चूहा गुर्दे प्रत्यारोपण के बाद तीव्र allograft अस्वीकृति की गैर इनवेसिव इमेजिंग का प्रयोग * These authors contributed equally

Medicine
 

Summary

हम इस के साथ साथ गैर invasively 18F-fluorodeoxyglucose साथ पोजीट्रान एमिशन टोमोग्राफी का उपयोग करते हुए तीव्र allograft अस्वीकृति का आकलन करने के लिए एक चूहा गुर्दे प्रत्यारोपण के मॉडल प्रस्तुत करते हैं.

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Grabner, A., Kentrup, D., Schnöckel, U., Gabriëls, G., Schröter, R., Pavenstädt, H., Schober, O., Schlatter, E., Schäfers, M., Reuter, S. Non-invasive Imaging of Acute Allograft Rejection after Rat Renal Transplantation Using 18F-FDG PET. J. Vis. Exp. (74), e4240, doi:10.3791/4240 (2013).

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Abstract

अंत मंच वृक्क रोग के साथ रोगियों की संख्या, और गुर्दे allograft प्राप्तकर्ताओं की संख्या लगातार बढ़ जाती है. तीव्र सेलुलर allograft अस्वीकृति (एआर) के प्रकरणों दीर्घकालिक allograft अस्तित्व के लिए एक नकारात्मक शकुन कारक हैं, और अपने समय पर निदान allograft समारोह 1 के लिए महत्वपूर्ण है. वर्तमान में, एआर ही निश्चित रूप से एक आक्रामक तरीके के रूप में, भ्रष्टाचार चोट या नुकसान का महत्वपूर्ण जोखिम bares, जो कोर सुई बायोप्सी से निदान किया जा सकता है. इसके अलावा, बायोप्सी एआर फोकल या बद है तो झूठी नकारात्मक परिणामों में परिणाम हो सकता है थक्कारोधी दवाओं और इस तकनीक के सीमित नमूना साइट लेने के रोगियों में संभव नहीं हैं. एक परिणाम के रूप में, यह अक्सर विभिन्न प्रत्यारोपण मॉडल के उपयोग सहित पशुओं में किया जा सकता है, जो नए एआर तरीकों का पता लगाने के लिए चल रहे एक खोज को जन्म दिया है.

प्रारंभिक 60 के दशकों चूहा गुर्दे प्रत्यारोपण examin के लिए एक अच्छी तरह से स्थापित प्रयोगात्मक विधि है इसलियेएआर 2 से समझना और विश्लेषण. इसके अलावा छोटे जानवर पोजीट्रान एमिशन टोमोग्राफी (पीईटी) एक allogeneic uninephrectomized चूहा गुर्दे प्रत्यारोपण के मॉडल में एआर आकलन और एक गैर इनवेसिव, विशिष्ट के लिए एक नए विकल्प के रूप में भ्रष्टाचार FDG-पीईटी इमेजिंग प्रस्ताव करने के लिए 18 एफ fluorodeoxyglucose (FDG) का उपयोग करने में हम इस के साथ साथ वर्तमान मानव स्थिति 3 के लिए भी एआर की और शीघ्र निदान. इसके अलावा, इस पद्धति का प्रत्यारोपण अस्वीकृति 4 की निगरानी में सुधार करने के लिए अनुवर्ती के लिए लागू किया जा सकता है.

Protocol

1. दाता अंग वसूली

  1. स्टीरियोटैक्टिक माइक्रोस्कोप, 8-10 सप्ताह पुराने चूहे (दाता और प्राप्तकर्ता के शरीर के वजन से मेल खाना चाहिए) की रिकॉर्ड वजन सेट करें.
  2. दाता चूहा (लुईस ब्राउन नॉर्वे एफ 1, LBN एफ 1) ऑक्सीजन / isoflurane साँस लेना (isoflurane के 4% / 2 एल / मिनट ऑक्सीजन) का उपयोग anesthetize. 2-2.5% की isoflurane के कम से संज्ञाहरण बनाए रखें.
  3. सर्जरी पैड पर anesthetized चूहे रखें. पैड पर चिपकने वाला टेप के साथ चूहे के हाथ - पांव फिक्स और चूहे की आंखों को नेत्र मरहम (Bepanthen, बायर) लागू होते हैं.
  4. दाढ़ी और चूहे के पेट कीटाणुरहित और शिश्नरोम से जिगर की दुम सीमा को एक उदर midline चीरा प्रदर्शन करते हैं. ध्यान से सही पक्ष को आंत ले जाकर छोड़ दिया गुर्दे और अपने जहाजों बेनकाब. बाएं गुर्दे के ऊपर धुंध की एक पतली चादर प्लेस और सुखाना को रोकने के लिए गर्म isotonic नमकीन घोल के साथ यह गीला करना.
  5. सावधानी (ड्यूमॉन्ट angled टिप संदंश के साथ वसा ऊतक काटना ड्यूमॉन्ट एसएस45 संदंश आईनॉक्स चिकित्सा, ललित विज्ञान उपकरण, cat.no. 11203-25) बाएं मूत्रवाहिनी घेर. मूत्रवाहिनी के साथ किसी भी सीधे संपर्क से बचें, बजाय, पर्याप्त आसपास वसा ऊतकों के साथ यह जुटाने.
  6. ड्यूमॉन्ट angled टिप संदंश का उपयोग गुर्दे धमनी से बाएं गुर्दे की नस अलग करें. दोनों जहाजों से सभी वसा और संयोजी ऊतक निकालें और अधिवृक्क और वृषण वाहिकाओं दाग़ना.
  7. क्रमशः, बाएं गुर्दे धमनी और शिरा के साथ ऊपर और अपने जंक्शन से नीचे महाधमनी और अवर रग Cava (IVC) काटना, और सभी निवर्तमान धमनियों दाग़ना.
  8. बेहतर mesenteric धमनी को निकट के रूप में संभव हो, बाएं गुर्दे की धमनी के ऊपर एक microsurgical को दबाना (माइक्रो Serrefines, ललित विज्ञान उपकरण, cat.no. 18055-04) के साथ suprarenal महाधमनी दबाना. शल्य रेशम का उपयोग कर अधोमूत्र पिंडीय महाधमनी (5-0, Vömel, कला नहीं. 14739) बाएं गुर्दे धमनी नीचे लगभग 5 मिमी ligate.
  9. शल्य रेशम के साथ अधोमूत्र पिंडीय IVC (5-0, Vömel) ligate, और suprarenal IVC दबानाएक microsurgical क्लैंप के साथ (माइक्रो Serrefines, ललित विज्ञान उपकरण, cat.no. 18055-03).
  10. ठीक कैंची (- ToughCut सीधे 11.5 सेमी, ललित विज्ञान उपकरण, cat.no. 14058-11 परितारिका कैंची) का उपयोग कर के रूप में करीब के रूप में संभव IVC के लिए गुर्दे की नस कट.
  11. धीरे धीरे डालने से 2 मिलीलीटर ठंडा HTK छिड़काव समाधान (CUSTODIOL HTK, डॉ. फ्रांज कोहलर केमी) के साथ बगल में गुर्दे छिड़कना एक Canula (Microlance 3 27G ¾, बीडी, cat.no. 302200) अधोमूत्र पिंडीय महाधमनी में. पुष्टि करें कि गुर्दे रंग परिवर्तन (अब जैतून का रंग चढ़ाया हुआ).
  12. सबसे पहले, फिर, अधोमूत्र पिंडीय महाधमनी suprarenal महाधमनी आड़ा काट और के रूप में बंद के रूप में संभव मूत्राशय के लिए अंत में मूत्रवाहिनी.
  13. बर्फ पर HTK छिड़काव समाधान में मूत्रवाहिनी और दुकान के साथ एक साथ गुर्दे और उसके संवहनी आपूर्ति निकालें.
  14. संवहनी clamps और संज्ञाहरण के तहत दिल की लगातार छांटना निकाल कर दाता चूहा euthanize.

2. प्राप्तकर्ता तैयारी और Transplantaमोर्चे

  1. स्टीरियोटैक्टिक माइक्रोस्कोप, चूहे का रिकॉर्ड वजन सेट करें.
  2. Isoflurane के 4% का उपयोग प्राप्तकर्ता चूहे (लुईस) anesthetize. 2-2.5% की isoflurane के कम से संज्ञाहरण बनाए रखें.
  3. सर्जरी पैड पर anesthetized चूहे रखें. पैड पर चिपकने वाला टेप के साथ चूहे के हाथ - पांव फिक्स और चूहा है `आंखों को नेत्र मरहम लागू होते हैं. एक गुदा तापमान संवेदक और एक वार्मिंग पैड का उपयोग करने की निगरानी और नियंत्रण के मुख्य शरीर के तापमान. शल्य चिकित्सा के दौरान repetitively तापमान, सांस लेने और पशु के हृदय की दर को नियंत्रित.
  4. दाढ़ी और पेट कीटाणुरहित और शिश्नरोम से जिगर की दुम सीमा को एक उदर midline चीरा प्रदर्शन करते हैं. त्वचा आघात को कम करने के क्रम में एक स्केलपेल forcutting त्वचा का प्रयोग करें. सही पक्ष को आंत ले जाकर छोड़ दिया गुर्दे और अपने जहाजों बेनकाब.
  5. ध्यान ड्यूमॉन्ट angled टिप संदंश और कपास swabs का उपयोग कर गुर्दे कैप्सूल को हटा दें.
  6. गुर्दे के पास बाएं गुर्दे धमनी, नस और मूत्रवाहिनी रोक देनाशल्य धागे (4-0 Mersilene, Ethicon, बिल्ली. नहीं. EH6732H) का उपयोग करते हुए दो ligations साथ वृक्कनाभि. केवल गुर्दे वृक्कनाभि छोड़ने गुर्दे की आबकारी बड़ा हिस्सा,. कपास swabs के साथ कटौती की सतह को साफ और खून बह रहा है के लिए जाँच करें. यदि आवश्यक हो तो एक और संयुक्ताक्षर जोड़ें.
  7. ध्यान से कपास swabs के साथ दुम साइट पर अधोमूत्र पिंडीय महाधमनी और रग कावा को कवर संयोजी ऊतक के माध्यम से दो टूक काटना.
  8. ड्यूमॉन्ट angled टिप संदंश का उपयोग अधोमूत्र पिंडीय महाधमनी और रग कावा से किसी भी दृश्य तंत्रिका अलग करें.
  9. पहली वृषण जहाजों की शाखाओं के नीचे, और आम श्रोणिफलक जहाजों की शाखाओं ऊपर दूसरा एक: ध्यान से दो 2-4 मिमी लंबाई के उद्घाटन के गठन, अधोमूत्र पिंडीय महाधमनी और रग कावा के बीच संयोजी ऊतक पत्रक के माध्यम से काटना. बीच में श्रोणिफलक तथा कटि (कमर) संबंधी धमनियों और शिराओं दाग़ना.
  10. दो खुलने से प्रत्येक के माध्यम से, एक भी शल्य धागे (Ethicon, बिल्ली no.EH6665E. Mersilene 0) ड्रा. इन धागों अधोमूत्र पिंडीय पुल का उपयोग करनाधीरे पृष्ठीय साइट पर शाखाओं में जहाजों के लिए पहुँच प्राप्त करने के लिए पशु के दाहिने हिस्से को महाधमनी और रग कावा. दो के उद्घाटन के बीच इन जहाजों में से किसी दाग़ना और उसके बाद शल्य धागे को हटा दें.
  11. अगला, महाधमनी के साथ ऊपरी उद्घाटन के अवसर पर शुरू और ऊपरी खोलने (माइक्रो Serrefines पर रग कावा के साथ समाप्त होने के चार microsurgical clamps (माइक्रो Serrefines, ललित विज्ञान उपकरण, cat.no. 18055-04) का दक्षिणावर्त आवेदन से महाधमनी और IVC रोक देना , ललित विज्ञान उपकरण, cat.no. 18055-03).
  12. बाद में ध्यान से बेध एक सुई के साथ महाधमनी के अलग हिस्से के ऊपरी समाप्त (Microlance 3 27G ¾, बीडी, cat.no. 302200), एक ठीक वसंत कैंची (Vannas वसंत कैंची की कम ब्लेड डालने - 3 मिमी ब्लेड, ललित विज्ञान पंचर खोलने के माध्यम से उपकरण, cat.no 15000-00) और एक छोटी अनुदैर्ध्य चीरा प्रदर्शन करते हैं. किसी भी शेष रक्त को निकालने के लिए ठंडा HTK छिड़काव समाधान के साथ अलग महाधमनी फ्लश.
  13. इसी तरह, ध्यान से बेधएक सुई के साथ रग कावा के अलग हिस्से के निचले अंत, पंचर खोलने के माध्यम से ठीक एक वसंत कैंची की कम ब्लेड डालने और शीघ्र ही महाधमनी चीरा नीचे समाप्त होने के एक अनुदैर्ध्य चीरा प्रदर्शन करते हैं. फिर, किसी भी शेष रक्त को निकालने के लिए पोत फ्लश.
  14. भंडारण समाधान से गुर्दे भ्रष्टाचार निकालें. बाएं गुर्दे की पूर्व की स्थिति से नीचे जगह है, और इसे सही ढंग से उन्मुख है कि यह सुनिश्चित करें.
  15. ग्राफ्ट वृक्क धमनी के उन्मुखीकरण की जाँच करें और कोई लपेटने सुनिश्चित करें कि वहाँ. फिर भ्रष्टाचार खत्म धुंध की एक पतली शीट जगह है और इसे शांत करने के लिए ठंडा HTK छिड़काव समाधान के साथ यह गीला करना, और सुखाना रोकने के लिए.
  16. ऊपरी में प्रथम, तब के निचले सिरे पर - भ्रष्टाचार के गुर्दे धमनी शल्य धागे (.. Ethilon 9-0, Ethicon, बिल्ली नहीं 2809G) के साथ में खुलता है जिसमें महाधमनी टुकड़ा के suprarenal भाग के उद्घाटन fixate महाधमनी चीरा. शल्य धागे का उपयोग एक निरंतर सीवन के साथ दक्षिणावर्त चीरा बंद(Ethilon 9-0), ड्यूमॉन्ट angled टिप संदंश और एक घुमावदार Castroviejo सुई धारक (ललित विज्ञान उपकरण, बिल्ली. नहीं. 12061-01). बाद में, एक वामावर्त दूसरी निरंतर सिवनी के माध्यम से संयोजी ऊतक के साथ पहली सीवन को कवर किया. अब, भ्रष्टाचार की महाधमनी टुकड़ा के केवल निचले हिस्से को बंद कर दिया जाना बना रहता है. नियमित रूप से ठंडा HTK छिड़काव समाधान के साथ भ्रष्टाचार शांत.
  17. सिवनी की जकड़न और अखंडता को मान्य है, साथ ही भ्रष्टाचार में शेष रक्त को हटाने ग्राफ्ट महाधमनी टुकड़ा के खुले अंत में डाला कुंद सुई के माध्यम से ठंडा HTK छिड़काव समाधान के 1 मिलीलीटर के साथ भ्रष्टाचार छिड़कना. बाद में, शल्य चिकित्सा रेशम के साथ महाधमनी टुकड़ा (5-0, Vömel) के खुले अंत ligate.
  18. ग्राफ्ट गुर्दे की नस के उन्मुखीकरण की जाँच करें और कोई लपेटने सुनिश्चित करें कि वहाँ.
  19. रग कावा पर चीरा के निचले सिरे पर है, तो ऊपरी में पहले - शल्य धागे (Ethilon 9-0) के साथ भ्रष्टाचार की नस का उद्घाटन fixate. चीरा बंदशल्य धागे (Ethilon 9-0), ड्यूमॉन्ट angled टिप संदंश और एक घुमावदार Castroviejo सुई धारक का उपयोग कर एक सतत सीवन के साथ दक्षिणावर्त. नियमित रूप से ठंडा HTK छिड़काव समाधान के साथ भ्रष्टाचार शांत.
  20. ऊपरवाला रग कावा क्लैंप के साथ शुरुआत, microsurgical clamps हटाने वामावर्त. पिछले महाधमनी क्लैंप को हटाने के बाद, ध्यान से कपास swabs के साथ अंत में हल्के से खून बह रहा बंद करो. कुछ सेकंड के बाद भ्रष्टाचार गुलाबी रंग चढ़ाया हुआ बंद हो जाएगा, और uretric संकुचन दिखाई देनी चाहिए.
  21. प्राप्तकर्ता `के मूत्राशय में ग्राफ्ट मूत्रवाहिनी की प्रविष्टि ध्यान से एक Vannas वसंत कैंची (छात्र Vannas वसंत कैंची सीधे, ललित विज्ञान उपकरण, cat.no. 91500-09 उपयोग कर मूत्राशय के शीर्ष पर मांसलता के एक छोटे पैच को हटाने के लिए ). फिर, ड्यूमॉन्ट angled टिप संदंश का उपयोग भ्रष्टाचार मूत्रवाहिनी से आसपास के ऊतकों (ज्यादातर वसा) को हटा दें. इसलिए, ध्यान से मूत्रवाहिनी की टिप ले लो और धीरे आसपास वसा, संयोजी ऊतक अलग और एम्बेडेड वाहिकाओं froविपरीत दिशा में उन्हें खींच कर यह मी. एक शल्य धागा (Prolene 6-0, Ethicon, बिल्ली. नहीं. 8697H) के अंत में uretric टिप fixate और संलग्न सुई के साथ मूत्राशय की पहले से तैयार शीर्ष छेदना. मूत्राशय के माध्यम से मूत्रवाहिनी खींचो और एक दूसरे के मुंह के माध्यम से आधार पर यह बाहर निकलें.
  22. शल्य धागे (Ethilon 9-0) से मूत्राशय के शीर्ष पर ऊतक अलग मूत्रवाहिनी से पहले fixate. संलग्न शल्य धागे के साथ मूत्रवाहिनी की टिप कट और धीरे नीचे से धक्का द्वारा मूत्राशय में वापस मूत्रवाहिनी खींच. बाद में, शल्य धागे (Ethilon 9-0) के साथ दूसरे मूत्राशय पंचर बंद करें.
  23. सर्जिकल सिवनी धागे (Mersilene 0) का उपयोग करते हुए दो निरंतर लेकिन अलग टांके द्वारा पेट की दीवार और त्वचा को बंद करें. Pividon आयोडीन का उपयोग कर घाव कीटाणुरहित और घाव दर्द को नियंत्रित करने के लिए सर्जरी के बाद तीन दिनों के लिए buprenorphine (किलो / BW / बोली प्रति 0.1 मिलीग्राम) सुप्रीम कोर्ट प्रशासन.

3. इमेजिंग allograft अस्वीकृति

  1. Isoflurane के 2-2.5% का उपयोग nonfasting चूहे anesthetize.
  2. 30 MBq FDG (0.1 में 30 MBq FDG मिलीलीटर 0.9% NaCl) एक 24 जी कैथेटर (ब्राउन, Introcan, 4252500-01) का उपयोग कर एक पार्श्व पूंछ नस catheterizing के माध्यम से चार प्रशासित रहे हैं. बाद में, 0.9 मिलीलीटर 0.9% NaCl समाधान के साथ कैथेटर शुद्ध.
  3. प्रति घंटा 0.9% NaCl समाधान के 1 मिलीलीटर के चार इंजेक्शन द्वारा स्कैन और हाइड्रेट जानवर की शुरुआत तक संज्ञाहरण के बिना एक restrainer में चूहे छोड़ दें.
  4. स्कैन के शुरू होने से पहले तुरंत isoflurane के 2% का उपयोग कर पुन: चतनाशून्य चूहा.
  5. एक उच्च संकल्प में anesthetized चूहे रखें बहु - तार चैम्बर आधारित पशु पीईटी कैमरा quadHIDAC (ऑक्सफोर्ड पोजीट्रान सिस्टम्स लिमिटेड, ऑक्सफोर्ड, ब्रिटेन). पीईटी स्कैनर के स्थानिक संकल्प 1.0 मिमी है और पूरे FOV (व्यास, 165 मिमी, अक्षीय लंबाई 280 मिमी) से अधिक स्थिर है. एक नाड़ी oxymeter साथ एक गुदा तापमान संवेदक और नियंत्रण संज्ञाहरण का उपयोग कर स्कैन के दौरान निगरानी और नियंत्रण के शरीर का तापमान.
  6. 60 मीटर के लिए गतिशील अधिग्रहण शुरूFDG के गुर्दे उत्सर्जन की वजह से गुर्दे में ट्रेसर संचय को कम करने के लिए FDG-इंजेक्शन के बाद 180 मिनट शुरू करने में.
  7. गुर्दे पैरेन्काइमा की पहचान के लिए और 18 एफ निकासी 5 की गणना के लिए स्कैनर में चूहे की स्थिति के चलते बिना 18 एफ फ्लोराइड चार से 5 MBq लागू करें और 60 मिनट के लिए तुरंत बाद 18 एफ फ्लोराइड इंजेक्शन एक और पीईटी स्कैन. दोनों स्कैन से छवियों के पुनर्निर्माण. 2 मिनट गुर्दे प्रांतस्था चारों ओर 18 एफ फ्लोराइड इंजेक्शन (छिड़काव चरण) के बाद खंगाला छवियों पर मैन्युअल रूप से ब्याज की एक मात्रा (Voi) का पता लगाने और FDG छवियों Voi हस्तांतरण. ध्यान Voi से गुर्दे श्रोणि बाहर. दोनों स्कैन से छवियों के पुनर्निर्माण और मैन्युअल गुर्दे प्रांतस्था भर में ब्याज की एक मात्रा (Voi) का पता लगा. सूची मोड डेटा 0.4 × 0.4 × 0.4 मिमी 3 के एक voxel आकार के साथ छवियों में खंगाला गया. ध्यान Voi से गुर्दे श्रोणि बाहर.
  8. अनुपात ओ द्वारा FDG तेज कंप्यूटच कुल मायने रखता है और मात्रा और इंजेक्शन की खुराक (% आईडी) के प्रतिशत की गणना. हम छवि विश्लेषण के लिए MATLAB (संस्करण R2011b, MathWorks, Natick, एमए, यूएसए) और tomographic इमेजिंग (टिम) संस्करण 2.8 का इस्तेमाल किया.

Representative Results

ऊतक विज्ञान

अस्वीकृति की गंभीरता सूजन की डिग्री से परिलक्षित होता है जबकि एआर ल्यूकोसाइट्स के दौरान, यानी मुख्य रूप से टी lymphocytes, प्रत्यारोपण में भर्ती कर रहे हैं. यहां दर्शाया आवधिक एसिड-Schiff (पीए) धुंधला में (चित्रा 1), गुर्दे allograft ए.आर., अर्थात् glomerulitis, tubulitis, endothelialitis और भ्रष्टाचार घुसपैठ (चित्रा 1, ATX POD4) (पॉड = पश्चात दिन) की महत्वपूर्ण ऊतकीय लक्षण दिखाता है अस्वीकृति का संकेत देशी नियंत्रण गुर्दे (चित्रा 1, सीटीआर) में अनुपस्थित रहे हैं, जबकि भ्रष्टाचार घुसपैठ कोशिकाओं को ग्लूकोज की बड़ी मात्रा में खपत करते हैं जो अत्यधिक metabolically सक्रिय कोशिकाओं रहे हैं. उत्तरार्द्ध FDG के साथ प्रतिस्थापित है हालांकि, अगर यह कोशिकाओं में जमा करेंगे और मापा और पीईटी द्वारा मात्रा निर्धारित किया जा सकता है.

पीईटी छवियाँ

एक अल की एक श्रृंखला के गतिशील पूरे शरीर अधिग्रहण के प्रतिनिधि पीईटी छवियोंlogeneically 30 MBq FDG (अधिकतम एक पीछे मानचित्र प्रक्षेपण, 180 मिनट गड़बड़ी) (चित्रा 2) की पूंछ नस इंजेक्शन के बाद चूहे प्रतिरोपित. एक ठेठ FDG वितरण मस्तिष्क, हृदय, अस्थि मज्जा और harderian ग्रंथियों में अलग शारीरिक संचय के साथ पाया जाता है. इसके अलावा, मुक्त filtrated FDG मूत्र मार्ग में जम जाता है. देशी गुर्दे (ग्रीन सर्कल, सही गुर्दे) सब पर किसी भी संचय नहीं दिखा है जबकि एआर पैरेन्काइमा (पीला सर्कल, बाएं गुर्दे) के दौर से गुजर गुर्दे ग्राफ्ट में अत्यधिक, POD4 पर एक अधिकतम के साथ FDG जम जाता है. गुर्दे श्रोणि मुक्त सफाया FDG शामिल कर सकते हैं, यह आगे की माप से बाहर रखा गया था. 3 से लिया चित्रा.

मात्रात्मक मूल्यांकन

मात्रात्मक मूल्यांकन छवियों को खंगाला गया के लिए ब्याज की मात्रा 18 एफ फ्लोराइड छिड़काव के अनुसार गुर्दे के आसपास मैन्युअल का पता लगाया और FDG छवियों पर पेश किया गया. गुर्दे पे के बहिष्कार के बादlvis गुर्दे पैरेन्काइमा में FDG तेज वॉल्यूम (% आईडी ± SEM) के लिए कुल गिनती के अनुपात द्वारा गणना की गई मतलब है. देशी नियंत्रण (0.2 ± 0.02%) या syngeneically प्रतिरोपित गुर्दे (0.37 ± 0.04%) की तुलना में जब एआर विकासशील गुर्दे POD4 पर काफी वृद्धि हुई FDG संचय (0.8 ± 0.06%) से पता चला है. इसके अलावा, एआर के दो प्रमुख विभेदक निदान, ischemia / reperfusion चोट (आईआरआई) (0.31 ± 0.02%) और तीव्र calcineurin अवरोध विषाक्तता (सीएसए) (0.16 ± 0.01%) में की तरह अर्थात् तीव्र छोटी नली परिगलन एक ऊंचा FDG संचय और नहीं दिखा था इसलिए एआर (3 से लिया चित्रा 3) से प्रतिष्ठित किया जा सकता है.

चित्रा 1
चित्रा 1. तीव्र अर्थात् अस्वीकृति, glomerulitis, tubulitis, endothelialitis, और भ्रष्टाचार के घुसपैठ के प्रोटोकॉल. साइन्स (allograft समूह में पाए गएऔर ATX) नियंत्रण गुर्दे (सीटीआर) में पूरी तरह से अनुपस्थित थे.

चित्रा 2
चित्रा 2. एक allogeneically प्रत्यारोपित चूहे की एक श्रृंखला के गतिशील पूरे शरीर अधिग्रहण की FDG-पीईटी छवि. प्रतिनिधि पीईटी छवियों. नियंत्रण गुर्दे (हरी हलकों) की तुलना में POD4 पर एक अधिकतम के साथ गुर्दे allografts (पीला हलकों) FDG के पैरेन्काइमा जम जाता है. गुर्दे श्रोणि मुक्त सफाया FDG शामिल कर सकते हैं के बाद से यह माप से बाहर रखा गया था. 3 से लिया चित्रा.

चित्रा 3
चित्रा 3. FDG का% आईडी के माप से तीव्र अस्वीकृति के मात्रात्मक मूल्यांकन. जांच. गुर्दे allografts (ATX) महत्वपूर्ण उच्च एफ प्रदर्शन0.8 ± 0.06% सीटीआर: 0.2 ± 0.02 syngeneically नियंत्रण गुर्दे (सीटीआर), allografts (STX), POD4 पर एक अधिकतम (ATX साथ तीव्र calcineurin अवरोध विषाक्तता (सीएसए) के साथ तीव्र छोटी नली परिगलन (एटीएन) या गुर्दे से गुर्दे से डीजी राशि %, STX: 0.37 ± 0.04%%, एटीएन: 0.31 ± 0.02%%, सीएसए: 0.16 ± 0.01%). 3 से लिया चित्रा.

Discussion

FDG-पीईटी इमेजिंग तीव्र अस्वीकृति के निदान के लिए एक नया विकल्प है. क्योंकि इसकी गैर इनवेसिव और विशिष्ट प्रकृति की, FDG-पीईटी कोर सुई बायोप्सी द्वारा शास्त्रीय निदान की तुलना में लाभ है. एक बायोप्सी, FDG-पीईटी विश्लेषण पूरे भ्रष्टाचार के सीमित नमूना आकार के विपरीत. इसके अलावा, एक anticoagulant चिकित्सा पर रोगियों के लिए इसे लागू कर सकते हैं, और एक repetitively उपचार दक्षता 4 नजर रखने के लिए जैसे पीईटी उपायों प्रदर्शन कर सकते हैं. इसके अलावा, हम पहले से ही एआर, ischemia reperfusion चोट और तीव्र calcineurin अवरोध विषाक्तता के कारण अर्थात् तीव्र छोटी नली नेक्रोसिस के दो प्रमुख विभेदक निदान FDG-पीईटी 3 का उपयोग एआर से भेदभाव किया जा सकता है दिखाया है. FDG-पीईटी इमेजिंग अपेक्षाकृत कम गतिविधि की मात्रा और प्रत्यारोपण के रोगियों या / और बिगड़ा गुर्दे समारोह के साथ रोगियों को या तो की इमेजिंग की आवश्यकता के बाद से गंभीर जटिलताओं का खतरा बढ़ इस दृष्टिकोण को आसानी से हस्तांतरित किया जा सकता है के साथ जुड़ा हुआ नहीं हैमें दैनिक नैदानिक ​​दिनचर्या.

फिर भी, एक FDG क्षेत्रीय चयापचय गतिविधि का आकलन करने के लिए एक नहीं बल्कि गैर विशिष्ट ट्रेसर है कि मन में रखने के लिए है. इस प्रकार, भ्रष्टाचार संक्रमण या ट्यूमर के साथ ही झूठी सकारात्मक परिणाम हो सकता है. गुर्दे पैरेन्काइमा में FDG तेज आकलन जब गुर्दे श्रोणि में FDG के ड्रेनेज एक समस्या हो सकती है. इसलिए, हम तीन घंटे FDG के गुर्दे उत्सर्जन की वजह से गुर्दे में ट्रेसर संचय को कम करने के लिए इंजेक्शन के बाद एक देर अधिग्रहण के समय को चुना है. इसके अलावा, गुर्दे श्रोणि गुर्दे FDG तेज बढ़ाता जब ध्यान से बाहर रखा जाना है. इस प्रोटोकॉल पीईटी के अनुसार गैर invasively, ए.आर. पता लगाने के एटीएन और सीएसए से अलग करने के लिए, और अनुवर्ती के लिए या उपचार दक्षता 3, 4, 6 के मूल्यांकन के लिए क्रमानुसार जांच प्रदर्शन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. 18 एफ फ्लोराइड का उपयोग कर पीईटी प्रकाशित bef के रूप में गुर्दे फ्लोराइड की मंजूरी के हिसाब से (विभाजन) गुर्दे समारोह का आकलन करने के लिए भी उपयोगी हैअयस्क 5.

LBN एफ 1 दाता और लुईस प्राप्तकर्ता चूहों का उपयोग कर अल्लोजीनिक गुर्दे प्रत्यारोपण मॉडल तीव्र सेलुलर allograft अस्वीकृति की जांच के लिए एक आदर्श मॉडल है. प्रतिरक्षादमन के अभाव में allograft गुर्दे Banff वर्गीकरण 7 के अनुसार एआर के विशिष्ट ऊतकीय लक्षण विकसित. इसके अलावा, चुना साधन (ऊनि बनाम प्रत्यारोपण 3, 8-10 binephrectomized) पर निर्भर करता है चयापचय डेटा allograft समारोह पर नजर रखने के रूप में अच्छी तरह से मूल्यांकन किया जा सकता है. प्रतिरक्षादमनकारी उपचार के अभाव के कारण, घाव या चूहों के प्रणालीगत संक्रमण अत्यंत दुर्लभ हैं. इस मॉडल के आम शल्य जटिलताओं ज्यादातर प्राप्तकर्ता की महाधमनी या ICV में भ्रष्टाचार जहाजों की प्रविष्टि बिंदुओं पर देखा पोत एक प्रकार का रोग, शामिल हैं. इस ischemia या भ्रष्टाचार घनास्त्रता का कारण बन सकता है. एक महाधमनी और IVC में अब चीरों का उपयोग करके इस समस्या से बच सकते हैं. कभी कभी यूरीमिया कारण भ्रष्टाचार विफलता या यू पाया जाता हैreter रिसाव मूत्राशय से मूत्रवाहिनी की मूत्रवाहिनी परिगलन या अलगाव की वजह से. भूख या सहज वजन के यूरीमिया जैसे उदासीनता, हानि के लक्षण पाए जाते हैं, जानवरों के तुरंत euthanized किया जाना चाहिए.

Disclosures

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

Acknowledgments

यह काम ड्यूश Forschungsgemeinschaft (SFB 656, Münster, जर्मनी, परियोजनाओं सी 7 और सी 6) और IZKF Münster (कोर इकाई SMAP) द्वारा समर्थित किया गया था. लेखकों Truc वान ली, ऐनी Kanzog, उटे न्यूगेबार, WIEBKE Gottschlich और रेडियोअनुरेखक उत्पादन के लिए उत्कृष्ट तकनीकी सहायता और डैनियल बर्कर्ट और स्वेन Fatum करने के लिए रोमन Priebe के लिए आभारी हैं.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Equipment
Mathieu Needle Holder - 14 cm Fine Science Tools 12010-14
Castroviejo Micro Needle Holder - 9 cm Fine Science Tools 12061-01
Surgical Scissors - Sharp_Blunt Fine Science Tools 14001-12
Iris Scissors - ToughCut Straight 11.5 cm Fine Science Tools 14058-11
Student Vannas Spring Scissors Fine Science Tools 91500-09
Vannas Spring Scissors - 3 mm Blades Fine Science Tools 15000-00
Student Tissue Forceps - 1x2 Teeth 12 cm Fine Science Tools 91121-12
Dumont SS-45 Forceps - Inox Medical Fine Science Tools 11203-25
Micro-Serrefine Clip Applicator with Lock Fine Science Tools 18056-14
Micro-Serrefine 6 mm x 1 mm Fine Science Tools 18055-03
Micro-Serrefine 4 mm x 0.75 mm Fine Science Tools 18055-04
Reagent
Isoflurane (e.g. Forene 100% v/v) Abott
cutane antiseptic (e.g. Octeniderm) Schülke
Povidone Iodine (e.g. Betaisodona) Mundipharma
ophthalmic ointment (e.g. Bepanthen) Bayer
Buprenorphin (e.g. Temgesic) RB Pharmaceuticals
HTK perfusion solution (e.g. CUSTODIOL HTK) Dr. Franz Köhler Chemie
surgical thread Mersilene 0 Ethicon EH6665E
surgical thread Mersilene 4-0 Ethicon EH6732H
surgical thread Prolene 6-0 Ethicon 8697H
surgical thread Ethilon 9-0 Ethicon 2809G
surgical silk 5-0 Vömel 14739
Canula (e.g. Microlance 3, 27G ¾) BD 302200

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References

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  3. Reuter, S., Schnöckel, U., Schröter, R., Schober, O., Pavenstädt, H., Schäfers, M., Gabriëls, G., Schlatter, E. Non-invasive imaging of acute renal allograft rejection in rats using small animal F-FDG-PET. PLoS. One. 4, e5296 (2009).
  4. Reuter, S., Schnöckel, U., Edemir, B., Schröter, R., Kentrup, D., Pavenstädt, H., Schober, O., Schlatter, E., Gabriëls, G., Schäfers, M. Potential of noninvasive serial assessment of acute renal allograft rejection by 18F-FDG PET to monitor treatment efficiency. J. Nucl. Med. 51, 1644-1652 (2010).
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