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大鼠原位肝移植

Medicine
 

Summary

我们提出了一个经典的大鼠原位肝移植二袖套技术易于建立的修订。

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Oldani, G., Lacotte, S., Morel, P., Mentha, G., Toso, C. Orthotopic Liver Transplantation in Rats. J. Vis. Exp. (65), e4143, doi:10.3791/4143 (2012).

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Abstract

在肝移植领域的临床进展已基本支持1,2动物模型。镰等。在1979年出版以来的第一次原位肝移植,这种模式仍然是金标准,尽管各拟议的替代技术。然而,它的广泛使用是有限的,其陡峭的学习曲线5。

在这个视频文件,我们显示了镰田的两袖套法简单,易于建立的修订。肝上下腔静脉吻合手动执行与运行缝合,静脉PORTA和infrahepatic的下腔静脉吻合,利用快速链接袖口系统6。制造业的快速连接器套件显示在一个单独的视频文件。

Protocol

1。捐助行动

  1. 麻醉雄性大鼠,体重200±20克异氟醚与锥上的面具(归纳为3%,2%,在操作过程中,1升/分钟空气流量,FIO2 70%)。
  2. 执行一个大型的中位数和横向剖腹探查术和灸两侧上腹船只。
  3. 切断镰状韧带,左膈静脉分开的suprehepatic腔静脉。最后,分成两个7-0丝结扎膈肌静脉。
  4. 切断左侧的三角形和胃肝韧带。
  5. 7-0结扎(凝血是一种有效的替代品)之间的分化肝食管韧带和动脉。
  6. 隔离左肾静脉下腔静脉infrahepatic。分离右肾静脉和周围组织之间划分10-0和7-0结扎,其近端和远端的两端,分别。
  7. 除以右肾上腺静脉之间7-0 ligatur,ES和自由的肝切割温柔的牵引下,从后韧带。
  8. 隔离gastrosplenic静脉和分裂之间的10-0和7-0结扎,近端和远端的两端,分别。
  9. 7-0关系之间的划分适当的肝动脉。
  10. 分离出的胰十二指肠静脉和10-0和7-0结扎,其近端和远端,分别划分。
  11. 通过实践在1厘米的距离从肝门的一个小切口插入胆总管1 22G,3.5毫米的支架。固定支架在7-0结扎的位置。
  12. ,通过阴茎背静脉注入10的用户界面,为1毫升生理盐水稀释肝素。
  13. Cannulate腔PORTA(尽可能从肺门),与21G针轻轻冲洗肝脏冷乳酸林格氏液(或其他保存液)20毫升。在同一时间,减少低于肾静脉腔静脉,使足够outfl唔。肝脏冷灌注应持续一两分钟之间。
  14. 切断胰十二指肠静脉下腔PORTA。
  15. 切断胆总管远端结扎支架周围的。
  16. 完成的infrahepatic腔静脉切开。
  17. 切肝上腔静脉脱脂隔膜取出肝脏。
  18. 放入充满了寒冷的乳酸林格氏液,躺在一个冰垫盆地盆地的肝脏。

2。移植物的制备

  1. 其袖口插入腔PORTA,然后船只周围边缘外翻,暴露内膜。争取在7-0结扎袖口外翻段。
  2. 上腔静脉infrahepatic重复同样的操作。
  3. 对下腔静脉infrahepatic近端部分微钳(4-6毫米长)的位置。此操作可避免血液门户再灌注后的损失。
  4. 推翻肝脏和插入两个8-0的普理灵缝线肝上下腔静脉,从外到内的另一侧边缘。
  5. 存放在冰箱中的移植(成乳酸林格氏液浸泡),在0-4°C。

3。受体手术

  1. 麻醉雄性大鼠,体重200±20克异氟醚与锥上的面具(归纳为3%,2%,在操作过程中,1升/分钟空气流量,FIO2 70%),并保持在一个温暖的垫。值得注意的是,应符合受援国和捐助国的重量(​​±40克)。
  2. 注入10毫升的生理盐水皮下注射,哌拉西林/他唑巴坦肌肉注射0.03Ğ前剖腹手术。
  3. 执行中线施福建耻骨剖腹。
  4. 自动静电镊子扭转的剑突过程中为了更好地暴露肝脏。
  5. 削减前韧带和两个7-0关系划分左膈静脉。
  6. 7-0结扎(混凝之间的分化肝食管韧带和动脉n是一个有效的替代)。不显示视频(捐助者的操作相同)。
  7. 隔离的infrahepatic腔静脉,右肾静脉。
  8. 7-0连字和自由切割温柔的牵引下,从肝后韧带(在视频显示(捐助者的操作相同))之间的分割右肾上腺静脉。
  9. 放置周围胆总管7-0结扎,仅低于其分裂。把另一个结扎1毫米削减之间。
  10. 隔离肝动脉和脐划分7-0连写。
  11. 轻轻分开左,右门静脉分支。注意不要损害肝动脉或胃脾静脉。
  12. 定位颅右肾静脉腔腔静脉周围环,。然后保护血管壁,环,把坚持四项基本原则9-0缝线。
  13. 门户环上腔PORTA重复同样的操作。 ,通过阴茎背静脉注入10的用户界面,为1毫升生理盐水稀释肝素。
  14. 设置麻醉和供氧浓度100%,0.25%。
  15. 钳略高于右肾静脉下腔静脉infrahepatic,然后钳上面的胃脾静脉腔PORTA。最后夹住肝上腔静脉,一定要包括至少2毫米膜片。
  16. 切肝上下腔静脉紧密的实质。
  17. 削减的左边和右边的门静脉分支和分裂之间的隔膜。
  18. 削减的infrahepatic腔静脉密切的实质,不切开任何先前定位缝线关注。取出肝脏放入腹腔移植。
  19. 执行的肝上下腔静脉移植和受援国之间的端至端吻合。启动与运行由左到右后壁缝合,然后进行前壁由右至乐英尺保持直到结束前缝合线松动,为了让前拧紧两端的内部腔慷慨潮红。
  20. 插入到门户的环柄尾分行的逼近,然后将其插入腔移植PORTA寻找到插槽的位置,与门户袖口,缝颅分支的逼近。
  21. 关闭的逼近,同时用生理盐水冲洗收件人的腔PORTA和袖口允许插入的船只。争取用7-0周的领带腔围绕其袖口收件人的PORTA。
  22. 删除的逼近。为了打开钳对肝上下腔静脉和腔PORTA:门户网站流量正在重建。
  23. 取出9-0连字切割额外罚款剪刀的门户环。
  24. 插入腔环柄尾分行的逼近,然后插入颅缝腔静脉移植infrahepatic分公司的逼近,与下腔静脉入插槽找到它的位置的袖口。
  25. 关闭的逼近,同时用生理盐水冲洗收件人的infrahepatic腔静脉和袖口允许插入的船只。争取用7-0周的领带收件人围绕其袖口腔静脉。
  26. 删除的逼近。为了打开下腔静脉移植和收件人的infrahepatic microclamps:静脉血流正在重建。
  27. 执行部分收件人的胆总管切口,适用于温柔的牵引,向头和插入以前插入到移植的胆管支架自由端。圆周7-0领带固定支架。
  28. 关闭层用5-0缝线的动物。允许从觉醒的自由水和食物。
  29. 根据当地机构协议管理的有效镇痛。一个24小时的最低期限的建议。
_content“>注:年底到年底可以进行肝动脉吻合,当需要通过实验设计(动脉大鼠肝移植后长期生存的需要)。

4。代表结果

所描述的技术可以成功地掌握我们的团队,经过约10个训练手术。它允许长期100%(> 21天)连续36刘易斯,刘易斯和黑刺鼠到刘易斯移植的生存,经过短期培训期间(同基因肝移植受者的数量一直维持存活超过12个月)。同基因移植后第1天肝功能试验表明:天门冬氨酸转氨酶(AST)的中位数:84 U / L(51.7 - 92.7)和中位数丙氨酸转氨酶(ALT):172.5 U / L(127.5 - 240.2)。平均无肝期(从腔PORTA夹紧移植再灌注)为14±2分钟,最长的肝上下腔静脉吻合的步骤,(运行小号uture)时间9±2分钟。

快速连接器系统允许1.55毫米口径袖口腔PORTA和2.40毫米口径袖口上腔静脉(体重200±20克的收件人)的定位。相反,当我们试图移植用镰田的技术,他们可以不超过1.40毫米,分别2.16毫米(应变和体重匹配的大鼠)。快速链接环, 如图7所示,旨在保持最佳伸展收件人的船只,允许最低卡尺和长度的浪费,导致在接近生理的血 ​​流动力学结果。

图1
图1。戒指措施。

图2
图2。Microclamps措施。

图3
图3。快速交联剂套件。

图4
图4。快速链接武装的。

图5
图5。快速链接关闭。

图6
图6。SHVC钳。

图7
图7。经典与快速连接器的辅助袖口吻合血流动力学。

图8
图8。捐赠者和接受者的皮肤准备切口。

Discussion

目前肝移植模型,可以方便地建立。几个关键点在我们的经验,有助于减少死亡的危险(≤20%)。早期死亡,再灌注前三个小时内发生的,是最常见的原因到肠梗塞,作为长期夹紧门户的后果。因此,建议保持在无肝期15分钟的理想限值(20分钟还是可以接受的)。中央空调等症也可以是突然死亡的原因,它是强制刷新之前的所有静脉吻合。

术后第二天一和三之间发生的死亡往往是由于肝功能衰竭或下腔静脉血栓形成。因此,应该避免任何侵略性移植前捐助explantation(我们用20毫升冲洗约60秒)冲洗,并确保适当的低温保存(为0-4°C间乳酸林格氏液充分浸泡)。血栓形成的风险可降低减少内膜的操作和维护其完整性。我们不建议手术后使用的抗凝。

术后第四天九之间的死亡通常与细菌性胆管炎7。根据我们的经验,piperacilline /他唑巴坦(0.03克)的单剂量给予前剖腹是足够的,以尽量减少胆总管感染的风险。

死亡后10天是罕见的事件。然而,由于动脉血流的情况下,一些胆管的问题,可以观察到8 cholastasis。根据研究者的需要,动脉可能被视为9。值得注意的是,冷缺血时间长达24小时,可以被视为可以接受的10。

快速连接器系统的最初目的是进行肝移植三袖套吻合(很短的无肝期)。然而,三袖套TEchnique需要使用非常小的卡钳为肝上下腔静脉(SHVC)袖口,它并没有被广泛接受,由于11-14肝脏流出问题的风险。因此,我们主张快速链接辅助三袖套法只有当需要热缺血时间短十多分钟。但在大多数研究中,植入阶段15-18分钟是可以接受的,允许使用两袖套法,更生理SHVC排水。在这个视频文件所示,我们经常使用快速连接器系统,在第二部分仅植入。虽然一些额外的手术时间需要快速连接器手柄的位置,以最小的风险有关这个过程的一部分,并可以缩短无肝期的关键得益于容易袖口插入。快速连接器系统的其他优点是一个更好的移植受体血管对齐,并使用更多更好的血流动力学结果袖口相比先前所描述的技术(包括镰等人描述的。)6( 图7)。

Disclosures

没有利益冲突的声明。

Acknowledgments

CT检查支持由瑞士国家科学基金会(分数批3232230-126233)。这项研究是支持的Artères基金会,阿斯特拉基金会欧洲和Boninchi的基金会。

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Tool / Reagent Company Catalogue n. Comment
Portal cuff altecweb.com or smiths-medical.com Coil 01-96-1729 800/100/420 Bore : 1.55mm
Wall : 0.30mm
Length: 3.5 mm
Infrahepatic v. cava cuff altecweb.com or smiths-medical.com Coil 01-96-1733 800/100/540 Bore : 2.40mm
Wall : 0.30mm
Length: 3.5 mm
Common bile duct stent common 22G venflon    
7-0 silk ties georgetiemann.com 160-1226-7/0  
10-0 prolene ethicon.com    
9-0 prolene ethicon.com    
8-0 prolene ethicon.com    
Straight micro forceps s-and-t.net FRC-15RM-8  
Curved micro forceps s-and-t.net FRS-15-RM-8  
Dissection needle-holder s-and-t.net B-15-8.2  
Anastomosis needle-holder rumex.net 8-021T  
Micro clamps finescience.com 18055-03 6 x 1mm
Micro clamps applicator finescience.com 18057-14  
Suprahepatic v. cava clamp pharmap.ch 13.349.14  
Quick-Linker rings dltchiropody.co.uk PAR 10 modified scalpel blades
Quick-Linker approximator pharmap.ch UD-04-275 modified Kocher’s forcep

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References

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Comments

1 Comment

  1. Dear Professor/s

    Congratulations for an excellent paper and a very neat video of the procedure. It would have been even more remarkable with explanation and commentary while performing the procedures. While performing the procedure every word of an experienced surgeon is worth and it makes learning easy and minimizes mistakes.

    Sincerely

    Pramod Upadhyay
    National Institute of Immunology, New Delhi, India

    Reply
    Posted by: Pramod U.
    July 14, 2012 - 7:16 AM

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