का निर्धारण मिट्टी संचारित पेट का कीड़ा संक्रमण की स्थिति और स्कूल के आयु वर्ग के बच्चों के शारीरिक स्वास्थ्य

Published 8/22/2012
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Immunology and Infection

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Summary

Malabsorption पुरानी मिट्टी संचारित helminths (STHs) के साथ संक्रमण का कारण बनता है, stunting, और बढ़ती बच्चे में बर्बाद. इसलिए, यह प्रशंसनीय है कि इन संक्रमणों को भी बच्चों की शारीरिक फिटनेस को कम. यहाँ, हम STHs और बच्चों की शारीरिक फिटनेस का आकलन करने के लिए 20 मीटर शटल रन परीक्षण के निदान के लिए दो तकनीकों कल्पना.

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Yap, P., Fürst, T., Müller, I., Kriemler, S., Utzinger, J., Steinmann, P. Determining Soil-transmitted Helminth Infection Status and Physical Fitness of School-aged Children. J. Vis. Exp. (66), e3966, doi:10.3791/3966 (2012).

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Abstract

Protocol

1. Kato-Katz तकनीक

  1. एक खुर्दबीन स्लाइड पर मल के 41.7 मिलीग्राम (एमजी) के आयोजन के लिए एक छेद के साथ एक मानक टेम्पलेट Kato Katz रखें.
  2. अखबार या एल्यूमीनियम पन्नी के एक टुकड़े पर एक ताजा fecal नमूना के 2-3 ग्राम स्कूप (छ), और यह चलनी के लिए शीर्ष पर तार या प्लास्टिक की जाली का एक टुकड़ा दबाएँ.
  3. एक छोटे से प्लास्टिक रंग का उपयोग, जाल बंद sieved सामग्री परिमार्जन और Kato-Katz टेम्पलेट में पूरी तरह से इसके साथ छेद भरने. अतिरिक्त fecal सामग्री हटाने के लिए, रंग के साथ छेद की सामग्री के स्तर.
  4. खड़ी fecal अब खुर्दबीन स्लाइड पालन सामग्री परेशान बिना खाका हटा. टेम्पलेट और रंग द्रव्य के साथ पानी में साफ किया जा सकता है, और reused.
  5. सिलोफ़न का एक टुकड़ा प्लेस, ग्लिसरीन मैलाकाइट हरी समाधान में कम से कम 24 घंटे (मानव संसाधन) के लिए खुर्दबीन स्लाइड पर fecal नमूना पर पूर्व भिगो.
  6. एक मोटी धब्बा में fecal सामग्री का प्रसार करने के लिए, धीरे से एक साफ सूक्ष्म दबाएँनमूना स्लाइड के खिलाफ गुंजाइश स्लाइड, एक थोड़ा खुर्दबीन स्लाइड की चौड़ाई की तुलना में छोटे व्यास के एक सर्कल के भीतर समान रूप से सामग्री का वितरण.
  7. स्लाइड 30-60 मिनट (मिनट), जिसके दौरान स्लाइड प्रत्यक्ष सूर्य के प्रकाश से दूर रखा जाना चाहिए के लिए स्पष्ट करने के लिए अनुमति दें. फिर, व्यवस्थित एक प्रकाश माइक्रोस्कोप (40-100x बढ़ाई) के तहत मोटी धब्बा की जांच. STH अंडे की संख्या की गणना और उन्हें प्रजातियों (यानी, A.lumbricoides, T.trichiura, और हुकवर्म) द्वारा विभक्त हो जाना. ध्यान दें, अन्य पेट का कीड़ा अंडे (शिस्टोस्टोमा mansoni उदाहरण के लिए) भी इस विधि द्वारा पता लगाया जा सकता है और गिनती की जानी चाहिए और अलग से दर्ज है.
  8. संक्रमण की तीव्रता का एक मानकीकृत अनुमान मिलता है, पारंपरिक मल (EPG) की ग्राम प्रति अंडे की संख्या के रूप में व्यक्त किया है, 24 (24 x 41.7 मिलीग्राम छ ≈ 1) अंडे की गिनती गुणा.

2. BAERMANN तकनीक

  1. एक स्टैंड में पकड़ कर सकते हैं कि एक गिलास कीप और रबर ट्यूब देते सेट, बुद्धि बंद कर दियाहा चिमनी के नीचे क्लिप,.
  2. कीप और चिकित्सा धुंध के एक टुकड़े के साथ यह परत में, एक चलनी या तार स्क्रीन एक शंकु के आकार का एक टुकड़ा रखें.
  3. नल के पानी के साथ कीप भरें और सुनिश्चित करें कि पूरे सेट अप लीक नहीं करता है.
  4. चिकित्सा धुंध के बीच पर ताजा मल के 20-30 ग्राम स्कूप और यह सुनिश्चित करना है कि यह पूरी तरह से पानी में डूबे हुए है. यदि आवश्यक हो तो अधिक पानी जोड़ें. नमूना पर चिकित्सा धुंध मोड़ो.
  5. नीचे से 2 घंटे के लिए कीप में कृत्रिम प्रकाश चमक.
  6. एक अपकेंद्रित्र ट्यूब में धीरे से रबर ट्यूब पर क्लिप को रिहा द्वारा नाली कीप में पानी के निचले हिस्से की 50 मिलीलीटर (एमएल).
  7. 5 मिनट के लिए 600 XG (सापेक्ष केन्द्रापसारक बल) में एकत्र पानी अपकेंद्रित्र और ध्यान से बाहर तलछट को परेशान करने के बिना तैरनेवाला डालना. ट्यूब में पिछले कुछ बूंदों को बनाये रखें.
  8. एक खुर्दबीन स्लाइड पर समाधान की तलछट और विंदुक 2 बूँदें पुनः निलंबित और स्लाइड की जांचएक प्रकाश माइक्रोस्कोप के तहत (पता लगाने के लिए और प्रजाति की पुष्टि के लिए 100-400x बढ़ाई 40x बढ़ाई). प्रथम चरण के एस के लार्वा (L1) stercoralis जीवित हैं और सक्रिय रूप से खुर्दबीन के नीचे चलते हैं.

3. 20-मीटर शटल रन टेस्ट

  1. एक 20 मीटर फ्लैट और सीधे चल रहे पाठ्यक्रम उपाय है और यह शंकु के साथ निशान.
  2. परीक्षण भागीदार और 18 सीने के आसपास इसी ट्रांसमीटर कलाई पर एक दिल की दर पर नजर रखने के पहनने में मदद करें. यह उपकरण भागीदार के दिल की दर से पहले और परीक्षण के बाद मापा जा करने की अनुमति देता है और इस तरह नज़र रखता है कि भागीदार अधिक से अधिक प्रयास exerted है.
  3. भागीदार आज्ञा पाठ्यक्रम पर आगे और पीछे पूर्व दर्ज की ध्वनि संकेतों 20-मीटर गोद परिसीमन की गति का पालन करके चलाने. प्रति घंटे 8.5 किलोमीटर (किमी / घंटा) की गति से चल रहा है, 20 मी 0.5 किमी की एक बराबर / हर मिनट घंटा अंतराल बढ़ जाती है का संकेत संकेतों की आवृत्ति के साथ शुरू.
  4. सुनिश्चित वेंमें भागीदार एक नया 20-मीटर अंतराल हर समय एक संकेत लग रहा है शुरू होता है और यह खत्म पहले अगले संकेत आता है.
  5. भागीदार बंद करो अगर वह / वह लगातार दो 20 मीटर के अंतराल के लिए गति का पालन करने में विफल रहता है.
  6. उच्चतम चल रहा है पिछले अंतराल जिसके भागीदार पूरी तरह से और भागीदार की उम्र, लिंग के साथ साथ, पूरा के लिए संकेत गति रिकार्ड.
  7. सत्यापित करें कि परीक्षण के अंत में हासिल दिल दर बच्चे अधिक से अधिक 19 दिल की दर है. यदि इस दिल की दर तक पहुँच नहीं है, बच्चे अधिक से अधिक प्रयास नहीं exerted, हो सकता है और इसलिए परीक्षण दोहराया जाना चाहिए.
  8. अनुमानित + 3.248 * उम्र (वर्षों में) - VO 2 = अधिकतम 31.025 + 3.238 * (किमी / घंटा) की गति: भागीदार की अधिकतम एरोबिक क्षमता (VO अधिकतम 2), एक Léger और सह कार्यकर्ताओं के आगे रख दिया समीकरण का उपयोग .1536 * (किमी / घंटा) की गति * उम्र (वर्षों में).

4. प्रतिनिधि परिणाम

के अनुसारKato-Katz तकनीक के साथ STH निदान, अलग पेट का कीड़ा अंडे की अद्वितीय विशेषताओं सबसे 20 प्रजातियों की पहचान के लिए अनुमति देते हैं. A.lumbricoides के अंडे (लगभग 45-75 सुक्ष्ममापी (सुक्ष्ममापी) लंबी और 35-50 सुक्ष्ममापी चौड़ा, चित्रा 1) (2 चित्रा) T.trichiura और हुकवर्म (3 चित्रा) के अंडे की तुलना में मोटा खोल दीवारों है. A.lumbricoides का एक निषेचित अंडे (1 चित्रा) एक बाहरी फीका कोट, जो बनाता है यह सुनहरे भूरे रंग के देखो है, जबकि एक गैर निषेचित अंडे इस बाहरी कोट का अभाव है और थोड़ा लम्बी और बड़ा समग्र है. T.trichiura के अंडे (लगभग 50 मीटर लंबी और 22 मीटर चौड़ा, चित्रा 2) लम्बी हैं और अलग ध्रुवीय प्लग है. हुकवर्म अंडे (लगभग 64-76 मीटर लंबी और 36-40 सुक्ष्ममापी चौड़ा, चित्रा 3), दूसरे हाथ पर, एक बहुत पतली दीवार, कोशिकाओं के एक घने समूह के चारों ओर एक स्पष्ट अंगूठी द्वारा पीछाअंडे के केंद्र में है.

लार्वा S.stercoralis एल 1 (4 चित्रा) 180-380 लगभग सुक्ष्ममापी लंबे होते हैं और एक बहुत ही कम मुख गुहा है. एक अलग जननांग उत्स (4 चित्र में एक नीले तीर के साथ प्रकाश डाला) और देखा जा सकता लार्वा (4 चित्र में एक लाल तीर के साथ प्रकाश डाला) की पूंछ एक तेज अंत है.

के रूप में बच्चों की शारीरिक फिटनेस पर STH संक्रमण का असली प्रभाव अभी भी 13,14,15 बहस की जा रही है, इस बिंदु पर उनके प्रभाव के लिए कोई प्रतिनिधि परिणाम है. 20 मीटर शटल रन परीक्षण के परिणाम की व्याख्या विभिन्न तरीकों से किया जा सकता है. बच्चों की शारीरिक फिटनेस संक्रमित और गैर संक्रमित विषयों, जो उम्र और सेक्स, अन्य संभावित प्रासंगिक स्वास्थ्य की स्थिति, सामाजिक स्थिति, और सांस्कृतिक आदतों के मामले में इसी तरह के हैं के बीच तुलना की जा सकती है. यह एक पार के अनुभागीय 13,14,15 सर्वेक्षण में किया जा सकता है जहांSTH संक्रमण की स्थिति और संक्रमित और गैर संक्रमित बच्चों की शारीरिक फिटनेस एक विशेष समय बिंदु पर मूल्यांकन कर रहे हैं. सबूत की ताकत उच्च हो सकता है जब एक यादृच्छिक नियंत्रित परीक्षण डिजाइन है जहां स्कूल के आयु वर्ग के बच्चों की शारीरिक फिटनेस कृमिहर / placebo उपचार के पहले और बाद में मूल्यांकन किया है, दोनों छोटी और लंबी अवधि के मूल्यांकन के लिए अनुमति देता है. एक और खुराक - प्रतिक्रिया STH संक्रमण और शारीरिक फिटनेस की तीव्रता के बीच एक संभावित संबंध की पहचान करने और शारीरिक फिटनेस साथ 1 multiparasitism के विभिन्न स्तरों की तुलना करने की कोशिश कर सकते हैं. काम में याप और सह कार्यकर्ता 15 द्वारा प्रस्तुत, शारीरिक फिटनेस, VO 2 अधिकतम द्वारा चित्रित, काफी बच्चों को जो T.trichiura साथ संक्रमित नहीं थे (5 चित्रा) T.trichiura साथ संक्रमित बच्चों की तुलना में कम हो पाया था .

चित्रा 1
Figu A.lumbricoides अंडे के 1 पुनः सूक्ष्म छवियों: (ए) निषेचित और 500x बढ़ाई (बी) के तहत गैर निषेचित. पैमाने बार = 50 सुक्ष्ममापी.

चित्रा 2
चित्रा 2 500x वृद्धि के तहत एक T.trichiura अंडे के सूक्ष्म छवि पैमाने बार = 50 सुक्ष्ममापी.

चित्रा 3
चित्रा 3 500x वृद्धि के तहत एक हुकवर्म अंडे की छवि. पैमाने बार = 50 सुक्ष्ममापी.

चित्रा 4
चित्रा 4 250x बढ़ाई के तहत एक S.stercoralis एल 1 लार्वा की छवि. तीर पूंछ (लाल) और जननांग उत्स (नीला) से संकेत मिलता है. पैमाने बार = 100 सुक्ष्ममापी.

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चित्रा 5 बच्चों की शारीरिक फिटनेस के स्तर टी. से संक्रमित नहीं की तुलना में T.trichiura से संक्रमित बच्चों की शारीरिक फिटनेस के स्तर दिखा ग्राफ. trichiura.

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Discussion

तीन इस पत्र में वर्णित प्रोटोकॉल परीक्षण किया गया है और युन्नान प्रांत, पीपुल्स Bulang जातीय अल्पसंख्यक 21 के सदस्यों के बीच और 6,13,14 अफ्रीका के विभिन्न भागों में चीन के गणराज्य के दक्षिण - पश्चिमी भाग में मार डाला.

वहाँ कई तकनीक Kato Katz के लिए उपलब्ध टेम्पलेट्स हैं. प्रत्येक छेद आकार अलग fecal सामग्री की एक अलग राशि वितरित करेंगे. EPGs की गणना के लिए, यह इसलिए टेम्पलेट की इकाई पता करने के लिए आवश्यक है, के रूप में सही पहलू EPG अनुमान पर पहुंचने के साथ अंडे की संख्या गिना गुणा. इसके अलावा, जब हुकवर्म जांच के तहत समुदाय में मौजूद है, यह करने के लिए तैयार करने के बाद शीघ्र ही स्लाइड पढ़ें (30 मिनट की एक समाशोधन समय के बाद, लेकिन 60 मिनट की एक अधिकतम समाशोधन समय के भीतर) के लिए आवश्यक है. मुख्य कारण यह है कि उच्च तापमान पर, हुकवर्म अंडे तेजी से 22 बिखर. अध्ययन सममूल्य द्वारा fecal उत्पादन के बीच के समयticipant और नमूनों की परीक्षा भी है 3 घंटा या अधिक हुकवर्म 23 निदान के लिए तकनीक Kato Katz की संवेदनशीलता में एक 50% की कमी करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं की एक अंतराल के रूप में महत्वपूर्ण है. अन्त में, Kato - Katz तकनीक के नैदानिक ​​संवेदनशीलता में सुधार करने के लिए, कम तीव्रता STH संक्रमण, कई fecal नमूने एक भागीदार से प्राप्त किया जाना चाहिए, और डबल या तीन प्रतियों Kato Katz मोटी स्मीयरों के साथ क्षेत्रों में विशेष रूप से प्रत्येक मल नमूना से तैयार किया जाना चाहिए 7,24.

BAERMANN तकनीक के संबंध के साथ, जब सावधानी प्रयोग प्रदर्शन के रूप में संक्रामक लार्वा मौजूद हो सकता है और इस प्रकार, दस्ताने पहना होना चाहिए लिया जाना चाहिए. हालांकि BAERMANN तकनीक अन्य एकाग्रता तकनीक की तुलना में काफी अधिक संवेदनशीलता से पता चलता है और संस्कृति तरीकों की तुलना में कम श्रमसाध्य है, वहाँ महत्वपूर्ण कमियाँ हैं. उदाहरण के लिए, ताजा fecal सामग्री की एक बड़ी राशि की आवश्यकता है, जो एक समस्या है जब रोगियों छोटे fecal नमूने प्रस्तुत है.दूसरी ओर, एक बड़े fecal नमूना कम तीव्रता के 9 संक्रमण में लार्वा का पता लगाने के अवसरों में वृद्धि हो सकती है. इसके अलावा, वहाँ एक जोखिम है कि हुकवर्म या Trichostrongylus एसपीपी जैसे अन्य नेमाटोड के लार्वा मौजूद हो सकता है, इस प्रकार सावधान अन्वीक्षण warranted है.

एरोबिक फिटनेस के आकलन के लिए वो 2 अधिकतम मापने के प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष रूप से तरीके हैं. प्रत्यक्ष प्रोटोकॉल treadmills, चक्र ergometers, और अन्य विशिष्ट और भारी उपकरणों, जो exhaled हवा की मात्रा और गैस सांद्रता उपाय कर सकते हैं की आवश्यकता होती है. इस तरह के एक दृष्टिकोण एक संसाधन विवश विकासशील दुनिया में ग्रामीण सेटिंग में संभव नहीं है. ऐसे सेटिंग्स के लिए, 20-मीटर शटल रन परीक्षण के रूप में अप्रत्यक्ष तरीके, पसंदीदा तरीके हैं. हालांकि अप्रत्यक्ष तरीकों के रूप में सीधे तरीके के रूप में सही नहीं कर रहे हैं, 20-मीटर शटल रन Léger और सह कार्यकर्ताओं द्वारा स्थापित उच्च परीक्षण (नि. = 0.89) reproducibility और validit का प्रदर्शन किया हैएक 16 ट्रेडमिल पर अधिक से अधिक ऑक्सीजन तेज खिलाफ y. इसके अलावा, अन्वेषक और भागीदार अनुपात कम हो सकता है और एक ही समय में कई प्रतिभागियों परीक्षण करने के लिए, मानव संसाधन और समय की बचत कर सकते हैं कर सकते हैं. दिल दर पर नज़र रखता है आम तौर पर इस तरह के 13,16 परीक्षण में नहीं किया जाता है. हालांकि, उनके उपयोग के अन्वेषक कि भागीदार परीक्षा में अधिक से अधिक प्रयास exerted है पर अतिरिक्त जानकारी प्राप्त करने के लिए अनुमति देता है. अंत में, यह सलाह दी जाती है के लिए प्रतिभागियों को पहले कुछ अंतराल के परीक्षण करना इतना है कि वे खुद को चलने की गति और पाठ्यक्रम के साथ परिचित कर सकते हैं.

अंत में, हमें विश्वास है कि उपर्युक्त तरीकों का एक संयोजन, मानक प्रोटोकॉल का पालन, और STH संक्रमण और एक वैज्ञानिक ध्वनि में स्कूल के आयु वर्ग के बच्चों, अभी तक प्रबंधनीय और किफायती ढंग की शारीरिक फिटनेस के प्रसार तीव्रता के आकलन के लिए अनुमति देता है.

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Disclosures

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

Acknowledgements

लेखकों युन्नान प्रांत, चीन जनवादी गणराज्य और Agboville, कोटे डी आइवर में समुदायों के लिए ऊपर वर्णित अध्ययन में उनकी भागीदारी के लिए आभारी हैं. हम स्थानीय क्षेत्र टीमों है कि परीक्षण और प्रोटोकॉल के निष्पादन में सहायता प्रदान की है के लिए आभारी हैं. वीडियो फिल्माने के दौरान उसकी सहायता के लिए सूक्ष्म, छवियों Hanspeter Marti और ​​प्रयोगशाला समर्थन और स्टेफनी KRAUTH के लिए उनकी टीम को प्रदान करने के लिए Yvette Endriss: हम विशेष रूप से स्विस उष्णकटिबंधीय और सार्वजनिक स्वास्थ्य संस्थान से निम्नलिखित सहयोगियों के लिए आभारी हैं. अंत में, हम उपयोगी टिप्पणी की एक श्रृंखला के लिए दो गुमनाम रेफरी धन्यवाद.

Materials

Name Company Catalog Number Comments

Note: Materials in this list are generic and can be obtained from different sources.

Kato-Katz kit
[400 plastic templates with a hole of 6 millimeter (mm) (diameter) in a 1.5 mm thick template; 400 plastic spatula; a 20-m role of nylon screen of 80 mesh size; a 20-m role of hydrophilic cellophane, 34 μm thick.]
Vestergaard Frandsen Please note that the glycerin-malachite green solution is not included in this kit but can be bought from any chemical supplier.
Glass funnel [about 8 centimeter (cm) wide and 6 cm deep] The glass funnel for the Baermann technique should be able to hold about 60 mL of water. The size of the rubber hose and gauze is dependent on the type of glass funnel used.
Biological microscope Olympus CX21LED/CX21
Centrifuge Shanghai Medical Instruments Group 80 - 2T
Pre-recorded signals Bitworks Design Team Bleep Test Version 1.3.1 iPhone application
Heart rate monitor POLAR FT1 Watch and transmitter

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References

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