ローカスの神経活動を特徴づけるためにマルチユニット記録方法(

Neuroscience

Your institution must subscribe to JoVE's Neuroscience section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

我々は、無脊椎動物の嗅覚経路の最初の3つの段階で臭気誘発反応を特徴づける細胞外マルチユニット記録技術のバリエーションを示しています。これらの技術は簡単にだけでなく、他の神経系において、アンサンブル活動を調べるために適合させることができます。

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Saha, D., Leong, K., Katta, N., Raman, B. Multi-unit Recording Methods to Characterize Neural Activity in the Locust (Schistocerca Americana) Olfactory Circuits. J. Vis. Exp. (71), e50139, doi:10.3791/50139 (2013).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

嗅覚の検出と解釈は、多くの生物の生存のために重要である。驚くべきことに、門の両端の種は驚くほど似て嗅覚システムは、化学センシングへの生物学的ア ​​プローチは進化の時間1の上に最適化されていることを示唆している。昆虫の嗅覚系では、匂い物質は活動電位の列車に化学的刺激に変換するアンテナの嗅覚受容ニューロン(ORN)によって導入されています。 ORNsからの感覚入力は、その後、触角葉(;脊椎動物の嗅球に類似した構造AL)に中継されます。 2,3、ALで、悪臭のための神経表現は、校長のニューロン集団(また、投射ニューロンと呼ばPNS)に分散時空間発火パターンの形をとる。 ALの出力は、その後、下流のキノコ体(メガバイト)、嗅覚記憶および4,5学習に関連付けられている構造でケニヨン細胞(KCS)によって処理されます。彼女のeは、我々はこれらの嗅覚回路で臭気誘発神経反応を監視するために電気生理学的記録手法を提案する。

まず、ORNs 6,7の集団のレベルで臭気誘発反応を研究するために、単一の感覚子の記録方法を提示します。我々は細胞外ORNの応答を監視するための電極として生理食塩水埋め研ぎガラスピペットの使用について説明します。次に、我々は細胞外に商業16チャネル電極3を使用たPN応答を監視する方法を提案する。カスタムメイドの8チャンネル撚線四極管を使用して同様のアプローチがケニヨン細胞録音8で実証されています。我々は、これらの技術のそれぞれのための私達の実験のセットアップの詳細と現在の代表的な記録トレースを提供します。

Protocol

1。臭気の準備と配達

  1. 所望の濃度レベルを達成するためにボリュームが鉱物油で臭気ソリューションを希釈します。 60mlのガラス瓶に鉱物油と臭剤20mlの混合物を保管してください。入口と出口のラインを提供するために、ゴム栓(計19)、上から下から1と他に2つの注射針を挿入します。このゴム栓とガラス瓶を密封し、入口ライン( 図1A)にカスタム設計された活性炭フィルターを取り付けてください。
  2. カーボンフィルターは2 6ミリリットルのシリンジを使用して行われます。半分に注射器をカットし、プランジャーの端を捨てる。熱収縮チューブを使用して、それらを一緒に接続する前に、綿と活性炭との残りの部分をそれぞれ記入してください。
  3. アンテナの向こう側に一定のエアフローを供給プラスチックチューブ(ナルゲンFEPチューブ、ID 5.8ミリメートル)である( 図1Bに臭気ボトル(ポリエチレンチューブ、0.86ミリメートルのIDを使用して)の出口ラインを接続
  4. イナゴアンテナの数cm以内に配置プラスチックチューブを使用してバッタに向かって、直接炭素 - ろ過、除湿空気(流量、0.75 L / minのキャリアガス)。
  5. 匂い刺激のために、ボトル内の臭気溶液上の静的ヘッドスペースの一定量(0.1リットル/ min)を変位させる。これはピコポンプ(WPIは、PV-820)を使用してボトルに除湿された空気の等しい量を注入することによって達成される。臭気ボトルから蒸気が通気管に出口ライン( 図1B)を経由します。
  6. 〜10センチメートルイナゴのアンテナの後ろに真空漏斗を配置することによって、配信臭気蒸気を除去。

2。シングル感覚子記録用ローカスアンテナの準備

  1. 完全に成長した翼でどちらの性別の若い大人のイナゴを選択したが、交配前のステージに混雑したコロニーから。イナゴを抑制するには、まずその足を切断。組織接着剤(Vetbond、3M)と切断部位を密封する。セキュアトン( 図2A)、その胸部の周りに覆われた電気テープの小片を使用して、カスタム設計されたチャンバーに彼はイナゴ。
  2. 解剖顕微鏡下では、アンテナの配置のためのワックスのプラットフォーム( 図2A)に浅い溝を作る。溝にアンテナを配置し、アンテナの両端( 図2B; electrowaxerがワックスを溶融するために使用されている)でバティックのワックスを使用して、それを安定させる。
  3. 胸部(約1cm離れて頭から)に接地電極(塩素化銀線)を挿入します。両方のシールに切開部位をバティックワックスを使用して、場所にアース線を保持した( 図2A)。

3。嗅覚受容ニューロン(ORNs)から臭気誘発反応を監視する単一の感覚子の記録

  1. 防振台(TMC)( 図3A)の実体顕微鏡(ライカM205C)で安定化ローカストアンテナを設置する。記録感覚子のベースがはっきりしていることを確認してくださいLY見える( 図3B)。
  2. ホウケイ酸ガラスキャピラリーチューブ(外径1.2ミリメートル、0.69ミリメートルのID)を用いて、ガラス電極(イナゴ生理食塩水9、先端径1〜3μmででいっぱいMΩインピーダンス3-10)作製するマイクロピペットプラー(サターP-1000)を使用します。
  3. 電動マイクロマニピュレーター(サッターMP-285)に取り付けられているマイクロピペットホルダーにガラス電極を配置します。優しく感覚子( 図3B)のベースに電極を挿入します。各感覚子はバッタ10で3から50 ORNsを含めることができることに注意してください。
  4. ACアンプ(グラスP-55)を使用した信号(10,000倍)を増幅する。 0.3の間の信号フィルタ- 10.0 kHzを、データ収集システムを使用して、15 kHzサンプリングレート( 図3D)(は、LabVIEW、PCI-MIO-16E-4 DAQカード、ナショナルインスツルメンツ)で取得する。

4。触角葉とキノコ体のレコーディングのためにイナゴの解剖手順

  1. restrainiに従ってくださいngの手順は、セクション2.1で説明された。 図4AおよびBに示すようにカスタム設計されたチャンバー内でバッタを置きます。
  2. 中に生理食塩水を灌流すると解剖手順の後に、イナゴ​​の頭の周りにワックスカップを構築することができます。ワックスカップはちょうど口の部分の上に起動して、 図4Cに示すように、2つのアンテナ間の領域を網羅し複眼を超えて拡張する必要があります。
  3. アンテナはワックスカップを通過することを許可するには、プラスチック(ポリエチレン)チューブ(長さ5mm、IDの0.86ミリメートル)を使用して、両側に小さなトンネルを作成します。プラスチック製のチューブがワックスカップを通してスライドできることを確認します。後者はしっかりプラスチックチューブを包み込むが、ワックスカップ( 図4C)に取り付けられているゴム製のガスケットを使用することによって達成される。
  4. エポキシ樹脂を用いて、プラスチックチューブの下端にアンテナのベースを取り付けます。このステップでは、アンテナがあっても周囲の後に所定の位置に保持されることを保証キューティクルは削除されます。
  5. この時点から食塩水9で埋めワックスカップを保つ。アンテナ2本(前後軸と平行な四角形の長辺)の間の中央の長方形領域を最初に取り外します。その後、アンテナの基部( 図4D)で複眼とキューティクルを乱すことなく、近隣地域でキューティクルを除去します。
  6. 細かい鉗子を使用して、静かに空気嚢や脳の周囲の脂肪体を削除します。このステップの終了時に、バッタの脳ははっきりと( 図4D)見られるべきである。嗅覚情報(淡黄色色素沈着を持つ)を処理する脳の領域は、2つのアンテナの間に位置していることに注意してください。
  7. イナゴでは腸は脳と体の下の長さに沿って実行されます。潜在的に準備を不安定にするから、腸の動きを防ぐために、静かに前腸を引き出し、それが正常にハサミを使ってカットします。腹部に小さな切開を加えるだけ直腸上記と粗鉗子で後腸を引っ張って腸を削除します。生理食塩水漏れを防止するために、縫合糸による切開部位のすぐ前方の腹部を結ぶ。
  8. 図4Dに示すように、電気生理学の間に脳を高め、11それを安定させるためにワックスの薄い層でコーティングされた細いワイヤーで作られた小型のプラットフォームを使用します。
  9. 昆虫の脳は前の実験に除去する必要が薄い絶縁シースで覆われている。 desheathに脳は、優しく細かい鉗子9を用いて脳の表面上に酵素を少量(0.3から0.4 mgのプロテアーゼ、シグマアルドリッチ)に広がった。酵素アプリケーションの5〜10秒後、生理食塩水で十分に脳をすすいでください。超微細鉗子を使用すると、非常に優しくつまんでシースをプルアップし、その後、それが記録位置(ALとMB、 図4E、Fに示す)を介して開く引き裂く。

5。触角葉からマルチユニットレコーディングとキノコ体

  1. 防振台上に置かブームスタンドから吊るさ実体顕微鏡下でイナゴの準備( 図5A)を置きます。
  2. 実験を通じて一定の生理食塩水灌流速度(約0.04リットル/時間)を維持する。接地電極として生理食塩水を充填したワックスカップに浸塩素化銀線を使用しています。
  3. PNの録音については、16チャネルシリコンプローブ(NeuroNexusテクノロジーズアイテム#A2x2-TET-3ミリメートル-150-150-121-A16、 図5B)を使用します 。各実験の前に、200〜300kΩの範囲でインピーダンスを達成するために金で電極を電気めっき。電気については、 図7に示す回路を使用しています。
  4. 近く触角葉の表面に電極を置き、そっと手動マニピュレーター(WPI、M3301R)( 図5D)を使用して組織に挿入します。
  5. 〜10μmステップで電極を進める。各ステップで2〜3分待ってから、獲得を検討D信号の品質。理想的なレコーディング現場では、細胞外の信号が複数の記録チャネルによってピックアップされ、高い信号対雑音比(SNR> 3-5回ノイズSDS)を持ちます。
  6. KCの録画用に、カスタムメイドの撚線テトロード(; 6節に示さステップ·バイ·ステップの製作手順図5C)を使用します 。ステップ5.3で説明したように、これらの電極に電気メッキ。 KC細胞体はMB 8の表層に限定されるメガバイト( 図5E)の表面に極真空管を配置します。
  7. 模式的に図5Aに示すように、両方のPNとKCの録音が同時に同じイナゴの準備から行うことができます。
  8. 電極の安定化を可能にするために録音の場所を見つけた後少なくとも15分間待ちます。
  9. 0.3から6 kHzの間のフィルタ15のKHzで、すべての細胞外シグナルを取得し、16チャンネルACアンプ(生物学電子商店;カリフォルニア工科大学、パサデナ、カリフォルニア州)を用いて(1万倍)を増幅(図6A、B)。

6。 KCの録音のためにツイストワイヤ電極を確認するための手順

  1. KCの録音のためのマルチユニットの電極を設計するには、絶縁されたニッケルクロム線(RO800、0.0005 "フィラメント)8を使用しています
  2. 8電極が望まれているならば、段ボールの4倍の10〜15センチメートル長い部分にワイヤーを巻きつけます。段ボールの端部は、ワイヤを切断からエッジを防ぐためにプラスチックチューブで覆うことができる。ラッピングしながら、少したるみがあることを確認しますが、ワイヤーがピンと張っていないことを確認してください。それが簡単に壊れるように慎重にワイヤを扱う。
  3. バンチ段ボールの上部に一緒に配線し、それらを一緒に保持するためにテープの一部(タイムテープは、T-534-RP)を使用しています。もう一方の端のストランドをカット。よくテープの別の部分を使用して、カット終了時にワイヤストランドとグループのワイヤを外します。
  4. タイタープレートシェーカー(サーモサイエンティフィック、モデル4625Q)を使用して、(3用〜72回転/分一緒に鎖を巻いて1撚線を形成する分)。録音されたストランドの底はタイタープレートローターにクリッピングすることができ、上部はブームスタンドにクリップすることができます。巻き取り時、ワイヤがピンと張ったことではない、まだ少し余裕が必要です。
  5. 一緒に個々のストランドを堅持し、単線を形成するためにヒートガン(ウェラー6966C)と一緒に断熱材を溶かす。ワイヤの長さに亘って3月4日遅いパスは(3-4秒毎に)一緒にストランドを加熱して溶融するのに十分でなければならない。その後、下からワイヤーを解放し、それがリラックスすることができます。テープを除去するために両端付近線をトリムします。
  6. 5〜6センチメートル長い、ガラスキャピラリーチューブ(外径1.0ミリメートル、0.58ミリメートルのID)を介してワイヤの一方の端を差し込みます。細かいピンセットを使用して1つの端に撚線を離れていじめると、非常に簡単に炎を使用してエンドを放火によってコーティングを除去してください。この手順は慎重に行わなければなりません。長すぎるために炎にワイヤーを公開することはストランドが溶融し、もつれてしまいます。
  7. 優しく燃え上がる端に8鎖を分離8ピンICソケットに別々にNDはんだが各鎖。コー​​ト代わりにストランドとガラスキャピラリーを保持するためにエポキシとICソケットの上部を。また、場所( 図5C)にワイヤーを保持するために毛細血管のもう一方の端にエポキシの小滴を配置します。
  8. 最後に、キャピラリー先端から約0.5cmカーバイドハサミで45度の角度で線の先端をカットします。

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

二つの異なるアルコールへの単一のORNの臭気誘発反応図3(d)に示すようにしています。記録位置に応じて(感覚子の種類、電極の配置)​​マルチユニットレコーディングを実現することができる。

ALの録音から生細胞外波形を図6(a)に示されています。活動電位または別のPNに由来する様々な振幅のスパイクは、この電圧トレースで観察できます。バッタ触角葉は興奮投射ニューロンと抑制性ニューロンローカルを持っていますが、唯一のPNSは細胞外に3を検出することができるナトリウムスパイクを生成します。この観察結果は、ここに提示され、マルチユニット記録法が選択的にイナゴの嗅覚コーディングを研究するための魅力的な無脊椎動物のモデルを作り、触角葉回路の出力を監視するために使用することができることを示唆している。

キノコ体の記録の例は、以下の例で示され

これらのマルチユニット記録から単一ユニット応答を分離するために、我々は、IGOR Proは(WaveMetrics社)12に実装され公開されたソフトウェアを使用してオフラインでスパイクソーティング(ベスト4チャンネル付)を行う。 PNとKCスパイクのソートの例を、それぞれ図6(c)、およびDに示されている。

図1
図1。匂い刺激(A)臭気瓶を準備するために必要なすべてのコンポーネントが表示されます。 (B)はピコポンプとアウトレット接続から臭気瓶から臭気送出管への入口接続が示されています。乾燥した空気の一定のストリームは、キャリアガス流として使用され、実験中にアンテナに向けられている。


図2。単一の感覚子のレコーディングのためにイナゴアンテナの調製 (A)はイナゴが腸内に配置接地電極との特注チャンバー内に設置されています。 (B)はワックスのプラットフォームを使用してアンテナを安定させるための方法が示されている。

図3
図3。シングル感覚子の録音(A)は、典型的な記録が設定します。キャリアガス及び臭気蒸気の混合物は、送達管を通って供給されます。 ORN活動電位は、ガラス電極を用いて記録されます。配信匂い物質は、右側のアンテナの後ろに位置し、真空漏斗を用いて除去される。実体顕微鏡を通して見たように(B)の電極配置。矢印は感覚子の基部にあるガラス電極チップの配置を示しています。 (C)のスキーマ単一の感覚子の記録アプローチのチック。 (D)は、2つの異なる匂い(2 - オクタノール、1 - ヘキサノール)にORNの応答を示す生細胞外電圧のトレース。

図4
図4。イナゴの解剖手順。(a)に示すようイナゴが拘束、カスタムデザインの解剖セットアップ中に配置される。 (B)上記からイナゴヘッドの眺め。複眼とアンテナの両方がはっきりと見ることができます(C)ワックスカップは解剖プロセス中と後の生理食塩水を灌流を可能にするために切開部位を中心に構築されます。 (D)が露出したバッタの脳(黄色色素神経組織)が示されている。脳を安定させるために示されているように、プラットフォームは、脳の下に配置されます。生理食塩水を灌流管はワックスカップに装着されている。 (E)はバッタの脳の概略図。解剖が明らかに関心領域を表示した後、バッタの脳の(F)に拡大された画像:tennalローブ(AL)とキノコ体(MB)。触角神経()アンテナから触角葉にORN活動電位を伝達する軸索の束が入っています。

図5
図5。触角葉とキノコ体からマルチユニットレコーディング。記録構成および臭気の配信のセットアップを示す(a)は概略。 (B)は、PNの録音に使用される16チャンネルNeuroNexus記録電極が示されています。 (C)の左パネル、カスタムは、8チャンネルのツイストワイヤ電極が示された。右側のパネル、電極チップやICソケットへの配線の接続が示されています。アラバマ州の16チャネル記録電極の(D​​)を配置。各シャンクで唯一のボトム4の電極が組織に挿入されます。 (F)はKCの録音のために表面的なMBの層でツイストワイヤ電極の配置が示されています。


図6触角葉(AL)とキノコ体(MB)の記録から、代表的な結果。 (A)は、マルチユニットALの記録からの生細胞のトレースが表示されます。 4秒臭気パルスは灰色のボックスで示された期間中に適用された。 (B)は、同様のプロットが、臭気に生KCの応答を示す。 (C)は、PNスパイクソートの例。マルチチャネル電極の4つの独立したチャネルから細胞外の波形は単一のPNに起因する全てのスパイクのイベントのために示されている。個々のイベント(黒)、平均値(赤)、およびSDSは(青)セルの両方のために示されている。ヒストグラムはその手段とを結ぶ直線上に、高次元のPNイベント表現(すべての4つの電極から3ミリ秒の信号を連結した180次元ベクトル)を投影して得られる。よくイソラ考慮すべきテッドユニット、クラスタ中心に少なくとも5回ノイズSDとこの場合のように、二峰性の分布がバラバラに同時に記録セル12のペアごとに期待されています。 (D)はKCスパイクのソートの例が示されている。

図7
図7電気めっきは、最大セット:異なるコンポーネント間の接続を示す回路図では、実際のセットアップの絵の上に表示されます。簡単に説明すると、ファンクション·ジェネレータ(MCP、SG 1639A)から3 Hz方形パルス(5V振幅)はゲートに次に電極インピーダンステスター(BAKエレクトロニクス、IMPから現在の5μAを実現刺激アイソレータ(WPI、A365)を使用されている2)。インピーダンステスターはどちら電極インピーダンスをテストしたり、金めっき用の電極に印加する刺激アイソレータからの電流パルスを許可するように操作することができます。どちらの場合も、マルチユニット·電極は、im保たれるよく金溶液を含む電気メッキでmersed。スイッチは電極チャンネルの選択は、金メッキにすることができます。

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

ほとんどの感覚刺激は、ニューロンのアンサンブルに分散されたコンビナトリアル反応を引き起こす。したがって、マルチニューロン活動の同時モニタリングが刺激固有の情報が脳内の神経回路で表されており、どのように処理されるかを理解する必要があります。ここでは、昆虫の嗅覚経路に沿って第3処理センターにおける臭気誘発反応を特徴づけるために、細胞外マルチユニット記録技術を実証した。我々はここで紹介する手法は、嗅覚のコーディング上の前の多くの研究で用いられており、この分野3,6,13-17で標準的な慣行になってきていることに注意してください。技術を組み合わせることで、一つは無脊椎動物の嗅覚系の設計およびコンピューティングの原則を調査し、システムのアプローチを開発することができますここで紹介する。ここでは、これらのapproaを開拓ジルローラン、マークStopferとその同僚2,3,8,9,13,16,18-21、製精貢献を認識しなければならないCHESは、嗅覚コーディングのいくつかの基本原則を明らかにし、明らかにする。

最後に、光学技術はまた、正常昆虫嗅覚回路22から27にアンサンブル活動を研究するために使用されていることは注目に値する。目標は、同時に多数のニューロンを横切って神経活動をモニターするときに、これらの光学技術は有利であるが、電気生理学的手法は、まだ個々の活動電位の検出が望まれている "ゴールドスタンダード"です。

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

特別な利害関係は宣言されません。

Acknowledgements

作者はこの仕事に資金を供給するため次のことを感謝したいと思います:スタートアップ寛大な資金をワシントン大学、システム神経科学助成金、米海軍研究助成金(グラント#:N000141210089)のOfficeのマクダネルセンターの医工学の学科からBRへ

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Electrophysiology Equipment
A.C. amplifier GRASS Model P55 for single sensillum recordings
Audio monitor (model 3300) A-M Systems 940000
Custom-made 16 channel pre-amplifier and amplifier Cal. Tech. Biology Electronics Shop for AL and MB recordings
Data acquisition unit National Instruments BNC-2090
Fiber optic light WPI SI-72-8
Light source 115 V WPI NOVA
Manual micromanipulator WPI M3301R for locust brain recordings
Stereomicroscope1 on boom stand Leica M80 for locust brain recordings
Stereomicroscope2 Leica M205C for single sensillum recordings
Vibration-isolation table TMC 63-500 series
Motorized micromanipulator Sutter Instruments MP285/T
Oscilloscope Tektronix TD2014B
Electrodes/Construction Tools
16-channel electrode NeuroNexus A2x2-tet-3mm-150-121 for antennal lobe recordings
Borosilicate capillary tubes with filament, ID 0.69 mm Sutter Instruments BF120-69-10 for making glass electrodes
Micropipette puller Sutter Instruments P-1000
Function generator Multimeter Warehouse SG1639A for gold-plating electrodes
Gold plating solution (non cyanide) SIFCO Industries NC SPS 5355
Impedance tester BAK Electronics Inc. IMP-2 for gold-plating electrodes
Switch rotary Electroswitch C7D0123N for gold-plating electrodes
Pulse isolator WPI A365 for gold-plating electrodes
Q series electrode holder Warner Instruments 64-1091
Silver wire 0.010" diameter A-M Systems 782500 ground electrode
8 pin DIP IC socket Digikey ED90032-ND
Borosilicate capillary tubes with filament, ID 0.58 mm Warner Instruments 64-0787
Heat gun Weller 6966C
Rediohm-800 wire Kanthal Precision Technologies PF002005
Titer plate shaker Thermo Scientific 4625Q twisting wires
Carbide scissors, 4.5" Biomedical Research Instr 25-1000 for cutting twisted tetrode wires
Fine point tweezers HECO 91-EF5-SA for teasing tetrode wires apart
Odor Delivery
6 ml syringe Kendall 1180600777 for custom designed activated carbon filter
Brown odor bottles Fisher 08-912-165
Charcoal BuyActivatedCharcoal.com GAC-48C
Desiccant Drierite 23005
Drierite gas drying jar Fischer Scientific 09-204
Heat shrink tubing 3M EPS-200 odor filter preparation
Hypodermic needle aluminum hub, gauge 19 Kendall 8881-200136 for providing inlet and outlet lines for odor bottles
Mineral oil Mallinckrodt Chemicals 6357-04 for odor dilution
Nalgene plastic tubing, 890 FEP Thermo Scientific 8050-0310 for carrier gas delivery
Pneumatic picopump WPI sys-pv820 for odor delivery
Polyethylene tubing ID 0.86 mm Intramedic 427421 for odor bottle outlet connections and saline profusion tubing
Stoppers Lab Pure 97041 for sealing odor bottles
Time tape PDC T-534-RP
Tubing luer Cole-Parmer 30600-66
Vacuum tube McMaster-Carr 5488K66
Preparation/Dissection
100 x 15 mm petri dish VWR International 89000-304
18 AWG copper stranded wire Lapp Kabel 4510013
22 AWG stranded hookup wire AlphaWire 1551 brain platform
Batik wax Jacquard 7946000
Dental periphery Wax Henry-Schein Dental 6652151
Electrowaxer Almore International 66000
Epoxy, 5 min Permatex 84101
Hypodermic needle aluminum hub Kendall 8881-200136
Protease from Streptomyces griseus Sigma-Aldrich P5147 for desheathing locust brain
Suture thread non-sterile Fisher NC9087024 for tying the abdomen after gut removal
Vetbond 3M 1469SB for sealing amputation sites
Dumont #1 forceps (coarse) WPI 500335
Dumont #5 titanium forceps (fine) WPI 14096
Dumont #5SF forceps (super-fine) WPI 500085 desheathing locust brain
10 cm dissecting scissors WPI 14393 for removing legs and wings
Vannas scissors (fine) WPI 500086 for removing cuticle, cutting the foregut
Saline Profusion
Extension set with rate flow regulator Moore Medical 69136 for regulating saline flow
IV administration set with Y injection site Moore Medical 73190 for regulating saline flow

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Ache, B. W., Young, J. M. Olfaction: diverse species, conserved principles. Neuron. 48, 417-430 (2005).
  2. Laurent, G., Wehr, M., Davidowitz, H. Temporal representations of odors in an olfactory network. Journal of Neuroscience. 16, 3837-3847 (1996).
  3. Stopfer, M., Jayaraman, V., Laurent, G. Odor identity vs. intensity coding in an olfactory system. Neuron. 39, 991-1004 (2003).
  4. Steven de Belle, J., Heisenberg, M. Associative odor learning in Drosophila abolished by chemical ablation of mushroom bodies. Science. 263, 692-695 (1994).
  5. Cassenaer, S., Laurent, G. Conditional modulation of spike-timing-dependent plasticity for olfactory learning. Nature. 482, 47-52 (2012).
  6. Hallem, E. A., Carlson, J. R. Coding of odors by a receptor repertoire. Cell. 125, 143-160 (2006).
  7. Raman, B., Joseph, J., Tang, J., Stopfer, M. Temporally diverse firing patterns in olfactory receptor neurons underlie spatiotemporal neural codes for odors. Journal of Neuroscience. 30, 1994-2006 (2010).
  8. Perez-Orive, J., et al. Oscillations and sparsening of odor representations in the mushroom body. Science. 297, 359-365 (2002).
  9. Naraghi, M., Laurent, G. Odorant-induced oscillations in the mushroom bodies of the locust. The Journal of Neuroscience. 14, 2993-3004 (1994).
  10. Ochieng, S. A., Hallberg, E., Hansson, B. S. Fine structure and distribution of antennal sensilla of the desert locust, Schistocerca gregaria (Orthoptera: Acrididae). Cell and Tissue Research. 291, 525-536 (1998).
  11. Burrows, M., Laurent, G. Synaptic Potentials in the Central Terminals of Locust Proprioceptive Afferents Generated by Other Afferents from the Same Sense Organ. Journal of Neuroscience. 13, 808-819 (1993).
  12. Pouzat, C., Mazor, O., Laurent, G. Using noise signature to optimize spike-sorting and to assess neuronal classification quality. Journal of Neuroscience Methods. 122, 43-57 (2002).
  13. Mazor, O., Laurent, G. Transient dynamics versus fixed points in odor representations by locust antennal lobe projection neurons. Neuron. 48, 661-673 (2005).
  14. Christensen, T. A., Pawlowski, V. A., Lei, H., Hildebrand, J. G. Multi-unit recordings reveal context dependent modulation of synchrony in odor-specific neural ensembles. Nature Neuroscience. 3, 927-931 (2000).
  15. Pellegrino, M., Nakagawa, T., Vosshall, L. B. Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae. J. Vis. Exp. (36), e1725 (2010).
  16. Geffen, M. N., Broome, B. M., Laurent, G., Meister, M. Neural Encoding of Rapidly Fluctuating Odors. Neuron. 61, 570-586 (2009).
  17. Ito, I., Ong, R. C., Raman, B., Stopfer, M. Sparse odor representation and olfactory learning. Nature Neuroscience. 11, 1177-1184 (2008).
  18. Laurent, G. Olfactory network dynamics and the coding of multidimensional signals. Nature Review Neuroscience. 3, 884-895 (2002).
  19. Brown, S. L., Joseph, J., Stopfer, M. Encoding a temporally structured stimulus with a temporally structured neural representation. Nature Neuroscience. 8, 1568-1576 (2005).
  20. MacLeod, K., Laurent, G. Distinct mechanism for synchronization and temporal patterning of odor-encoding neural assemblies. Science. 274, 976-979 (1996).
  21. Wehr, M., Laurent, G. Relationship between afferent and central temporal patterns in the locust olfactory system. The Journal of Neuroscience. 19, 381-390 (1999).
  22. Moreaux, L., Laurent, G. Estimating firing rates from calcium signals in locust projection neurons in vivo. Frontiers in Neural Circuits. 1, 1-13 (2007).
  23. Galizia, C. G., Joerges, J., Kuttner, A., Faber, T., Menzel, R. A semi-in-vivo preparation for optical recording of the insect brain. Journal of Neuroscience Methods. 76, 61-69 (1997).
  24. Galan, R. F., Sachse, S., Galizia, C. G., Hez, A. V. M. Odor-driven attractor dynamics in the antennal lobe allow for simple and rapid olfactory pattern classification. Neural Computation. 16, 999-1012 (2004).
  25. Kuebler, L. S., Schubert, M., Karpati, Z., Hansson, B. S., Olsson, S. B. Antennal Lobe Processing Correlates to Moth Olfactory Behavior. Journal of Neuroscience. 32, 5772-5782 (2012).
  26. Silbering, A. F., Bell, R., Galizia, C. G., Benton, R. Calcium Imaging of Odor-evoked Responses in the Drosophila Antennal Lobe. J. Vis. Exp. (61), e2976 (2012).
  27. Skiri, H. T., Galizia, C. G., Mustaparta, H. Representation of Primary Plant Odorants in the Antennal Lobe of the Moth Heliothis virescens Using Calcium Imaging. Chemical Senses. 29, 253-267 (2004).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics