간 간선 재건과 부분 Orthotopic 간 이식의 쥐 모델에 대한 외과 절차

Medicine
 

Summary

쥐의 Orthotopic 간 이식은 생명 의학 연구에 필수적인 실험 모델입니다. 여기 50 % 부분 이식을 사용하여 간장 동맥 재건과 orthotopic 쥐의 간 이식에 대한 수술 절차를 제시한다.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Nagai, K., Yagi, S., Uemoto, S., Tolba, R. H. Surgical Procedures for a Rat Model of Partial Orthotopic Liver Transplantation with Hepatic Arterial Reconstruction. J. Vis. Exp. (73), e4376, doi:10.3791/4376 (2013).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

전체 또는 일부 그라프 트를 사용하여 쥐의 Orthotopic 간 이식 (올트)는 이러한 이식을 보존하고 국소 빈혈 reperfusion - 상해 1,2, 면역 반응 3,4, 혈류 역학 5,6에 대한 연구로 이식 연구에 필수적인 실험 모델이며, 소형에 대한 크기 증후군 7. 쥐 올트는 실험 수술에서 가장 어려운 동물 모델들입니다 배울 수있는 시간이 오래 걸릴 고급 microsurgical 능력을 요구합니다. 따라서,이 모델의 사용이 제한되었습니다. 결과의 신뢰성 및 재현성 이러한 복잡한 동물 모델이 사용되는 실험의 핵심 구성 요소입니다 때문에,이 모델에 잘 표준화하고 정교한 절차에서 훈련 할 쥐 올트에 관련된 의사 필수적입니다.

첫 번째 모델은 describ 때부터 다양한 기술과 쥐의 올트의 수정은 8을보고되었지만그들은 정말 좋은 정도 재건 절차를 단순화하기 때문에 리 외하여 에드. 1973 년 9 간장 동맥 재건 10 Kamada 외하여 커프 문합 기술의 도입을 제거. 11,이 모델의 주요 발전했다 . Kamada 외.에 의해 모델에서 간 rearterialization도 제거되었습니다. 쥐가 간 이식 후 간장 동맥 흐름없이 살아남을 수 있기 때문에 간 arterialization의 가치 이상의 상당한 논란이 있었다. 그러나, arterialized 모델의 생리적 우수성이 점점 특히 담즙 덕트 시스템 8,12, 간 무결성 8,13,14를 보존의 관점에서, 인정되었습니다.

이 문서에서는, 우리는 예 생체 간 resec 후 50 % 부분 이식을 사용하여 간장 동맥 재건과 올트의 쥐 모델에 대한 자세한 수술 절차를 제시기. 과와 간장 동맥에 대한 스텐트 기술, 포털 정맥의 커프 기술, 위에와 infrahepatic 대정맥에 7-0 폴리 프로필렌 연속 봉합 : 각 혈관과 담즙 덕트의 재건 절차는 다음과 같은 방법으로 수행됩니다 담즙 덕트.

Protocol

1. 기본 기술 및 공통 절차

  1. 모든 절차는 깨끗하지만 nonsterile 조건에서 수행됩니다.
  2. 쥐의 복부가 열려되면, 모든 절차는 16X의 배율의 수술 현미경으로 수행됩니다. 담즙 덕트와 간장 동맥에 스텐트 삽입하고, 간 동맥의 재건, infrahepatic 대정맥 : 예외가 10X에서 수행된다 예 생체 간 절제술, 다음과 같은 절차 25x에서 수행됩니다 아르 (IHVC) 및 담즙 덕트.
  3. 면봉은 기관의 부드러운 조작, 조직의 무딘 절개, 그리고 압축 지혈을 위해 사용됩니다. lactated 벨소리 솔루션으로 흠뻑 압박 붕대 면봉은 (5 × 5 ㎝) 간 또는 장을 철회하고, 장기 촉촉 유지하는 데 사용됩니다. Satinsky 클램프가 왼쪽 또는 IHVC 주위에 수술 분야를 확대 할 수있는 쥐의 꼬리쪽으로 거즈 덮인 장내의 철회를 사용할 수 있습니다.
  4. 모든 ligations는 4-0 실크 스레드가 사용되는 예 생체 간 절제술, 중 간 엽의 pedicles을 제외한 6-0 실크 스레드로 수행됩니다. 끈은 두 번째 끈은 처음에 거리를 만들 수 있습니다, 두 출혈도 잡았 점 사이의 분열이 제대로 수행 할 수 있도록 출혈도 잡았 시점에 적절한 긴장을 제공하기 위해 DeBakey 겸자 또는 다른 악기에 의해 당겨 수 있습니다.
  5. 모든 정맥 주사가 음경 정맥을 통해 수행됩니다.
  6. suprahepatic 대정맥 (SHVC), 포털 정맥, 간 동맥, 그리고 담즙 덕트, 오일 기반 점토의 작은 덩어​​리의 재건 절차 동안 주변 혈관 클램프 또는 모기 포셉의 손가락 반지를 개최하는 데 사용됩니다 위치에 단단히 고정 유지합니다.

2. Presurgical 준비

  1. 230 250g 사이의 무게가 남성 루이스 쥐가 간 이식을위한 기증자와받는 사람으로 사용됩니다. 쥐들이 모두마취의 유도 때까지 물과 음식을 무료로 이용하실 수 있습니다 되었죠.
  2. 포털 정맥 (그림 1) 혈압계는 : 현미경 11 호 메스 블레이드 14 게이지 카테터를 절단하여 포털 정맥의 끝단을 준비합니다. 수갑은 몸과 확장, 2 mm의 길이 각각 구성되어 있습니다. 스레드가 해제 미끄러없이 즉석에서 단단히 고정 할 수 있도록 모기 포셉과 원주 단계로 커프 단계의 벽을 클램핑하여 즉석에서 원주 홈하십시오.
  3. 담즙 덕트와 간장 동맥 (그림 1) Stents : 담즙 덕트에 대한 간동맥 4 mm의 길이와 5mm로 카테터의 양쪽 끝에 bevels을 생산하기 위해 현미경으로 메스 컷은 24 게이지 카테터 .

3. 기부자 운영

기증 쥐의 간 제거의 스키마는 그림 2에 표시됩니다. 이 절차는 약이 필요imately 30-35 분.

  1. 유지 보수 2 L / 분에서 마취의 유도 4 L / 분의 유량에서 100 % 산소 및 1.5 권의 %의 isoflurane 4 권 %의 흡입으로 쥐를 마취. 진통제로 피하에 buprenorphine를 (0.1 밀리그램 / kg) 주사. 가열 패드에 쥐를 놓고, 그리고 자기 fixator의 후퇴 시스템 (그림 3A)를 사용하여 상부 팔을 해결할 수 있습니다. 쥐의 전체 복부 지역에서 털을 면도하고, povidone-요오드 솔루션을 해당 피부를 소독.
  2. 양국 확장과 중간 선 절개하여 복부를 엽니 다. SHVC이 ventrally 상승 될 수 있도록 쥐의 뒤쪽 아래에 5 ML 주사기를 삽입합니다. 모기 포셉을 사용하여, 클램프 및 머리쪽으로 칼 돌기를 당겨, 그리고 수술 분야 (그림 3a를) 열 subcostal 견인기를 적용 할 수 있습니다.
  3. 낫 모양의 인대 및 왼쪽 삼각 인대를 해부. 다음 ligate와 왼쪽 phrenic 정맥을 나눕니다.
  4. RETR젖은 거즈 면봉으로 위쪽으로 중간과 왼쪽 측면 엽을 연기 해. 양극성 포셉 사용 응고와 왼쪽 측면과 앞 꼬리가있는 엽의 사이의 파라 식도 혈관을 나눕니다.
  5. 쥐의 왼쪽에 복부 외부 창자를 이동하고 젖은 거즈 면봉으로를 다룹니다. 젖은 거즈 면봉으로 위쪽으로 오른쪽 측면 엽을 철회. retroperitoneal 조직에서 IHVC를 분리, 그리고 그라프 트 제거하기 전에 나중에 분리 될 수있는 권리 부신 정맥을 ligate.
  6. 담즙 덕트 (그림 3B)에 스텐트를 삽입하려면 :
    1. gastroduodenal 동맥의 분기 수준에서 담즙 덕트를 Ligate. 담즙 덕트를 둘러싼 부드러운 조직을 최대한 보존하고, 간장 동맥에서 덕트 담즙의 분리는 담즙 덕트에 대한 충분한 동맥 혈액 공급을 확보하기 위해 피해야한다.
    2. 바로 마이크로 가위로 anteri에 작은 절개를또는 출혈도 잡았 지점에 인접 담즙 덕트의 벽. 왼쪽 손에 직선 마이크로 포셉과 절개의 앞쪽 벽을 누른 상태에서 오른쪽 손에 곡선 마이크로 포셉을 사용하여 덕트에 스텐트를 삽입하고, 6-0 실크 스레드로 고정하십시오. 스레드가 나중에 문합 개최 할 수 있도록 컷 중 하나는 담즙 덕트에 스레드의 종료는 4 mm의 길이에 보관됩니다.
  7. ligating하고이를 나누어 pyloric과 지라 정맥에서 포털 정맥을 해방.
  8. gastroduodenal 동맥을 Ligate과 나눈 다음 그 루트에 췌장 머리에서 일반 간장 동맥 (CHA)를 분리. 면봉으로 오른쪽으로 간을 회전하고, 간, 식도의 뒷면 주위의 인대를 해부.
  9. 간 절단을위한 준비의 완료에, 견인기, 칼 돌기의 모기 포셉, 그리고 쥐의 뒷면 아래의 5 ML 주사기를 제거합니다. abdomina에 장을 반환난 캐비티.
  10. 음경 정맥을 통해 정상적인 생리 식염수의 2 ML의 헤파린 - 나트륨 500 IU를 삽입. 3 분 후, 5 ML 주사기, 모기 포셉, 그리고 견인기를 재설정하십시오. 그 루트에 인접 CHA을 Ligate. 컷을 유지 한 오래 CHA에 출혈도 잡았 스레드의 종료됩니다.
  11. 모기 포셉과 오른쪽 신장 정맥에 IHVC 가까이 클램핑 한 후 지라 정맥의 그루터기 아래의 일회용 마이크로 혈관 클램프와 함께 포털 정맥 클램프. 포털 정맥의 앞쪽 벽을 절개하고, 포털 정맥에 18 게이지 카테터를 삽입합니다.
  12. 20cm H 2 O.의 정수압에 추위 히스티딘 - 트립토판 - ketoglutarate (HTK) 솔루션의 60 ML과 함께 현장에 간 Perfuse 즉시 그 이후, 횡경막을 잘라 intrathoracic 정맥을 가로로 쪼개다, 그리고 재관류 솔루션은 간 (그림 3C)에서 헹구어 할 수 있도록 IHVC 개방의 앞쪽 벽을 잘라.
  13. 디로 IHVC 고정sposable 마이크로 선박은 간 아래 클램프. 약간 간하고 오른쪽 신장 정맥 사이의 중간 지점 아래 IHVC을 해부하여 소비세 간, 지라 정맥의 그루터기 아래의 포털 정맥, 횡격막, 간의 뒷면에 남아있는 인대, 오른쪽 부신 정맥, 와 루트에있는 CHA. 얼음 조각들로 가득 찬 플라스틱 상자에 장착 된 금속 컵에 차가운 HTK 솔루션에서 excised 간을 배치합니다.

4. 예 생체 이식 준비

간 이식에 대한 모든 절차는 얼음처럼 차가운 HTK 솔루션 가득 금속 컵에서 수행됩니다. 예 생체 이식 준비는 약 30 분을 필요로합니다.

  1. 포털 정맥 (그림 4)에 커프의 첨부 파일 :
    DeBakey 불독 클램프와 포털 정맥 트렁크를 고정. 컵 (그림 4A, B)을 통해 브리징 위치에 클램프를 놓습니다. 소매를 통해 포털 정맥을 올리고과 집게다시 함께 12시 위치 (그림 4C)에서 즉석의 확장과 포털 정맥. 7시 위치 (그림 4D)에서 즉석 외부 지라 정맥의 몸통 위치로 즉석를 통해 포털 정맥의 벽을 뒤집다, 그리고 6-0 실크 스레드 (그림 4E)와 포털 정맥을 확보 .
  2. 간장 동맥 (그림 5)에 스텐트를 삽입하려면 :
    포셉하여 격막의 양쪽 가장자리를 고정하여 간을 수정하고, 바로 DeBakey 불독 클램프 (그림 5A)과 출혈도 잡았 스레드를 개최하여 CHA를 당깁니다. 바로 마이크로 가위로 CHA의 앞쪽 벽에 작은 절개를합니다. 왼쪽 손으로 직선 마이크로 포셉과 절개의 앞쪽 벽을 보유하고 오른손으로, 곡선 마이크로 포셉을 사용하여 CHA에 스텐트를 삽입합니다. 스텐트는 이전에 헤파린 - 나트륨 용액 (100 IU / ML) (그림 5B-D)로 세척합니다. 에스ecure 6-0 실크 스레드와 스텐트, 그리고 컷 중 하나를 유지 4 mm의 길이에 스레드의 종료됩니다. 차가운 HTK 솔루션의 5 ML과 동맥 카테터를 통해 간을 플러시.
  3. : 50 % 간 절제술 (그림 6)의 경우
    1. 곳에서 문제를 해결 할 수있는 모기 포셉과 뒤쪽 꼬리가있는 엽의 고정. 4-0 실크 스레드 (그림 7A)과의 작은 꽃자루의 결합 후 엽을 잘라내 다. 같은 방식으로, 앞 꼬리가있는 엽의를 제거합니다.
    2. 플라스틱 상자를 90도 회전합니다. 횡경막과 중간 엽의 왼쪽 부분의 오른쪽 가장자리를 고정. 중간 엽의 양국 간 부분의 경계의 위쪽 가장자리에 작은 절개를 확인하고 결합 후 왼쪽 부분 (그림 7B)를 제거하십시오. 4-0 실크 스레드와 작은 꽃자루의 결합 후 왼쪽 측면 엽을 제거합니다. 바이폴라 집게로 조심스럽게 resected 간 표면을 부식. 그 결과, 간 질량은 감소된다pproximately 50% 15 일 (7C 그림, D).
  4. : SHVC의 plasty (그림 8)에 대한
    모기 포셉 (그림 8A)와 격막의 양쪽 가장자리를 고정하여 간의 위치를 수정합니다. 해당 가로막을 제거하여 SHVC의 앞쪽 벽을 잘라. 나중에 문합 (그림 8B)에 대한 봉합 숙박으로 두 모서리에 외부에서 내부에 두 개의 7-0 폴리 프로필렌 봉합을 연결합니다. 그런 다음 SHVC의 뒤쪽 벽을 잘라.
  5. 4에 간 이식을 저장 ° 차가운 물 목욕의 HTK 솔루션에서 C.

5. 받는 운영

받는 사람 쥐에 이식 주입의 스키마는 그림 9에 표시됩니다. 받는 작업 anhepatic 시간 10-11 분, IHVC 클램핑 시간이 약 23-24 분을 포함 60-70 분을 필요로합니다.

  1. DO에서와 같은 절차를 수행양국 확장 (그림 10A)이없는 중간 선 절개하여 복부의 개통을 제외하고도 작업 (3.1-3.4).
  2. IHVC 주위에 수술 필드를 얻기 위해 십이지장과 전체 창자의 오른쪽 위에 젖은 거즈 면봉를 놓습니다. 왼쪽 subphrenic 구멍에 왼쪽 측면과 중간 엽 (叶)을 넣고 젖은 거즈 면봉으로 위쪽으로 오른쪽 측면 엽을 철회. retroperitoneal 조직에서 IHVC를 분리합니다. Ligate하고 오른쪽 부신 정맥 (그림 10B)를 나눕니다. 젖은 거즈와면 면봉으로 왼쪽으로 간을 회전하고 간 뒤 주변의 인대를 해부.
  3. 해부학 적 위치로 오른쪽 측면 엽을 반환합니다. 위쪽 중간과 왼쪽 측면 엽 (叶)을 커버하고 철회를 젖은 거즈 면봉를 놓습니다. 단지 꼬리가있는 엽의 지점 아래에있는 담즙 덕트를 가로로 쪼개다. 담즙 덕트를 둘러싼 부드러운 조직을 최대한 보존해야합니다. 컷의 유지 하나는 일의 끝길이 4 mm에서 담즙 덕트에 출혈도 잡았를 참조하십시오.
  4. Ligate과 CHA에서 분기로 3 mm 거리에있는 gastroduodenal 동맥과 적절한 간장 동맥을 나눕니다. 그런 다음, CHA의 끝에서 동맥의 Y-구조를 확인하십시오. 컷을 유지 한 길이 4-mm에서 적절한 간장 동맥에 출혈도 잡았 스레드의 종료됩니다. 면봉으로 오른쪽으로 간을 회전하고, 왼쪽에서 간 뒤 주변의 인대를 해부.
  5. lactated 벨소리 솔루션 2 ML의 정맥 주사 후, 바로 오른쪽 신장 정맥 위의 금속 마이크로 혈관 클램프로 IHVC 클램프. 쥐의 왼쪽에서 모기 포셉으로 간 hilum에서의 분기 수준에서 포털 정맥을 고정. 주변 혈관 클램프로 오른쪽에서 가로막와 함께 SHVC을 고정하고, 석유 기반의 진흙 덩어리에있는 클램프의 손가락 반지를 해결할 수 있습니다.
  6. (기간 anhepatic 시간 동안 0.4 권의 %로 isoflurane으로 마취를 줄의) 포털 정맥의 교차 클램핑. 소비세 SHVC, 포털 정맥, 다음과 같은 수준에서 IHVC 해부하여받는 원시 간 : SHVC, SHVC과 간 사이의 국경, 그냥 모기 포셉의 턱 위에, 그리고 포털 정맥 및 약간 간하고 오른쪽 신장 정맥 (그림 10C) 사이의 중간 지점 아래 IHVC. orthotopically 간 이식을 놓으십시오.
  7. : 연속 봉합 (그림 11)에 의해 SHVC의 문합에 대한
    1. 혈관 벽을 쥐었고 또는 suturing 바늘을 쥐고 suturing 절차를 수행하는 동안 왼쪽 손에 곡선 마이크로 포셉을 사용합니다. 먼저, 매듭 (또는 모든 suturing 절차가 완료 후 그것을 묶을 수) 매는 다음 그라프 트의 오른쪽 모서리에 첨부 된 7-0 폴리 프로필렌을 사용하여 내부에서 외부로받는 SHVC에서 숙박 봉합을 배치합니다. 다음, 왼쪽 옥수수에서 같은 방법으로 두 번째 숙박 봉합을 배치실행중인 봉합의 시작 스티치 될 것 어. 문합을 확장하려면 파악하고 superiolaterally 부드러운 견인 (그림 11A, B)와 두 모서리에 DeBakey 불독 클램프를 사용하여 봉합를 유지하고 있습니다.
    2. 피어스 밀접하게 매듭이 외부에 내부에 외부에서 이식 측면에 벽을 통해 왼쪽에서 봉합, 그리고 오른쪽 모서리 (그림 11c)에 7-8 바늘과 intraluminally SHVC의 뒤쪽 행을 봉합 해. 신중하게되므로 내부 루멘은 서로 직면하고있는 처음 몇 바늘을 만듭니다. 바깥으로 그라프 트 측에서 선박을 통해 오른쪽에서, 피어스는 7-0 폴리 프로필렌.
    3. 다음 약 10 바늘 (그림 11d)로, 오른쪽에서 왼쪽으로, 외부에서 앞 행을 봉합 해. 앞 행의 완료 전에 기포를 제거하는 lactated 벨소리 솔루션 내부를 플러시. 가까이로 앞 행에서 마지막 스티치를숙박 왼쪽 모서리에 봉합하고 그들을 함께 묶어 가능한.
  8. : 커프스 기술 (그림 12)에 의해 포털 정맥의 재건을 위해
    1. 젖은 거즈 면봉으로 위쪽으로 중간과 왼쪽 측면 엽 (叶)을 취소. 오른쪽에서 일회용 마이크로 선박 클램프를 사용하여 pyloric 정맥과의 합류에서받는 사람 포털 정맥을 고정. 모기 포셉 그 클램프 진흙에 포털 정맥을 수정하고, 간 hilum (그림 12A, B) 방향으로 포셉의 끝을 당겨.
    2. 단지 모기 포셉의 턱 아래에있는 포털 정맥의 앞쪽 벽을 절개. 받는 사람 포털 정맥 및 lactated 벨소리 솔루션을 즉석 내부를 씻으십시오. 왼쪽 손에 직선 마이크로 포셉, 오른쪽 손에 곡선 마이크로 포셉과 즉석의 확장과 절개의 앞쪽 벽을 잡아. 깊이받는 사람 포털 정맥에 수갑 넣고으로 확보원주 6-0 실크 스레드 (그림 12C-F).
    3. 포털 정맥과 SHVC의 클램프를 풀어 후 간을 reperfuse. 쥐의 뒷면에서 5 ML 주사기를 제거하고, 0.8 권의 %로 isoflurane의 농도를 증가시킵니다.
  9. 스텐트 기술 16 (그림 13)에 의한 간장 동맥의 재건을 위해 :
    1. 먼저, 왼쪽에서 모기 포셉로받는 적절한 간장 동맥의 실을 보유하고 간 hilum쪽으로 당겨 한 다음 췌장에 오른쪽 가까이 (그림 13A)에서받는 CHA 클램프.
    2. 직선 마이크로 포셉으로 깔대기 모양의 열기를 만들기 위해받는 CHA의 끝 부분에 Y-구조의 분기에 작은 절개를합니다. 곡선 마이크로 포셉으로 이식 CHA에 배치 스텐트를 잡아. 헤파린 - 나트륨 용액 (100 IU / ML) 각 내강을 세척 한 후 다시에 스텐트를 밀어cipient의 CHA과 6-0 실크 스레드로 고정하십시오. 함께 있으므로 두 CHAs 가까이 서로 anastomotic 사이트 (그림 13B)의 감소 긴장과 얻을 하나받는 CHA에서이 스레드의 끝과 그라프 트 CHA에서 4 mm 스레드를 묶어주세요. 그 후 클램프를 놓습니다.
  10. : 연속 봉합 (그림 14)에 의해 IHVC의 문합에 대한
    SHVC과 동일한 방식으로 합한다,하지만 미세한 입으로 더 많은 바늘 (그림 14A-D)을 사용합니다. 마지막 스티치에서 봉합의 매는는 제거 할 수 있습니다, 또는 묶는도 단단히 매는으로 인한 anastomotic 협착을 방지하기 위해 성장 인자를 수행 할 수 있습니다. declamping 후, 1.0 권 %로 마취의 농도를 증가시킵니다. 문합이 stenotic 보이는 경우, 양자 숙박 봉합를 당기는하거나 문합 부위를 확장하기 위해 부드럽게 앞 행을 확대하여 anastomotic 사이트를 팽창.
  11. 8.4 % 나트륨 중탄산염 solutio의 0.5 ML를 관리N intravenously lactated 벨소리 솔루션의 1.0 ML로.
  12. 출혈과 담즙의 유출을 방지하기 위해 resected 간 표면을 밀봉하는 Tachosil의 작은 조각을 적용합니다.
  13. 스텐트 기술에 의해 담즙 덕트의 재건을 위해 :
    1. 왼쪽에서 모기 포셉으로받는 담즙 덕트의 스레드를 잡아. 진흙에서 모기 포셉를 수정하고, 간 hilum 대한 포셉의 끝을 당겨.
    2. 복원 담즙 덕트가 너무 오래 걸리 진 않을 것이다 않도록 적절한 수준에서 담즙 덕트의 작은 절개를합니다. 트위스트를 피하기 위해 세심한주의와받는 사람 덕트에 그라프 트 담즙 덕트에 배치 스텐트를 삽입하고, 6-0 실크 스레드로 고정하십시오. 이식 덕트에받는 덕트 및 4 mm 스레드에서이 스레드를 묶어 함께 있으므로 두 구멍은 anastomotic 사이트의 감소 긴장 서로에게 가까이 가려고하는.
  14. 재건 절차의 완료에 1m를 삽입5 % 포도당 용액의 리터 intravenously (그림 15).
  15. 적절한 지혈을 확인한 다음 두 레이어에서 연속 4-0 Vicryl 봉합하여 복부 절개를 닫습니다.

6. 수술 치료 및 후속

즉시 수술 후 정상적인 생리 식염수의 1.5 ML의 총에 피하 cefuroxime 나트륨의 주입 (16 MG / kg)과 buprenorphine (0.1 밀리그램 / kg)를받는 쥐를 취급합니다. 쥐가 예열 ​​공기 (30-35 ° C)와 산소 공급과 특별 중환자 실 케이지에서 60 분에 복구 할 수 있습니다. 3 일 동안 피하 진통제로 buprenorphine (0.1 밀리그램 / kg) 12 시간마다 주사. 이후 일반 케이지에 쥐를 이동하고 물과 음식에 광고 libitum 액세스를 제공합니다.

Representative Results

모든받는 사람 쥐 (N = 20) (각 시점에서 N = 5) 포털 reperfusion 후 (7 일) 1, 3, 24, 그리고 168 시간의 혈액 샘플링에 대한 계획 안락사까지 뚜렷한 합병증없이 살아 남았습니다. 혈액 샘플은 27 게이지 바늘로 직접 주사하여 IHVC에서 수집되었다. 10 분에 5,340 XG에서 원심 분리 후, 혈청 샘플이 획득되었으며 이식 후 간세포 손상의 정도를 반영 알라닌 아미노 전이 효소 (ALT) 수준에 대해 분석했다. 혈청 ALT 수준의 변화의 시간 코스는 그림 16에 표시됩니다. ALT 수준은 24 시간에서 피크에 도달 (± 표준 편차 의미 : 212.6 ± 67.9 IU / L)를 한 후 168 시간 (33.6 ± 6.8 IU / L)에 정상 범위 내에을 거부했다.

그림 1
그림 1. 1 일부터 포털 정맥 (PV)에 대한 커프4 게이지 카테터 및 24 게이지 카테터에서 간장 동맥 (HA) 및 담즙 덕트 (BD)를 stents.

그림 2
그림 2. 기증 쥐의 간 제거의 스키마 BD, 담즙 덕트,. HA, 간장 동맥, IHVC, infrahepatic 대정맥, PV, 포털 정맥, SHVC, suprahepatic 대정맥.

그림 3
그림 3. 기부자 작동. 가. 쥐가 자기 fixator의 후퇴 시스템을 가열 패드에 표시됩니다. 복부는 양국 확장과 중간 선 절개가 열립니다. B는. 스텐트의 삽입은 담즙 덕트에. C는. 간 재관류은 포털 정맥을 통해. 약어 설명 아르그림 2 거구나.

그림 4
4 그림. 포털 정맥에 커프의 첨부 파일. A, B. 포털 정맥 트렁크를 grasps DeBakey 불독 클램프는 금속 컵 위에 배치됩니다. 컵은 얼음 조각. C로 가득 플라스틱 상자에 장착되어 있습니다. 포털 정맥은 즉석으로 삽입됩니다. 라이. 포털 정맥의 벽이 7시에 즉석 외부 지라 정맥의 그루터기와 함께 즉석으로 everted 수 있습니다 시 위치 12시 위치에서 즉석의 확장. 전자. 포털 정맥은 즉석에서 원주 6-0 실크 스레드와 함께 고정된다. 검은 색 화살표는 지라 정맥의 그루터기를 나타냅니다.

그림 5
그림 5. 예 생체간장 동맥에 스텐트 삽입. 가. 간은 횡경막의 두 가장자리를 고정으로 고정되어 있으며, 간장 동맥은 바로 동맥에 출혈도 잡았 스레드를 잡고 당겨 있습니다. B는. 간장 동맥에 작은 절개의 앞쪽 벽이 바로 마이크로 포셉와 함께 개최됩니다 . C, D. 스텐트는 간장 동맥에 삽입하고 6-0 실크 스레드와 함께 고정된다.

그림 6
6 그림. 예 생체 50 % 간 절제술의 스키마는. 회색의 엽 (叶)이 제거됩니다. ACL, 앞 꼬리가있는 엽, PCL, 후부 꼬리가있는 제품 엽, LLL, 왼쪽 측면 엽, LML, 중간 엽의 왼쪽 부분, 중간 엽의 RML, 오른쪽 부분, SRL, 우수한 오른쪽 측면 엽, IRL, 열악한 오른쪽 측면 엽.


그림 7. 전 생체 50 % 간 절제술. 중간 엽. C의 왼쪽 부분의 작은 꽃자루의. 뒤쪽 꼬리가있는 엽의의 작은 꽃자루의 결합. 나. 결합. 50 % 절제 전에 간. 라. 50 % 절제 후 간.

그림 8
그림 8. suprahepatic 대정맥의 예 생체 plasty. 가. 간은 모기 포셉과 격막의 양쪽 가장자리를 고정으로 고정됩니다. 나. 유지 봉합을 7-0 폴리 프로필렌으로이 두 코너에 부착된다.

그림 9 9 그림. 받는 사람 쥐에 이식 주입의 스키마. 재건 절차는 7-0 연속 봉합, 커프 기술에 의해 포털 정맥 (PV), 그리고 간장과 위에와 infrahepatic 대정맥 (SHVC 및 IHVC)에 대해 수행됩니다 스텐트 기술에 의해 동맥 (HA) 및 담즙 덕트 (BD).

그림 10
10 그림. 기본 간을 제거 할 때까지받는 작업. 가. 복부은 중간 선 절개가 열립니다. 나. 오른쪽 부신 정맥은 출혈도 잡았 있습니다. C는. 원시 간은 excised 수 있습니다. 약어는 그림 2에 설명되어 있습니다.

그림 11
11 그림. suprahe의 문합patic 대정맥. 는 나. suprahepatic 대정맥의 주변 혈관 클램프는 석유 기반 진흙의 덩어리에서 해결되었습니다. 두 코너의 숙박 봉합은 superiolaterally 문합 부위를 확대하기 위해 부드러운 미끄러지는 유지됩니다. C는. 진행 뒤 행의 연속 intraluminal 봉합사가. D는. 진행 앞 행의 연속 봉합은.

그림 12
그림 12. 포털 정맥의 재건. A, B. 포털 정맥을 클램핑 모기 포셉은 석유 기반의 진흙에서 수정 및 간 hilum쪽으로 당겨 있습니다. CF는. 포털 정맥에 즉석의 삽입.

그림 13
13 그림. 간장 동맥의 재건. A, B. g 적절한 간장 동맥 (PHA)과 gastroduodenal 동맥 (GDA)의 분기에서받는 일반적인 간장 동맥 (CHA)로 스텐트의> 삽입.

그림 14
14 그림. infrahepatic 대정맥의 문합. infrahepatic 대정맥의. 두 모서리에있는 숙박 봉합. 나. 뒤쪽 행의 연속 봉합 해. 다. 앞 행의 연속 봉합 해. 라. Reperfusion. 약어는 그림 2에 설명되어 있습니다.

그림 15
그림 15. 모든 재건 절차가 완료됩니다. 약어는 그림 2에 설명되어 있습니다.

</ HTML"그림 16"SRC = "/ files/ftp_upload/4376/4376fig16.jpg"/>
그림 16 혈청 알라닌 아미노 전이 효소 (ALT) 수준의 변화의 시간 코스 수술 (N = 20, N 각 시점에서 = 5).. 데이터는 표준 편차를 나타내는 오류 바가있는 수단으로 표현됩니다. ALT 수준은 24 시간에서 피크를 (212.6 ± 67.9 IU / L)에 도달 한 후 168 시간 (33.6 ± 6.8 IU / L)에 정상 범위 내에을 거부했다.

Discussion

쥐 올트의 첫 번째 모델은 리 외에 의해보고되었다. 1,973 9, 간장 동맥을 포함한 모든 선박은 손 놓은 방법으로 재건되었으며 extracorporeal portosystemic 션트가 사용 된 인치 이 모델은 기술적으로 복잡하고 수행하는 것이 어려웠습니다. 다음 모델은 1975 년 10 동일한 저자에 의해 개발 된 간장 동맥 재건 및 extracorporeal 션트없이 하나했습니다. 그 후 1979 년, Kamada 외이 있습니다. 간 rearterialization 11없이 모델에 대한 커프 문합 기술을 도입했습니다. 이러한 수정을 통해 쥐의 올트받는 작업의 단축 anhepatic 시간으로 단순화 된 널리 인정 실험 모델로 사용되었습니다.

arterialization가 까다로운 작업했지만하지만,이 쥐의 간 arterialization 올트 8 중요성으로 이후 많은 논란이있었습니다 디이식 후 생존에 영향을 미치지 싶네요. 다양한 재건 기술을 이용하여 간 arterialization에 대한 많은 연구가 이러한 대동맥 세그먼트 - 투 - 대동맥 문합 3,9,17, 커프 문합 기술 18,19,20, 텔레 스코핑 기법 (5), 스텐트 기술 138,보고되었습니다 16, 및 슬리브 문합 기술 12,21-23. 쥐 올트에 대한 기술이 오늘날 표준화되지 않지만, arterialized 모델은 점점 더 그 생리 우위 8,12,13,14의 관점에서 선호하고 있습니다. 위에서 언급 한 기술 중 수행 할 간단하고 빠르 스텐트 기술은 레만 외에 의해보고되었다. 2005 년 16. 연구는 우수한 결과를 보여 주었다 : 더 가림 율은 reperfusion 후 8 시간, 24 시간, 6 개월에서 복원 간장 동맥에서 관찰되지 않았습니다. 따라서 간 arterialization이 기술을 채택했다.

우리는 perforSHVC와 IHVC의 재건을위한 mA 손집니다 문합. 이 방법은 혈전증 8 감소 발생에 이르게 최적의 생리 상태와 anastomotic 사이트를 제공하고 최고의 미세 시뮬레이션 및 의사에 대한 교육입니다. 또한, 문합는 짧은 선박 stumps 가능 할 수 있습니다. IHVC의 문합에 대하여,이 방법은 커프 문합 기술에 비해 이식 측면에 긴 IHV​​C을 필요로하지 않습니다. 따라서 기증자 신장 정맥이 오래 이식 IHVC를 만들기 위해 해부를 할 때,이 방법은 짧은 intrahepatic과 오른쪽 측면과 꼬리가있는 엽으로 구성되어 30 %의 이식과 같은 긴 IHV​​C을 필요로 작은 이식​​의 이식 적용됩니다 SHVC이없는 대정맥.

여러 가지 방법을 현재까지 쥐에서 간 절제술의 기술에 관한 것이보고되었습니다, 두 가지 주요 기술은 전통적인 대량 봉합사 기술 아르그리고 선박 중심의 기술 24. 우리는 50 % 간 절제술 15 클래식 봉합사 기술을 수행하지만, 수술 현미경 절차 미세한를하고, 나머지 엽과 구조에 대한 손상을 방지 할 수 있습니다.

우리는 우리의 모델에서받는 쥐의 대표 결과를 설명하고, 쥐가 명백한 합병증없이 7 일간 관찰 기간 동안 살아 남았습니다. 모델은 같은 장기간 냉장, 심장 사후 기증을 포함 연장 따뜻한 국소 빈혈 및 간 부상 또는 질병의 실험 모델에서 작은 간 이식 또는 이식의 사용과 같은 다른 설정을 선택하여 실험의 다른 목적으로 수정할 수 있습니다.

, 운영 시간, 전자 출혈의 양 : 우리의 경험에서, 이식, 쥐 올트의 결과에 대해 가장 신뢰할 수있는 매개 변수를 한 후 생존에 영향을 미칠 수있는 절차를 통해 세 가지 핵심 요소가 있습니다특히 포털 정맥과 IHVC 시간을 클램핑하고, 각 선박의 재건의 적절성은 어느 협착증, 혈전증이 발생할 수, 또는 출혈이. 이 모델의 연수 기간에서 실패의 대부분은 아마도 이러한 요인과 관련이있을 수도 있습니다. 이 비디오 문서에서는, 우리는 간장 동맥 재건과 일부 올트 우리의 쥐 모델에 대한 수술 절차에 대한 단계별 지침을 제시한다. 올트의 쥐 모델이 복잡하고 고급 microsurgical 기술을 필요로하는 반면,이 문서에서는이 모델의 교육 및 학습을위한 좋은 가이드 역할을해야 실질적인 정보를 충분히 제공합니다. 효율적으로이 모델을 학습하면 학습 기간을 단축 연습에 필요한 동물과 비용의 수를 줄이고, 나중에 실험에서 신뢰할 수있는 결과를 재현을 위해 특히 중요합니다. 이에 러셀과 버치가 postulated 된 동물 실험의 3Rs 개념 (교체, 감소, 및 개선)와 라인에1959 25.

Disclosures

우리는 공개 할 충돌 관심이 없습니다. 쥐가 실험실 동물 과학 협회 (FELASA)에 대한 연방 정부의 지침에 따라 특정 - 병원체가없는 조건에서 자리 잡고 있습니다. 모든 실험 동물의 보호와 "실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 안내"(보건 발행 번호 86-23 국립 연구소, 1985 개정)에 관한 독일 연방 법에 따라 실시되었다.

Acknowledgments

저자는 기술 지원을 위해 파스칼 Paschenda과 Mareike Schulz 감사드립니다.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Surgical microscope Leica M651
Light source Schott KL1500LCD
Cotton swabs NOBA Verbandmittel 974202
Gauze swabs (5x5 cm) Fuhrmann 10002
povidone-iodine solution Mundipharma 6108022.00.01
Oil-based clay Debika corporation 090148
TachoSil Takeda Pharmaceuticals International GmbH EU/1/04/277/001-004 Applied to resected liver surface
Scalpel blade No. 11 Pfm medical 200130011 Preparation of cuff and stents
14-gauge catheter B. Braun 4268210S Cuff for PV
18-gauge catheter B. Braun 4268130S Perfusion via PV
24-gauge catheter B. Braun 4269071S Stent for BD and HA
4-0 silk suture Resorba H3F Liver resection
6-0 silk suture Resorba H1F
7-0 Prolene (polypropylene) suture Ethicon 8701H SHVC and IHVC
4-0 Vicryl suture Ethicon V304H Abdominal closure
5-ml syringe Terumo SS+T05ES1 Back pillow
Heating pad Thermo 190 x 260 mm
Magnetic fixator retraction system Fine Science Tools Inc. 18200-01
18200-02
18200-03
18200-12
Cold water bath Huber 740.000X Graft preservation
Bipolar forceps Söring MBC-200
Mosquito forceps BONIMED 451-476-03 Two pairs used
Adson micro forceps Dimeda 10.176.12
Curved micro forceps AESCULAP FD281R
Straight micro forceps Bonimed 451-476-03
Curved micro scissors Medicon 05.15.83
Straight micro scissors AESCULAP FD12 Fine incision
Scissors AESCULAP BC211W
Micro needle holder AESCULAP FD241R Reconstruction
Mayor-Hegar Needle holder Mizuho Ikakogyo 06-798-00 Abdominal closure
DeBakey Bulldog clamp (straight) ULRICH CV3054
DeBakey Bulldog clamp (curved) CODMAN 37-1062
Satinsky clamp Mizuhoika 09-230-24
Peripheral vascular clamp Teleflex Medical 353494 Recipient SHVC
Micro vessel clamp (disposable) AROSurgical Instruments Corporation TKM-1-60 g PV, graft IHVC, and recipient HA
Micro vessel clamp (metal) Fine Science Tools Inc. 18052-01 Recipient IHVC
Lactated Ringer solution Fresenius Kabi 6150917.00.00
Normal saline solution DeltaSelect 1299.99.99
HTK solution Dr. Franz Köhler Chemie GmbH 31268.00.00 Preservation solution
Heparin-Natrium Ratiopharm 5394.02.00 500 IU before graft perfusion
8.4% sodium bicarbonate Fresenius Kabi 4399.97.99 0.5 ml after reperfusion
5% Glucose solution B. Braun 6714567.06.00 1.0 ml after reperfusion
Cefuroxim sodium Fresenius Kabi 38985.01.00 Antibiotic, 16 mg/kg
Buprenorphine Essex Pharma 997.00.00 Painkiller, 0.1 mg/kg
Intensive Care Unit Cage Brinsea Products Ltd. Vetario S10 Postoperative care

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Puhl, G., et al. Low viscosity histidine-tryptophan-ketoglutarate graft flush improves subsequent extended cold storage in University of Wisconsin solution in an extracorporeal rat liver perfusion and rat liver transplantation model. Liver Transpl. 12, 1841-1849 (2006).
  2. Yagi, S., et al. Improved Preservation and Microcirculation with POLYSOL After Partial Liver Transplantation in Rats. J Surg Res. 167, e375-e383 (2011).
  3. Engemann, R., Ulrichs, K., Thiede, A., Muller-Ruchholtz, W., Hamelmann, H. Value of a physiological liver transplant model in rats. Induction of specific graft tolerance in a fully allogeneic strain combination. Transplantation. 33, 566-568 (1982).
  4. Sumimoto, R., Shinomiya, T., Yamaguchi, A. Influence of hepatic arterial blood flow in rats with liver transplants. Examination of donor liver-derived serum class I MHC antigen in rats with liver transplants with or without hepatic arterial reconstruction. Transplantation. 51, 1138-1139 (1991).
  5. Chaland, P., et al. Orthotopic liver transplantation with hepatic artery anastomoses. Hemodynamics and response to hemorrhage in conscious rats. Transplantation. 49, 675-678 (1990).
  6. Imamura, H., Rocheleau, B., Cote, J., Huet, P. M. Long-term consequence of rat orthotopic liver transplantation with and without hepatic arterial reconstruction: a clinical, pathological, and hemodynamic study. Hepatology. 26, 198-205 (1997).
  7. Zhong, Z., Theruvath, T. P., Currin, R. T., Waldmeier, P. C., Lemasters, J. J. NIM811, a mitochondrial permeability transition inhibitor, prevents mitochondrial depolarization in small-for-size rat liver grafts. Am. J. Transplant. 7, 1103-1111 (2007).
  8. Spiegel, H. U., Palmes, D. Surgical techniques of orthotopic rat liver transplantation. J. Invest. Surg. 11, 83-96 (1998).
  9. Lee, S., Charters, A. C., Chandler, J. G., Orloff, M. J. A technique for orthotopic liver transplantation in the rat. Transplantation. 16, 664-669 (1973).
  10. Lee, S., Charters, A. C. 3rd, Orloff, M. J. Simplified technic for orthotopic liver transplantation in the rat. Am. J. Surg. 130, 38-40 (1975).
  11. Kamada, N., Calne, R. Y. Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage. Transplantation. 28, 47-50 (1979).
  12. Howden, B., Jablonski, P., Grossman, H., Marshall, V. C. The importance of the hepatic artery in rat liver transplantation. Transplantation. 47, 428-431 (1989).
  13. Gao, W., Lemasters, J. J., Thurman, R. G. Development of a new method for hepatic rearterialization in rat orthotopic liver transplantation. Reduction of liver injury and improvement of surgical outcome by arterialization. Transplantation. 56, 19-24 (1993).
  14. Zhao, D., Zimmermann, A., Wheatley, A. M. Morphometry of the liver after liver transplantation in the rat: significance of an intact arterial supply. Hepatology. 17, 310-317 (1993).
  15. Omura, T., Ascher, N. L., Emond, J. C. Fifty-percent partial liver transplantation in the rat. Transplantation. 62, 292-293 (1996).
  16. Lehmann, T. G., Bunzendahl, H., Langrehr, J. M., Neuhaus, P. Arterial reconstruction in rat liver transplantation--development of a new tubing technique of the common hepatic artery. Transpl. Int. 18, 56-64 (2005).
  17. Reck, T., et al. Impact of arterialization on hepatic oxygen supply, tissue energy phosphates, and outcome after liver transplantation in the rat. Transplantation. 62, 582-587 (1996).
  18. Hasuike, Y., et al. A simple method for orthotopic liver transplantation with arterial reconstruction in rats. Transplantation. 45, 830-832 (1988).
  19. Steffen, R., Ferguson, D. M., Krom, R. A. A new method for orthotopic rat liver transplantation with arterial cuff anastomosis to the recipient common hepatic artery. Transplantation. 48, 166-168 (1989).
  20. Knoop, M., Bachmann, S., Keck, H., Steffen, R., Neuhaus, P. Experience with cuff rearterialization in 600 orthotopic liver grafts in the rat. Am. J. Surg. 167, 360-363 (1994).
  21. Hickman, R., Engelbrecht, G. H., Duminy, F. J. A technique for liver transplantation in the rat. Transplantation. 48, 1080 (1989).
  22. Liu, T., Freise, C. E., Ferrell, L., Ascher, N. L., Roberts, J. P. A modified vascular "sleeve" anastomosis for rearterialization in orthotopic liver transplantation in rats. Transplantation. 54, 179-180 (1992).
  23. Li, J., et al. Modified sleeve anastomosis for reconstruction of the hepatic artery in rat liver transplantation. Microsurgery. 22, 62-68 (2002).
  24. Martins, P. N., Theruvath, T. P., Neuhaus, P. Rodent models of partial hepatectomies. Liver Int. 28, 3-11 (2008).
  25. Russell, W. M. S., Burch, R. L. The Principles of Humane Experimental Technique. Methuen & Co. Ltd. London. reprinted by UFAW (1992).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics