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전체 혈액의 Enoxaparin 항응고제의 효능의 빠른 포인트 -의 - 케어 분석

Medicine
 

Summary

낮은 분자 - 무게 헤파린, enoxaparin에 의한 혈액 응고의 억제의 급속한 양적 분석의 데모. enoxaparin의 기여는 heparinase과 소화를 통해 영향을 제거하여 평가된다. 분석의 둥근 설명은 우리 출판 종이에 자세히 설명되어 있습니다.

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Inchiosa Jr., M. A., Pothula, S., Kubal, K., Sanchala, V. T., Navarro, I. Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood. J. Vis. Exp. (68), e3852, doi:10.3791/3852 (2012).

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Abstract

환자의 혈액이 효과적으로 낮은 분자 - 무게 헤파린 (LMWH), enoxaparin에 의해 anticoagulated되는 범위를 결정하는 임상 시험에 대한 필요가있다. 이 작업은 신속하게 결정 할 수 있다면 중요한 것 어디에서 긴급 임상 상황도 있습니다. 현재 검정은 이러한 목표를 달성하기 위해 설계되었습니다. 우리는 enoxaparin 알려진 농도를 타서 한 사람의 혈액 샘플을 assayed. 현재 검정의 필수 기능은 heparinase과 비활성을 완료 할 수 저하에 의한 환자의 혈액 샘플에서 enoxaparin의 효능을 정량화입니다. enoxaparin를 타서 한 2 개의 혈액 샘플을 Vacutainer 튜브 (프랭클린 호수, NJ Becton-Dickenson)에 그려진 하나 있었는데 샘플을 37 번 5 분 ° C에 heparinase을 소화 한, 다른 예제는 환자의 기본 anticoagulated 상태를 나타낸다. heparinase - 처리 샘플에서 혈액 응고 시간의 비율 단축은 같은 B에 비해aseline 상태는 enoxaparin의 항응고제 기여를 굴복. 우리는 혈액 응고 시간 측정 (국제 Technidyne 공사, 에디슨, NJ)에 대한 휴대용, 배터리 작동 Hemochron 801 장치를 사용했습니다. 장치는 2 thermostatically 제어 (37 ° C) 검정 관 우물이 있습니다. 우리는 악기의 제조업체에서 제공하는 검정 카트리지의 두 종류 assays를 실시했다. 한 카트리지의 감도를 증가 바뀌​​ 었습니다. 우리는 activators으로 만 튜브의 유리 표면, 그리고 아마도 감지 자석을두고, 증류수로 린스 광범위한하여 FTK-ACT 카트리지에서 카올린을 제거했습니다. 우리는이 우리의 최소한 활성화 분석 (MAA)를했다. 최소한 활성화 검정의 사용은 우리와 다른 사람들에 의해 연구되었습니다. 2-4 연구 한 두 번째 카트리지가 활성화 부분 thromboplastin 시간 (aPTT) 검정 (A104)이다. 이 문제는 제조업체에서 제공 한 사용되었다. 악기 WER의 thermostated 우물e는 heparinase의 소화와 응고 assays 모두 사용됩니다. 분석은 10 분 이내에 완료 할 수 있습니다. MAA 분석은 전형적인 임상 농도 범위 enoxaparin의 heparinase 소화 후 혈액 응고 시간에 강력한 변화를 보여 주었다. 0.2에서 혈액 샘플의 ML 당 enoxaparin의 반 XA IU, heparinase는 소화 응고 시간에 9.8 %의 평균 감소 (20.4 초) 발생, enoxaparin의 ML 당 1.0 IU에서 41.4 %의 감소 (148.8 초)이있었습니다. 이 보고서는 분석의 실험 응용 프로그램을 제공, 임상 설정에서 그 값은 여전히​​ 설정해야합니다.

Protocol

1. Heparinase의 Reconstitution

  1. 동결 건조 된 heparinase 나는 정화 단백질의 1 μg을 포함하는 시험관에 (지멘스, 뉴 어크 델라웨어, DadeHepzyme REF B4240-10) 상업적으로 얻어진다. 단백질은 염분의 0.25 ML (0.9 % NaCl)에 용해되어 있습니다.

2. 혈액 샘플의 수집

  1. Vacutainer 튜브 (; 프랭클린 호수, NJ Becton - 디킨슨을), 버퍼, 두 개의 혈액 샘플은 나트륨 시트르산 (3.2 % 0.3 ML 0.109M)에 진공에 의해 이끌려하는 튜브는 모두 enoxaparin의 알려진 농도와 사전 아군이다; 혈액 양 2.7 ML은 그려주고 있습니다. 전체 콘텐츠는 3.0 ML입니다.

3. Heparinase의 소화

  1. 주사기 (; 유리 병의 80 %, 약 0.2 ML 단백질의 0.8 μg)로 흡입 할 수있는 heparinase 유리 병의 전체 내용은 한 Vacutainer 튜브로 전송됩니다, 염분의 0.2 ML (0.9 % NaCl)이 추가됩니다 바젤 역할을 두 번째 관enoxaparin 효과 제거하기 전에 오프라인 상태입니다.
  2. 두 Vacutainer 관은 5 분 동안 Hemochron 장치의 thermostated 우물에 배치됩니다. (heparinase와 5 분 소화 시간의 적절성은 우리의 이전에 다음 ID로 출판 업무에 설립되었습니다. 1)

4. 응고 Assays

  1. heparinase의 부화의 끝 부분에 혈액의 2.0 ML은 검정 카트리지로 전송됩니다. MAA 관의 경우는 응고를 시작하기 위해 250 MM CaCl 2 0.1 ML로 미리 채워집니다. 상업 aPTT 검정 카트리지 (A104)은 항응고제로 나트륨 구연산을 포함하는 Vacutainer 튜브에 그려진 된 그 전체 혈액에 응고 시작하기 위해 설계되었습니다.
  2. Hemochron 장치는 혈액 응고의 완료를 신호와 초 응고 시간을 보존합니다. 응고 TI로 나눈 heparinase - 처리 샘플 및 기본 샘플 사이의 응고 시간의 차이,나 기준 샘플, enoxaparin의 제거에 의한 % 감소를 얻을. 아래 설명 강력한 선형 상관 관계가 방지 XA의 chromgenic 분석하여 enoxaparin의 측정 농도와 상관 관계에 대한 %의 응고 시간이 감소하고 전체 혈액의 아군 샘플에서 enoxaparin의 농도뿐만 아니라 사이의 관계에 대해 획득 된 활동. enoxaparin 농도의 반 (反) XA의 assays는 2 단계 chromogenic 분석을위한 상용 키트 (; Aniara, 메이슨, OH BIOPHEN)로 실시되었다.

Representative Results

그림 1은 enoxaparin의 아군 농도 (ML 당 0.2, 0.4 및 1.0 항 XA IU)의 시리즈를위한 heparinase과 enoxaparin의 제거 후 혈액 응고 시간에 % 감소 사이의 관계에 대한 결과를 제공합니다. 결과는 MAA와 aPTT 분석 카트리지를 모두 제공됩니다. 안티 XA 활동의 chromogenic 분석에서 enoxaparin의 측정 농도는 각 음모를 자리표에 포함되어 있습니다.

그림 2는 안티 XA 활동의 chromogenic 측정 대 응고 시간 % 감소와 같은 데이터의 플롯을 선물한다.

높은 통계 significances와 강력한 선형 상관 관계는, 네 명 모두 관계에 대한 발견되었습니다.

그림 1
그림 1. enoxaparin contr의 치료 결정 포인트 -의heparinase과 부화 후 혈액 응고 시간의 퍼센트 변경 (단축)에 따라 아군 전체 혈액의 응고 시간을 ibution. 아군 enoxaparin 농도는 전체 혈액에 추가되고 측정 된 안티 - XA 플라즈마 농도는 (괄호 안의 ± SE를 의미) 각 그래프의 가로 좌표에 배치됩니다. 응고 시간의 모든 %의 변경 사항은 초 응고 시간의 평균 단축과 함께 수단과 SE로 제공됩니다. 같은 환자의 데이터가 점선으로 연결되어 있습니다. 음모의 별표로 식별 네 명의 환자에 대한 데이터가 A (MAA 결과) 줄거리 B에서 네 명의 환자 (aPTT의 assays)과 동일합니다. 그 결과 모든 단일 결정을 나타냅니다. 피어슨 상관 계수였다 R = 0.869 (P = 1.9 × 10 -5)과 R = 0.916 (P = 2.8 × 10 -5) 각각 MAA와 aPTTassay과의 관계에 대해. Inchiosa 외의 허가를 재현 1.


. 그림 2 그림 1A & B에 표시된 포인트의 케어 assays의 응고 시간의 퍼센트 변화에 대한 결과는 플라즈마 방지 요소 XA 농도에 대해 도시 아르 A, MAA 결과,. B, aPTT의 assays. 그 결과 모든 단일 응고 시간 assays 및 안티 요소 XA 농도의 단일 결정에서입니다. 피어슨 상관 계수는 R이었다 = 0.910 (P = 2.5 × 10 -6)과 R = 0.922 (P = 2.0 × 10 -5) 각각 Inchiosa 외의 허가를 복제 MAA와 aPTT 분석과의 관계를 들면, 1.

Discussion

enoxaparin 효능이 검정은 출혈이나 혈종의 개발의 승무원 위험이있는 침습적 절차를 수행의 상대적 안전성을 결정하는 중요한 옵션이 될 수있다. 경막 외 주사로 간주되는 때 특히 중요 할 것입니다. 가이드 라인의 대다수는 enoxaparin과 침략 절차의 개시의 주입 사이에 12 시간 대기 기간을 권장 5 신장 장애, 비만과 임신이 enoxaparin의 주입 요구 사항에 영향을 미칠 수있다 6,7를 분석는 10 이내에 완료 할 수 있기 때문에.. - 분 기간은, 그것은이 정맥 thromboembolism 개발의 위험에 노출되어 환자의 anticoagulation의 적절성에 관한 정보를 제공 할 것이라고 병원이나 의사의 사무실에서도 사용할 수 있습니다. 필요에 따라 즉시 투여 조정은 제정 될 수 있습니다.

플라즈마의 enoxaparin 농도는 chromogenic에 의해 측정 될 수있다응고 요소, XA의 억제의 범위에 ssay. 그러나,이 만의 농도, 명확하게 개별 환자들 사이에서 널리 다릅니다은 항응고제의 효능. 6-8 산출

우리의 연구는 enoxaparin과 함께 진행되었다. 그러나,이 분석은 heparinase I.하여이 이미 dalteparin, nadroparin 및 tinzaparin의 경우로 알려져 있습니다 저하되는 모든 LMWH에 적용 할 수 있다는 사실을 예상 할 수 있습니다. 9-11는 우리의 기능과 관련하여 분석을 설계 Hemochron 응고 시간 악기. 악기는 상대적으로 저렴, 또한 일회용 혈액 수집 관, heparinase 앰풀 및 검정 카트리지는 한 환자에 대한 분석입니다 약 15 달러를 완료 할 수 있습니다. 따라서,이 다양한 임상 설정에서 항응고제 상태를 모니터링하기에 적합한 될 것으로 예상됩니다.

Disclosures

저자는 공개 할 수 없어요.

Acknowledgments

조사는 전적으로 부서 및 기관 자원의 지원으로 수행되었다. 응고 장치 (Hemochron 801)은 제조업체의 의무없이 빌려줬습니다. 검정 카트리지는 자신의 소매 비용에서 구입했다. 동영상에 입문 수치는 Sanderink, 외에서 바뀌 었습니다. 12 동영상에서 두 번째 그림 (heparinase의 소화 시간 코스) Inchiosa 외의 허가를 재현되었다. 1

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Hepzyme Siemens AG B4240 heparinase I
"MAA" cartridge Technidyne FTK-ACT modified by kaolin removal
aPTT cartridge Technidyne A104

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References

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