Sıçan Karaciğer Hücreleri İzolasyon ve İlköğretim Kültür

JoVE Journal
Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

İlköğretim hepatositler bir fizyolojik ilgili deneysel sistem biyokimyasal, moleküler ve metabolik fonksiyonlarını değerlendirmek için değerli bir araç sağlar. Biz sürekli to1.0 × 10 kadar yaşayabilir hepatositler üretir yerinde karaciğer perfüzyon, sıçan için güvenilir bir protokol tarif

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Shen, L., Hillebrand, A., Wang, D. Q. H., Liu, M. Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells. J. Vis. Exp. (64), e3917, doi:10.3791/3917 (2012).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

İlköğretim hepatosit kültürü yaygın karaciğer fonksiyonu, hastalık, patofizyolojisi, farmakoloji ve diğer ilgili konularda temel araştırmalarda kullanılan bir araçtır. Sağlam hepatosit izolasyonu için iki adım kollajenaz perfüzyon dayanan yöntemi ilk kez 1969 1 Berry ve Friend tarafından tanıtıldı ve o zamandan beri birçok değişiklikler geçirmiştir. En sık kullanılan teknik Seglenin 1976 2 tarafından tanımlanmıştır. Esasen, hepatositlerde portal ven yoluyla olmayan bir recirculating kollajenaz perfüzyon ile anestezi yetişkin sıçan ayrışmış bulunmaktadır. İzole hücreleri daha sonra, bir 100 mikron gözenek boyutu örgü naylon filtre aracılığıyla süzülmüş ve plakalar üzerinde kültürlenmiştir. 4-saatlik kültür sonra, orta kültürüne ek süre için serum içeren ya da serum içermeyen aracı madde, örneğin HepatoZYME-SFM ile değiştirilir. Bu prosedürler iyi metin ile daha çok video gösterdiği edilebilir cerrahi ve steril kültür adımları gerektirir. Here, biz çok sayıda canlı hepatositlerin nesil sürekli izin video ve yazılı bir protokol, her iki tarafından bu işlemler için ayrıntılı adımlar belgelemek.

Protocol

1. Hazırlık

Tüm tamponları taze steril teknik kullanılarak hazırlanmıştır ve bir Corning 0.22 mikron filtre kullanılarak sterilize filtresi.

  1. Hank Dengeli Tuz Çözeltisi için aşağıdaki ekleyerek Ben tampon Perfüzyon hazırlayın (HBSS, Ca 2 olmadan + ve Mg 2 +, bkz. Tablo 1): 25 0.5 mM ve HEPES 0,9 mM EDTA için Mg 2 + (MgCl2) mM.
  2. (HBSS için aşağıdaki ekleyerek Perfüzyon tampon II hazırlayın Ca 2 + ve Mg 2 +, 25 mM HEPES: Tablo 1) bakın.
  3. Perfüzyon tampon II artı collagenaseII hazırlayın: kollajenaz II (1000 U) 300 ml Perfüzyon tampon II ile çözülür ve perfüzyon önce su banyosunda çözüm sıcak tutun. Kollajenaz II aktivite süresi olan azalma nedeniyle, bu çözelti 30 dakika içinde kullanılmalıdır.
  4. William komple Orta hazırlayın: Aşağıdaki ekle; insülin ile 100 nM, dekzametazon, 100 nM, penisilin 100 IU / ml streptomisin ve ila 100 mg / ml 'ye L-glutamin 2 mM, fetal bovin serumu (FBS)% 5 ila için: Williams' Orta E.
  5. Bunlar, tamponlar 42 az su banyosunda 30 dakika boyunca ısıtılmış edilmelidir ° C, 37 kanülün bir çıkış sıcaklığı tekabül eden en uygun ° C.

2. Karaciğer İzolasyon için Rat Perfüzyon

  1. Perfüzyon sistemi pompa, otoklavlanabilir silastik tüp ve su banyosu (bkz. Şekil 1) oluşur. 10 ml / dak perfüzyon peristaltik pompa önceden ayarlanabilir debi.
  2. Intraperitoneal (ip) ketamin (87 mg / kg vücut ağırlığı) artı Xylazine (13 mg / kg) ile bir yetişkin sıçan (300 g vücut ağırlığı) uyuşturmak. Anestezi derinliği ayak tutam tarafından takip edilmelidir. Rat artık zararlı uyaran tepki verdiğinde, karın saç ve hazırlık betadin ve etanol ile karın tıraş. Ensizyon yoluyla girin.
  3. Ortaya çıkarmakdikkatli karın boşluğunun sağ dış organları hareket ve hepatik portal ven (bkz. Şekil 1) içine 18-gauge angiocath eklemek tarafından hepatik portal ven.
  4. Iğne perfüzat boru bağlayın ve önceden ısıtılmış (37 ° C) Perfüzyon Tampon ben düşük bir akış hızı (10 ml / dak) in situ olarak infüzyon başlatabilir.
  5. Düzgün bir şekilde gerçekleştirildiği takdirde, karaciğer anında mazur başlamalıdır. Başarılı kateterizasyonu onaylandıktan sonra, inferior vena kava (IVC) bir kesim efflux (Şekil 1) izin olun. Başarılı kateterizasyonu için bir başka test IVC üzerine steril bez ile hafif bir basınç uygulayarak yapılabilir; karaciğerin tüm loblar hızla şişmeye başlaması gerekir.
  6. 25 ml / dak akış hızını artırmak. Karaciğer rengi soluk haline gelmelidir.
  7. Ek bir 6 dakika için akış kesinti olmaksızın Perfüzyon tampon II artı kollajenaz II perfüzyon çözüm açın.
  8. <li> Periyodik (sindirim sırasında 5-10 kez) 5 saniye aralıklarla için IVC için bez ile basınç uygulayın. Karaciğer da toplam sindirim süresini azaltmak, ve nihai verimi artırarak, gelişmiş karaciğer hücre ayrışma yol şişer.
  9. Kollajenaz perfüzyon sonra, karaciğer Duygusal aramaya başlamalıdır. 20 ml William tam medyum ile bir pre-soğutulmuş steril bir behere karaciğer içermeyen, yerinde incelemek ve sonra da doku kültürü hücre ardına al.

3. Hepatosit Hücre İzolasyon

  1. Hücre kültürü kaput içinde, nazikçe steril bir petri içinde William komple Orta içine hücreleri dağıtmak için bir hücre kazıyıcı kullanın.
  2. Bağ dokusu ve sindirilmemiş doku parçaları ortadan kaldırmak için bir 50 ml Konik tüpü içine, bir 100 mikron gözenek büyüklüğü hücre süzgecinden hücre dispersiyon filtre.
  3. 4 ° C'de 3 dakika süreyle 50 x g'de 40 ml William tam medyum ve santrifüj hücreleri askıya
  4. Süpernatant aspire, veyavaşça hücreleri yıkamak için 40 ml soğuk William'ın tam Orta hücrelerin yeniden askıya. Santrifüj tekrarlayın.
  5. Süpernatant aspire ve yavaşça 25 ml William'ın tam Orta ile tekrar askıya hücreler. Tüpe PBS içinde 25 ml% 90 Percoll çözüm ekleyin ve hafifçe karıştırın.
  6. 4 ° C'de 10 dakika süreyle 200 x g'de santrifüje Canlı hücreler Percoll degrade altında kalacaktır, çünkü degrade üstünden ölü hücreleri aspire.
  7. 30 ml ılık William'ın tam Orta hücre pelet Askıya ve sonra santrifüj tekrarlayın ve 20 ml sıcak William'ın tam Ortamda hücre pelletini yeniden askıya.
  8. Bir hemasitometre kullanarak hücre süspansiyonu içindeki hücreleri saymak ve Tripan mavisi ile hücre canlılığı belirler.

4. Hepatosit Kültür

  1. Tercih edilen konsantrasyon sıcak William komple Orta hücreleri seyreltilir, örneğin 2.5 x 10 5 hücre / ml. Hücre kültürü plakalar üzerinde istenilen hacimde Tabak hücreler, örneğin. 5 x 10 5 hücre / 2 ml / kuyu, 6 kuyu / plaka; veya 2.5 iyi x 10 5 hücre / 1,5 ml /, 12 kuyu / plakası. Un kaplı plaka karaciğer hücre kültürleri için uygundur.
  2. Hepatositler tam hücre boyutu büyüyecek ve son bir izdiham elde etmek için yeterli alan sağlarken>% 85 canlı hücreler ile tipik bir hazırlık olarak, hücre yoğunluğu hücre-hücre teması sağlayan yaklaşık% 60-70 izdiham, ulaşmalıdır % 90-95.
  3. İyi bir merkezi bölgeye toplamak için hücreler için eğilimi en aza indirmek için, başka bir deyişle, hepatositlerin eşit bir tek tabaka oluşturmak üzere (hücre inkübatöründe bir hava akımı içinde nedeniyle büyük olasılıkla), plakaları içinde kalmasına izin Bir kuluçka koymadan önce 30 dakika boyunca hücre kültürü kaput.
  4. Kültür 37 hücreleri% 95 hava ve% 5 CO2 ile nemlendirilmiş bir atmosferinde ° C. 4-h kültürden sonra, hücreler ya aynı serumu içeren ortam içinde kalır olabilir ya da serum-f ile orta yerineree ortam, örneğin HepatoZYME-SFM (bkz. Tablo 1). Serum içermeyen aracı madde, serum içermeyen aracı madde kullanılır hormonlar hiçbir yan etki ile hücre morfolojisi temin edilmesine yardımcı olur.
  5. Hücreleri deney önce kurtarmak ve en az bir gece büyümeye olanak sağlar. Bu kritik enzimler (örneğin, P450) fonksiyonu korumaya yardımcı olabilir, çünkü 24 saat içinde test için hücreleri kullanmanızı öneririz.
  6. Gerekirse, 2 gün aralıklarla büyüme medyumu yerini alır.

5.. Temsilcisi Sonuçlar

Koşulları düzenli olarak bir sıçan karaciğer hazırlık başına 1.0 x 10 8 hücrelerinin hücre hasat oluşturmak nitelendirdi. Tripan mavisiyle çıkarma ile ölçülen hepatositlerin yaşayabilirliği 88 ~% 96 aralığında olduğu, sürekli.

Şekil 2, 4 saat tohumlama sonrası hepatositlerin agrega ve form küme tasvir. En çok izole hücreler tipik monolayer büyüme düzleşir ve yaymak. 24 saat olarak, hücre kenarları tanımlandığı gibidir, hücre yüzeyinde oldukça düz ve lipid damlacıkları görülebilir. Hücreler 1-3 hücrelerinin merkezinde bulunan yuvarlak nükleol, ve hücreler arasında çekirdekler görüntü tutarlıdır boyutu (Şekil 2) sahiptir.

Şekil 1
Şekil 1. Karaciğer perfüzyon şeması. Bir 18-gauge angiocath karaciğer portal damar içine yerleştirilir, daha sonra bir perfüzat boru iğne bağlanır. Başarılı kateterizasyonu onaylandıktan sonra, inferior vena kava (IVC) bir kesim efflux izin olun.

Şekil 2
Şekil 2. Zamanla kültür hepatosit (4 saat ile 24 saat), büyütme x 200 morfolojisi. 24 saat kültüre sonra, hücreler tipik monolayer büyüme yayılır ve hücreler arasındaki kavşaklar doğrusaldır.

Reaktif Adı Şirket Katalog numarası
HBSS (Ca 2 olmadan + ve Mg 2 +) Invitrogen 14174
HBSS (Ca2 + ve Mg ile birlikte 2 +) Invitrogen 14025
Williams'ın Orta D Invitrogen 12551-032
Collegenase II Worthington LS004176
Hücre süzgeç (100 mikron) BD 352360
HepatoZYME-SFM Invitrogen 17705
Percoll Sigma P4937
Angiocath (18 gauge) BD 381705

Tablo 1.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Karaciğer primer kültürü yaygın karaciğer fizyolojisi ve patolojisi çeşitli yönlerini incelemek için kullanılan in vitro model olduğunu. Örneğin, primer kültür P450 sitokromlar, ilaç metabolizması, ilaç-ilaç etkileşimleri ve sitotoksisite ve genotoksisite 3-7 mekanizmaları da dahil olmak üzere ilaç metabolize eden enzimlerin ifade ve fonksiyonunu değerlendirmek için kullanılır. Sıçan karaciğer hücrelerinin izolasyonu ve kültür tarif protokolü 8. Aiken ark önceki raporlarda uyarlanmıştır ve modifikasyonları olan diğerleri 2,9,10 edilir. Koşulları sürekli olarak 1.0 'e uygun hepatositler kadar üretmek x 10 88 ~% 96 arasında hücre canlılığı ile hazırlık başına 8 hücre. Tarif Aşağıdaki diğer kritik adımlar şunlardır:

  1. Hücre kültürü açıklayan herhangi bir protokol olduğu gibi, en kritik yönü sıkı aseptik teknikler kullanılarak 11 bakteriyel veya fungal patojenlerin bulaşma kaçınmaktır.
  2. Dezmozom, aynı zamanda maküler adherens olarak bilinen, hücre-hücre yapışması için için özel bir hücre yapıdır. Dezmozom bütünlüğü kalsiyum gerektirir ve EDTA ve kalsiyum içermeyen medya tarafından bozuldu. Enzimler kollajenaz izolasyonu karaciğer hücreleri yol açan, dezmozom ayrılabilir. Bu nedenle, perfüzyon Ca 2 kullanır + ücretsiz orta ve daha sonra Ca 2 + zengin orta Ca 2 + bağımlı içeren kollajenaz, sindirim için.
  3. Uygun kollajenaz tedavi hepatosit hazırlanması için kesinlikle çok önemlidir. Perfüzyon tampon II artı collegenase II akış hızı 25 ml / dak tutulmalıdır. Başarısız hepatosit kültürünün yaygın nedenleri şunlardır: yetersiz 37 ° C ve / veya yavaş perfüzyon hızı ısındı perfüzyon tamponlar nedeniyle olabilir 1) kötü hücre ayrışma, ve 2) hücre ölümü, Could aşırı kollajenaz sindirimi nedeniyle olabilir.
  4. Pipet sadece iyi tarafı aşağı, ve asla doğrudan hücrelerde üstüne; ilk 4 saatlik kültürden sonra medya değiştirirken hepatositler hala oldukça kırılgan ve kolayca zarar ya da doğrudan temasa bozulabilmektedir gibi, dikkatli olun.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Çıkar çatışması ilan etti.

Acknowledgments

Yazarlar, teknik yardım için Sayın Josh Basford ve Dr Xiao-min Li teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma NIH hibe (DK70992 ve ML DK92779) tarafından kısmen desteklenmiştir.

References

  1. Berry, M. N., Friend, D. S. High-yield preparation of isolated rat liver parenchymal cells: a biochemical and fine structural study. J. Cell Biol. 43, 506-520 (1969).
  2. Seglen, P. O. Preparation of isolated rat liver cells. Methods Cell Biol. 13, 29-83 (1976).
  3. Saito, K., Kobayashi, K., Mizuno, Y., Fukuchi, Y., Furihata, T., Chiba, K., Schmidt, M., Schmitz, H. J., Baumgart, A., Guedon, D. Peroxisome proliferator-activated receptor alpha (PPARalpha) agonists induce constitutive androstane receptor (CAR) and cytochrome P450 2B in rat primary hepatocytes. Drug Metab. Pharmacokinet. 25, 108-111 (2010).
  4. Gomez-Lechon, M. J., Donato, M. T., Castell, J. V., Jover, R. Human hepatocytes in primary culture: the choice to investigate drug metabolism in man. Curr. Drug Metab. 5, 443-462 (2004).
  5. Goncalves, L. A., Vigario, A. M., Penha-Goncalves, C. Improved isolation of murine hepatocytes for in vitro malaria liver stage studies. Malar. J. 6, 169 (2007).
  6. Bu, S. Y., Mashek, D. G. Hepatic long-chain acyl-CoA synthetase 5 mediates fatty acid channeling between anabolic and catabolic pathways. J. Lipid Res. 51, 3270-3280 (2010).
  7. Aiken, J., Cima, L., Schloo, B., Mooney, D., Johnson, L., Langer, R., Vacanti, J. P. Studies in rat liver perfusion for optimal harvest of hepatocytes. J. Pediatr. Surg. 25, 140-144 (1990).
  8. Jauregui, H. O., McMillan, P. N., Hevey, K., Naik, S. A quantitative analysis of lectin binding to adult rat hepatocyte cell surfaces. In Vitro Cell. 24, 401-412 (1988).
  9. Klaunig, J. E., Goldblatt, P. J., Hinton, D. E., Lipsky, M. M., Trump, B. F. Mouse liver cell culture. II. Primary culture. In Vitro. 17, 926-934 (1981).
  10. Hay, R. J. Operator-induced contamination in cell culture systems. Dev. Biol. Stand. 75, 193-204 (1991).

Comments

23 Comments

  1. Dear Dr.L. Shen,
    I have watched your viedo about " Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells"which was perfectly made. I and our young collegues in the department would like to have full protocol of this work. Is it possible to send it by email. ?
    Thank you for your kind collaboration.
    Regards
    Prof.Dr.Cengiz Baycu
    Head of dept. of Histology&Embryology
    University of Osmangazi Medical Faculty

    Reply
    Posted by: Cengiz B.
    September 13, 2012 - 3:25 AM
  2. Yes, please let me know your e-mail address and then I will send you the protocol. Thanks for your interest.

    Min

    lium@uc.edu

    Reply
    Posted by: Min L.
    November 8, 2012 - 10:44 AM
  3. my email:sxm1987²010@163.com,thank you very much

    Reply
    Posted by: shi x.
    November 9, 2012 - 2:53 AM
  4. Dear Dr.L. Shen,
    I have watched your viedo about " Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells"which was perfectly made. I and our young collegues in the department would like to have full protocol of this work. Is it possible to send it by email. ?
    Thank you for your kind collaboration.
    Regards
    Kita
    Department of ZheJiang University

    Reply
    Posted by: li y.
    November 7, 2012 - 11:18 PM
  5. Yes, please let me know your e-mail address and then I will send you the protocol. Thanks for your interest.

    Min Liu, Ph.D.
    lium@uc.edu

    Reply
    Posted by: Min L.
    November 8, 2012 - 10:45 AM
  6. I am Urmil Dhru from University of Maryland Baltimore requesting you to send the detail and complete protocol on my yahoo account Urmil_Dhru@yahoo.com or my umaryland account udhru@smail.uamryland.com

    Reply
    Posted by: Urmil D.
    June 27, 2014 - 12:24 PM
  7. Dear Dr.L. Shen,
    I have watched your viedo about " Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells"which was perfectly made. I and our young collegues in the department would like to have full protocol of this work. Is it possible to send it by email. ? My email: zhuhaossmu@hotmail.com.
    Thank you for your kind collaboration.
    Regards

    Hao Zhu
    Department of Anatomy
    Shanghai Jiao Tong University

    Reply
    Posted by: Hao Z.
    December 19, 2012 - 8:30 PM
  8. Dear Dr.L.Shen,
    I am very intereted in the video and protocol of "Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells" . Would you please send a full copy of video and protocol to me? My email: ldc1983king@yahoo.com.cn
    Thank you very much.
    Best wishes!

    Li Daochuan
    Department of Public health
    Sun yat-sen University

    Reply
    Posted by: li d.
    December 20, 2012 - 8:56 PM
  9. Dear Dr.L.Shen,
    I am very intereted in the video and protocol of "Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells" . Would you please send a full copy of video and protocol to me? My email: yipeng511@163.com
    Thank you very much.
    Best wishes!

    Yi Peng
    Department of Life Science and Technology
    China Pharmaceutical University

    Reply
    Posted by: Yi P.
    April 7, 2013 - 1:34 AM
  10. Dear Dr.L.Shen,
    I am very intereted in the video and protocol of "Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells" . Would you please send a full copy of video and protocol to me? My email: nagh0²14@naver.com
    Thank you very much.
    Best wishes!

    Gun Hyung Na
    Department of Surgery
    Catholic University of Korea

    Reply
    Posted by: Gun Hyung N.
    April 10, 2013 - 9:41 AM
  11. Dear Dr.L. Shen,
    I have watched your viedo about " Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells"which was perfec.
    I need a copy of it if it is possible please for my student learning about the liver perfusion.
    Dr Hamed zeinvand
    department of toxicology
    tehran university of medical science
    Iran

    Reply
    Posted by: hamed z.
    May 4, 2013 - 3:05 AM
  12. Dear Dr.L.Shen,
    I am very instereted in the video and protocol of "Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells" . Would you please send a full copy of video and protocol to me? My email: dickg@126.com
    Thank you very much.
    Best wishes!

    Reply
    Posted by: yufan g.
    July 2, 2013 - 4:41 PM
  13. Reply
    Posted by: su x.
    August 2, 2013 - 10:51 PM
  14. Dear Dr.L. Shen,
    I have watched your viedo about " Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells"which was perfect.
    Would you please send a full copy of protocol to my email (raghava@suven.com).

    Mr Raghava Choudary Palacharla,
    Drug Metabolism and pharmacokinetics.
    Hyderabad, INDIA - 500055

    Reply
    Posted by: Raghava Choudary P.
    August 5, 2013 - 7:25 AM
  15. Hello Dr L Shen,

    Thank you for your work in producing this protocol. I would very much like to have a full copy of this protocol. Best wishes. sylvie.coulibaly@wmich.edu.

    Reply
    Posted by: Sylvie C.
    August 27, 2013 - 6:30 PM
  16. Dear Hello Dr L Shen,

    I would be glad and appreciate if you kindly email me this protocol video and pdf.

    Best Wishes
    Waqar Saeed

    Waqar.saeed33@gmail.com

    Reply
    Posted by: blue v.
    September 3, 2013 - 10:59 PM
  17. Dear Dr.L.Shen,
    I am very intereted in the video and protocol of "Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells" . Would you please send a full copy of video and protocol to me? My email: atulwavhal@gmail.com
    Thank you very much.
    Best wishes!

    Reply
    Posted by: Atul W.
    November 21, 2013 - 10:56 PM
  18. Dear Dr.L. Shen,
    I have watched your viedo about " Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells"which was perfectly made. I and our young collegues in the department would like to have full protocol of this work. Is it possible to send it by email. ? My email: mbenyamina.2001@yahoo.fr
    Thank you for your kind collaboration.
    Regards.
    Departement of Biotechnology
    University of Oran. Algeria

    Reply
    Posted by: benyamina m.
    March 3, 2014 - 3:22 PM
  19. Dear Dr.L. Shen,
    I have watched your viedo about " Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells"which was perfectly made. I and our young collegues in the department would like to have full protocol of this work. Is it possible to send it by email. ? My email: mbenyamina.2001@yahoo.fr
    Thank you for your kind collaboration.
    Regards.
    Departement of Biotechnology
    University of Oran. Algeria

    Reply
    Posted by: benyamina m.
    March 3, 2014 - 5:29 PM
  20. Dear Dr. Shen,
    Very useful protocol for me, since Im trying to isolate hepatocytes from sheep liver. I have been facing problem since cells are not attaching to collagen coated plates. Kindly guide me on these aspects and also send the complete protocol (both text and video) to my e mail ID: bdpunith@gmail.com.

    Thanks and Regards,
    Punith B D
    NIANP
    Bangalore, India

    Reply
    Posted by: Punith B.
    July 21, 2014 - 8:38 AM
  21. Dear Dr.L.Shen,
    I am very intereted in the video and protocol of "Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells" . Would you please send a full copy of video and protocol to me? My email: delongn@mcmaster.ca
    Thank you for sharing!
    Best wishes!

    McMaster University
    Canada

    Reply
    Posted by: Nicole D.
    September 4, 2014 - 2:19 PM
  22. Dear Dr.L.Shen,
    I am very interested in your video and I want to prepare hepatocyte cells accordingly. I want to ask which brand/catalog of insulin do you use for preparing the medium?

    Reply
    Posted by: Wenjie W.
    October 10, 2014 - 2:15 AM
  23. why the steps showed in the video is different from what written in the protocol? in the video no Percoll used, but in protocol you used Percoll

    Reply
    Posted by: Xia D.
    May 22, 2018 - 6:58 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics