कार्बन ब्लैक इंक के Intravascular परफ्यूज़न सेरेब्रल वेसल्स के विश्वसनीय दृश्य की अनुमति देता है

Neuroscience

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Hasan, M. R., Herz, J., Hermann, D. M., Doeppner, T. R. Intravascular Perfusion of Carbon Black Ink Allows Reliable Visualization of Cerebral Vessels. J. Vis. Exp. (71), e4374, doi:10.3791/4374 (2013).

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Abstract

मस्तिष्क वाहिकाओं के संरचनात्मक ढांचे मस्तिष्क hemodynamics के लिए एक महत्वपूर्ण निर्धारक के रूप में के रूप में अच्छी तरह से चोट के इस्कीमिक अपमान के बाद गंभीरता है. मस्तिष्क vasculature गतिशील विभिन्न pathophysiological राज्यों के लिए जवाब है और यह तनाव के बीच और आनुवंशिक जोड़तोड़ की शर्तों के तहत काफी मतभेद को दर्शाती है. मूलतः, intracranial पोत धुंधला के लिए एक विश्वसनीय तकनीक क्रम में ischemic स्ट्रोक के रोगजनन अध्ययन आवश्यक है. अभी हाल तक, विभिन्न तकनीकों का एक सेट कम चिपचिपापन राल, araldite एफ के इंजेक्शन सहित मस्तिष्क vasculature, जेलाटीन 2 या 3 कार्बन ब्लैक के बिना विभिन्न 1 (यानी कामैन लाल, भारत स्याही) या लाटेकस रंगों के साथ मिश्रित. कल्पना करने के लिए नियोजित किया गया है आरोही महाधमनी के माध्यम से सफेद लेटेक्स परिसर के परफ्यूज़न 1 Coyle और Jokelainen 3 द्वारा सूचित किया गया है. Maeda एट अल. 2 कार्बो जोड़कर प्रोटोकॉल को संशोधित किया हैn मस्तिष्क के खारा छिड़काव के बाद जहाजों की सुधार विपरीत दृश्य के लिए लाटेकस परिसर काली स्याही. हालांकि, अक्षम छिड़काव और जहाजों के अपर्याप्त भरने अक्सर लाटेकस 4 परिसर के उच्च चिपचिपापन कारण अनुभव कर रहे हैं. इसलिए, हम एक सरल और लागत प्रभावी तकनीक दो व्यावसायिक रूप से उपलब्ध कार्बन ब्लैक स्याही (CB1 और CB2) का एक मिश्रण का उपयोग करने के लिए एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य 5 तरीके में मस्तिष्क vasculature कल्पना का वर्णन किया है. हम CB1 + चूहों परिणामों में CB2 साथ लाटेकस 5 छिड़काव की तुलना में एक उच्च घनत्व में काफी छोटे मस्तिष्क वाहिकाओं के धुंधला कि छिड़काव में दिखाया गया है. यहाँ, हम अपने प्रोटोकॉल (एसीए) पूर्वकाल और मध्य मस्तिष्क धमनियों (एमसीए) विभिन्न आनुवंशिक पृष्ठभूमि के साथ चूहों में पोत विविधताओं का अध्ययन करने के लिए के बीच शाखामिलन संबंधी बिंदुओं की पहचान करने का वर्णन करता है. अंत में, हम CB1 संयोजन के द्वारा एक क्षणिक फोकल चूहों में मस्तिष्क ischemia मॉडल में हमारी तकनीक की व्यवहार्यता का प्रदर्शन +CB2 की मध्यस्थता इस्कीमिक चोटों के विभिन्न डिग्री में टीटीसी धुंधला के साथ पोत धुंधला हो जाना.

Protocol

1. पशु

  1. प्रयोगों प्रयोगशाला पशुओं की देखभाल और उपयोग के लिए NIH दिशा निर्देशों के अनुसार किए गए और स्थानीय अधिकारियों द्वारा मंजूरी दे दी है. सभी प्रयोगों के लिए, / C57BL6 जम्मू जंगली प्रकार चूहों, ApolipoproteinE - / - (ApoE KO) और SV129 चूहों (12-16 सप्ताह की उम्र, 26-30 छ शरीर के वजन, प्रायोगिक समूह प्रति 5-6 जानवरों) इस्तेमाल किया गया.

2. रंगीन कंडोम के साथ सेरेब्रल वेसल्स के धुंधला हो जाना

  1. लेटेक्स परिसर के 0.5 मिलीलीटर (Pebeo, फ्रांस) के साथ एक EP ट्यूब में 1:20 के अनुपात में 25 μl कार्बन काली स्याही (Herlitz, जर्मनी) का एक मिश्रण तैयार एक नहाने के पानी में मिश्रण गर्म 37 डिग्री सेल्सियस. 28-30g एक सुई साथ पशु anaesthetizing से पहले एक 2 मिलीलीटर सिरिंज में मिश्रण ले लीजिए.
  2. बाँझ सामान्य नमक के 1 मिलीलीटर में 50 मिलीग्राम papavarine हाइड्रोक्लोराइड पाउडर के भंग. एक इंसुलिन सिरिंज में समाधान ले लीजिए. बंद एक और बाँझ इंसुलिन सिरिंज से सुई तोड़. एक 20 के अंत में इस सुई रखेंमीटर लंबी ट्यूब PE10. अब इंसुलिन papavarine हाइड्रोक्लोराइड समाधान युक्त ऊरु नस के माध्यम से इंजेक्शन vasodilatation और जहाजों के उचित भरने सुनिश्चित सिरिंज की सुई पर इस PE10 ट्यूब देते हैं.
  3. एक और दो इंसुलिन सीरिंज खारा के प्रत्येक युक्त 1 मिलीग्राम तैयार. इंसुलिन सीरिंज एक सटीक स्थान पर इंजेक्शन द्रव की चिकनी वितरण की अनुमति देते हैं. हालांकि, उच्च दलदलापन लाटेकस, वैकल्पिक हटाने योग्य व्यापक सुइयों के साथ 1 मिलीलीटर सीरिंज के कारण किया जाना चाहिए.
  4. सीरिंज और निष्फल विदारक यंत्र ऑपरेटिंग चरण के लिए करीब ले लो. आपरेशन मंच के चारों ओर एक शल्य ड्रेपर चादर बिखरा हुआ है. आपरेशन मंच पर्याप्त और प्रबुद्ध चाहिए एक ऑपरेटिंग माइक्रोस्कोप यदि आवश्यक हो तो इस्तेमाल किया जा सकता है.
  5. अब एक माउस / C57BL6 जम्मू के शरीर के वजन को मापने और फिर प्रेरित संज्ञाहरण के साथ 5% 70% एन 2 हे और 30% 2 हे में isoflurane vaporized. Vaporized isoflurane के 1% के साथ संज्ञाहरण जारी रखें. उचित स्थिति उत्पादों के बादअपनी पीठ और अंगों के निर्धारण पर माउस के छ, संज्ञाहरण की गहराई का आकलन. फिर बाईं और्विक शिरा पर त्वचा में कटौती और नस का पता लगाने. सुई की तेज टिप PE10 ट्यूब पर रखा डालें और धीरे धीरे प्रति मिनट 100 μl (50 शरीर के वजन मिलीग्राम / किग्रा) की दर पर papavarine हाइड्रोक्लोराइड समाधान इंजेक्षन.
  6. इंजेक्शन के बाद, उदर गुहा और बेध डायाफ्राम में कटौती. पसलियों कट करने के लिए यह हानिकारक या चोट के बिना दिल बेनकाब. एक धमनी संदंश के साथ उतरते वक्ष महाधमनी क्लिप. सही atrium पर एक तेज कटौती करने के लिए अनुमति शिरापरक रक्त बाहर नाली. बाएं वेंट्रिकल में खारा के 2 मिलीलीटर सुई, रंगीन लाटेकस 18-20 सेकंड पर थोड़ा दबाव के साथ स्वयं इंजेक्शन द्वारा पीछा किया. पहले से भरे सीरिंज एक के बाद एक का प्रयोग करें. कोई बुलबुले इंजेक्शन से बचें.
  7. लेटेक्स के इंजेक्शन के बाद 5 मिनट के लिए पशु छोड़ दें. पशु वध करना और ध्यान से पूरे दिमाग हटाने. अच्छी तरह से देखभाल करने के लिए पोत वास्तुकला और Corte घायल नहींएक्स जबकि खोपड़ी की हड्डी और meninges को हटाने. एक 60 मिमी सेल संस्कृति पकवान 4% पीएफए ​​के 6-8 मिलीलीटर युक्त एक फोटो लेने में मस्तिष्क रखें. पारदर्शी पकवान के तहत एक को मापने शासक रखें. पृष्ठीय और एक ऑपरेटिंग माइक्रोस्कोप जुड़ी कैमरा के साथ मस्तिष्क के ventral सतह की एक 25x बढ़ाई तस्वीरें ले लो. तस्वीरें पेट्री डिश और माइक्रोस्कोप उद्देश्य के बीच 90 डिग्री कोण पर लिया जाना चाहिए क्रम में मूल दूरी यों.
  8. एक और 4-5 पशुओं में इस प्रक्रिया को दोहराएँ.

3. सेरेब्रल वेसल्स के कार्बन ब्लैक इंक्स मिश्रण के साथ धुंधला हो जाना

  1. लाटेकस आधारित हमारे प्रोटोकॉल के साथ मस्तिष्क संवहनी धुंधला हो जाना के परिणाम की तुलना करने के लिए, Pelican Scribtol Schwarz स्याही (2LQ) के एक 1.5 मिलीलीटर EP ट्यूब में 900 μl साथ Herlitz Stempelfarbe स्याही (CB1) के 100 μl का एक मिश्रण तैयार करते हैं. CB1 और CB2 के 2 मिलीलीटर मिश्रण की एक 01:09 के अनुपात में एक कुल मात्रा बनाने के लिए तैयार करने के लिए दो EP ट्यूबों. इंसुलिन सीरिंज (1 दो अलग - अलग में मिश्रण लीजिएप्रत्येक मिलीलीटर) है. सीरिंज कैप और उन्हें एक पानी में स्नान जगह 37 डिग्री सेल्सियस तक गर्म एक और दो इंसुलिन सीरिंज में खारा के 2 मिलीलीटर ले लीजिए, और उन्हें एक पानी में स्नान जगह के रूप में अच्छी तरह से.
  2. पशु anesthetize और एक ही प्रक्रिया के रूप में papavarine हाइड्रोक्लोराइड के इंजेक्शन के अलावा ऊपर वर्णित को दोहराएँ. बाएं वेंट्रिकल में 2 मिलीलीटर salaine के इंजेक्शन के बाद, एक 2 कार्बन ब्लैक स्याही के बजाय रंग लाटेकस मिलीलीटर मिश्रण इंजेक्षन. 18-20 मिलीग्राम प्रति सेकंड पर थोड़ा दबाव के साथ हाथ से इंजेक्शन प्रदर्शन. क्लिप उतरते वक्ष इंजेक्शन के लिए पूर्व महाधमनी.
  3. पशु बलि, मस्तिष्क को हटाने और तस्वीरें ले लो.
  4. मस्तिष्क के लंबी अवधि के संरक्षण के लिए, 4% में मस्तिष्क डाल पीएफए ​​रातोंरात पीछा किया जब तक धीरे धीरे बढ़ती एकाग्रता के साथ sucrose साथ ऊष्मायन द्वारा अस्थायी मस्तिष्क पूरी तरह submerges (5% 15% द्वारा पीछा किया और फिर 30%). रंग लाटेकस साथ perfused जानवरों के दिमाग भी उसी तरह संरक्षित किया जा सकता है.
  5. निष्पादनएक और 4-5 पशुओं में प्रक्रिया. मस्तिष्क संवहनी विभिन्न आनुवंशिक पृष्ठभूमि या उपभेदों के कारण शरीर रचना विज्ञान में अंतर की तुलना करने के लिए, ApoE KO और SV129 चूहों के बराबर संख्या में प्रोटोकॉल क्रमशः दोहराने के लिए,.
  6. इस्कीमिक शर्तों के तहत नाड़ी शरीर रचना विज्ञान में अध्ययन करने के लिए 45 मिनट या गहरी संज्ञाहरण (सर्जरी के एक विस्तृत वर्णन इस लेख के दायरे से परे है के तहत एक एमसीए की intraluminal रोड़ा के मानक प्रोटोकॉल के अनुसार 90 मिनट के लिए क्षणिक फोकल मस्तिष्क ischemia प्रेरित; पाठक Doeppner एट अल, 2010) के लिए जाना जाता है. Reperfusion अवधि की योजना बनाई (1 दिन या 5 दिन) के अंत में, CB1 + CB2 स्याही केवल साथ संवहनी धुंधला हो प्रदर्शन और 37 डिग्री सेल्सियस पर 5-10 मिनट के लिए 2% टीटीसी समाधान के साथ पूरे मस्तिष्क दाग रोधगलितांश मात्रा की पहचान . टीटीसी mitochondrial एंजाइमों (विशेष रूप से succinate डिहाइड्रोजनेज) द्वारा लाल रंग formazan कम है. टीटीसी धुंधला हो के बाद, metabolically सक्रिय ऊतक गहरे लाल रंग के दाग जबकि infarcted ऊतक unstai रहता हैनेड और कारण बेकार और विकृत mitochondrial एंजाइम सफेद दिखाई देता है. उसी तरह के रूप में ऊपर वर्णित में छवियों को ले लीजिए.

4. मस्तिष्क संवहनी प्रदेशों के अध्ययन

  1. मस्तिष्क वाहिकाओं, मस्तिष्क या तो रंग लाटेकस या CB1 + CB2 स्याही ImageJ सॉफ्टवेयर (एक जावा आधारित सार्वजनिक डोमेन इमेज प्रोसेसिंग और विश्लेषण के लिए सॉफ्टवेयर का इस्तेमाल किया) के साथ विश्लेषण किया जा सकता है के साथ दाग की पृष्ठीय सतह की छवियों के सकल शारीरिकी का विश्लेषण. रंग लाटेकस साथ perfused दिमाग पोत पृष्ठीय सतह पर स्थित धुंधला हो जाना चर डिग्री दिखाने के लिए, जबकि CB1 + CB2 छिड़काव दोनों उदर और पृष्ठीय सतहों पर सभी जहाजों दाग सकता है.
  2. ImageJ सॉफ्टवेयर के साथ एक छवि फ़ाइल खोलें. एसीए और एमसीए के बीच सभी शाखामिलन संबंधी बिंदुओं की पहचान. एक शाखामिलन संबंधी बिंदु साइट है जहाँ पोत व्यास सबसेसंकरेमें या एसीए के पास की शाखाओं में बंटी अंक और एमसीए शाखाओं के बीच आधी दूरी, क्रमशः 2 के रूप में परिभाषित किया गया है.
  3. मिमी में पैमाने पर सेट. शाखामिलन संबंधी लाइन और 4 मिमी लांगुलिय सीधे लाइन ड्राइंग उपकरण और "उपाय" उपकरण का उपयोग कर मस्तिष्क के ललाट पोल पर midline के बीच की दूरी को मापने. ललाट पोल से दुमदारी से 6 मिमी एक ही मत करो. पशु प्रति 3-4 छवियों का विश्लेषण और मतलब मूल्य की गणना. जानवरों के विभिन्न समूहों के बीच मूल्यों की तुलना cerebrovascular शरीर रचना विज्ञान के परिवर्तन की पहचान. C57BL6 / जम्मू जानवरों में, एसीए और एमसीए के बीच लाइन शाखामिलन संबंधी दुमदारी से ललाट पोल से 6 मिमी से 4 मिमी midline के करीब का पता लगाया जा सकता है. ApoE KO चूहों में इस संबंध में कोई महत्वपूर्ण अंतर पेश करेंगे. इसके विपरीत, SV129 चूहों में शाखामिलन संबंधी लाइन ललाट पोल से आगे और 4 मिमी पर दोनों midline समानांतर और 6 मिमी दुमदारी से झूठ होगा.
  4. मैं संवहनी शरीर रचना का विश्लेषणn इस्कीमिक शर्तों, एक ही ऊपर उल्लेख किया गणना करते हैं. लाल और सफेद रंग के ऊतक metabolically सक्रिय ऊतक और परिगलित अस्थिर ऊतक का प्रतिनिधित्व मार्जिन के रूप में रोधगलन सीमा क्रमशः पहचानें. 4 मिमी और 6 मस्तिष्क के ललाट पोल से लांगुलिय मिमी midline से infarction सीमा के दूरी मापें. पशु प्रति 3-4 छवियों से मतलब मूल्य ले लीजिए. अलग ischemia और reperfusion अवधि के बीच परिणामों की तुलना करें.

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Representative Results

यहाँ वर्णित प्रोटोकॉल कृंतक मस्तिष्क vasculature की पारंपरिक लाटेकस आधारित दृश्य की तकनीकी सीमाओं पर काबू चित्रा 1A रंग लाटेकस कि निम्नलिखित छिड़काव से पता चलता है, केवल ventral सतह पर बड़े जहाजों दाग रहे हैं, पूरे पृष्ठीय सतह छोड़ने बेदाग. परिणाम भी अत्यधिक परिवर्तनशील है. केवल छह एसीए और एमसीए (नहीं दिखाया डेटा) मस्तिष्क की पृष्ठीय सतह पर दिखाई आंशिक धुंधला हो शो के बाहर एक जानवर. इसके विपरीत, CB1 + (चित्रा 1B) एक समान तरीके में दोनों छोटे और बड़े जहाजों के लिए पर्याप्त भरने में CB2 छिड़काव परिणाम. धुंधला हो गुणवत्ता के किसी भी बदलाव के बिना 7 दिनों तक स्थिर है. ImageJ कार्यक्रम का उपयोग करना, हम जंगली प्रकार C57BL6 / जम्मू चूहों (चित्रा 1C) में midline से एसीए और एमसीए के बीच शाखामिलन संबंधी अंक की दूरी मात्रा निर्धारित है. हम ApoE KO चूहों के साथ इन मूल्यों की तुलना करने के लिए किया जाए या नहीं आनुवंशिक modificati निरीक्षणक्षेत्रीय संवहनी शरीर रचना विज्ञान (चित्रा 1D) पर कोई प्रभाव नहीं पड़ा. हालांकि ApoE के बाहर दस्तक C57BL6 / जम्मू चूहों में मस्तिष्क जहाजों की शारीरिक संरचना को प्रभावित नहीं किया, एक महत्वपूर्ण अंतर C57bl/6J और SV129 उपभेदों (चित्रा 1E, एफ) के बीच देखा गया था. इस प्रकार, हम इस धुंधला हो जाना प्रोटोकॉल की व्यवहार्यता को दिखाने के लिए चूहों में आनुवंशिक या तनाव मतभेद के कारण मस्तिष्क vasculature की संरचनात्मक मतभेदों का मूल्यांकन करने में सक्षम हैं.

प्रयोगात्मक कृंतक मॉडलों स्ट्रोक में, टीटीसी धुंधला हो व्यापक रूप रोधगलन मात्रा का निरीक्षण करने के लिए प्रयोग किया जाता है. मस्तिष्क वाहिकाओं और रोधगलन की मात्रा के साथ - साथ दृश्य हमें ischemia-reperfusion के बाद morphological परिवर्तन का विश्लेषण करने का अवसर दे. इसलिए, हम सत्यापित कर दिया है चाहे या नहीं CB1 + CB2 की मध्यस्थता संवहनी धुंधला हो इस्कीमिक-reperfusion चोट (चित्रा 2A-एच) के विभिन्न डिग्री में टीटीसी धुंधला के साथ स्थिर था. हम आगे शाखामिलन संबंधी विश्लेषण किया है एसीए और एमसीए के बीच अंक 45 मिनट या ischemia के 90 मिनट के बाद या तो 1 दिन या 5 दिनों reperfusion अवधि (चित्रा मैं, जम्मू) के साथ मिलान. जैसी कि उम्मीद थी, midline और शाखामिलन संबंधी अंक के बीच औसत दूरी समूहों के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर दिखाया (चित्रा 2I, जम्मू) और गैर इस्कीमिक जानवरों (चित्रा 1F) के साथ एक ही श्रेणी में था. हालांकि, midline से रोधगलन सीमा दूरी काफी मतभेद, ischemia-reperfusion चोट (चित्रा 2k, एल) के एक उच्च डिग्री के साथ वृद्धि हुई रोधगलन मात्रा को दर्शाती है. ये आंकड़े बताते हैं है कि CB1 + CB2 धुंधला हो ischemia-reperfusion चोट और धुंधला हो जाना की स्थिरता के विभिन्न डिग्री के अधीन जब टीटीसी धुंधला के साथ संयुक्त पशुओं में reproduced किया जा सकता है.

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चित्रा 1. आनुवंशिक और तनाव मतभेद के साथ चूहों में मस्तिष्क संवहनी शरीर रचना विज्ञान के अवलोकन चित्रा 1A रंग लाटेकस केवल उदर सतह पर बड़े जहाजों दाग की कि intravascular छिड़काव से पता चलता है, जबकि पृष्ठीय सतह अस्थिर बनी हुई है. इसके विपरीत, CB1 + CB2 उदर पर दोनों छोटे और बड़े जहाजों और मस्तिष्क (चित्रा 1 बी) के पृष्ठीय सतहों के स्थायी धुंधला हो जाना में छिड़काव का परिणाम है. पूर्वकाल मस्तिष्क धमनी (एसीए) और जंगली प्रकार C57BL6 जम्मू / चूहों (चित्रा 1C) में midline से मध्यम प्रमस्तिष्क धमनी (एमसीए) के बीच शाखामिलन संबंधी बिंदुओं की दूरी की मात्रा उनके आनुवंशिक उत्परिवर्ती ApoE KO समकक्षों (चित्रा के साथ कोई अंतर नहीं दिखा ) 1D. हालांकि, C57BL6 / जम्मू और SV129 उपभेदों (चित्रा 1E, एफ) के बीच महत्वपूर्ण अंतर देखा जाता है. स्केल बार = 2mm. * गौरतलब दोनों C57BL6 / जम्मू जंगली प्रकार और ApoE KO चूहों से 4mm, पी. अलग पी <0.01 **.

चित्रा 2
चित्रा 2. इस्कीमिक दिमाग में संवहनी शरीर रचना विज्ञान के विश्लेषण. चित्रा 2A एच दिमाग के उदर और पृष्ठीय सतहों के शो छवियों 45 मिनट या 90 मिनट बाद 1 दिन या 5 दिन reperfusion समय ischemia अधीन है. बाएं पैनल CB1 + CB2 मध्यस्थता संवहनी धुंधला हो जाना पता चलता है, जबकि सही पैनल दोनों संवहनी धुंधला हो जाना और टीटीसी धुंधला हो के संयोजन से पता चलता है, इस्कीमिक-reperfusion चोट (चित्रा 2A-एच) के विभिन्न डिग्री में संवहनी धुंधला हो जाना की स्थिरता का संकेत है. पूर्वकाल मस्तिष्क धमनी (एसीए) और 45 मिनट या 90 मिनट या तो 1 दिन या 5 दिनों reperfusion अवधि डे के साथ मिलान ischemia के बाद मध्य मस्तिष्क धमनी (एमसीए) के बीच शाखामिलन संबंधी बिंदुओं का विश्लेषणसमूहों के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर (चित्रा 2I, जम्मू) picts. बहरहाल, महत्वपूर्ण अंतर midline से रोधगलन सीमा दूरी में उल्लेख किया जा सकता है, ischemia-reperfusion चोट (चित्रा 2k, एल) के एक उच्च डिग्री के साथ रोधगलन मात्रा की वृद्धि का संकेत है. पैमाने बार = 2 मिमी. * गौरतलब है कि एक दिन reperfusion, <0.05 पी, और ** 5 दिनों reperfusion, पी <0.01 के साथ 45 मिनट ischemia से अलग है. बड़ा आंकड़ा देखने के लिए यहां क्लिक करें .

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Discussion

CB1 + CB2 पुस्तिका इंजेक्शन द्वारा परफ्यूज़न बाहर किया जा सकता है सफलतापूर्वक द्वारा गहन प्रशिक्षण के बिना के रूप में यह किसी भी विशिष्ट डिवाइस के लिए कुछ दबाव 2,3 मतलब शामिल नहीं करता है. हमारे प्रोटोकॉल में छिड़काव के परिणामों की विविधता भी नगण्य है. केवल 16 गैर इस्कीमिक जानवरों के बाहर 1 जानवर और 3 20 इस्कीमिक जानवरों के बाहर अधूरा छिड़काव दिखाया है. इन मामलों में, बुलबुले के खारा जहाजों के रोड़ा प्रमुख छिड़काव के दौरान समावेश सबसे अधिक संभावना असफल परिणाम के कारण था.

हालांकि लाटेकस के छिड़काव मूल आरोही महाधमनी 2,3 के माध्यम से किया गया है बाहर किया जाता है, छिड़काव की वैकल्पिक मार्गों को भी छोड़ दिया 7,8 निलय या आम मन्या धमनी 9 सहित रिपोर्ट कर रहे हैं. हम या तो आरोही महाधमनी या बाएं वेंट्रिकल (अप्रकाशित टिप्पणियों) के माध्यम से के परिणामों के बाद छिड़काव में कोई महत्वपूर्ण अंतर पाया. जैसे, बादअपनी आसान पहुंच के कारण चुना गया है.

विशिष्ट कार्बन ब्लैक इस अध्ययन में वर्णित स्याही का चयन करने से पहले, हम व्यावसायिक रूप से उपलब्ध कार्बन ब्लैक स्याही की एक श्रृंखला के साथ intravascular छिड़काव के परिणामों का मूल्यांकन किया है. CB1 और CB2 उनके छिड़काव और धुंधला की दक्षता स्थिरता के लिए चुना जाता है. मूल रूप से एक सुलेख स्याही के रूप में निर्मित - 2.5% एक उच्च चिपचिपापन (10-50 MPa / s) के साथ कार्बन ब्लैक शामिल CB1 एक बहुत कम (1.1 Mpa / सेक) 2.1% कार्बन ब्लैक चिपचिपापन युक्त जबकि CB2 है. इन स्याही के व्यक्तिगत आवेदन करने के दोनों और धुंधला की दक्षता और स्थिरता के बारे में अपर्याप्त होना पाया गया है. नतीजतन, हम स्याही संयुक्त है और संयोजन अनुपात titrated. CB2 दोनों बड़े और छोटे जहाजों के स्थायी धुंधला हो में एक 1:09 अनुपात परिणाम: CB1 साथ परफ्यूज़न. इसलिए, धमनियों शाखामिलन संबंधी अंक आसानी से हो सकता है दो संवहनी प्रदेशों, अर्थात् के बीच जंक्शन को परिभाषित करने का पता लगाया जा सकता है. एसीए और एमसीए. ये चindings पिछले 2,10,11 रिपोर्ट के साथ संगत कर रहे हैं.

ApoE KO चूहों 5-8 गुना अधिक प्लाज्मा कोलेस्ट्रॉल के स्तर को वर्तमान और अत्यधिक atherosclerosis विकासशील जब कोलेस्ट्रॉल अमीर 12 आहार पर डाल करने के लिए अतिसंवेदनशील होते हैं. चाहे आनुवंशिक संशोधन भी मस्तिष्क वाहिकाओं के शरीर रचना विज्ञान को प्रभावित करता है अभी तक नहीं बताया गया है. दूसरी ओर, SV129 चूहों को पहले से ही C57BL6 जम्मू / उनके अलग संवहनी 2 शरीर रचना के कारण चूहों की तुलना में बड़ा रोधगलन मात्रा उपस्थित करने के लिए रिपोर्ट कर रहे हैं. हम पशुओं के इन तीन समूहों में हमारे प्रोटोकॉल सत्यापित नाड़ी शरीर रचना विज्ञान में अंतर की तुलना.

इस्कीमिक दिमाग में धुंधला हो जाना प्रोटोकॉल को मान्य करने के लिए, हम क्षणिक फोकल मस्तिष्क ischemia शामिल करने के लिए और पिछले अध्ययनों, जो मुख्य रूप से एमसीए 2-4, 10,13 के स्थायी रोड़ा पर ध्यान केंद्रित करने के लिए विपरीत में reperfusion का प्रभाव शामिल हैं. जैसी कि उम्मीद थी, हम एल के पैटर्न में कोई महत्वपूर्ण मतभेद का पालन नहीं कियासम्मिलन C57BL6 जम्मू / चूहों में अलग इस्कीमिक और reperfusion अवधि के बाद ine. Ischemic और गैर इस्कीमिक गोलार्द्धों के बीच पोत व्यास में कोई परिवर्तन नहीं मनाया गया, शायद, अब reperfusion समय पर इस तरह के बदलाव होते हैं, यानी 2-3 सप्ताह के बाद स्ट्रोक 14. अंत में, हमारे द्वारा प्रदर्शन प्रोटोकॉल एक कम जटिल, लागत प्रभावी तकनीक है, जो आसानी से पारंपरिक लाटेकस आधारित छिड़काव किया जा सकता है की तुलना में reproduced मस्तिष्क vasculature कल्पना है. यह विभिन्न शारीरिक और रोग की स्थिति में मस्तिष्क और वाहिकाओं संवहनी प्रदेशों के सकल शरीर रचना का विश्लेषण करने के लिए एक प्रभावी उपकरण के रूप में माना जा सकता है. टीटीसी धुंधला इस तकनीक के साथ संयोजन करके एक नया करने के लिए मस्तिष्क में संवहनी आपूर्ति क्षेत्र के संदर्भ में एक ischemic अपमान की हद तक पहचान करने का अवसर प्रदान करता है.

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Disclosures

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

Acknowledgements

हम Britta Kaltwasser उसे उत्कृष्ट तकनीकी सहायता और महेश कुमार तेली वीडियो फिल्माने की तैयारी को व्यवस्थित करने के लिए शुक्रिया अदा करना चाहते हैं.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Scribtol Schwarz (CB2) Pelican, Germany 221 135
Stempelfarbe (CB1) Herlitz PBS AG, Germany 10417202
Gedeo Latex Pebeo, France 13042B

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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