Abstract
גידולים ליצור microenvironment לדיכוי המערכת החיסונית ייחודי (microenvironment הגידול, TME) לפיה leukocytes מגויסים לתוך הגידול על ידי כמוקינים שונים גורמים 1,2 צמיחה. עם זאת, מדי פעם TME, תאים אלו מאבדים את היכולת לקדם נגד הגידול חסינות ולהתחיל לתמוך בצמיחה הגידול ולמטה לווסת אנטי סרטניים התגובה החיסונית 3-4. מחקרים על גידולים הקשורים leukocytes התמקדו בעיקר על תאים מבודדים גידולים ניקוז בלוטות הלימפה או הטחול, בשל הקשיים הכרוכים בהשגת מספרים סלולריים מספיק וטוהר מן הגידול הראשוני. תוך זיהוי מנגנוני ההפעלה של התא וסחר באמצעות מערכת הלימפה של בעכברים נושאי גידולים חשוב ויכול לתת תובנה על קינטיקה של התגובה החיסונית לסרטן, מניסיוננו, leukocytes רבים, כולל תאים דנדריטים (DCS), בגידול, ניקוז בלוטות הלימפה יש פנוטיפ שונה מאלה לחדור גידולים 5,6. יתר על כן, אנו הוכיחו בעבר כי adoptively, הועבר לתאי T שבודדו גידולים ניקוז בלוטות הלימפה לא tolerized ומסוגלים להגיב לגירוי משני במבחנה בניגוד לתאי T שבודדו TME, שהם tolerized ואינה מסוגלת או ריבוי ציטוקינים ייצור 7,8. מעניין, אנו הראו כי שינוי microenvironment הגידול, כגון מתן CD4 + ותאי T מסייעים באמצעות העברה המאמצת, מקדם CD8 + T לתאים לשמור Pro דלקת פונקציות מפעיל 5. התוצאות של כל המחקרים שהוזכרו לעיל ממחישים את החשיבות של מדידת התגובות הסלולר מ TME למוצרי שחדרו תאים חיסוניים, לעומת התאים שנותרו בפריפריה. כדי לחקור את הפונקציה של תאים חיסוניים אשר לחדור גידולים באמצעות מערכת ביוטק Miltenyi בידוד 9, יש לנו שונה אופטימיזציה הליך זה נוגדן מבוסס בידוד להשיג ביותר הדואראוכלוסיות nriched של תאים מציגי אנטיגן והגידול אנטיגן ספציפי לימפוציטים מסוג T ציטוטוקסיים. הפרוטוקול כולל דיסקציה מפורטת של רקמות הערמונית Murine מן המודל הגידול ספונטנית הערמונית (אדנוקרצינומה של עכבר מהונדס הערמונית נווד) 10 ו מלנומה תת עורית (B16) מודל הגידול ואחריו טיהור הבאות של אוכלוסיות ליקוציט שונים.
Protocol
1. בידוד של תאים מיאלואידית של גידולי הערמונית הנווד
- כל ההליכים נעשו תחת הדרכתו של הלוח ביקורת בעלי חיים. עכברים הנווד ספונטני לפתח גידולי הערמונית הקדומות כתוצאה transgene (SV40) נשלט על ידי האמרגן probasin 10. כל עכבר זכר ניתן להשתמש בהליך זה. בעוד גידולים הנווד ניתן לקצור בכל גיל, יש לציין כי גידולים הערמונית הנווד בדרך כלל נשארים קטנים עד העכברים להגיע הגילאים גדול מ 20 שבועות. להרדים עכברים ידי מחנק 2 CO. להסיר את מערכת המין ודרכי השתן (UGT), על ידי חיתוך פתוח חלל הצפק ולמשוך בחזרה את רקמת השומן. רקמת השומן היא הרקמה מוקצף, מסתכל ונוצץ.
- אתר את שלפוחית השתן, הוא נמצא ישירות בין השניים, שלפוחיות הזרע גדולים לבנים. להיאחז בשלפוחית עם מלקחיים. שמירה על המספריים סגור, להחליק רקמת שומן ולאתר את השופכה. לצמצם את urethra קרוב חגורת האגן ככל האפשר לנתק את הזרע הזרע. תוך צמצום, בו זמנית למשוך על שלפוחית השתן. זה ישחרר UGT שלמה כעת ניתן מיקרו גזור להשיג כל אחת האונות של בלוטת הערמונית.
- מניחים את UGT ב בטמפרטורת החדר PBS. במיקרוסקופ לנתח לדמיין UGT ו לסלק כל רקמת שומן עודף. באמצעות מלקחיים, להחזיק השופכה ולאסוף האונות הגחון בצירי הקדמי של בלוטת הערמונית. מניחים את רקמות PBS תוך כדי לאסוף את שאר האונות.
- הסר את שלפוחית הזרע וזורקים.
- הפעל ° 180 הנותרים רקמות. לאסוף את בלוטת הערמונית ampullary ו אונות הגב.
- באמצעות מלקחיים, ניסתה להפריד רקמת הערמונית ולמקם אותו לתוך מערכת העיכול (דיסוציאציה) המאגר.
- הגידול במקום רקמות 1 מ"ל דיסוציאציה חיץ (100 U / ml collagenase סוג IV ו 100 מיקרוגרם / מ"ל DNase ב RPMI + FBS 10%). כל הגידול במאי requזעף תנאים ייחודיים דיסוציאציה, עבור גידולים הערמונית הנווד, להשתמש 1 מ"ל ועבור B16 גידולים, השתמש 5 מ"ל (ראה להלן). הערה: ציון collagenase (I-IV) יהיה תלוי באוכלוסייה התא להיות מבודדת, בידוד תא מיאלואידית הוא הטוב ביותר לסוג הרביעי, ואילו תשואה גבוהה יותר באמצעות לימפוציטים מסוג I.
- צינור מקום 37 ° C החממה למשך 30 דקות.
- פיפטה למעלה ולמטה עם 1 מ"ל פיפטה לקבל השעיה בקלות זורם תא בודד.
- ההשעיה מסנן דרך 70 מיקרון המסנן ולשטוף 3x עם חיץ MACS ההפרדה השלימו עם FBS 10% עבור בידוד תא מיאלואידית.
- סרכזת ההשעיה התא XG 400 דקות 10. לאחר מכן לשטוף עם גלולה חיץ 10 MACS מ"ל ו סרכזת שוב עם אותן הגדרות.
- Resuspend תא גלולה במאגר 100 MACS μl. לאחר מכן, להוסיף 1 anti-CD16/32 מיקרוגרם נוגדנים (AB) עבור 10 8 תאים (200 μl 2.4.G2 hybridoma תרבות supernatant) ו דגירה בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות. הערה: לאהוא סכום של FCR-γ חסימת הנוגדנים (AB) שיש להוסיף עשויה להשתנות בהתאם את תדר / מספר FCR למוצרי γ + תאים ברקמה והיקף ההשעיה התא, ולכן צעד זה עלול לדרוש אופטימיזציה.
- הוסף 100 μl של "פאן-DC" או 10 μl של אנטי CD11b, אנטי CD11c או נגד PDCA-1 microbeads ל 10 8 תאים בסך הכל, בהתאם האוכלוסייה התא הרצוי. הערה: כמות microbeads הנדרשים עשוי להשתנות בהתאם תדר / מספר התאים של האוכלוסייה הרצויה ברקמות, לכן, שלב זה עשוי לדרוש אופטימיזציה.
- מערבבים היטב בעדינות מצליף צינור (אל מערבולת) ו דגירה של 15 דקות ב 4-8 מעלות צלזיוס, מוגן מפני האור. אין דגירה על הקרח.
- לשטוף את התאים על ידי הוספת 10 מ"ל של חיץ מקינטוש. סרכזת ב XG 400 דקות 10.
- יוצקים את supernatant לחלוטין resuspend תאים μl 500 מאגר מקינטוש. המתלים תאים סרטניים לזרום טוב יותר באמצעות העמודות LC. (אחראפשרויות: MS, LS, LD).
- החל טור טרי מפריד מגנט. ראש העמודה על ידי שטיפה עם כמות מתאימה של חיץ MACS עבור העמודה הנבחרת: עבור LC ועמודות טרשת נפוצה להשתמש 500 μl. עבור LS או LD עמודות להשתמש 1 מ"ל. לאחר תחול הטור, לחול על השעיית התא העליון של העמודה. השתמש עמודה אחת עבור כל 1 x 10 8 תאים.
- איסוף התאים שהוסרו מהן תוויות (התמסורת) ולשטוף את הטור מינימום של 3 (עד 5) פעמים עם נפח 500 μl עבור סכום כולל של 1.5-2.5 מ"ל של נוזל כביסה. בצע לשטוף שלב 1 על ידי הוספת מאגר MACS לעמודה, חשוב לשמור על עמודת זורם. ברגע טור מטפטף את הטיפה האחרונה, להוסיף למאגר יותר. אל תתנו לעמוד בטור ללא זרימה או לאפשר לו לפעול יבש (זה לא יכול להיות מאופק, כמו ייבוש הטור יכול להרוס את טוהר לגרום לאובדן משמעותי של הכדאיות התא.). לשלב רחצה 2, יש לשטוף את העמודה בתערובת חיץ דיסוציאציה (המכיל collagenase + DNase כמו דהscribed בשלב 1.7); זה מהווה צעד "קשה יותר" שטיפה כדי לנקות פסולת דביקה של תאים סרטניים מתים או גוססים. בצע לשטוף בשלב 3 עם חיץ MACS, אם לזרום דרך לא נראה ברור לחלוטין אחרי שלב 3 לשטוף, להמשיך לשטוף במשך 2 צעדים לשטוף נוספים במק חיץ (עבור סכום כולל של 5 שוטף). עבור גידולים גדולים תת עורי (למשל, מלנומה B16), במהלך שלב הכביסה האחרונה, להפעיל לחץ עדין עם אצבע הנתונה בכפפה לחלק העליון של העמוד, זה משחרר פסולת נוספת נקי, מטוהר האוכלוסייה התא. שלב זה אינו נדרש עבור גידולים מוצקים כגון רקמות הערמונית, במקום זאת, השתמש צעדים לשטוף נוספות, כביסה כולל של לפחות 5-6 פעמים.
- הסרת העמודה מפריד מגנטי ומניחים אותו על צינור איסוף מתאים. פיפטה 2 מ"ל של המאגר על הטור. אוספים את התאים המסומנים מגנטית ידי בחוזקה יישום הבוכנה מסופק עם הטור.
- ספירת מספר התאים לאשר טוהר לאוכלוסייה התא שנבחר על ידיניתוח תזרים cytometric. זיהוי אוכלוסיות DC, סמנים שהציע כוללים CD45, CD11c, PDCA-1, B220 ו CD11b. סמנים מקרופאג שהציע כוללים CD45, CD11b, F4-80, ו Ly6C.
2. בידוד של תאים T המועברים Adoptively תת עורית של גידולים מלנומה B16
פרוטוקול זה עובד הכי טוב עם גידולים 250 מ"מ 2 או פחות (מוערך על ידי מדידת קוטר החוצים של הגידול).
- B16 תאים סרטניים הוזרקו תת עורית לתוך C57BL / 6 עכברים ומדידות הגידול נרשמו כל 2 ימים 8. בעכברים עם גידולים מדידה 250 מ"מ 2 מומתים על ידי מחנק 2 CO. באמצעות מכשירי ניתוח autoclaved שטופים עם ETOH 70%, לחתוך לתוך הגידול (<3mm) לחתיכות קטנות דגירה של 5 מ"ל ניתוק פתרון (בינוני RPMI בתוספת 5% FBS, collagenase סוג אני (200 U / ml) ו DNase אני (100 מיקרוגרם / ml)) למשך 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס, Pipetting (באמצעות μ 1000pipet עצה L) vortexing כל 10 דקות במהלך הדגירה. אם תאים מיאלואידית יהיה מבודד לאחר מכן, להחליף 5% FBS ו collagenase הקלד אני עם 10% FBS ו collagenase סוג ד '(200 U / ml), בהתאמה.
- לאחר הדגירה, עוברים השעיה התא דרך מסננת תא 70 מיקרומטר ולשטוף פעמיים עם 10 מ"ל MACS חיץ (מוכן לפי הוראות היצרן, Miltenyi ביוטק). לא חובה - עבור גידולים גדולים מאוד (> 300 מ"מ 2), תאים דלקתיים ניתן מראש מועשר באמצעות שיפוע צפיפות צנטריפוגה (Percoll או Ficoll).
- Aspirate supernatant לשטוף ולהוסיף 1 מיקרוגרם anti-CD16/32 antibody/10 8 תאים (200 μl של supernatant תרבות 2.4.G2 שיבוט) ו דגירה בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות.
- ללא שטיפה, להוסיף 1 מיקרוגרם אנטי Thy1.1 נוגדנים PE לכל 10 8 תאים, לערבב היטב על ידי מצליף בעדינות צינור דגירה במשך 30 דקות על הקרח, מוגן מפני האור.
- שוטפים את התאים להסיר מאוגד פרימרי נוגדנים על ידי הוספת 10 מ"ל MACS חיץ צנטריפוגות ב XG 400 במשך 5 דקות.
- Aspirate supernatant ולהוסיף 20 μl נגד PE microbeads (Miltenyi ביוטק) לכל 10 7 תאים בסך הכל, על פי הוראות היצרן.
- מערבבים היטב בעדינות מצליף צינור (אל מערבולת) ו - דגירה על 4 ° C (לא משתמשים קרח) במשך 15 דקות, מוגן מפני האור. זהירות: vortexing יכול להפחית את תקינות החרוזים.
- לשטוף את התאים על ידי הוספת 10 מ"ל של חיץ MACS ואת צנטריפוגות ב XG 400 במשך 5 דקות.
- Aspirate תאים supernatant, ו resuspend במאגר 500 MACS μl. עבור גידולים בגודל גדול יותר (> 300 מ"מ 2), השתמש 1 חיץ מ"ל.
- מקום אחד LC (תאים גדולים) עמודה מפריד את השדה המגנטי. המתלים תאים סרטניים לזרום הטוב ביותר באמצעות עמודות אלה. יש לשטוף את העמודה עם מאגר 500 MACS μl כדי להכין את הטור. רוב הגידולים גם לזרום דרך LS ועמודות LD, אבל דורשים עיכול נוסף ד מכניisruption כדי להשיג רמה נאותה של השעיה תא בודד. לשטוף את העמודה עם חיץ 1 MACS מ"ל כדי להכין את הטור.
- החל ההשעיה על התא בעמודה ולאפשר לחלוטין לזרום (מבלי לאפשר ריצה טור יבש). לאחר מכן לשטוף עם מאגר 500 MACS μl, וחזור כביסה 3x. רק להוסיף מאגר חדש כאשר המאגר עמודה ריקה, אבל לא נותנים טור עומדים ללא זרימה. זה יגרום סתימת וטוהר פחתה.
- זהו צעד קריטי עבור גידולים גדולים תת עורי: לאחר שלב הכביסה שעברה, עם קצה אצבע הנתונה בכפפה, להפעיל לחץ עדין לחלק העליון של העמודה בעוד עדיין מפריד מגנטי. זה משחרר פסולת נוספת לאוכלוסייה העשירה יותר טהור. לאחר מכן, שוטפים את העמודה 1 זמן רב יותר עם מאגר 500 MACS μl.
- הסרת העמודה מפריד ולמקם אותו צינור נקי מ"ל 15 חרוטי, הוסף 2 מ"ל חיץ MACS על הטור. לשטוף את cel מגנטית, שכותרתוLS ידי בחוזקה דוחף את הבוכנה לתוך הטור.
- בצנטריפוגה חלק eluted ב XG 400 דקות 5. טוהר בשלב זה הוא בדרך כלל בין 75-80%. כדי להשיג> טוהר 90%, חזור על הליך ההפרדה מגנטי כמתואר בשלב 1.10-1.12 באמצעות טור חדש טרשת נפוצה. טור MS קטן וקומפקטי יותר ההשעיה ירוצו לאט יותר באמצעות הטור, אבל תניב מספרים גבוהים יותר של תא טוהר של עניין.
- ספירת מספר תאים לניסויים נוספים ולבדוק טוהר על ידי ניתוח תזרים cytometric. עבור בידוד של תאים T שהועברו adoptively כגון אלה שתוארו בפרוטוקול זה, allelic סמנים לזיהוי כוללים CD45 ו Thy1.1 (תאים שהועברו) ו Thy1.2 (המארחות ותאי T).
3. נציג תוצאות
תשואה של האוכלוסייה תא מסוים (מקרופאגים כלומר, DC, תא T, וכו ') משתנה בהתאם לגודל של הגידול וטיפולים שהיו Administered במהלך הגידול. הערמונית של העכבר בשבוע מטופל 14-16 שנווד זקן צריך התשואות בין 8x10 1x10 5-6 CD11c + / PDCA-1 + (DC) התאים בכל טוהר 90-95% או 1x10 6-1.5x10 6 F4/80 + / CD11b + (מקרופאגים) בשעה טוהר 80-90% מ 300 מ"ג של רקמת בעקבות פרוטוקול בידוד לעיל כפי שמוצג באיור 1. מספר זה של תאים אלה מעט מעלה עם העברת המאמצת של גידולים אנטיגן לתאי T ספציפיים. טוהר עני הוא בדרך כלל תוצאה של שטיפת מספיק, המאפשר טור להתייבש (אשר עלולה לגרום אצירת פסולת גידול בטור), או מספיק רצפטור Fc חוסם.
כמו כן, התאים הכל מבודד B16 גידולים משתנה גם בהתאם לגודל הגידול בזמן הקציר רקמות העברת המאמצת של תאים T (העברת 5x10 6) עם או בלי חיסון DC (העברת 1x10 5). מעטים אנטיגן-SPEcific ותאי T לחדור את הגידול, אלא אם כן חיסון אנטיגן פעמו-DC ניתן גם יום לאחר העברת תא T. אם החיסון DC ניתנת העכבר הנושא קטן, גידול מוחשי (<50 מ"מ 2), תשואה של כ 3x10 5 Thy1.1 תאים + T, עם טוהר של 80-85%, ייחשב "טוב "לקצור כפי שמוצג באיור 2 א. עם זאת, אם גידולים גדולים יותר נקצרים, התשואה טוהר הכולל יהיה קטן יותר.
מקרופאגים (F4/80 + / CD11b +) הם בדרך כלל אחוז קטן יותר של תאים סך B16 גידולים. איור 2B מראה כי ניצול CD11b, מן הגידול הזה הוא 250 מ"מ 2, מניב כ 1x10 6 מקרופאגים על טוהר 90-95% . בנוסף, איור מראה -2 כי אוכלוסיית הבירה בשנת B16 גידולים הם הטרוגניים. שלא כמו גידולים בערמונית, שני subpopulations: CD11c + / PDCA-1 + (plasmacytoid DC) ו CD11c+ / PDCA-1 - (DC רגיל) ניתן להשיג B16 גידולי מלנומה. מוערך 2x10 6 PDC ו 4x10 6 CDC צפויות 250 מ"מ 2 B16 גידולים על טוהר 80-90%. טוהר הקטינה היא בדרך כלל תוצאה של לא ניקוי של גידולים תאים מן הטור. שלב 2.12 הוא שלב קריטי כדי להסיר את גוש קטן של תאי המלנומה נמשכת בבסיס הטור. לאחר שלב זה משפר את האפקטיביות של הצעדים לשטוף ותוצאות ב טוהר טוב יותר.
באיור 1. DCS (CD11c + / PDCA-1 +) ומקרופגים (F4/80 + / CD11b +) נותקו מן הגידול בערמונית קבצן. ערכים דוט העלילה מייצגים אחוז של תאים בעלי עניין טיהור שלאחר מראש או.
איור 2 (א) Adoptivאלי העביר Thy1.1 + / CD8 + T תאים ו (ב) תאים מיאלואידית כולל CD11c + / PDCA-1 + plasmacytoid DCS, CD11c + / PDCA-1 - DCS קונבנציונאלי F4/80 + + / CD11b ומקרופגים בודדו תת עורית מלנומה B16 גידול מ Thy1.2 עכברים +. ערכים דוט העלילה מייצגים אחוז של תאים בעלי עניין טיהור שלאחר מראש או.
Discussion
פרוטוקול זה יכול להיות שונה, המבוסס על גודל מקור הגידול (תת עורית, גידול ספונטני, או גידולים orthotopic). עבור גידולים גדולים יותר, מומלץ להגדיל את כמות מאגר דיסוציאציה, מאגר מקינטוש, וכן מספר שוטף. הלבביות של תאים בודדים יכולים לסמוך על TME שמהם מתבצע מועשר. כך, למשל, הניסיון שלנו, תאים מבודדים גידולי הערמונית ספונטניות דורשים ניתוק עדין יותר תאים שבודדו תת עורי B16 גידולים מלנומה. במהלך דיסקציה של הגידול, למנוע ככל השומן בעור הרבה, או פסולת אחרת שיכולה למנוע ניתוק אנזימטי יעיל. זה קריטי לחלוטין לעכל ההמונים הגידול ולקבל השעיה תא בודד כדי להבטיח נכונה תיוג Ab ולמנוע עמודות מ סתימת. בידוד תא מיאלואידית, בסך של בסרום שור עוברית מומלץ במאגר MACS בידוד הוגדל מ 2% ל 10% כדי לשפר את כדאיות התא. כמו כן, essential לשמור את כל מאגרי ותאים קרים ברחבי פרוטוקול כדי למנוע הלא ספציפית Ab מחייב סתימת העמודה. לסיכום, כדי לקבל אוכלוסיות מועשר של תאים מציגי אנטיגן והגידול אנטיגן ספציפי לימפוציטים מסוג T ציטוטוקסיים, יש לנו שונה אופטימיזציה הליך נוגדנים מבוסס בידוד ניצול הטכנולוגיה ביוטק Miltenyi. שימוש בפרוטוקול זה, שתי האוכלוסיות ליקוציט שהועברו adoptively ו אנדוגני ניתן להעשיר באמצעות שרירי הבטן המכוונים נגד סוג ספציפי סמנים תא השטח. אחד היתרונות של ההליכים המתוארים הוא צמצום פסולת הגידול למסירה מעל בעקבות שטיפת נרחבת וקפדנית. זה כולל את השימוש collagenase במאגר לשטוף כמו גם זיהוי לנקודה שבה הוסיף לחץ לעמודה יכול לחסל כפכפים עמודה של תאים סרטניים. קבלת מספר מספיק של תאים חיסוניים מן הרקמות, במיוחד טוהר המתאים אנליזה פונקציונלית, יכולה להיות משימה קשה.עם זאת, מניסיוננו, פרוטוקול במסמך זה מניב את המספר הגבוה ביותר של תאים, על טוהר הגדול ביותר, עם עקביות ביותר.
Disclosures
החוקרים אין גילויים הנוגעים בדבר.
Acknowledgments
המחברים מבקשים להודות ד"ר סקוט Durham לבדיקה של כתב היד ווידאו. עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי תוכנית מחקר המיפוי של NIH, NCI.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Collagenase I | GIBCO, by Life Technologies | 17100-017 | Use when selecting for T cells |
| Collagenase IV | GIBCO, by Life Technologies | 17104-019 | Use for myeloid selection |
| DNase | Calbiochem | 260913 | |
| RPMI | GIBCO, by Life Technologies | 21870 | |
| Dulbecco’s PBS | Lonza Inc. | 17-5158 | |
| Fetal Bovine Serum | Lonza Inc. | 14-501F | |
| MACs Buffer | 2% FBS for T cells 10% FBS for myeloid cells |
||
| Thy1.1 PE | eBioscience | 551401 | |
| Anti-PE microbeads | Miltenyi Biotec | 120-000-294 | |
| Anti-Pan DC microbeads | Miltenyi Biotec | 120-003-183 | |
| Anti-CD11b microbeads | Miltenyi Biotec | 120-000-300 | |
| LC column | Miltenyi Biotec | 130-042-202 | |
| MS column | Miltenyi Biotec | 130-042-201 |
References
- Shurin, M. R. Intratumoral cytokines/chemokines/growth factors and tumor infiltrating dendritic cells: friends or enemies. Cancer Metastasis Rev. 25, 333-356 (2006).
- Lewis, C. E., Pollard, J. W. Distinct role of macrophages in different tumor microenvironments. Cancer Res. 66, 605-612 (2006).
- Anderson, M. J., Shafer-Weaver, K., Greenberg, N. M., Hurwitz, A. A. Tolerization of tumor-specific T cells despite efficient initial priming in a primary murine model of prostate cancer. J. Immunol. 178, 1268-1276 (2007).
- Ganss, R., Hanahan, D. Tumor microenvironment can restrict the effectiveness of activated antitumor lymphocytes. Cancer Res. 58, 4673-4681 (1998).
- Shafer-Weaver, K. A. Immunity to murine prostatic tumors: continuous provision of T-cell help prevents CD8 T-cell tolerance and activates tumor-infiltrating dendritic cells. Cancer Research. 69, 6256-6264 (2009).
- Watkins, S. K., Zhu, Z., Riboldi, E., Shafer-Weaver, K. A., Stagliano, K. E. R., Sklavos, M. M., Ambs, S., Yagita, H., Hurwitz, A. A. Foxo3a programs tumor associated dendritic cells to become tolerogenic in Human and Murine Prostate Cancer. Journal of Clinical Investigation. 121, (2011).
- Shafer-Weaver, K. A., Hurwitz, A. A. Tumor-Specific CD8+ T Cells Infiltrating Prostatic Tumors are Induced to Become Suppressor Cells. , (2009).
- Singh, V., Ji, Q., Feigenbaum, L., Leighty, R. M., Hurwitz, A. A. Melanoma progression despite infiltration by in vivo-primed TRP-2-specific T cells. J. Immunother. 32, 129-139 (2009).
- Matheu, M. P., Cahalan, M. D. Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification. J. Vis. Exp. (9), e409 (2007).
- Hurwitz, A. A., Foster, B. A., Allison, J. P., Greenberg, N. M., Kwon, E. D. The TRAMP mouse as a model for prostate cancer. Curr. Protoc. Immunol. Chapter 20, (2001).
