor cortex of the awake rat. Brain Res. 333-3173 (1985).
  6. Westby, G. W., Wang, H. A floating microwire technique for multichannel chronic neural recording and stimulation in the awake freely moving rat. J. Neurosci. Methods. 76, 123-133 (1997).
  7. Suga, N., O'Neill, W. E., Manabe, T. Cortical neurons sensitive to combinations of information-bearing elements of biosonar signals in the mustache bat. Science. 200, 778-781 (1978).
  8. O'Neill, W. E., Suga, N. Target range-sensitive neurons in the auditory cortex of the mustache bat. Science. 203, 69-73 (1979).
  9. Suga, N., O'Neill, W. E., Manabe, T. Harmonic-sensitive neurons in the auditory cortex of the mustache bat. Science. 203, 270-274 (1979).
  10. Portfors, C. V., Felix, R. A. 2nd Spectral integration in the inferior colliculus of the CBA/CaJ mouse. Neuroscience. 136-1159 (2005).
  11. Felix, R. A. 2nd, Portfors, C. V. Excitatory, inhibitory and facilitatory frequency response areas in the inferior colliculus of hearing impaired mice. Hear Res. 228, 212-229 (2007).
  12. Portfors, C. V., Jonson, K. G., Roberts, P. D. Over-representation of species-specific vocalizations in the awake mouse inferior colliculus. Neuroscience. 162, 486-500 (2009).
  13. Franklin, K. B. J., Paxinos, G. The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. 3rd edn, Academic Press. NY. (2007).

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