Author Produced

Regelmæssig pleje og vedligeholdelse af en zebrafisk ( * These authors contributed equally

Biology
 

Summary

Denne protokol beskriver regelmæssig vedligeholdelse og pleje for at opretholde optimale betingelser for zebrafisk dyrehold. Videoen illustrerer den protokol, for systemvedligeholdelse, regelmæssig boliger, fodring, avl, samt optagelse af zebrafisk larver.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Avdesh, A., Chen, M., Martin-Iverson, M. T., Mondal, A., Ong, D., Rainey-Smith, S., Taddei, K., Lardelli, M., Groth, D. M., Verdile, G., Martins, R. N. Regular Care and Maintenance of a Zebrafish (Danio rerio) Laboratory: An Introduction. J. Vis. Exp. (69), e4196, doi:10.3791/4196 (2012).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Denne protokol beskriver regelmæssig pleje og vedligeholdelse af en zebrafisk laboratorium. Zebrafisk er nu stigende popularitet i genetik, farmakologiske og adfærdsmæssige forskning. Som et hvirveldyr, er zebrafisk aksjer betydelig genetisk sekvenslighed med mennesker og anvendes som en dyremodel for forskellige humane sygdomstilstande. Fordelene ved zebrafisk i forhold til andre almindelige hvirveldyr modeller omfatter høj frugtbarhed, lave vedligeholdelsesomkostninger, gennemsigtige embryoner, og hurtig udvikling. På grund af den spur af interesse i zebrafisk forskning, behovet for at etablere og opretholde en produktiv zebrafisk hus facilitet er også stigende. Selv om litteraturen er tilgængelig for opretholdelsen af ​​et zebrafisk laboratorium, er en kortfattet videoprotokollatet mangler. Denne video illustrerer den protokol for regelmæssig boliger, fodring, avl og opdræt af zebrafisk larver. Denne proces vil hjælpe forskerne til at forstå den naturlige adfærd og optimale betingelser for zebrafish dyrehold og dermed fejlfinding eksperimentelle problemer, der stammer fra fisk opdrætsbetingelser. Denne protokol vil være af enorm hjælp til forskere, der planlægger at etablere en zebrafisk laboratorium, og også for studerende, der ønsker at bruge zebrafisk som en dyremodel.

Protocol

1. Systemvedligeholdelse

  1. Zebrafisk holdes i et cirkulerende system, som kontinuerligt filtre og ilter vandet i systemet for at opretholde vandkvaliteten kræves for et sundt vandmiljø. Den cirkulerende system hjælper også til at filtrere overskydende mad og fisk ekskrementer. Forskellige virksomheder giver zebrafisk systemer, men vi bruger systemer fra akvatiske habitater, USA i vores laboratorium. Rumtemperaturen eller beholdertemperaturen holdes sædvanligvis mellem 26-28,5 ° C, og lysforholdene er 14:10 timer (lys: mørke). Et zebrafisk system fra akvatiske naturtyper (f.eks Benchtop system) omkostninger ~ 9.000 USD. Dette benchtop system med to hylder kan rumme seks 10 liter, tolv 3-liter eller 20 1,5 liters beholdere på hver hylde. Flere linjer af fisk (fx transgene, mutant, vildtype) kan også være anbragt på samme system.
  2. En række forskellige typer af filtre anvendes i systemet. I vores system, vand fra alle tankene paSSES gennem en 120 mikron-filter pad, 50-micron dåse filter, biologisk filter, aktivt kul absorption filter og UV-desinfektion filter, før det cirkuleres tilbage i tanken. De-chlorinated/aged vand anvendes i zebrafisk system. Vand kan de-chloreret ved ældning i mindst 48 timer. Under ideelle forhold skal vand opbevares i et reservoir med en pumpe cirkulerer vandet for at holde den varm, og fremskynde de-chlorering.
  3. PH-værdien af ​​vandet i systemet skal kontrolleres dagligt og holdes mellem 6,8 og 7,5. Når det er nødvendigt, bør natriumbicarbonat anvendes til at forøge pH-værdien.
  4. Akvarier bør rengøres regelmæssigt. For at rense et akvarium, skal du lukke vandstrømmen til denne tank, dræne overskydende vand ved at vippe tanken bagud og fjern tanken forsigtigt fra systemet. Snavs og algevækst vil fremgå i bunden og siderne af tanken.
  5. Placer baffelen i en ren tank, og fyld med de-chlorerede vand (aka System water). Forsigtigt overføre fiskene ind i denne tank med et fiskenet. Luk låget og overføre navneskilt af tanken. Læg forsigtigt ren beholder ind i systemet og tænde for vandforsyningen.
  6. At rense fisk net, spray med 70% ethanol, skylles i vand, og lad det tørre, før re-bruger. Fjern pladen fra den snavsede tank og sprøjtes begge dele med 70% ethanol. Skyl grundigt med vand fra hanen og lade tanken og forbløffe at tørre helt, inden re-bruger.
  7. De cirkulerende system filtre skal kontrolleres og skiftes regelmæssigt for at sikre deres korrekte funktion. Disse filtre skal skiftes regelmæssigt for at sikre en korrekt og rent vand til alle akvarier.
  8. Den 120-mikron filter pad er normalt omplaceres eller udskiftes dagligt, flytte mod vandstrømmen at bruge det fuldstændigt, inden batteriet med et nyt.
  9. Beholderen Filteret skal skiftes ugentligt. Hvis du vil ændre dåse filter, skal du fjerne filterenheden ved at vride myreiclockwise med en skruenøgle eller hænder. Placere et plastark eller et håndklæde nedenfor for at forhindre eller absorbere vandspild. Udskift dåse filter med en ny og passer filterenheden tilbage i systemet, omhyggeligt stramme med hænder og en skruenøgle, hvis nødvendigt.
  10. Kulfilteret bør skiftes hver fjortende dag (hver anden uge). Hvis du vil ændre kulfilter, fjerne kulfilter enhed forsigtigt med en skruenøgle. Kassere den brugte aktive kul og erstatte den med ny aktiveret carbon. Re-fit carbon indehaveren og læg det tilbage i filterenheden. Passer til filterenheden tilbage i systemet. Tænd for systemet og kontrollere, at vandet strømmer til filteret. Om nødvendigt skylles noget vand gennem rørene til at rense snavs i rørene inden filtret monteres i systemet.
  11. Det biologiske filter bør rengøres hvert halve år. Et biologisk filter er generelt anbragt mellem kanisteren og kulfilter i det cirkulerende system. At ændre det biologiske filter, remove filterenheden fra systemet. Tag trykket fra filteret ved at trykke på tryk udløserknappen. Skru filteret med en skruenøgle. Generelt to personer er behov for dette trin. Fjern låget af filterenheden. Tømme indholdet af filteret i en sigtet beholderen til adskillelse af den siporax fra vandet. Bemærk: Siporax er en fin pore bio-filtermedier, der har evnen til at udføre både nitrifikation og denitrifikation.
  12. Hvis siporax er meget beskidt erstatte den med en ny. Fyld filterenheden med systemet vand (de-chlorerede vand), lukker låget returnere filterenheden til systemet og tænd vandforsyningen. Bemærk: I en akklimatiseret akvarium, vil siporax være hjemsted for adskillige nitrificerende bakterier. Disse mikroorganismer er afgørende for opretholdelsen af ​​kvælstofkredsløbet i akvariet, og fjernelse af den primære hus for det biologiske filter (det beskidte siporax) kan medføre en alvorlig ammoniak spids, efterfulgt af et nitrit spike mens new biologisk filter (med ny siporax) er at genetablere. Begge disse mellemliggende tilstande af kvælstofkredsløbet kan være giftigt for vandlevende organismer og kan dræbe zebrafisk hvis ikke reageret på passende vis. Det er derfor vigtigt at have en sekundær biologisk filter andetsteds i zebrafisk staldsystem (fx i opsamlingstanken i akvatiske habitater system) for at muliggøre hurtig repopulation af disse vigtige mikroorganismer på den nye siporax.
  13. UV-filtre anvendes til at styre systemets biologiske kontaminanter (såsom bakterier) og bør udskiftes hver 9-10 måneder. Det skal bemærkes, at UV-filter desinfektion dosis er ~ 110 mJ / cm 2 ved begyndelsen af lampens levetid og dosering falder i løbet af tiden, og det er derfor nødvendigt at udskifte hele verden, selv når det viser sig stadig at være funktionelt.

2. Fodring

  1. Zebrafisk kan fodres med tørfoder (mad størrelse fra 100 mikron til larver to 300/400 mikron for voksne fisk) eller levende foder (saltlage rejer). Artemia (Artemia sp.) Æg er tilgængelige fra lokale dyrehandler og kan udklækkes i laboratoriet ved at følge de enkle trin beskrevet nedenfor.
    1. Opløs rød havsalt i alderen vand ved at placere et bæger med salt på en magnetomrører for bedre opløselighed. Alternativt kan saltet opløses i vand ved beluftning den med beluftning røret. Instant Ocean salt kan også anvendes som en udklækning løsning, hvis røde havsalt ikke er tilgængelig. Brine rejer kan tåle en lang række saltholdighed, men vi udklækkes vores artemia (10-15 g) i 30 til 35 g / L red sea saltvand. Bemærk: I tilfælde saltlage rejer æg er ikke let tilgængelige i de lokale dyrehandlere derefter indkapslet saltlage rejer kan også bruges efter "decapping" dem i grupper, før du tilføjer dem til rejer rugeri. Dette kan også undgå hyppige ture til dyrehandel.
    2. Fyld artemia klækkeren med salt vand og tilsæt rejer æg ved en koncentration på 1,2 spsk / liter. Luftes klækkeren kraftigt med en luftpumpe og forlade saltlage rejer æg at klække for ~ 48 timer.
      Bemærk: Det skal bemærkes, at un-beriget artemia miste næringsværdi hver time efter udklækning. Det kan derfor være hensigtsmæssigt enten at lugen over 24 timer eller berige over 48 timer for at opnå den maksimale næringsværdi fra artemia.
    3. Spildevand fra klækning systemet sættes til karantæne affald, der skal desinficeres med blegemiddel og anbragt senere.
  2. At indsamle saltlage rejer, fjerne luftrøret og tillade kulturen at nøjes med 4-5 min, men ikke mere end 10 min. De skraverede brine rejer samles på bunden af ​​Hatcher.
    1. Opsaml brine rejer ved hjælp af hanen i bunden af ​​klækkeren. Kassér den første strøm som består af un-udklækkede saltlage rejer æg.
    2. Adskil brine rejer fra det salte vand, ved hjælp af en artemia samling netto (~ 350 micron nylon mesh). Skyl brine rejer fra nettet i en beholder ved hjælp af systemets vand.
  3. De opsamlede brine rejer er generelt til stede i høj koncentration i bunden af ​​beholderen giver det en temmelig orange farve.
  4. Feed brine rejer til zebrafisk med en pipette eller en pipette / Squeezy flaske. Mængden af ​​dispenseres fødevarer afhænger af befolkningens størrelse af de enkelte tanke. Den almindeligt accepterede ratio for zebrafisk er at modtage 4% af kropsvægten i fødevarer per dag. Zebrafisk bør aldrig bøvet, da dette kan øge nitratindholdet i vandet, hvilket muligvis påvirker deres avl, eller levedygtighed, da nogle fisk kan dø på grund af overspisning.
    1. Efter indsprøjtning af fødevarer ivand, sultne fisk svømme at fange brine rejer.
  5. Tørfodring kan udføres ved hjælp af en Aquatic Eco-Systems / akvatiske habitater simpel fjeder-baseret fiskefoder dispenser. Alternativt kan tørfodring også udføres med en simpel ske eller ved at skære en plastik pipette diagonalt med en saks for at give det et udseende af en lille ske.

3. Avl

  1. Zebrafisk initiere avl ved starten af ​​lys. Befrugtede æg kan fås enten via in-tanken avl eller parvis avl. Mens der i-tank avl er mere arbejdskraft-effektiv og gennemføres for regelmæssig embryonindsamlingsteam i vores laboratorium, er parvis avl foretrækkes, når gener eller mutationer skal screenes fra fisk.
  2. For in-tank avl, samles i-tank opdrætter og slippe langsomt ind i akvarium efter udbrud af lys. Alternativt kan i-tank-avl set-up stå natten over i akvarium.
  3. Leave in-tank opdrætter for omkring 15 min at gøre det muligt for fiskene at parre sig, før du fjerner opdrætter fra tanken og indsamling af æg.
  4. Parvis avl er normalt sat op sidst på eftermiddagen efter fodring.
  5. Saml akvariet og fyld den med alderen systemets vand.
  6. Overfør en kvindelig og en mandlig til modstående sider af akvariet. Hunnerne kan skelnes fra mænd på grund af deres større bug. Hanner kan også skelnes fra hunner, fordi de er mere slank og mørkere i farven end kvinder. Endvidere mænd har mere gulfarvning i gatfinnen forhold til kvinder (se figur 1). Når du er i tvivl kig efter ovipositor i kvindernes zebrafisk (se figur 4).
  7. Fjerne deleren næste morgen kort efter indtræden af ​​lys. Tillade parring at forekomme uforstyrret i 20 minutter, eller indtil et tilstrækkeligt antal fostre, der er på bunden af ​​tanken.
  8. Efter avl,returnere fisk til deres tanke. Saml æggene ved hjælp af en si.
  9. Vask embryoner grundigt med systemets vand.
  10. Overfør embryoner til en petriskål ved at skylle filteret med embryo medium, aka EM3 (NaCl, 13,7 mM, KCI, 0,54 mM; MgSO4, 1,0 mM, CaCl2, 1,3 mM, Na 2 HPO 4, 0,025 mM; KH 2 PO 4, 0,044 mM, NaHCO3, 4,2 mM).
  11. Embryoner kan observeres under et mikroskop. Befrugtede æg adskilles derefter fra ubefrugtede æg under anvendelse af en nål og en pipette (se figur 3).

4. Hævning af larver

  1. Befrugtede æg holdes i en inkubator (~ 28.5 ° C) i 72 timer indtil larverne klækkes.
  2. Nu er larverne er ude af chorion og svømning frit de er klar til at overføre til en vigtigste fisk tank. Larver skal fodres fra 5 dage efter befrugtning (dpf), og holdes i embryo medium (sammensætning beskrevet iDel 3, 10) eller system vand. Larverne kan holdes i runde skåle med ~ 50% eller mere af vand deri ændret på en daglig basis. Vandet ændring bør omfatte fjerne døde eller syge larver og andre rester.
  3. Flytte fiskelarver forsigtigt ind i en tank indeholdende en lille størrelse ledeplade (omkring 300 til 400 mikrometer). Døde og syge larver skal fjernes, og nogle ml vand bør tilsættes langsomt på daglig basis.
  4. Efter 14 dage kan larver tanke henlægges i systemet, og leveres med en lille strøm af cykling vand (1-2 dråber per sekund). Som larverne vokser, kan vandstrømmen øges. Forskellige størrelser af ledeplader kan anvendes afhængigt af størrelsen af larverne (f.eks baffel size 300-400, 500, 700-750, og 1000 mikrometer) og en normal plast ledeplade bør anvendes til voksne fisk.
  5. Det tager normalt 3 måneder for at embryonerne at udvikle sig til seksuelt modne voksne.

Representative Results

Zebrafisk boliger og vedligeholdelse er nemmere og billigere end traditionelle gnavermodeller. Flere tusinde zebrafisk kan være anbragt i et lille laboratorium. Som et resultat af denne protokol, vil forskerne være i stand til at håndtere et zebrafisk facilitet, som vil give sunde betingelser til zebrafisk. Derudover vil følgende illustrationer hjælpe med at identificere befrugtede æg, voksen zebrafisk, og deres mad. En illustration af en mandlig zebrafisk (figur 1A) og kvindelige zebrafisk (figur 1B og 1C) er vist for at hjælpe forskere skelne mellem en han og en hun zebrafisk til opdræt formål Figur 2 viser et mikroskopisk billede af. Brine rejer på 12X (fig. 2A), en enkelt artemia på 90X (figur 2B), og en ugødet artemia æg på 90X (figur 2C). Dette vil hjælpe med at forstå forskellen mellem ubefrugtede og befrugtede saltlage rejer til propøh foderbrug. Befrugtede og ubefrugtede æg er vist i fig. 3. Figur 3A viser et mikroskopisk billede af befrugtede og ubefrugtede æg. Ubefrugtede æg er generelt uigennemsigtige og / eller med bristede celle (r) inde i chorion (sort pil), mens befrugtede æg synes intakt og voksende til næste celledeling stat (for detaljerede gennemgang af forskellige stadier af zebrafisk embryoner se 1). Højere forstørrelse af et befrugtet og en unfertilized æg er vist i figur 3B og 3C henholdsvis. Figur 4 illustrerer en kvindelig zebrafisk er ovipositor at hjælpe forskere skelne mellem en han og en hun zebrafisk.

Adskillige kritiske problemer, der måtte opstå i en zebrafisk laboratorium omfatter blokering af vandforsyningen til individuelle / alle tanke i huset systemet, dårlig vandkvalitet, og lækager i rør eller reservoir af den cirkulerende system. Desudenproblemer med at få fostre fra avl kunne være en anden bekymring. Fejlfinding af disse spørgsmål er beskrevet nedenfor.

Figur 1
Fig. 1. En illustration af en mandlig zebrafisk (A) og kvindelige zebrafisk (B, C).

Figur 2
Figur 2. En mikroskopisk billede af saltlage rejer på 12X (A), en enkelt artemia på 90X (B), og en ugødet artemia æg på 90X (C).

Figur 3
Figur 3. Mikroskopisk visning (16X) af befrugtede og ubefrugtede æg, hvor kun to æg ubefrugtede, er de ubefrugtede æg er angivet med sorte pile (A). Større forstørrelsevisning (90X) af et befrugtet (B) og en unfertilized æg (C).

Figur 4
Figur 4. En kvindelig zebrafisk er ovipositor (angivet med sort pil) illustration.

Parameter Optimalt rækkevidde
Alkalinitet 50-150 mg / l CaCO 3
pH 6,8-7,5 (6,0-8,5 tolereres)
Temperatur 26-28,5 ° C
Hårdhed 50-100 mg / l CaCO 3
Un-ioniseret Ammoniak <0,02 mg / L
Nitrat (NO 3 -) <50 mg / L
Nitrit (NO 2 -) <0,1 mg / L
Opløst oxygen > 6,0 mg / L
Saltindhold 0,5-1 g / L
Ledningsevne 300 -1500 uS

Tabel 2. Vandkvalitetsparametre. Vandkvalitetsparametre. Optimalt række miljømæssige parametre i zebrafisk akvariet 11.

Discussion

Zebrafisk stammer fra Ganges-floden i det nordlige Indien og er ved at blive populære i forskning i både deres voksne og larvestadier 2, revideret af Spence et al. 3. Zebrafisk har flere fordele i forhold til andre dyremodeller såsom høj frugtbarhed, nem vedligeholdelse, optisk clearance af embryoner, hurtig embryonale udvikling, og lave vedligeholdelsesomkostninger. De er modtagelige for genetisk manipulation 6 og egnet til high-throughput lægemiddel-screening 4,5. Befrugtningen er ekstern hvilket er fordelagtigt for deres anvendelse ved udviklingsmæssige biologer. På grund af disse fordelagtige egenskaber, er zebrafisk stigende popularitet i genetik 7, farmakologiske 8, og adfærdsforskning 9,10. Der er en række udfordringer for at opretholde en zebrafisk facilitet og zebrafisk dyrehold at få embryoner. Heri beskriver vi vores erfaringer og anbefalinger til at håndtere disse udfordringer og outline en protokol for systemvedligeholdelse, fodring, avl og hævning af larverne.

Systemvedligeholdelse

For at opretholde zebrafisk i en sund tilstand, er det vigtigt at give dem et rent miljø i et velfungerende akvarium system. En vigtig del af dette er ved at ændre systemet filtre regelmæssigt, således at alle tankene får ordentlig vandflow og rent vand. Det er afgørende at undgå svigt i cykling vandforsyningen til hver tank på grund af blokerede systemet rør. Rørene kan rengøres med en højere end normal vand tryk og flow, hvis blokering forekommer. Ideelt set bør omkring 10% af systemets vand udskiftes dagligt for at opretholde en god vandkvalitet. Alternativt kan vand udskiftes, mens Udskiftning af beholder eller Carbon filter. Dette sikrer, at snavs aflejret i rørene forbinder disse filtre, fjernes. Kvaliteten af ​​vand bør kontrolleres regelmæssigt. Parametre som alkalinitet, pH, temperature, hårdhed, ammoniak, opløst ilt, saltholdighed, og ledningsevne bør betragtes som vigtige faktorer i repræsenterer kvaliteten af vandet i systemet (se tabel 2 for detaljer). I det mindste nitrat, pH og temperatur overvåges regelmæssigt for at sikre god vandkvalitet for boliger zebrafisk. Ideal nitrat (NO3 -) niveauer er <50 mg / L 11, hvis høj disse niveauer kan reduceres ved at erstatte vandet i cirkulationssystem med det friske systemet vand. Lejlighedsvis, behøver filtrene ikke passer godt og lække, så det anbefales at tjekke for lækager efter et filter skift. Hvis vandstrømmen fra hovedreservoiret blokeres enten efter ændring af vandpumpen eller ændrer et filter, kan flowet genoprettet ved enten at løsne eller fjerne filteret i et par sekunder for at frigive noget vakuum genereres i rørene. Den nødvendige tid til at skifte filtrene kan variere afhængigt af forskellige faktorer såsom den samlede biologiske belastning on systemet, renholdelse af andre filtre, og snavs aflejret i rørene. Derfor bør filtre straks udskiftes, hvis de forekommer snavset eller hvis alle tankene ikke får den rette vandforsyning. Det anbefales også, at fiskenet renses med 70% ethanol og skyllet i vand for at rense den og tillades at tørre, før det genanvendes. Tørring sikrer fordampning af ethanol, som ellers er giftigt for fisk.

De fleste af zebrafisk systemer anvender de-chloreret ledningsvand, men nogle systemer anvender deioniseret vand. Det er vigtigt at holde ledningsevnen af ​​vandet i systemet mellem 300 og ~ 1.500 mikrosiemens, da dette reducerer den energi fisken nødt til at opretholde kroppens salte. Derfor kan zebrafisk ikke opbevares i demineraliseret vand, hvis salte tilsættes for at opretholde de optimale ledningsevne niveauer. Der er risiko af mulige høje kobberkoncentrationer i systemet vand, hvis ledningsvand anvendes, fordi kulfilter ikke fjerner kobber. Derfor uSERS skal tjekke for kobberkoncentrationer og undgå kobberrør hvor det er muligt.

Fodring

Zebrafisk bør aldrig bøvet, da dette kan øge nitratindholdet i vandet, hvilket muligvis påvirker deres opdræt 11, eller levedygtighed, da nogle fisk kan dø på grund af overspisning. Vi anbefaler, giver ikke mere mad i løbet af et fodring end en tank af fisk kan afslutte indenfor 10 min. Det er meget vigtigt at fjerne salt fra saltlagen rejer, inden de indføres i zebrafisk som overskydende saltkoncentration forårsager dødsfald. Hvis flere zebrafisk æg er påkrævet, kan fiskene fodres tre gange om dagen. Rengøring opdrætteren akvarier dagligt forbedrer også niveauet af ægproduktionen.

Ved fodring på de akvatiske naturtyper systemer, vi normalt slukke for vandpumpe og luft pumpe til at tillade fisk at spise den mad i 10 min. Dette reducerer mængden af ​​mad, der er skyllet ind filtrene. Dog skal brugerne være omhyggelig med at remGlød at tænde disse pumper igen bagefter.

Avl

Zebrafisk er normalt på optimal avl tilstand mellem ~ 3 og 18 måneder. Parvis avl bør ikke udføres i to efterfølgende dage 11, men kan i-tank avl udføres dagligt som en tank kan rumme mange fisk, der reducerer chancen for det samme par af fisk opdrættes i to dage i træk. Avl bør foretages med jævne mellemrum, selvom æg er ikke påkrævet. Denne fremgangsmåde vil sikre avlscyklus af fisken opretholdes. Det anbefales, at der er flere kvinder end mænd, der gennem opdræt set-up. Mand zebrafisk ændre deres kvindelige partnere på daglig basis 12, som yderligere støtter denne anbefaling. Desuden inden for vores laboratorium vi oprindeligt havde problemer med avl, men ved hjælp af flere kvinder end mænd i et avlsprogram set-up hjalp med at løse problemet. Desuden fodring med et højt proteinindhold content kost og artemia 2-3 gange om dagen, blanding fisk fra forskellige tanke (fra forskellige forældre), idet temperaturen af ​​opdrætningsbassinet set-up mellem 27 og 28 ° C, og presse maver hunner med blokerede ovarieceller rør med blid massage yderligere forbedret ægproduktion. Vi anbefaler at holde et referat af fisk linjer / oprindelse for at undgå in-avl mellem søskende. Dette forbedrer yderligere embryo produktion. Holde en opgørelse over antallet af embryoner lagt af fisk fra hver tank er også anbefales. Dette hjælper med at holde et spor af de bedste avlsdyr fisk tanke og træffe foranstaltninger til at forbedre avlen i fiskene ikke lægge æg.

Hævning af larver

Fodring af larver skulle begynde fra 5 dpf (dage efter befrugtningen). Unge larver kan fodres med tørfoder på ~ 100 mikrometer i størrelse (f.eks ZM100) eller levende foder såsom Paramecium og hjuldyr (som stimulerer vækst). Fødevarer størrelse kan langsomt øgestil 200 mikrometer (f.eks ZM200) eller 300/400 micron (f.eks ZM300). En population af voksne fisk bør være omkring 6-7 fisk per liter vand. Denne praksis anbefales til bedre vedligeholdelse af BOD (biologisk iltforbrug) til tankene.

Disclosures

Ingen interessekonflikter erklæret.

Acknowledgments

Forfatterne vil gerne takke Tammy Esmaili for hendes hjælp i forvaltningen af ​​laboratorie forbrugsstoffer. AA er modtageren af ​​et ph.d.-stipendium fra Center of Excellence for Alzheimers Disease Research og pleje, School of Medical Sciences, Edith Cowan University. MC modtager ph.d.-støtte fra Rotary Club, Perth. AM, er GV, KT, og RNM finansieret af McCusker Alzheimers Research Foundation.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Zebrafish circulating system Aquatic Habitats, USA AHAB stand-alone, bench-top systems
Sodium Bicarbonate Sigma Aldrich S6297
Fish food dispenser/Dry food feeder Aquatic Habitats, USA AH19
Microscope Olympus SZX12
Dry Food ZM Fish food, UK ZM100, ZM200, ZM300
Brine shrimp eggs Salt Creek, Inc., USA Premium Grade
In-tank breeders Aquatic Habitats, USA ITSTS-A
Activated carbon Penn-Plax Pro-crab, USA PBC3MF
Breeding tanks Aquatic Habitats, USA SBTANK (1L)
Breeder Tank-2 (2L)
Red sea salt Red sea salt, USA Local pet store/
www.redseafish.com
Filters (Canister, filter pads, and UV) Aquatic Habitats, USA aquatichabitats.com
Siporax Media Aquatic Habitats, USA BF 820
Brine shrimp net Aquatic Habitats, USA BSN 1
Brine shrimp hatcher Aquatic Habitats, USA BS252
Baffles Aquatic Habitats, USA aquatichabitats.com
Table 1. Table of specific reagents and equipment used in this protocol.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. Stages of embryonic development of the zebrafish. Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).
  2. Avdesh, A., et al. Evaluation of color preference in zebrafish for learning and memory. J. Alzheimers Dis. 28, 459-469 (2012).
  3. Spence, R., Gerlach, G., Lawrence, C., Smith, C. The behaviour and ecology of the zebrafish, Danio rerio. Biol. Rev. Camb. Philos. Soc. 83, 13-34 (2008).
  4. Best, J. D., et al. Non-associative learning in larval zebrafish. Neuropsychopharmacology. 33, 1206-1215 (2008).
  5. Wolman, M. A., Jain, R. A., Liss, L., Granato, M. Chemical modulation of memory formation in larval zebrafish. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 15468-15473 (2011).
  6. Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function. J. Vis. Exp. (25), e1115 (2009).
  7. Gerlai, R. Zebra fish: an uncharted behavior genetic model. Behav. Genet. 33, 461-468 (2003).
  8. Eddins, D., Petro, A., Williams, P., Cerutti, D. T., Levin, E. D. Nicotine effects on learning in zebrafish: the role of dopaminergic systems. Psychopharmacology. (Berl). 202, 103-109 (2009).
  9. Colwill, R. M., Raymond, M. P., Ferreira, L., Escudero, H. Visual discrimination learning in zebrafish (Danio rerio. Behav. Processes. 70, 19-31 (2005).
  10. Blaser, R. E., Chadwick, L., McGinnis, G. C. Behavioral measures of anxiety in zebrafish (Danio rerio). Behav. Brain Res. 208, 56-62 (2010).
  11. Westerfield, M. A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). THE ZEBRAFISH BOOK. 5th, University of Oregon Press. Eugene. (2007).
  12. Delaney, M., et al. Social interaction and distribution of female zebrafish (Danio rerio) in a large aquarium. Biol. Bull. 203, 240-241 (2002).

Comments

7 Comments

  1. zebra fish laboratory play an important role in the world.Zebra fish laboratory help us from the various method like cleaning water etc.It is very nice and informative sharing.For more detail.visit water tank Sydney

    Reply
    Posted by: micheal c.
    March 14, 2013 - 1:55 AM
  2. I would like further information about your feeding protocols for larval rearing. I am currently using rotifers then brine shrimp but know there are lots of ways to do it. Thanks.

    Reply
    Posted by: Edward F.
    April 24, 2013 - 12:33 PM
  3. Dear Edward,
    Please accept my apologies for the late reply. Yes, you are right, there are several other ways to feed zebrafish larvae. You can feed them with dry food of

    Reply
    Posted by: Avdesh A.
    May 28, 2013 - 7:02 AM
  4. Aquatic Habitats seems to have discontinued production of the manual fish feeder, AH19. Has anyone found an alternative vendor for a product that is similar?

    Reply
    Posted by: Anne W.
    October 19, 2015 - 1:21 PM
  5. With normal tanks and aeration systems (without sophisticated filters, flow through water supply and so..), how to main maintain zebra fish. Any suggestions for a small scale set up? how to improve the egg quality? (some articles say that it is mandatory, to only breed fish once in a week. Even after following that, eggs tend to die after budding stage)

    Reply
    Posted by: Niranjana Kamala Priya S.
    February 12, 2016 - 6:13 AM
  6. Dear Niranjana, Please accept my apologies for the late reply. Are you still facing the same problem of eggs being dying after budding stage? If yes, can you please describe how they appears before they die? For example, is there any fungus growth in the petridish. How many eggs do you keep in a petridish?
    Thanks
    Kind Regards
    Avdesh

    Reply
    Posted by: Avdesh A.
    January 31, 2017 - 10:30 AM
  7. we regularly wash eggs, and maintain it in E3 medium (to prevent fungal contamination), though 80% of them die before hatching. Remaining 20 % survives for a month (till the yolk sac disappears).But, only 2 or 3 survives after that.

    Reply
    Posted by: Niranjana Kamala Priya S.
    February 2, 2017 - 12:49 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics