Nephrectomy 5/6th בשילוב עם דיאטת מלח גבוהה ועיכוב תחמוצת החנקן synthase כדי לגרום למחלת כליות כרונית בחולדת לואיס

Published 7/03/2013
0 Comments
  CITE THIS  SHARE 
Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Summary

שיטת שני שלבים להקמת מחלת כליות כרוניות (CKD) בחולדת לואיס על ידי ניתוח להסרת הכליה 5/6th מסה מתוארת. שילוב של ההליך כירורגי, NOS-עיכוב ותזונה עתיר מלח מביאים למודל דומה למחלת כליות כרוניות אנושית, המאפשרים מחקר ופיתוח של מנגנונים של התערבויות טיפוליות חדשניות סיבתיים.

Cite this Article

Copy Citation

van Koppen, A., Verhaar, M. C., Bongartz, L. G., Joles, J. A. 5/6th Nephrectomy in Combination with High Salt Diet and Nitric Oxide Synthase Inhibition to Induce Chronic Kidney Disease in the Lewis Rat. J. Vis. Exp. (77), e50398, doi:10.3791/50398 (2013).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

מחלת כליות כרונית (CKD) היא בעיה עולמית. האטת התקדמות מחלת כליות כרונית היא בעדיפות בריאותית משמעותית. מאז מחלת כליות כרונית מאופיינת derangements מורכב של הומאוסטזיס, מודלים של בעלי חיים אינטגרטיביים נחוצים כדי ללמוד התפתחות והתקדמות של מחלת כליות כרונית. ללמוד פיתוח של התערבויות טיפוליות CKD ורומן במחלת הכליות כרונית, אנו משתמשים במודל אבלציה כריתת הכליה 5/6th, מודל ניסיוני ידוע של מחלת כליות מתקדמת, שמזכירים כמה היבטים של מחלת כליות כרונית אנושית. הפחתת ברוטו במסת הכליה גורמת גלומרולרי מתקדמים ופציעת tubulo-ביניים, אובדן nephrons השריד ופיתוח של יתר לחץ דם מערכתי וגלומרולרי. זה קשור גם עם אובדן הדרגתי intrarenal נימים, דלקות ופקעיות כליה. גורמי סיכון למחלת הכליות כרוניים תמיד השפעה על תפקוד האנדותל. כדי לחקות את זה, אנו משלבים הסרת 5/6th מסת כליות עם תחמוצת חנקן (NO) דלדול ודיאטה מלח גבוהה. לאחר הגעה והתאקלמות, בעלי חיים מחדשceive NO מעכב synthase (NG-ניטרו-L-ארגינין) (L-NNA) בתוספת למי שתייה (20 מ"ג / ליטר) לתקופה של 4 שבועות, ואחריו uninephrectomy צדדי הימנית. שבוע לאחר מכן, כריתת כלית סיכום ביניים (SNX) מתבצעת בצד השמאל. לאחר SNX, בעלי חיים אפשרו להתאושש במשך יומיים ואחרי LNNA במי שתייה (20 מ"ג / ליטר) לתקופה נוספת של 4 שבועות. תזונה עתירה מלח (6%), בתוספת בקרקע צ'או (ראה תרשים קו זמן 1), הוא המשיך לאורך כל הניסוי. התקדמות של אי ספיקת כליות ואחריו לאורך זמן על ידי מדידת פלזמה אוריאה, לחץ דם סיסטולי ופרוטאינוריה. בשישה שבועות לאחר SNX, אי ספיקת כליות פיתחה. תפקוד הכלייתי נמדד באמצעות אינולין ו" תקן זהב "טכנולוגית פינוי חומצת hippuric para-אמינו (PAH). מודל זה של מחלת כליות כרונית מתאפיין בירידה בקצב סינון הגלומרולרי (GFR) וזרימת פלזמה כליות יעילה (ERPF), יתר לחץ דם (לחץ דם סיסטולי> 150 מ"מ כספית), פרוטאינוריה (> 50 mg/24 HR) וuremia קל (> 10 מ"מ). תכונות היסטולוגית כוללות נזק tubulo-ביניים באו לידי ביטוי על ידי דלקת, ניוון צינורי וסיסטיק ופקעיות מוקד מוביל להפחתה מסיבית של glomeruli בריא בקרב אוכלוסיית השריד (<10%). מעקב עד 12 שבועות לאחר SNX מציג התקדמות נוספת של מחלת כליות כרונית.

Introduction

בשל אופייה המתקדם, מחלת כליות סופנית שלאחר מכן, ותחלואה לב וכלי דם ותמותה הקשורים, מחלת כליות כרונית היא בעיה בריאותית ציבורית גוברת 1. האטת התקדמות מחלת כליות כרונית היא אפוא בראש סדר עדיפויות בריאותי משמעותי. מאז מחלת כליות כרונית מאופיינת derangements מורכב של הומאוסטזיס, מודלים של בעלי חיים אינטגרטיביים נחוצים כדי ללמוד התפתחות והתקדמות של מחלת כליות כרונית. הכליה מורכבת ממגוון רחב של סוגי תאים שונים הפועלים באינטראקציה אחד עם השני. מורכבות זו לא ניתן חיקתה במבחנה.

ללמוד התערבויות טיפוליות חדשניות במחלת הכליות כרונית, אנו משתמשים במודל 5/6th כריתת הכליה אבלציה, מודל ניסיוני ידוע של מחלת כליות מתקדמת, שמזכיר כמה היבטים של מחלת כליות כרונית אנושית 2,3. הפחתת ברוטו במסת הכליה גורמת גלומרולרי מתקדמים ופציעת tubulo-ביניים, אובדן nephrons השריד ופיתוח של יתר לחץ דם מערכתי וגלומרולרי. היא מזוהה עם progrאובדן essive intrarenal נימים 4, דלקת ופקעיות כליה. גורמי סיכון למחלת הכליות כרוניים תמיד השפעה על תפקוד האנדותל 5. השתמשנו זן עכברים (לואיס) שהוא עמיד יחסית להתפתחות של מחלת כליות כרונית, ולכן אנחנו בשילוב הסרת 5/6th מסת כליות עם תחמוצת חנקן (NO) דלדול 6, 7, 8 ו 9 גבוהה דיאטת מלח. לאחר הגעה והתאקלמות, בעלי חיים מקבלים שום מעכב synthase (L-NNA) בתוספת למי שתייה (20 מ"ג / ליטר) לתקופה של 4 שבועות, ואחריו uninephrectomy צדדי הימנית (UNX) עם המשך של L-NNA אחרי יומיים . שבוע לאחר מכן, כריתת הכליה (SNX) ההסרה כלומר סכום הביניים של 2/3rds של מסת הכליה מבוצעת בצד השמאל. לאחר SNX, בעלי חיים מותר לשחזר עבור 2 ימים לאחר מכן שוב על ידי 20 מ"ג / ליטר LNNA במי שתייה לתקופה של 4 שבועות. תזונה עתירה מלח (6%), בתוספת בקרקע צ'או (ראה תרשים קו זמן 1), הוא המשיך לאורך כל הניסוי. Tהוא הסיבה לביצוע UNX בצד הימין וSNX בצד השמאל הוא שכלי הכליות הם כבר בצד השמאל שהופך אותו קל יותר לגשת הכליות ללא מתיחת כלי יותר מדי כאשר הכליות חשופה מחוץ לגוף . בספרות, מודלים מתוארים שבקטבים של הכליה השמאלית יוסרו ראשון, ואחרי UNX של הכליה הימנית כעבור שבוע 10,11,12. בידיים שלנו מודל זה הראה התפתחות הרבה יותר מהיר של אי ספיקת כליות, אלא גם וריאציה הרבה יותר גדולה באובדן של תפקוד כליות. התקדמות של אי ספיקת כליות ואחריו לאורך זמן על ידי מדידת פלזמה אוריאה, לחץ דם סיסטולי ופרוטאינוריה. בשישה שבועות לאחר SNX, אי ספיקת כליות פיתחה, המתאפיינת בירידה ניכרת בקצב סינון גלומרולרי (69%) וזרימת פלזמה כליות יעילה (62%) 13 יתר לחץ דם (לחץ דם סיסטולי> 150 מ"מ כספית), פרוטאינוריה (> 50 mg/24 uremia HR) והמתון (> 10 מ"מ). תכונות היסטולוגית כוללות טובולנזק O-ביניים בא לידי ביטוי על ידי דלקת, ניוון צינורי וסיסטיק ופקעיות מוקד מוביל להפחתה מסיבית של glomeruli בריא בקרב אוכלוסיית השריד (<10%). מעקב עד 12 שבועות לאחר SNX מציג התקדמות נוספת של מחלת כליות כרונית, המספק חלון ההזדמנויות להערכה של התערבויות טיפוליות.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

כל הניסויים מבוצעים בהתאם לקווים המנחים של בעלי החיים הניסיוניים האתיים של ועדת בעלי החיים הניסיונית אוטרכט. הפרוטוקול מבוצע תחת הדרכתו ואישורו של הטיפול בבעלי החיים של המוסד של המחבר ועדת שימוש.

מחלת כליות כרונית היא מושרה בזכר לואיס חולדות מולדות (צ'ארלס ריבר, Sulzfeld, גרמניה) בגיל 8 שבועות. חולדות הם שוכנו בתנאים סטנדרטיים בסביבת אור, טמפרטורה והלחות מבוקרת.

1. הכנת ניתוח

  1. לעקר מכשירי ניתוח:
    • רקמת תלמיד 1 מלקחיים 1-2 שיניים 12 ס"מ
    • מלקחיים דפוס רגילים תלמיד 1
    • 2 מלקחיים Semken
    • 1 מספריים מאיו
    • 1 איריס מספריים תלמיד
    • בעל מחט אולסן-Hegar 1 עם מספריים
    • שמיכה
  2. לבדוק את רשימת המלאי:
    • הפעלת שולחן עם כרית החימום ומנורה
    • O
    • רקמות
    • מגלח
    • מאזנים
    • ערכת הפעלה סטרילי
    • 5x5 גזה סטרילית ו10x10
    • 70% אלכוהול
    • 0.9% NaCl פתרון
    • מזרק 1 מ"ל
    • מחטים (25G)
    • כריות קצף ג'ל: spongostan
    • Vicryl 4.0 ו 5.0
    • עצירות מ"ג 0.03 ק"ג / (1:10 דילול במלח פיסיולוגי)
    • כלוב נקי לחולדות לאחר ניתוח

2. Uninephrectomy צד ימין

  1. לחטא את הטבלה עם 70% אלכוהול.
  2. עכברוש מקום בתיבת אינדוקציה ולגרום הרדמה עם 4% isoflurane וזרימת 1 ליטר של O 2. הערה: בהתאם לזן העכברים משמש, שיכוך כאבים לפני וPerioperative נקבעו, זה צריך להיות נדון עם הווטרינר המקומי.
  3. העבר את העכבר לשולחן ומקום האף לקונוס. החולדה וחרטומו מונחים על כרית חימום כדי לשמור על טמפרטורת הגוף של החולדה. אני העכברוששל מאוורר בתערובת של 2% isoflurane ו1 ליטר O 2.
  4. לגלח את אגפו של העכברוש ולחטא עם אלכוהול. לשטוף ולחטא את ידי וללבוש כפפות כירורגיות סטריליות. ללבוש כובע ראש ומסכה. הפוך 1-1.5 ס"מ חתך מקביל לצלעות באמצעות מלקחיים אנטומיים ומספריים קהים. לחשוף את הכליה על ידי נתיחה בוטה של ​​שרירי הגב.
  5. הקוטב התחתון של הכליה הוא גלוי, להשתמש בזהירות את המלקחיים הבוטים הקטנים לאחוז רקמות שומן perirenal. להחצין את הכליה על ידי משייכתו בעדינות בשומן perirenal עם מלקחיים. תשמור על עצמך שלא להפריע את בלוטת יותרת הכליה בהליך זה. בלוטת יותרת הכליה ניתן להסיר בקלות על ידי הצבת מלקחיים באתר המדיאלי ברקמות שומן ובעדינות כלפי מעלה עברה בין בלוטת יותרת הכליה והכליה כמתואר באיור 2.
  6. הנח בעדינות על כליות גזה וברורה של רקמות שומן וחיבור. זהה את העורק ווריד הכליה ולמקם את מייתר (5.0vicryl) עם קשר יחיד סביב כלי הדם, אך לא לקשור את הקשר.
  7. הזז את הקשר הרופף בזהירות לאורך כלי כלפי אב העורקים בכ 0.5 ס"מ, כדי ליצור חלל שבין הכליות ואת הקשר. הדבר נעשה כדי למנוע את הקשירה מלהחליק ולנפול לאחר החיתוך.
  8. לקשור קשר עם שני קשרים כפולים. אם זלוף הוא נעצר, הצבע של הכליה ישתנה מייד לחום. אל תחתוך את הקצוות של המייתר.
  9. חותכים את כלי הכליות הקרובים לכליות ולהסיר את הכליה. משוך בעדינות על הקצוות הארוכים של המייתר כדי לבדוק לדימום של כלי הכליות. הקשירה צריכה להישאר במקום על כלי השיט. חותכים את הקצוות הארוכים של המייתר. שימו לב, את כלי כליות השריד יהיה לסגת לתוך חלל הבטן באופן מיידי.
  10. כתם כליות נכרתה לייבש ולשקול אותו.
  11. סגירה חתך שריר השלד עם הריצה עם תפרי Vicryl 5.0. הזרק 0.10 מ"ל (0.03 מ"ג / ק"ג) עצירות im בגפיים האחוריות. סגור אתעור עם Vicryl 4.0 עם תפרי intracutaneous. זה מונע את החולדות מפתיחת הפצע. הערה: עקב דיכוי נשימתי בחולדות לואיס, אנחנו נותנים שיכוך כאבים שלאחר הניתוח רק לפני כיבוי isoflurane.
  12. בית החולדה בכלוב בודד נקי עם גישה קלה למזון ומים. מניחים את החצי הכלוב על התחממות כרית O / N ולבדוק בזהירות את העכברוש ביום שלמחרת. כאשר הפצע סגור והעכברוש הוא פעיל, שהיא בדרך כלל בין 6 ל 12 שעות לאחר ניתוח, ניתן להציב בחזרה את החולדה לדיור קבוצה.

3. צד שמאל Nephrectomy סיכום ביניים

  1. שבעה ימים לאחר מכן, אותם ההכנות נעשות בצד השמאל כמו בצד ימין כמתואר 2.1-2.5. לפני הניתוח, כמות רקמת כליה שצריכה להסיר מקביל לכ 2/3rds של המשקל של הכליה הימנית מחושבת. הכן חתיכות קטנות של קצף ג'ל (Spongostan, ג'ונסון אנד ג'ונסון, ניו ג'רזי) לפני הניתוח. הנח מספריים חדים סביב הקוטב העליון של הכליה השמאלית ולכרות את המוט העליון במכה אחת (למיקום מספריים, ראה איור 3). לכסות מייד עם פיסת קצף ג'ל ולהפעיל לחץ מתון עם גזה סטרילית.
  2. חזור עם המוט התחתון של הכליות כמו ב3.3.
  3. הרם כליות כדי למנוע קרישה על עור. לשמור על לחץ מתון על שתי כריות קצף ג'ל עם גזה סטרילית עד שהדימום ייעצר. כאשר דימום נמשך, להוסיף משטח קצף אחר.
  4. הנח כליות שריד עם כריות קצף ג'ל חסיד בתוך הבטן. סגור את השרירים והעור ופעל 2.9-2.12.

4. שאם ניתוח

  1. פקדים המופעלים דמה לעבור את אותו תהליך, במטרה לחשוף את הכליות. במקום כריתה מוחלטת כליות או חיתוך קטבי שבוע אחד מאוחר יותר, שתי הכליות decapsulated במרווח שבוע אחד, נזהרת שלא להפריע לבלוטת יותרת הכליה. סגירת פצע וטיפול שלאחר הניתוח הם identical ול2.11 2.12.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

לאחר כריתת כלית סכום ביניים, כ 1/6th מסת כליה מוחלטת שנשאר. איור 4 מראה את משקליו של חלק מוסר של הכליה הימנית עם סטיית תקן ממוצעת בשני ניסויים קודמים. אחד צריך לזכור כי בשבוע אחרי UNX, היפרטרופיה של הכליה השמאלית מתרחשת; מצביע על כך שהמשקל שיש להסיר מחושב על בסיס המשקל של הכליה הימנית תמיד תוצאות בפחות מהסרת 5/6th. עם זאת, מאחר שלא ניתן לקבוע את המשקל של הכליה השמאלית במהלך ניתוח; זו הדרך מדויקת ביותר כדי להסיר כ 5/6th של מסת הכליה המקורית.

במשך זמן, חולדות עם מחלת כליות כרונית לפתח יתר לחץ דם, אורמיה, אנמיה, פרוטאינוריה וירידה משמעותית בGFR וERPF. לאחר 6 שבועות, הוקם CKD פיתחה, נקודת הזמן מתאים לבחון התערבויות הצלה. במשך זמן, התקדמות חזקה של יתר לחץ דם וחלבון בשתן הוא ציין תוך המטוקריטותפקוד הכלייתי (GFR וERPF) להראות הידרדרות מתונה (איור 5). תסמינים אחרים שאנחנו לא מתמקדים בניסויים שלנו כוללים derangements בסידן פוספט וחילוף חומרים של שומנים בדם, ועוד רבים אחרים. בהתאם לזן של חולדות, התפתחות מחלת כליות כרונית יכולה להשתנות במידה ניכרת 14, 15, 2. אנחנו הוספנו את דיאטת מלח הגבוהה ולא חוסם לגרום יתר לחץ דם ותפקוד האנדותל.

התקדמות של אי ספיקת כליות היא במעקב על ידי אוסף של שתן (למדידת כמות החלבון וקריאטינין), דם (פלזמה אוריאה וקריאטינין) ולחץ דם הסיסטולי. אנו מבינים שהתפתחות של יתר לחץ דם יכולה להיות אחרי בצורה מדויקת יותר בעת שימוש בטלמטריה במקום plethysmography שרוול זנב. ניתן לחשב את פינוי קריאטינין, אך נוטה לזלזל בירידת GFR בשל הפרשת קריאטינין צינורי נרחבת בחולדות 16, והדגיש את חשיבותה של שיטת תקן הזהב כדי לקבוע תפקוד כליות על ידי אינולין וPAH אישור 17, 18, ​​19. Koeners et al. תאר את ההליך המלא 20. אינולין ואישור PAH מחושבים מריכוזם בדגימת השתן (U), קצב זרימת שתן (V), וריכוז הפלזמה שלהם (P). אנחנו הראיתי בעבר ירידה ניכרת של GFR וERPF במודל זה תוך שימוש בטכנולוגיה קלאסי אישור, ואילו זה היה פחות ברור משינויים בפלזמה קריאטינין, אוריאה פלזמה, או קריאטינין אישור 13.

איור 1
איור 1. קו זמן של L-NNA, דיאטת מלח גבוהה, מדידות UNX וSNX. אורכיים כדי לקבוע פונקציה וסיום נקודת זמן כליות מצוינות. כאשר מעקב ארוך יותר יש צורך לאחר SNX, 6% דיאטת NaCl ניתן להמשיך לאורך זמן.

98fig2.jpg "/>
איור 2. נתיחת בלוטת יותרת הכליה. כדי להסיר את בלוטת יותרת הכליה מבלי להפריע אותו, מלקחיים מקום בשומן בין הכליות ובלוטת יותרת הכליה ומעבר מכלי המוט כלפי מעלה לחלק העליון כמצביע על הקו האדום. איור מותאם מהמהדורה ה -20 של ארה"ב של האנטומיה של גריי של גוף האדם, 1918.

איור 3
איור 3. כריתת כלית סיכום ביניים. קווים אדומים מציינים חיתוך קצוות. איור מותאם מהמהדורה ה -20 של ארה"ב של האנטומיה של גריי של גוף האדם, 1918.

איור 4
איור 4. אחוז רקמת הכליה הוסרה לאחר כריתת כלית סכום הביניים בשני ניסויים שונים. Exp 1, n = 16, exp 2, n = 23.

e = "תמיד"> איור 5
איור 5. התפתחות של אי ספיקת כליות בחולדות CKD הסתיימה 6 שבועות לאחר SNX (קווי sdashed N = 5) לעומת נבדקים בריאים (קווי pdashed n = 5) וחולדות CKD הסתיימו 12 שבועות לאחר SNX (£ N = 8) לעומת בריא • פקדים (n = 8). חולדות CKD קיבל L-NNA עד שבוע 4 ודיאטה מלח גבוהה משבוע 1 עד להפסקה (לא מוצג בגרפים). SNX גורם יתר לחץ דם (שנמדד על ידי tailcuff plethysmography) (א), אורמיה (ב '), אנמיה (C) ופרוטאינוריה (ד') וניכר ירידה של GFR (E) וERPF (F) 13. * צוין p <0.05 לעומת נבדקים בריאים לכל נקודת זמן נבדקת על ידי ניתוח שונה דו כיוונית עם Bonferroni שלאחר בדיקה לגרפי A, B ו-D. הגרפים C, E ו-F נבדקו עם שני זנבמבחן t ל6 ו -12 שבועות נקודת זמן. לחץ כאן לצפייה בדמות גדולה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

הסרה כירורגית של 5/6th מסת כליה בחולדת לואיס, בשילוב עם דיאטה עתירת מלח ועיכוב NOS זמני מובילה למודל של מחלת כליות כרונית דומה למחלת כליות כרוניות אנושית ומאפשרת למחקר של מנגנונים סיבתיים ויעילות של התערבויות טיפוליות במחלת הכליות כרונית.

מודל כריתת כלית 5/6th הוא מודל ידוע ותאר בהרחבה למחלת הכליות כרונית. עם זאת, פשוט הסרת 5/6th מסת הכליה אינה מוביל לאי ספיקת כליות מיידית בכל זני החולדה. אנו משתמשים בחולדות לואיס כדי לחקור את ההשפעות של טיפולים מבוססי תאים במחלת כליות כרוניים כעל זמינותו של ה-GFP + לואיס חולדות 21 מאפשרת מעקב תא של תאי תורם מנוהלים בנמען (nonGFP +) חולדה. עכברוש לואיס הוא עמיד יחסית להתפתחות של פגיעה בכליות והתפתחות של מחלת כליות כרונית הוא איטית בהשוואה לזנים אחרים 22, 15. לכן אנו בשילוב הסרת 5/6th מסת כליות עם NO דלדול ודיאטה מלח גבוה שכן זה דומה לכמה היבטים של מחלת כליות כרונית אנושיתכמו צריכת מלח גבוהה ובפגיעה בתפקוד האנדותל. קוראים צריכים לזכור כי צורך בשילוב עם כריתת כלית 5/6th תזונה עתירה מלח ו / או ללא דלדול תלוי בזן של עכברים המשמשים לניסויים.

בצענו כריתת כלית 5/6th בהליך בן שני שלבים במקום הליך צעד אחד כמו זה נחשב פחות מעיק לבעלי החיים, קשור עם פחות תמותה הקשורה לניתוח והוא מועדף על ידי הוועדה הניסויית בעלי החיים שלנו. אנחנו העדפנו חתך אגף ולא laparatomy להגיע לכליות כlaparotomy קשור לסיכון גבוה יותר של זיהום פצע, התרופפות תפרים, פריצת והידבקויות למעי בהשוואה לחתך אגף התת עורית. יתר על כן, אם עיצוב הניסיון כרוך בהתערבות עם laparotomy - כפי שקורה במחקרים הניסיוניים שלנו לממשל של תאי מח עצם לתוך עורק הכליה מכליות laparotomies ביצוע-השריד לSNX הוא לא מראשferable כlaparotomies החוזרים ונשנים יש להימנע.

בעקבות הסרה כירורגית של 5/6th מסת כליה, כמה בעיות קריטיות יכולות להתרחש. במהלך UNX לא יכול להיות קשיי ייצוב הכליות שכן השומן שמסביב יהיה לנתק בקלות. שתי שיטות ניתן להשתמש כדי לקבל את הכליה חשופה. 1) שימוש במלקחיים קטנים יותר כדי לקבל אחיזה על כלי הכליות בעדינות על ידי נע למטה מהקוטב התחתון של הכליה לכיוון כלי הדם ולמשוך בזהירות עד שתוכל לייצב את הכליות. 2) שימוש במלקחיים בוטים למשוך בזהירות את הכליה מתוך הבטן. כאשר הכליות חשופה, ניתן להשתמש בתחבושת כדי לעצור את הדימום שעלול להתרחש במהלך הליך זה. כדי למנוע דימום, להתחיל למשוך את השומן בקוטב התחתון של הכליה, שבו השומן הוא מחובר חזק לכליות.

זה חשוב כדי ליצור רווח בין הקשר סביב כלי וכליות כדי למנוע דימום לאחר הסרת הכליה כליות כקשר יכול להחליקכלי הכליות עקב זרימת הדם הנכנסת, מילוי הבטן במהירות בדם. גזה יכולה לשמש גם כדי להסיר את לחץ הדם ויש להחיל כדי לעצור את הדימום. השתמש במלקחיים כדי לאחוז את הכליות ואת מקום קשירה חדשה. כאשר לא ניתן לייחס כלי כליות בחזרה, לשמור על לחץ עד שהדימום ייפסק. הוסף 1 מ"ל של מלח פיסיולוגי על מנת למנוע התייבשות כתוצאה מהדימום בחלל הבטן ולהמתין כ -5 דקות לפני סגירת השריר ושכבת עור. לפקח עכברוש נוסף בזהירות בימים הבאים. כאשר המייתר הוא עדיין במקום לאחר הסרת הכליה אך כלי כליות הם הדימום, ניתן להשתמש בקצוות הארוכים של הקשירה לקשור את כלי הדם.

כאשר לאחר נתיחה של הקטבים, למרות לחץ מחזיק בכריות קצף ג'ל אם הדימום ממשיך, זה כנראה עקב פגיעה בעורק כליה גדול או אגן הכליה. דימום זה יכול להיעצר על ידי הצבת כריות קצף ג'ל חדשות על הפצע, נזהר שלא לעבורמשטח הקצף במהלך הרמת השריד מאז כלי גדול יותר קרוב לhilum, ומחכה לתקופה ארוכה יותר.

דם ניתן לאתר בשתן עד 2 ימים לאחר ניתוח. כאשר אגן הכליה פגום או כלי כליות גדול נמשך לדמם, לא יהיו עקבות מתמשכת של המטוריה. חולדות עם המטוריה המתמשכת לאחר ניתוח צריכים להיות מורדמים מאז אותו לא ניתן לעצור את הדימום. אם המטוריה הוא ציין בזמן שלב מאוחר יותר לאחר ניתוח, אשר יכול להתרחש עד 2 שבועות לאחר ניתוח, החולדה צריכה גם להיות מורדמים מאז יש דם קרוש בתוך אגן הכליה וסופו של דבר להדביק את השופכן ושלפוחית ​​השתן, מה שמוביל לחסימה.

כאשר פיתוח מהיר יותר של אי ספיקת הכליות נדרש, יכול להיות הפוך הפרוטוקול, כלומר להסיר תחילה את הקטבים ואחרי uninephrectomy שבוע לאחר מכן. מודל הפוך זה כבר נעשה שימוש בזני עכברים אחרים, ראה לדוגמה ליו et al. 24. מודל אוטם מלווה בשחרור רנין גבוה יותר, עלייה חריפה יותר ומובהקת בלחץ דם ובפציעה 3 גלומרולרי ראשוני יותר. בשני הדגמים, במצב של מחלת כליות כרונית מתפתח יציבה במשך 4 עד8 שבועות. קרישה של קליפת הכליות יכולה לשמש גם כדי להפחית את מסת כליות 25.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

יש מחברים אין לחשוף.

Acknowledgements

אנו מודים קריסטה דן Ouden לקבלת סיוע הטכני המעולה שלה. טכניקה זו נתמכה כלכלית על ידי קרן הכליה ההולנדית, מענק C06.2174. MCV נתמך על ידי הארגון ההולנדי למחקר מדעי (NWO) Vidi-המענק 016.096.359.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Reagent
L-NNA Sigma-aldrich N5501
Spongostan dental: gel foam pads 1x1x1 cm Johnson&Johnson Ms0005
Ethicon Vicryl FS-2S naald 4/0 V392H p/36 Ethicon V303H
Ethicon Vicryl RB-1+ naald 5/0 V303H p/36 Ethicon V392H
Buprenorphine (0.3 mg/ml) Via local pharmacist ordered by Reckitt Benckiser pharmaceuticals unknown
Equipment
Student Tissue Forceps - 1x2 Teeth 12 cm Fine Science Tools (FST) 91121-12
Student Standard Pattern Forceps FST 91100-12
Mayo Scissors FST 14010-15
2X Semken Forceps FST 11008-13
Student Iris Scissors FST 91460-11
Olsen-Hegar Needle Holder FST 12002-14

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. AS, G. o, Chertow, G. M., Fan, D., McCulloch, C. E., Hsu, C. Y. Chronic kidney disease and the risks of death, cardiovascular events, and hospitalization. N. Engl. J. Med. 351, (13), 1296-1305 (2004).
  2. Fleck, C., Appenroth, D., et al. Suitability of 5/6 nephrectomy (5/6NX) for the induction of interstitial renal fibrosis in rats--influence of sex, strain, and surgical procedure. Exp. Toxicol. Pathol. 57, (3), 195-205 (2006).
  3. Griffin, K. A., Picken, M. M., Churchill, M., Churchill, P., Bidani, A. K. Functional and structural correlates of glomerulosclerosis after renal mass reduction in the rat. J. Am. Soc. Nephrol. 11, (3), 497-506 (2000).
  4. Kang, D. H., Kanellis, J., et al. Role of the microvascular endothelium in progressive renal disease. J. Am. Soc. Nephrol. 13, (3), 806-816 (2002).
  5. Baylis, C. Nitric oxide synthase derangements and hypertension in kidney disease. Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. 21, (1), 1-6 (2012).
  6. Bongartz, L. G., Braam, B., et al. Transient nitric oxide reduction induces permanent cardiac systolic dysfunction and worsens kidney damage in rats with chronic kidney disease. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 298, (3), 815-823 (2010).
  7. Fujihara, C. K., De N, G., Zatz, R. Chronic nitric oxide synthase inhibition aggravates glomerular injury in rats with subtotal nephrectomy. J. Am. Soc. Nephrol. 5, (7), 1498-1507 (1995).
  8. Fujihara, C. K., Sena, C. R., Malheiros, D. M., Mattar, A. L., Zatz, R. Short-term nitric oxide inhibition induces progressive nephropathy after regression of initial renal injury. Am. J. Physiol. Renal Physiol. 290, (3), F632-F640 (2006).
  9. Dikow, R., Kihm, L. P., et al. Increased infarct size in uremic rats: reduced ischemia tolerance? J. Am. Soc. Nephrol. 15, (6), 1530-1536 (2004).
  10. Elrashidy, R. A., Asker, M. E., Mohamed, H. E. Pioglitazone attenuates cardiac fibrosis and hypertrophy in a rat model of diabetic nephropathy. J. Cardiovasc. Pharmacol. Ther. 17, (3), 324-333 (2012).
  11. Haylor, J., Schroeder, J., et al. Skin gadolinium following use of MR contrast agents in a rat model of nephrogenic systemic fibrosis. Radiology. 263, (1), 107-116 (2012).
  12. Moriguchi, Y., Yogo, K., et al. Left ventricular hypertrophy is associated with inflammation in sodium loaded subtotal nephrectomized rats. Biomed. Res. 32, (2), 83-90 (2011).
  13. van Koppen, A., Joles, J. A., et al. Healthy bone marrow cells reduce progression of kidney failure better than CKD bone marrow cells in rats with established chronic kidney disease. Cell Transplant. (2012).
  14. Baylis, C., Corman, B. The aging kidney: insights from experimental studies. J. Am. Soc. Nephrol. 9, (4), 699-709 (1998).
  15. Szabo, A. J., Muller, V., Chen, G. F., Samsell, L. J., Erdely, A., Baylis, C. Nephron number determines susceptibility to renal mass reduction-induced CKD in Lewis and Fisher 344 rats: implications for development of experimentally induced chronic allograft nephropathy. Nephrol. Dial Transplant. 23, (8), 2492-2495 (2008).
  16. Darling, I. M., Morris, M. E. Evaluation of "true" creatinine clearance in rats reveals extensive renal secretion. Pharm. Res. 8, (10), 1318-1322 (1991).
  17. Levey, A. S. Measurement of renal function in chronic renal disease. Kidney Int. 38, (1), 167-184 (1990).
  18. Myers, G. L., Miller, W. G., et al. Recommendations for improving serum creatinine measurement: a report from the Laboratory Working Group of the National Kidney Disease Education Program. Clin. Chem. 52, (1), 5-18 (2006).
  19. Hostetter, T. H., Meyer, T. W. The development of clearance methods for measurement of glomerular filtration and tubular reabsorption. Am. J. Physiol. Renal Physiol. 287, (5), F868-F870 (2004).
  20. Koeners, M. P., Racasan, S., Koomans, H. A., Joles, J. A., Braam, B. Nitric oxide, superoxide and renal blood flow autoregulation in SHR after perinatal L-arginine and antioxidants. Acta. Physiol. (Oxf). 190, (4), 329-338 (2007).
  21. van den Brandt, J., Wang, D., Kwon, S. H., Heinkelein, M., Reichardt, H. M. Lentivirally generated eGFP-transgenic rats allow efficient cell tracking in vivo. Genesis. 39, (2), 94-99 (2004).
  22. Kreutz, R., Kovacevic, L., Schulz, A., Rothermund, L., Ketteler, M., Paul, M. Effect of high NaCl diet on spontaneous hypertension in a genetic rat model with reduced nephron number. J. Hypertens. 18, (6), 777-782 (2000).
  23. Liu, Z. C., Chow, K. M., Chang, T. M. Evaluation of two protocols of uremic rat model: partial nephrectomy and. 25, (6), 935-943 (2003).
  24. Griffin, K. A., Picken, M., Bidani, A. K. Method of renal mass reduction is a critical modulator of subsequent hypertension and glomerular injury. J. Am. Soc. Nephrol. 4, (12), 2023-2031 (1994).
  25. Meyer, F., Ioshii, S. O., et al. Laparoscopic partial nephrectomy in rats. Acta. Cir. Bras. 22, (2), 152-156 (2007).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Video Stats