Производство лентивирусов векторов для трансдукции клетки из центральной нервной системы

Neuroscience

Your institution must subscribe to JoVE's Neuroscience section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

В этом протоколе описываются производства, очистки и титрования лентивирусов векторов. Мы приведем пример того, лентивирусов вектор-опосредованной доставки генов в первичных культивируемых нейронов и астроцитов. Наши методы могут применяться и к другим типам клеток

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Li, M., Husic, N., Lin, Y., Snider, B. J. Production of Lentiviral Vectors for Transducing Cells from the Central Nervous System. J. Vis. Exp. (63), e4031, doi:10.3791/4031 (2012).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Protocol

1. Упаковка лентивирусов векторов

Лентивирусов векторов производятся котрансфекции из лентивирусов вектор передачи и другие плазмиды, необходимые для упаковки в 293T клеток кальцием метод трансфекции фосфатом. Мы используем 10 100-мм культуры тканей блюда в этом протоколе. Он может быть увеличен или уменьшен в зависимости от приложения. 293T клеточной линии сохраняется в модифицированной орлы Дульбекко среде (DMEM) с высоким содержанием глюкозы (4500 мг / л), с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки (FBS), 100 ед / мл пенициллина, 100 мкг / мл стрептомицина в 37 ° C инкубаторе с 5% CO 2.

  1. Семенной 293T клеток на 30-40 слияния% до 10 100-мм культуры тканей блюд (3 х 10 6 клеток / блюдо) в культуральной среде. Вернуться клетки инкубатора.
  2. После 20-24 ч культуре, проверьте плотность клеток. Клетки должны быть около 80% слияния во время трансфекции.
  3. Подготовьте 50 мл трубку. Добавить 4,4 мл TE79/10 (1 мМ TrisHCl, 0,1 мМЭДТА, рН 7,9) за вычетом общего объема следующие плазмидной ДНК. Добавить 100 мкг лентивирусов передача плазмиды (рис. 1), 58 мкг pMDLg / pRRE 31 мкг pCMV-G, 25 мкг pRSV-Rev, 600 мкл 2М CaCl 2. Аккуратно перемешайте.
  4. Подготовка еще 50 мл трубку. Добавьте 5 мл 2x HBS (0,05 М HEPES, 0,28 М NaCl, 1,5 мМ Na 2 HPO 4, рН 7.12).
  5. Возьмите ДНК-CaCl 2 смеси 10 мл пипетки и добавить в пробирку с 2 х HBS, по каплям при встряхивая трубку.
  6. Держите осадков реакции при комнатной температуре (RT) в течение 30 мин.
  7. Удалить культуры блюда из инкубатора. Смешать осадков реакции хорошо встряхивая. Добавьте 1 мл суспензии на каждые 100 мм блюдо содержащих клетки. Подвеска должна быть добавлена ​​медленно, по капле, осторожно вращая среды в блюдо. Возвращение этих блюд в инкубатор и оставить на 5 часов.
  8. Удаление среды от культуры. Добавить 6 мл свежей питательной среде, содержащей 6 ммоль натрия буtyrate к каждому блюду. Вернуться культуры в инкубатор. После ночной культуры, если есть люминесцентные репортером в конструкцию, проверьте выражение гена-репортера под флуоресцентным микроскопом. Как правило, более 80% клеток выразить ген-репортер, если это обусловлено повсеместным промоутер (например, ЦМВ промотор).
  9. Через два дня (40-44 ч) после трансфекции, собирают супернатант из 10 блюд на 2 50 мл пробирки (около 30 мл каждая трубка). Замораживание супернатант в -80 ° C морозильник или перейти к следующему шагу.

2. Концентрация и очистка векторы

  1. Центрифуга недавно собранных или талой супернатант на 900 г (около 2000 оборотов в минуту) в течение 10 минут, чтобы удалить все клетки мусора в супернатант.
  2. Прикрепите 60-мл шприц 0,2-мкм фильтр SFCA шприц. Передача супернатант из 50 мл трубки шприц. Фильтр супернатант в пробирку центрифуги polyallomer.
  3. Возьмите 5 мл 20% сахарозы (подготовлен в PBS) в 5 мл пипетки. Вставитьпипетки на дно пробирки, содержащие центрифуги супернатант. Медленно добавить раствор сахарозы в соответствии с вектором супернатант. Повторите эти действия для супернатант из другой трубы.
  4. Центрифуга супернатанта в 11 000 оборотов в минуту и ​​4 ° C в течение 4 часов с Beckman ЮЗ28 качели ротора.
  5. Удалить супернатант. Добавить 150 мкл 4% лактозы (подготовлен в PBS) для каждой центрифуге трубки. Ресуспендируют гранул.
  6. Передача концентрированной вектор из всех пробирок на 1,5 мл трубки. Оставьте пробирку на льду в течение 15 мин.
  7. Смешать вектор подвески с помощью пипетки. Спина с микроцентрифужных на полной скорости (около 16000 г) в течение 1 мин.
  8. Передача супернатант в новую 1.5-мл трубку. Разделите окончательного образца в 20 мкл аликвоты и хранить их в -80 ° C морозильник.

3. Титрование векторы

  1. Семенной 5 х 10 4 / лунку HT1080 клеток в 12-луночного планшета в 1 мл DMEM среде с 10% ЭТС.
  2. После overnigHT культуры, рассчитывать клеток из одной ямы и набрать номер ячейки.
  3. Сделайте 5 раз серийного разведения (1:5, 1: 25; 1:125 и 1:625) концентрированного вектор с питательной среде. Добавить I мкл каждого разведенного вектор отдельных скважин. Образцы могут быть продублированы для повышения точности.
  4. Добавить 1 мкл 4 мг / мл Polybrene (Hexadimethrine метила) в каждой лунке, содержащей вектор и в и без вектора. Перемешайте, осторожно встряхивая пластины. Вернуться в инкубаторе в течение 48 часов.
  5. Удаление среды из скважин культуре клеток. Промыть каждую лунку с PBS. Добавить 250 мкл 1x трипсина-EDTA решение клеток. Когда клетки отделяются (3-5 мин), добавить 1 мл культуральной среды. Ресуспендируют клеток с помощью пипетки. Передача клеточной суспензии в пробирки на 1,5 мл центрифугу.
  6. Центрифуга в 900 г в течение 6 мин. Для векторов с люминесцентными гена-репортера (например, GFP), переходите к пункту 3.7 для анализа FACS. Для векторов, не репортер, переходите к пункту 3.8 для реального КПЦР времени.
  7. Для векторов, содержащих флуоресцентныеrescent гена-репортера, удалите супернатант и ресуспендируют осадок 300 мкл 3,7% формальдегида в PBS. Определить процент репортер положительных клеток на основе анализа FACS. Титр будут представлены как трансдукция единиц на миллилитр концентрированной вектор (TU / мл).

Уравнение 1

Например, если 1 х 10 5 клеток трансдуцированных с 1/25 мкл (0,04 мкл) вектора и 30% клеток репортер положительный, титр будет:

Уравнение 2

Используйте только разведения попадают в линейной зависимости между процентом положительных клеток и количество векторных добавил рассчитать титр. Окончательный титр должна быть в среднем титр получить преобразователями, по крайней мере 2 различных количеств вектора.

  1. Для векторов безфлуоресцентный ген репортер, извлечения геномной ДНК из клеток с использованием HT1080 QIAamp ДНК Mini Kit (Qiagen) в соответствии с протоколом производителя. Усиление вектор последовательности геномной ДНК с использованием ABI Prism 7000 Detection System (Applied Biosystems) с праймерами (ВИЧ-1 PBS / дюйм регион 17) 5'-CCGTTGTCAGGCAACGTG-3 'и 5'-AGCTGACAGGTGGTGGCAAT-3 », и TaqMan зонда 5 '-FAM-AGCTCTCTCGACGCAGGACTCGGC-TAMRA-3'. Альбумин ген, который является одним копий гена в геноме (2 экз / клетка) также усиливается с праймерами 5'-TGAAACATACGTTCCCAAAGAGTTT-3 'и 5'-CTCTCCTTCTCAGAAAGTGTGCATAT-3 », и зонд 5'-FAM-TGCTGAAACATTCACCTTCCATGCAGA-TAMRA-3 », как внутренний контроль. Определить копию количество векторных и альбумина методом ПЦР в 96-луночного планшета в соответствии с инструкцией завода-изготовителя со следующей программой: 50 ° C в течение 2 мин, 95 ° С в течение 10 мин, 35 циклов 95 ° C в течение 15 секунд и 60 ° C в течение 2 мин. Десять раз серийные разведения плазмиды с известной концентрацией (представлены в виде копиичисло), содержащий шаблон последовательности должны быть усилены для создания калибровочной кривой для количественного определения неизвестных образцов. Титр будет представлен как интеграция единиц на миллилитр концентрированной вектор (МЕ / мл).

Уравнение 3

4. Трансдукции неокортекса культур

Неокортекса культур, содержащих как нейроны и клетки глии готовится из коры мыши использованием двухступенчатой ​​процедуры покрытие, как описано выше 18. Neocortices полученные из эмбриональных мышей на 14-16 день беременности высевают на ранее установленные глиальных монослоя в MEM с добавлением 10% FBS, 20 глюкоза мм и 2 мм глютамина в 24-луночного планшета для культуры ткани.

  1. Через 5 дней в пробирке, добавить 10 мкМ цитозинарабинозид (Ara-C) в neocortical культуру подавлять без нейронов деление клеток. Продолжить культуре клеток в течение 2 дней.
  2. Теплый питательной среды в 37 ° С на водяной бане 5-10 мин. Замените Ara-C среде, содержащей свежей питательной среды (500 мкл / лунку).
  3. Добавить вектор желаемого МВД (кратность инфекции; отношение числа векторных частиц с числом клеток-мишеней) к культуре. Продолжить культуры в течение 24 часов. Мы используем МВД 1-10 (обычно 5) в первичных корковых культур.
  4. Замените культуральной среде со свежей средой. Продолжить культуры. Если есть ген-репортер в векторной конструкции, проверить клетки под флуоресцентным микроскопом через 2 дня после трансдукции. Выражение репортер ген будет виден в нейронах 2-7 после трансдукции, в зависимости от конструкции вектора и дозы используется.

5. Представитель Результаты

Титры лентивирусов векторов производится с этого диапазона протокол 10 8 -10 10 МЕ / мл, whicч предназначены для трансдукции различных типов клеток из ЦНС, как в пробирке и в естественных условиях. таблице 1 и рисунке 2 показано представитель результат с помощью векторов производства этого протокола. Мы трансдуцированных мышиный неокортекса культур лентивирусов векторов выражения зеленый флуоресцентный белок (GFP), контролируемые synapsin (SYN) промоутер или глиального фибриллярного кислого белка (GFAP) промотора. Через семь дней после трансдукции, мы провели иммунной маркировать нейроны и астроциты с анти-NeuN и анти-GFAP антителами, соответственно. Как показано в таблице 1 и на рис. 2А, после трансдукции с вектора, несущего synapsin промоутера, более 90% нейронов (NeuN + клеток), экспресс-GFP и не астроциты (GFAP + клеток) выразить это ген-репортер. Когда GFAP промоутер используется в конструкции вектор (рис. 2В), около 80% астроцитов (GFAP + клеток) выраженияс GFP, все GFP + клеток астроцитов, что подтверждается колокализации с GFAP и отсутствия GFP выражение в NeuN-меченых клеток. Эти результаты показывают, что лентивирусов векторов очень эффективны для доставки трансгенов в клетках центральной нервной системы и клеточной конкретного гена может быть достигнуто при необходимости используются промоутеров.

Рисунок 1
Рисунок 1. Схематическое изображение ВИЧ на основе лентивирусов векторов и упаковка плазмид. ВИЧ-1 провируса показан в верхней части. Элементы вектора производства разделены на четыре различных плазмид. Лентивирусов передачи плазмида содержит гибридный LTR 5 ', в которой U3 область заменяется цитомегаловирус (CMV), промотор упаковки сигнала (ψ), RRE последовательность, центральный тракт polypurine (cPPT), гена (например, люминесцентные репортер) вместе с промоутером выбора, и 3 'LTR, в которомцис-регуляторных последовательностей полностью удаляются из U3 региона. pMDLg / pRRE содержит кляп и пол гены и последовательности РРЭ от ВИЧ-1 под контролем промотора CMV. pRSV-Rev содержит кодирующую последовательность Rev обусловлен промоутер RSV. pCMV-G содержит VSV-G гена белка под контролем промотора CMV. PA указывает на сигнал полиаденилирования от человеческого β-глобина генов.

Рисунок 2
Рисунок 2. Экспрессия генов в репортер мыши неокортекса смешанной культуры трансдуцированных лентивирусов переносчиков клетки определенного типа промоутеров. Культур трансдуцированных LV-SYN-GFP () или LV-GFAP-GFP векторов (B) в МВД 5. Через семь дней после трансдукции клеток immunostained с анти-NeuN или анти-GFAP антителами. Верхняя панель показывает GFP флуоресценции, средней панели показывают, окрашивания и нижняя панели объединены изображения (GFP: зеленый; NeuN или GFAP: красный). Вектор GFP + клеток в нейроны GFP + в астроциты LV-SYN-GFP 92,2 ± 7,3 0 LV-GFAP-GFP 0 78,3 ± 11,5

Таблица 1. Сравнение GFP выражение в мышиных неокортекса культуры трансдуцированных лентивирусов переносчиков различных промоутеров.
мышей неокортекса культур (5 х 10 5 / и в 24-луночного планшета) были трансдуцированных LV-SYN-GFP или LV-GFAP-GFP в МВД 5. Через семь дней после трансдукции, культуры были зафиксированы и immunostained для NeuN или GFAP. Количество GFP и NeuN / GFAP выражения клетки подсчитывали в образах из 10 полей в экспериментальных условиях. Значения представляют собой процент нейронов (NeuN + клеток) илиастроциты (GFAP + клетки), которые также выразили ген GFP репортера. Значения указаны средние значения ± SD из трех независимых экспериментов.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

В этом протоколе, мы показали, производство лентивирусов векторов и применение этих векторов в неокортекса культур. Мы продемонстрировали эффективную и клетки определенного типа трансдукции с векторами производятся с помощью этих методов. Когда промоутер synapsin использовании GFP выражение строго конкретный нейрон. Когда промоутер GFAP использовании GFP выражение исключительно в астроциты. Если ни один тип клеток конкретных выражений не требуется, вездесущий промоутер может быть использован. Мы обнаружили, как и ubiqutin фосфоглицераткиназы (ПГК) промоутеров может управлять высокий уровень экспрессии генов в неокортекса культур 6. Экспрессия генов обусловлен лентивирусов векторов могут быть настроены для конкретных уровней экспрессии или клеточных типов по выбору учредителей (например, повсеместно или клетки определенного типа) или с помощью различных белков конверте или вектор pseudotypes для решения конкретных тканей и приложений. Например, pseudotyping бешенством белка G или слияние VSV-Gг бешенством белка поддерживает ретроградного аксонального транспорта 19,20. Переходный протокол позволяет трансфекции вектором упаковки с различными белками оболочки.

Лентивирусов векторов, как правило, концентрируется ультрацентрифугирования без очистки шаги. Эти векторы неочищенных подходят для многих типов клеток. Тем не менее, основной культуры нейронов, чувствительных к загрязнениям от производителя клеток, в результате чего партии к партии вариации цитотоксичности. 20% сахарозы подушки очистки шаг делает векторы последовательно нетоксичных в первичных нейронов. Мы рекомендуем использовать очищенную векторов трансдукции первичных нейронов и инъекции в животных. Если более крупных масштабах или выше чистота вектор подготовки не требуется, другие методы очистки, такие как аффинной хроматографии 21 и анионообменной мембраны хроматографии 22 может быть использован. В долгосрочной трансдукции, как правило, требуется в первичных нейронов культуры, Особую осторожность следует свести к минимуму загрязнение во время приготовления векторов. Передача вектор супернатант 0,2 мкм фильтр и с помощью автоклавирования пробирки polyallomer при концентрации вектор будет служить этой цели. Бутылка-топ фильтры могут быть использованы, если большой объем надосадочной должны быть отфильтрованы. Бутират натрия, как сообщается, стимулируют активность промоутеров 23. Добавление бутират натрия в питательной среде после трансфекции клетки производитель может увеличить вектор титр более 10 складок 24. Polybrene (hexadimethrine бромид) широко используется для протоколов передачи генов на повышение эффективности антиретровирусной перенос генов путем нейтрализации отрицательных зарядов, способствуя тем самым вектор-клеточного взаимодействия 25. В наших руках, polybrene является токсичным для нейронов неокортекса культур. Таким образом, polybrene следует избегать в трансдукции первичных нейронов культуры. Если естьлюминесцентные репортер в векторе, это удобно для определения вектора титр анализом FACS. Когда репортер не доступны или репортер гена обусловлена ​​конкретной ткани промоутер, КПЦР для обнаружения интеграции вектора в клетки-мишени должны быть лучшим выбором в качестве вектора интеграции не зависит от экспрессии трансгена. Титра специфических векторов определяется с помощью анализа FACS будет ниже, чем у КПЦР так как не все интегрированные копии вектора являются функциональными. Векторные титры можно определить, измеряя ВИЧ p24 белка ELESA или вектор геномной РНК QRT-PCR в вектор препаратов. Однако, эти методы менее точны из-за значительного количества дефектных вирусных частиц неизбежно образующихся при процессе упаковки и функциональные частицы, которые не успешно преобразовывать клетки-мишени 26. Векторов, сделанные этим протоколом, были успешно использованы в как в пробирке и в естественных условиях в ровмятина мозга 27. Следователи должны проверить в своих системах индивидуально, так как вектор-опосредованной экспрессии генов не всегда идентичны в клеточных культурах и в естественных системах даже в одном типе клеток 6,28. Лентивирусов векторов широко используются для гиперэкспрессией или сбить генов интерес в различных клеточных типов в ЦНС. Наш протокол должен быть полезны для неврологии исследователи развивать лентивирусов векторов в своих приложениях исследований.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Нет конфликта интересов объявлены.

Acknowledgments

Эта работа была поддержана NIH Neuroscience Blueprint Основные гранта (P30 NS057105, BJS) в Вашингтонском университете, Программа гранта NS032636 (BJS) и Надежда Центра неврологических расстройств.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
DMEM Sigma-Aldrich D5796
MEM Invitrogen 11090-081
Fetal bovine serum Hyclone SV3001403
PBS Mediatech, Inc. 21-040-CM
Trypsin-EDTA Sigma-Aldrich T3924
Sodium butyrate Sigma-Aldrich B5887
Hexadimethrine bromide (Polybrene) Sigma-Aldrich H9268
293T cells ATCC CRL-11268
HT1080 cells ATCC CCL-121
Falcon 100 x 20 mm tissue culture dish BD Biosciences 353003
1 x 3 ½ in polyallom–r centrifuge tube Beckman Coulter Inc. 326823
0.2-micron syringe filter Corning 431219
QIAamp DNA Mini Kit Qiagen 51304

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Naldini, L. In vivo gene delivery and stable transduction of nondividing cells by a lentiviral vector. Science. 272, 263-267 (1996).
  2. Zufferey, R. Self-inactivating lentivirus vector for safe and efficient in vivo gene delivery. J. Virol. 72, 9873-9880 (1998).
  3. Davidson, B. L., Breakefield, X. O. Viral vectors for gene delivery to the nervous system. Nat. Rev. Neurosci. 4, 353-364 (2003).
  4. Gascon, S., Paez-Gomez, J. A., Diaz-Guerra, M., Scheiffele, P., Scholl, F. G. Dual-promoter lentiviral vectors for constitutive and regulated gene expression in neurons. J. Neurosci. Methods. 168, 104-1012 (2008).
  5. Hioki, H. Efficient gene transduction of neurons by lentivirus with enhanced neuron-specific promoters. Gene Ther. 14, 872-882 (2007).
  6. Li, M. Optimal promoter usage for lentiviral vector-mediated transduction of cultured central nervous system cells. J. Neurosci. Methods. 189, 56-64 (2010).
  7. Naldini, L., Blomer, U., Gage, F. H., Trono, D., Verma, I. M. Efficient transfer, integration, and sustained long-term expression of the transgene in adult rat brains injected with a lentiviral vector. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93, 11382-11388 (1996).
  8. Blomer, U. Highly efficient and sustained gene transfer in adult neurons with a lentivirus vector. J. Virol. 71, 6641-6649 (1997).
  9. Consiglio, A. Robust in vivo gene transfer into adult mammalian neural stem cells by lentiviral vectors. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 14835-14840 (2004).
  10. Jakobsson, J., Ericson, C., Jansson, M., Bjork, E., Lundberg, C. Targeted transgene expression in rat brain using lentiviral vectors. J. Neurosci. Res. 73, 876-885 (2003).
  11. Arya, S. K., Guo, C., Josephs, S. F., Wong-Staal, F. Trans-activator gene of human T-lymphotropic virus type III (HTLV-III). Science. 229, 69-73 (1985).
  12. Sirven, A. The human immunodeficiency virus type-1 central DNA flap is a crucial determinant for lentiviral vector nuclear import and gene transduction of human hematopoietic stem cells. Blood. 96, 4103-4110 (2000).
  13. Burns, J. C., Friedmann, T., Driever, W., Burrascano, M., Yee, J. K. Vesicular stomatitis virus G glycoprotein pseudotyped retroviral vectors: concentration to very high titer and efficient gene transfer into mammalian and nonmammalian cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90, 8033-8037 (1993).
  14. Farson, D. A new-generation stable inducible packaging cell line for lentiviral vectors. Hum. Gene Ther. 12, 981-997 (2001).
  15. Broussau, S. Inducible packaging cells for large-scale production of lentiviral vectors in serum-free suspension culture. Mol. Ther. 16, 500-507 (2008).
  16. Wang, X., McManus, M. Lentivirus production. J. Vis. Exp. (32), e1499 (2009).
  17. Sastry, L., Johnson, T., Hobson, M. J., Smucker, B., Cornetta, K. Titering lentiviral vectors: comparison of DNA, RNA and marker expression methods. Gene Ther. 9, 1155-1162 (2002).
  18. Snider, B. J., Lobner, D., Yamada, K. A., Choi, D. W. Conditioning heat stress reduces excitotoxic and apoptotic components of oxygen-glucose deprivation-induced neuronal death in vitro. J. Neurochem. 70, 120-129 (1998).
  19. Mazarakis, N. D. Rabies virus glycoprotein pseudotyping of lentiviral vectors enables retrograde axonal transport and access to the nervous system after peripheral delivery. Hum. Mol. Genet. 10, 2109-2121 (2001).
  20. Kato, S. Neuron-specific gene transfer through retrograde transport of lentiviral vector pseudotyped with a novel type of fusion envelope glycoprotein. Hum. Gene Ther. 22, 1511-1523 (2011).
  21. Segura, M. M., Garnier, A., Durocher, Y., Ansorge, S., Kamen, A. New protocol for lentiviral vector mass production. Methods Mol. Biol. 614, 39-52 (2010).
  22. Kutner, R. H., Puthli, S., Marino, M. P., Reiser, J. Simplified production and concentration of HIV-1-based lentiviral vectors using HYPERFlask vessels and anion exchange membrane chromatography. BMC Biotechnol. 9, 10 (2009).
  23. Laughlin, M. A., Chang, G. Y., Oakes, J. W., Gonzalez-Scarano, F., Pomerantz, R. J. Sodium butyrate stimulation of HIV-1 gene expression: a novel mechanism of induction independent of NF-kappa B. J Acquir Immune Defic Syndr Hum Retrovirol. 9, 332-339 (1995).
  24. Gasmi, M. Requirements for efficient production and transduction of human immunodeficiency virus type 1-based vectors. J. Virol. 73, 1828-1834 (1999).
  25. Palsson, B., Andreadis, S. The physico-chemical factors that govern retrovirus-mediated gene transfer. Exp. Hematol. 25, 94-102 (1997).
  26. Lizee, G. Real-time quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction as a method for determining lentiviral vector titers and measuring transgene expression. Hum. Gene Ther. 14, 497-507 (2003).
  27. Lee, J. K., Chung, J., McAlpine, F. E., Tansey, M. G. Regulator of G-Protein Signaling-10 Negatively Regulates NF-{kappa}B in Microglia and Neuroprotects Dopaminergic Neurons in Hemiparkinsonian Rats. J. Neurosci. 31, 11879-11888 (2011).
  28. Shevtsova, Z., Malik, J. M., Michel, U., Bahr, M., Kugler, S. Promoters and serotypes: targeting of adeno-associated virus vectors for gene transfer in the rat central nervous system in vitro and in vivo. Exp. Physiol. 90, 53-59 (2005).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics