इमेजिंग Glioma दीक्षा * These authors contributed equally

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Summary

एक पॉलिश और प्रबलित (बंदरगाह) पतली खोपड़ी कपाल खिड़की और glioblastoma (जीबीएम) सेल इंजेक्शन के संयोजन से, हम glioma दीक्षा और इंजेक्शन जीबीएम कोशिकाओं से एक जीवित longitudinally माउस के मस्तिष्क में वृद्धि का पालन कर सकते हैं.

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Zhang, L., Lapierre, A., Roy, B., Lim, M., Zhu, J., Wang, W., Sampson, S. B., Yun, K., Lyons, B., Li, Y., Lin, D. T. Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window. J. Vis. Exp. (69), e4201, doi:10.3791/4201 (2012).

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Abstract

Protocol

1. प्रोटोकॉल

  1. और 0.1 मिलीग्राम ketamine और शरीर के वजन के 1 ग्राम प्रति xylazine की 0.01 मिलीग्राम की एक खुराक पर ketamine xylazine साथ माउस anesthetize. Carprofen (0.005 मिलीग्राम शरीर के वजन के 1 ग्राम प्रति) analgesia के लिए किया जाता है और preoperatively प्रशासित.
  2. दंत ड्रिल बिट सहित शल्य चिकित्सा उपकरण, सभी एक autoclave में निष्फल भाप हैं. यदि बैच सर्जरी के लिए प्रदर्शन हो रहे हैं, शल्य चिकित्सा उपकरणों के सुझावों जाना चाहिए प्रत्येक बाद सर्जरी से पहले एक गिलास मनका अजीवाणु बनानेवाला पदार्थ (ललित विज्ञान उपकरण FST 250) के साथ फिर से निष्फल.
  3. एक बार माउस संज्ञाहरण के एक शल्य विमान, एक पैर की अंगुली चुटकी एक प्रतिक्रिया के अभाव द्वारा मूल्यांकन तक पहुँच गया है, यह है कि फिर एक गर्म पैड पर रखा गया है ~ 37 डिग्री सेल्सियस के एक शरीर का तापमान बनाए रखने के एक कपास पैड पर रखा गया है संज्ञाहरण की गहराई अक्सर सर्जरी के दौरान नजर रखी है.
  4. फर एक मोटे तौर पर त्रिकोणीय क्षेत्र में पृष्ठीय सिर ~ 3 मिमी nares के लिए लांगुलिय से निकाल दिया जाता है और CE दुमदारी से का विस्तारrvical कशेरुक. नेत्र मरहम आंखों के लिए लागू किया जाता है के लिए उन्हें निर्जलीकरण और जलन से बचाने.
  5. माउस उदर recumbancy में रखा जाता है और त्वचा शल्य आयोडीन, 70% इथेनॉल, और बाँझ swabs साथ कीटाणुरहित है. एक 0.8 x 1.0 खोपड़ी के ललाट और पार्श्विका हड्डियों के पृष्ठीय पहलू को कवर त्वचा के सेमी प्रालंब ठीक कैंची का उपयोग कर हटा दिया जाता है.
  6. एक सामयिक एनाल्जेसिक, 0.5% lidocaine, स्थानीय periosteum और घाव की परिधि में उजागर ऊतकों के लिए लागू किया जाता है. periosteum धीरे एक स्केलपेल ब्लेड के साथ खोपड़ी scraping द्वारा हटा दिया जाता है, हड्डी का पालन करने के लिए इस cyanoacrylate गोंद में मदद मिलेगी.
  7. ब्याज की cortical क्षेत्र एक मार्कर के साथ खोपड़ी पर उल्लिखित है. हित के क्षेत्र खोपड़ी सीवन लाइनों पर स्थित है, नहीं चाहिए अंतर्निहित बड़े जहाजों को नुकसान से बचने के.
  8. Cyanoacrylate चिपकने की एक पतली परत घाव मार्जिन को लागू किया जाता है, serosanguinous तरल पदार्थ का रिसाव को रोकने के, और खोपड़ी में छोड़करहित के क्षेत्र.
  9. प्रकाश सक्रिय दंत सीमेंट हमारे प्रोटोकॉल में खोपड़ी सील करने के लिए प्रयोग किया जाता है. दंत सीमेंट के आवेदन से पहले, thinning के लिए इरादा क्षेत्र के अलावा सभी उजागर खोपड़ी प्राइमरों के साथ और बाद में प्रकाश सक्रिय दंत सीमेंट किट से संबंध एजेंट के साथ व्यवहार किया जाता है. एक बार संबंध एजेंट सूख जाता है, प्रकाश सक्रिय दंत सीमेंट की खोपड़ी को कवर करने के लिए लागू किया जाता है. बाद सर्जरी और इमेजिंग के लिए माउस के सिर को स्थिर करने के लिए, एक बाँझ 00-90 # हेक्स अखरोट दंत सीमेंट में thinned किया क्षेत्र से एक दूरी पर एम्बेडेड है. प्रकाश सक्रिय दंत सीमेंट का उपयोग करने के लिए पूरी प्रक्रिया खत्म की भीड़ के लिए बिना हमें खोपड़ी को तैयार करने के लिए अनुमति देता है. एक बार दंत खोपड़ी पर सीमेंट तैयारी पूरा हो गया है, दंत सीमेंट दृश्य प्रकाश के साथ ठीक हो जाता है.
  10. दंत सीमेंट के बाद ठीक हो जाता है, stereotactic डिवाइस से एक बुद्धि धारक माउस सिर का उपयोग कर एक पेंच # 00-90 पर हेक्स अखरोट के लिए मुहिम शुरू की है.
  11. एक डॉ.कमरे के तापमान के सेशन, 0.9% बाँझ खारा खोपड़ी thinned किया क्षेत्र के लिए लागू किया जाता है. एक stereomicroscope की सहायता के साथ, एक उच्च गति माइक्रो ड्रिल खोपड़ी के हित के क्षेत्र पर एक परिपत्र (आमतौर पर ~ व्यास में 4-5 मिमी) क्षेत्र पतली करने के लिए प्रयोग किया जाता है. ड्रिलिंग और खारा के drilled क्षेत्र के लिए आवेदन रहकर thinning प्रक्रिया के दौरान प्रदर्शन कर रहे हैं अंतर्निहित मस्तिष्क के ऊतकों को चोट से बचने के थर्मल. Saline ऊष्मा अवशोषित है और भी हड्डी को नरम में मदद करता है.
  12. माउस खोपड़ी कॉम्पैक्ट हड्डी पतली परत के दो शामिल हैं, चिमड़ा हड्डी की एक मोटी परत sandwiching. कॉम्पैक्ट हड्डी और चिमड़ा हड्डी के सबसे बाहरी परत ड्रिल का उपयोग कर हटा रहे हैं.
  13. चिमड़ा हड्डी के बहुमत के बाद निकाल दिया जाता है, चिमड़ा हड्डी के भीतर शेष cavities एक विदारक खुर्दबीन के नीचे देखा जा सकता है, यह दर्शाता है कि ड्रिलिंग आंतरिक कॉम्पैक्ट हड्डी परत आ रहा है. इस स्तर पर, खोपड़ी मोटाई में अभी भी 50 से अधिक सुक्ष्ममापी होना चाहिए. खोपड़ी thinning होना चाहिएध्यान से जारी करने के लिए एक बहुत (~ 20 सुक्ष्ममापी) पतली और चिकनी तैयारी प्राप्त.
  14. एक बार खोपड़ी के इच्छित मोटाई (~ 20 सुक्ष्ममापी) हासिल की है, खोपड़ी पहली बार लगभग 10 मिनट के लिए एक कस्टम निर्मित हीरे पेस्ट के साथ सिलिकॉन कोड़ा (6-15 सुक्ष्ममापी) का उपयोग पॉलिश है. चमकाने हीरे पेस्ट दो उद्देश्यों में कार्य करता है. सबसे पहले, यह आगे thinned खोपड़ी पर दबाव लागू किए बिना खोपड़ी thins, जिससे आकस्मिक अंतर्निहित मस्तिष्क के ऊतकों को नुकसान से बचने के. दूसरा, यह thinned खोपड़ी के लिए एक प्रारंभिक चमकाने कदम के रूप में कार्य करता है पहले सुक्ष्म टिन ऑक्साइड आगे खोपड़ी चमकाने के लिए प्रयोग किया जाता है.
  15. हीरे पेस्ट चमकाने के बाद, लगभग 10 मिनट के लिए टिन ऑक्साइड के साथ thinned खोपड़ी पॉलिश है. एक बार खोपड़ी पॉलिश है, टिन ऑक्साइड नमक के साथ दूर प्लावित है जब तक thinned खोपड़ी को साफ दिखाई देता है.
  16. इस चरण में, अगर कपाल खिड़की अनुदैर्ध्य लिए vivo इमेजिंग में इस्तेमाल किया जा रहा है, साफ पतली खोपड़ी क्षेत्र सूख जाता है. स्पष्ट की एक छोटी सी बूंदcyanoacrylate गोंद कपाल खिड़की सील करने के लिए लागू किया जाता है. cyanoacrylate गोंद thinned खोपड़ी और coverslip के बीच की परत के रूप में संभव के रूप में पतली होना चाहिए.
  17. यदि एक इंजेक्शन एक बंदरगाहों कपाल खिड़की के निर्माण के बाद किया जा रहा है इस कदम पर है, एक 26-गेज सुई सिरिंज पॉलिश खोपड़ी पतली खिड़की के एक पक्ष पर एक छोटे से खोलने बनाने के लिए प्रयोग किया जाता है. इस खोलने जीबीएम सेल इंजेक्शन के लिए प्रयोग किया जाता है.
  18. व्यास में लगभग 50 सुक्ष्ममापी खोलने टिप के साथ एक बाँझ कांच विंदुक एक विंदुक डांड़ी का उपयोग कर खींच लिया है. इस विंदुक जीबीएम सेल इंजेक्शन के लिए इस्तेमाल किया जाएगा, और एक micromanipulator पर लोड है. विंदुक एक 30 डिग्री के कोण इतना है कि जीबीएम सेल इंजेक्शन साइट अंतिम इमेजिंग साइट से दूर हो जाएगा पर भरी हुई है. विंदुक टिप एक विच्छेदन खुर्दबीन के तहत हटा दिया जाता है. जीबीएम सेल निलंबन एक सिरिंज पंप का उपयोग कर चूषण द्वारा विंदुक में सामने से भरी हुई है.
  19. एक बार इंजेक्शन विंदुक जीबीएम कोशिकाओं के साथ भरी हुई है, माउस वापस वें के तहत ले जाया गया हैई खुर्दबीन. इंजेक्शन विंदुक कपाल विंडो में छोटे से खोलने की दिशा में उतारा जाता है और अंत में एक micromanipulator का उपयोग खोलने के माध्यम से दिमाग में डाला. जीबीएम सेल निलंबन की 1 μl मस्तिष्क की सतह से मस्तिष्क 100-200 सुक्ष्ममापी (: 0.1 μl / मिनट, अवधि: 10 मिनट की गति) में इंजेक्ट किया जाता है.
  20. स्पष्ट cyanoacrylate गोंद की एक छोटी सी बूंद खोपड़ी सूख जाता है, सूखे खोपड़ी को लागू किया जाता है, और 3 मिमी आकार # 1 coverslip का एक टुकड़ा पतली और पॉलिश खोपड़ी क्षेत्र का पालन किया है. coverslip के बीच अंतरिक्ष और आसन्न दंत सीमेंट cyanoacrylate गोंद के साथ बंद है.
  21. सर्जरी के बाद, माउस subcutaneously 1 मिलीलीटर गर्म बाँझ खारा साथ इंजेक्शन है और पूरक गर्मी के साथ प्रदान की शरीर के तापमान को बनाए रखने के लिए जब तक पूरी तरह से संज्ञाहरण से बरामद.
  22. इमेजिंग के लिए, चूहों और 0.1 मिलीग्राम ketamine और शरीर के वजन के 1 ग्राम प्रति xylazine की 0.01 मिलीग्राम की एक खुराक में ketamine xylazine साथ anesthetized हैं. चूहे एक कस्टम stereotactic फ्रेम का उपयोग immobilized कर रहे हैंखुर्दबीन के नीचे. यदि vivo इमेजिंग में दोहराव दैनिक आधार पर किया जाता है, isofluorane एक बेहतर विकल्प हो सकता है, के रूप में चूहों ketamine के दोहराव का उपयोग के साथ निर्भरता के लक्षण दिखाने.

2. प्रतिनिधि परिणाम

एक सफल बंदरगाहों कपाल खिड़की सर्जरी कपाल खिड़की सप्ताह के लिए स्पष्ट महीने के लिए रहने के लिए अनुमति देता है चित्रा 1 एक बंदरगाहों कपाल खिड़की के नीचे vasculature के रूप में दिखाता है backscattered प्रकाश का उपयोग कर कल्पना. इन vasculature छवियों दोहराव इमेजिंग के लिए एक ही मस्तिष्क के क्षेत्रों का पता लगाने के लिए स्थलों के रूप में इस्तेमाल किया गया. दोनों vasculature endothelial कोशिकाओं और जीबीएम कोशिकाओं कल्पना हम B6.Cg टीजी (टेक - रचनात्मक) / 1Ywa जम्मू माउस को पार कर गया, जो B6.Cg जी.टी. (रोजा) tm9 26Sor (सीएजी tdTomato साथ संवहनी endothelial कोशिकाओं लेबल ) / Hze माउस जम्मू, और संवहनी endothelial लाल फ्लोरोसेंट प्रोटीन tdTomato के साथ लेबल की कोशिकाओं के साथ चूहों उत्पन्न. हम तो इन मील पर बंदरगाहों craniotomy प्रक्रिया का प्रदर्शनCE, और उनके दिमाग में एक कपाल विंडो के किनारे पर एक छोटे से खोलने के माध्यम से GFP लेबल जीबीएम कोशिकाओं इंजेक्शन. हम तो दो photon इमेजिंग vivo में longitudinally इंजेक्शन के साथ चूहों पर प्रदर्शन किया. लेजर उत्तेजना तरंग दैर्ध्य 910 एनएम, है जो दोनों GFP और tdTomato उत्तेजना के परिणामस्वरूप में स्थापित किया गया था. दो photon इमेजिंग एक कस्टम निर्मित दो photon लेजर स्कैनिंग खुर्दबीन पर युगपत हरी / लाल प्रतिदीप्ति का पता लगाने की क्षमता के लिए दो डिटेक्टरों के साथ प्रदर्शन किया गया था चित्रा 2. इंजेक्शन vasculature निकट जीबीएम कोशिकाओं से glioma दीक्षा के vivo उदाहरण में एक से पता चलता है. बंदरगाहों कपाल खिड़की भी पुरानी vivo इमेजिंग में समय व्यतीत हो जाने के लिए एक उत्कृष्ट पसंद है चित्रा 3 बंदरगाहों सर्जरी के बिना एक माउस से cortical वर्गों के GFAP धुंधला हो जाना, बंदरगाहों सर्जरी के बाद एक माउस 7 दिन, और एक माउस 7 दिनों बंदरगाहों सर्जरी के बाद और से पता चलता है. खारा इंजेक्शन. यह माउस और पोर साथ सर्जरी के बिना छवियों से स्पष्ट है कि माउससर्जरी टीएस gliosis नहीं है, खारा इंजेक्शन के बाद, जबकि gliosis माउस के मस्तिष्क के ऊतकों में मनाया जाता है, मस्तिष्क में प्रवेश और खारा इंजेक्शन विंदुक कारण. यह नतीजा यह दर्शाता है कि gliosis बंदरगाहों कपाल खिड़की के नीचे नहीं होते हैं, स्वतंत्र मान्यता है कि बंदरगाहों कपाल खिड़की यहाँ वर्णित है कि आम तौर पर एक "खुला खोपड़ी" पुरानी कपाल खिड़की के साथ जुड़ा हुआ है gliosis नेतृत्व नहीं करता है प्रदान चित्रा 4 से पता चलता है उच्च संकल्प. इमेजिंग सर्जरी के दिन ही माउस (0 दिन) से वृक्ष के समान spines और बंदरगाहों खिड़की निर्माण के बाद 32 दिन (32 दिन), प्रदर्शन है कि बंदरगाहों खिड़की भी इमेजिंग vivo में उच्च संकल्प के लिए एक उत्कृष्ट पसंद है.

चित्रा 1
1 चित्रा vasculature की एक पॉलिश और प्रबलित thinned खोपड़ी कपाल backscattered प्रकाश का उपयोग कर खिड़की के तहत विज़ुअलाइज़ेशन. दिन टी का प्रतिनिधित्व करते हैं सर्जरी के बाद वह दिनों की संख्या, छवियों जीबीएम सेल इंजेक्शन के पूरा होने के बाद तुरंत सर्जरी के दिन पर शुरू ले जाया गया. स्केल पट्टी: 0.5 मिमी बड़ा आंकड़ा देखने के लिए यहां क्लिक करें .

चित्रा 2
चित्रा 2 इंजेक्शन जीबीएम और vivo में कोशिकाओं vasculature की विज़ुअलाइज़ेशन. दोनों टेक Cre और सीएजी-tdTomato ROSA26 ले चूहे जीबीएम सेल इंजेक्शन के लिए इस्तेमाल किया गया. संवहनी endothelial कोशिकाओं tdTomato (लाल) के साथ लेबल रहे थे, और जीबीएम कोशिकाओं GFP (हरा) के साथ लेबल रहे थे. छवियाँ जीबीएम सेल इंजेक्शन के बाद 24 घंटे के शुरू हासिल किया गया. 10-12 देखने के सटे क्षेत्रों के कुल ले रहे थे और थे और एक दूसरे के लिए आसन्न इकट्ठे, पहचान की कुल क्षेत्र के केंद्र में जीबीएम कोशिकाओं के साथ इंजेक्शन, अंतिम छवियों का उत्पादन. दिन सर्जरी के बाद दिनों की संख्या का प्रतिनिधित्व करते हैं. स्केल पट्टी: 100 सुक्ष्ममापी.href = "http://www.jove.com/files/ftp_upload/4201/4201fig2large.jpg" लक्ष्य = "_blank" बड़ा आंकड़ा देखने के लिए यहां क्लिक करें.

चित्रा 3
चित्रा 3. Gliosis बंदरगाहों कपाल खिड़की सर्जरी के बाद नहीं होती है. कम वृद्धि के तहत माउस मस्तिष्क राज्याभिषेक अनुभाग: ऊपरी पैनल. वाम पैनल: किसी भी कपाल खिड़की सर्जरी के बिना एक माउस, कोई GFAP सक्रियण मस्तिष्क के ऊतकों में मनाया जाता है. मध्य पैनल: एक बंदरगाहों कपाल मस्तिष्क के दाएँ पक्ष पर उत्पन्न खिड़की के साथ एक माउस, कोई GFAP सक्रियण मस्तिष्क के ऊतकों में मनाया जाता है. सही पैनल: एक बंदरगाहों कपाल और बंदरगाहों खिड़की की ओर से खारा इंजेक्शन खिड़की के साथ एक चूहा. GFAP सक्रियण बंदरगाहों खिड़की के किनारे पर मनाया जाता है, लेकिन बरकरार मस्तिष्क ऊतक के पक्ष पर नहीं. स्केल पट्टी: 1 मिमी. लोअर पैनल: क्षेत्रों में मस्तिष्क के ऊतकों के उच्च शक्ति छवियों ऊपरी पैनल छवियों के सफेद बॉक्स में संकेत के रूप में. स्केल पट्टी: 100 सुक्ष्ममापी.

चित्रा 4
चित्रा 4 तेरा-1 YFPH चूहों से वृक्ष के समान spines के उच्च संकल्प इमेजिंग. छवियाँ बंदरगाहों सर्जरी के दिन पर हासिल किया गया है, और 32 दिनों बंदरगाहों सर्जरी के बाद. यह स्पष्ट है कि ज्यादातर कांटा दिन पर उपस्थित छवियों से स्पष्ट रूप से दिखाई दे 0 बंदरगाहों सर्जरी के बाद 32 दिन हैं. स्केल पट्टी: 2 सुक्ष्ममापी.

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Discussion

एक सफल बंदरगाहों कपाल खिड़की कुंजी thinning और चमकाने है. जबकि thinning प्रारंभिक जल्दी से किया जा सकता है, देखभाल सुनिश्चित करने के एक बड़े क्षेत्र में समरूप खोपड़ी के thinning लिया जाना चाहिए. हम आम तौर पर खारा की खोपड़ी से एक पतली परत को लागू करने के लिए, और पतली खोपड़ी एक पास तो एक समय में, जैसे कि खारा समाधान evaporates के बाद शीघ्र ही microdrill खोपड़ी पर एक बार पारित कर दिया गया है. यह हमारे लिए धीरे धीरे लेकिन homogenously आगे खोपड़ी पतली की अनुमति देता है. खुर्दबीन के नीचे एक स्थिर हाथ भी महत्वपूर्ण है. एक बार खोपड़ी thinning इच्छित मोटाई nears, हम आम तौर पर इस्तेमाल हीरे का पेस्ट को 10-15 मिनट के लिए बाद टिन ऑक्साइड का उपयोग कर चमकाने के साथ thinned खोपड़ी, पॉलिश. हम पाते हैं कि हीरे का पेस्ट के साथ thinned 1 खोपड़ी चमकाने बेहतर सामान्य में चमकाने के परिणाम पैदावार, और भी हमें thinned खोपड़ी क्षेत्र पर ज्यादा दबाव लागू किए बिना पतली खोपड़ी क्षेत्र के एक बड़े क्षेत्र को आगे करने के लिए अनुमति देता है.

हम बंदरगाहों करोड़ चुना"खुला खोपड़ी" खिड़की और "thinned खोपड़ी" खिड़की के रूप में इस तरह के अन्य आमतौर पर इस्तेमाल किया कपाल खिड़कियां, निम्नलिखित कारणों के लिए, बजाय anial खिड़की: खुले खोपड़ी खिड़की के साथ, कपाल खिड़की आम तौर पर निर्माण के बाद शीघ्र ही बादल बन जाता है और फिर साफ करता है पहले दो हफ्तों के भीतर अपने दम पर, इस प्रकार लगभग दो सप्ताह की प्रतीक्षा अवधि की आवश्यकता से पहले किसी भी इमेजिंग प्रयोगों का प्रदर्शन किया जा सकता है. यह प्रतीक्षा अवधि दो सप्ताह जीबीएम सेल इंजेक्शन के बाद प्रारंभिक दो सप्ताह के दौरान glioma दीक्षा के दृश्य को रोका जा सके. thinned खोपड़ी कपाल खिड़की की आवश्यकता पहले प्रत्येक इमेजिंग सत्र, जो renders यह जीबीएम सेल और एक दैनिक आधार पर इंजेक्शन glioma दीक्षा के दृश्य के लिए अनुपयुक्त है दोहराव thinning. इसके विपरीत, बंदरगाहों खिड़की हमें खिड़की की ओर है, जो मस्तिष्क के ऊतकों को नुकसान को कम करता है, और भी उच्च संकल्प इमेजिंग विंडो के तुरंत बाद रचना के प्रदर्शन के लिए अनुमति देता है से जीबीएम सेल इंजेक्शन प्रदर्शन करने के लिए अनुमति देता है. Infglioma दीक्षा पर ormation जीबीएम सेल इंजेक्शन, जो अध्ययन के इस प्रकार के लिए खुला खोपड़ी तकनीक पर एक महत्वपूर्ण लाभ यह है के बाद पहले कुछ हफ्तों के भीतर एकत्र किया जा सकता है.

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Disclosures

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

Acknowledgments

यह काम जैक्सन प्रयोगशाला कैंसर केंद्र पायलट अनुदान और मेन कैंसर फाउंडेशन द्वारा समर्थित है.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
DMEM/F12(1:1) with Sodium Pyruvate Thermo Sci Hyclone SH3026101
B-27 Serum Free Supplement (50x) Invitrogen 17504-044
GlutaMax-1 Supplement Invitrogen 35050061
Penicillin-Streptomycin Solution Thermo Sci Hyclone SV30010
Accutase-Enzyme Cell Detachment Medium eBioscience 00-4555-56
T25 flasks-vent cap green Sarstedt Ltd 83.1810.502
70% alcohol JAX LAHS
10% povidone-iodine topical solution JAX LAHS
Ketamine HCl Butler Animal Health Supply NDC# 11695-0550-1
Xylazine Akorn, Inc. NADA# 139-236
Carprofen JAX LAHS
Ophthalmic ointment Dechra Veterinary Products 17033-211-38
0.5% Lidocaine HCl REGENT, Inc. NDC 0517-0625-25
Cyanoacrylate glue Henkel Corp 46551
Sterile Swabs Fisher Scientific 23-400-114
Diamond paste Widget Supply BBE60
Tin oxide LORTONE, Inc. 591-038
Liner Bond 2V KURARAY Medical Inc. 1921-KA
Clearfil AP-X KURARAY Medical Inc. 1721-KA
Saline JAX LAHS
Cover glass Warner Instruments 64-0720
Hex Nut Small Parts, Inc. HNX-0090-C
Syringe Pump Syringepump.com NE-1000
Two-Photon imaging system Custom built (Any commercial system would work)

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References

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