Yüksek Tuz Diyet ve Lewis Rat Kronik Böbrek Hastalığı tetikleyebilecek Nitrik Oksit Sentaz inhibisyonu ile bağlantılı 5/6th nefrektomi

Published 7/03/2013
0 Comments
  CITE THIS  SHARE 
Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Summary

Cerrahi renal kitle 5/6th kaldırarak Lewis sıçan kronik böbrek hastalığı (KBH) kurmak için bir iki aşamalı yöntemi açıklanmıştır. Cerrahi işlem kombinasyonu, NOS-inhibisyonu ve yüksek tuz diyeti nedensel mekanizmaları ve yeni tedavi yaklaşımları gelişimi çalışma izin, insan CKD benzeyen bir model yol açar.

Cite this Article

Copy Citation

van Koppen, A., Verhaar, M. C., Bongartz, L. G., Joles, J. A. 5/6th Nephrectomy in Combination with High Salt Diet and Nitric Oxide Synthase Inhibition to Induce Chronic Kidney Disease in the Lewis Rat. J. Vis. Exp. (77), e50398, doi:10.3791/50398 (2013).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Kronik böbrek hastalığı (KBH) küresel bir sorundur. CKD ilerleme Yavaşlama önemli bir sağlık önceliktir. CKD dengesinin karmaşık bozukluklar ile karakterize olduğundan, bütünleştirici hayvan modellerinde CKD gelişimi ve ilerlemesi çalışma için gereklidir. CKD CKD ve yeni terapötik girişimlerin gelişimini incelemek için, insan CKD çeşitli yönleri benzeyen, 5/6th nefrektomi ablasyon modeli, ilerleyen böbrek hastalığının bilinen bir deneysel model kullanın. Renal kitle brüt azalma ilerici glomerüler ve tübülo-interstisyel yaralanma, kalan nefron kaybı ve sistemik ve glomerüler hipertansiyon gelişimine neden olur. Ayrıca, ilerleyen böbrek içi kılcal kaybı, enflamasyon ve glomerüloskleroz ile ilişkilidir. Için risk faktörleri her zaman endotel fonksiyonu üzerindeki etkisi CKD. Bu taklit için, nitrik oksit (NO) azalması ve yüksek tuz diyeti ile renal kitle 5/6th çıkarılması birleştirir. Varış ve iklimlendirme sonra, hayvanlar yenidenSağ taraflı uninephrectomy takiben 4 haftalık bir süre için içme suyu (20 mg / L) ile desteklenmiş bir NO sintaz inhibitörü (NG-nitro-L-arginin) (L-NNA), alma işlemine. Bir hafta sonra, bir alt toplam nefrektomi (SNX) sol tarafta gerçekleştirilir. SNX sonra, hayvanlar, 4 haftalık bir süre için daha içme suyu (20 mg / L) LNNA takiben iki gün süre ile iyileşmeye bırakıldı edilir. Zemin chow (zaman çizgisi bkz. Şekil 1) de ilave bir yüksek tuz diyeti (% 6), deney boyunca devam edilir. Böbrek yetmezliğinin ilerlemesi plazma üre, sistolik kan basıncı ve proteinüri ölçerek zaman içinde takip eder. SNX sonra altı hafta, böbrek yetmezliği geliştirdi. Böbrek fonksiyonu 'altın standart' inulin ve para-amino hippurik asit (PAH) temizlik teknolojisi kullanılarak ölçülür. CKD Bu model bir glomerüler filtrasyon hızı (GFH) azalma ve etkin renal plazma akışı (ERPF), hipertansiyon (sistolik kan basıncı> 150 mmHg), proteinüri (> 50 mg/24 saat ile karakterizedir) Ve hafif üremi (> 10 mM). Histolojik özellikleri inflamasyon, tübüler atrofi ve fibrozis ve kalan nüfus (<% 10) içinde sağlıklı glomerül büyük azalmaya yol açan fokal glomerüloskleroz yansıyan tübülo-interstisyel zarar içerir. Takip SNX CKD daha fazla ilerleme gösteren 12 hafta sonrasına kadar.

Introduction

Ilerici doğa, takip eden son dönem böbrek hastalığı ve ilişkili kardiyovasküler morbidite ve mortalite nedeniyle, CKD giderek büyüyen bir halk sağlığı sorunu 1'dir. CKD ilerleme Yavaşlama bu nedenle önemli bir sağlık önceliktir. CKD dengesinin karmaşık bozukluklar ile karakterize olduğundan, bütünleştirici hayvan modellerinde CKD gelişimi ve ilerlemesi çalışma için gereklidir. Böbrek birbirleri ile etkileşim farklı hücre tipleri arasında, geniş bir aralık oluşur. Bu karmaşıklık in vitro taklit edilemez.

CKD yeni tedavi girişimleri incelemek, insan CKD 2,3 çeşitli yönleri benzeyen 5/6th nefrektomi ablasyon modeli, ilerleyen böbrek hastalığının iyi bilinen bir deneysel model, kullanın. Renal kitle brüt azalma ilerici glomerüler ve tübülo-interstisyel yaralanma, kalan nefron kaybı ve sistemik ve glomerüler hipertansiyon gelişimine neden olur. Bu Progr ile ilişkiliessive böbrek içi kılcal kaybı 4, inflamasyon ve glomeruloskleroz. Için risk faktörleri her zaman endotel fonksiyonu 5 üzerindeki etkisi CKD. Biz CKD gelişimi nispeten dirençli olan bir fare suşu (Lewis) kullanılan ve bu nedenle nitrik oksit (NO) azalması 6, 7, 8 ve yüksek tuz diyeti 9, renal kitle 5/6th çıkarılması birleştirilir. Varış ve iklimlendirme sonra, hayvanlar iki gün sonra L-NNA devamı ile sağ taraflı uninephrectomy (UNX) takip 4 haftalık bir süre için içme suyu (20 mg / L) için ilave bir NO sentaz inhibitörü (L-NNA), almak . Bir hafta sonra, renal kitle 2/3rds subtotal nefrektomi (SNX) yani kaldırma sol tarafında yapılır. SNX sonra, hayvanlar, 4 haftalık bir süre için içme suyu içinde 20 mg / L, LNNA yine ardından 2 gün süre ile iyileşmeye bırakıldı edilir. Zemin chow (zaman çizgisi bkz. Şekil 1) de ilave bir yüksek tuz diyeti (% 6), deney boyunca devam edilir. TO yandaki UNX gerçekleştirmek için bir neden ve sol taraftaki SNX böbrek damarlarının daha kolay böbrek vücut dışında maruz bırakıldığında çok damarları germeden böbrek erişimi kolaylaştırır sol taraftaki uzun olmasıdır . Literatürde, model bir hafta sonra 10,11,12 sağ böbrek UNX ardından, sol böbrek kutup önce kaldırılır olduğu tarif edilmektedir. Bizim ellerde bu model böbrek yetmezliği çok daha hızlı bir gelişme gösterdi, ama aynı zamanda böbrek fonksiyon kaybı çok daha büyük bir değişim. Böbrek yetmezliğinin ilerlemesi plazma üre, sistolik kan basıncı ve proteinüri ölçerek zaman içinde takip eder. SNX sonra altı hafta, böbrek yetmezliği, geliştirmiştir glomerüler filtrasyon hızında belirgin bir azalma (% 69) ve etkin renal plazma akışı (% 62) 13 hipertansiyon (sistolik kan basıncı> 150 mmHg), proteinüri (ile karakterize> 50 mg/24 saat) ve hafif üremi (> 10 mM). Histolojik özellikleri tubul içeriro-interstisyel zarar inflamasyon, tübüler atrofi ve fibrozis ve kalan nüfus (<% 10) içinde sağlıklı glomerül büyük azalmaya yol açan fokal glomerüloskleroz yansıyan. Takip 12 hafta sonrasına kadar SNX terapötik girişimlerin değerlendirilmesi için bir fırsat penceresi sağlayan, CKD daha fazla ilerleme gösterir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Tüm deneyler Utrecht deneysel hayvan komitenin hayvan deneysel etik kılavuz çizgileri uygun olarak yürütülür. Protokol yazarın kurumun hayvan bakımı ve kullanımı komitesi rehberlik ve onay altında yapılır.

CKD 8 hafta yaşında erkek doğuştan Lewis sıçan (Charles River, Sulzfeld, Almanya) indüklenir. Sıçanlar bir ışık, sıcaklık ve nem kontrollü bir ortamda, standart koşullar altında muhafaza edilmektedir.

1. Cerrahi Hazırlık

  1. Cerrahi aletler sterilize:
    • 1 öğrenci doku 1-2 diş 12 cm forseps
    • 1 öğrenci standart desen forseps
    • 2 Semken forseps
    • 1 Mayo makas
    • 1 öğrenci iris makası
    • Makasla 1 Olsen-Hegar iğne tutucu
    • Battaniye
  2. Envanter listesini kontrol edin:
    • Isınma pad ve lamba ile masa Çalışma
    • O
    • Dokular
    • Tıraş makinesi
    • Terazi
    • Steril çalışma seti
    • Steril gazlı bez 5x5 ve 10x10
    • % 70 alkol
    • % 0.9 'luk NaCl çözeltisi
    • 1 ml şırınga
    • Iğneler (25G)
    • Jel köpük pedler: spongostan
    • Vicryl 4.0 ve 5.0
    • Buprenorfin, 0.03 mg / kg (1:10 fizyolojik tuz içinde seyreltilmiş)
    • Ameliyat sonrası sıçanlar için temiz bir kafes

2. Sağ Taraf Uninephrectomy

  1. % 70 alkol ile masaya dezenfekte edin.
  2. Yeri indüksiyon kutusunda fare ve% 4 izofluran ve O 2 1 litre akışı ile anestezi neden. Not: Kullanılan sıçan suşu bağlı olarak, ön ve perioperatif analjezi reçete edilir, yerel veteriner hekim ile görüşülmelidir bu ihtiyacı.
  3. Koni içine masa ve yer burun sıçan aktarın. Sıçan ve burun konisi sıçan vücut ısısını korumak için bir ısıtma pedi üzerine yerleştirilir. Sıçan is O 2 izofluran ve 1 litre% 2 karışımı ile havalandırılan.
  4. Sıçan kanadını Tıraş ve alkol ile dezenfekte edin. Yıkayın ve dezenfekte el ve steril cerrahi eldiven giyin. Kafa kapağı ve bir maske. 1 olun - 1.5 cm kesi paralel anatomik forseps ve künt makas kullanılarak kaburga. Arka kasların künt diseksiyon ile böbrek Açığa.
  5. Böbreğin alt kutbu görünür, dikkatle perirenal yağ dokusu kavrama küçük künt forseps kullanabilir. Hafifçe forseps ile perirenal yağ çekerek böbrek dışa. Bu işlem sırasında böbreküstü bezi rahatsız dikkat edin. Böbrek üstü bezi kolayca yağ dokusunda medial sitesinde bir forseps koyarak çıkarıldı ve hafifçe böbreküstü bezi ve Şekil 2'de gösterildiği gibi, böbrek arasında yukarı doğru hareket ettirilebilir.
  6. Gazlı bez ve yağ ve bağ dokusu çevreleyen açık hafifçe böbrek yerleştirin. Renal arter ve ven belirlenmesi ve bir bağ (5.0 yervikril) gemilerin etrafında tek bir düğüm ile, ancak düğüm kapalı kravat yok.
  7. Böbrek ve düğüm arasında boşluk oluşturmak için, yaklaşık 0.5 cm aorta doğru damarları boyunca dikkatle gevşek düğüm taşıyın. Bu kesim sonra kaymasını bağ önlemek için yapılır.
  8. Iki çift düğüm ile düğüm. Perfüzyon durduruldu ise böbreğin renk hemen kahverengiye kadar değişecektir. Bağ ucunda kesmeyin.
  9. Böbrek yakın böbrek damarları kesin ve böbrek çıkarın. Yavaşça böbrek damarlarının kanama kontrol etmek için dikilen uzun ucunda çekin. Bağ gemide yerde kalmak gerekir. Bağ uzun biter kesin. Not, kalan böbrek damarlarının hemen karın boşluğuna geri çekilecektir.
  10. Leke eksize böbrek kuru ve tartın.
  11. Vicryl 5.0 ile sütürlerinin ile iskelet kası kesi kapatın. Arka bacak, 0.10 mL (0.03 mg / kg) enjekte buprenorfin im. Yakınintrakutanöz dikişler ile Vicryl 4.0 ile cilt. Bu yara açmasını sıçan engeller. Not: Lewis sıçanlarda solunum depresyonu nedeniyle, sadece sadece izofluran kapatmadan önce post-operatif analjezi verir.
  12. Yiyecek ve su kolay erişim ile temiz bir tek kafeste sıçan ev. Isınma pad O / N kafes yarım yerleştirin ve dikkatli bir şekilde sıçan ertesi gün kontrol edin. Yara kapatıldı ve sıçan ameliyat sonrası 6 ile 12 saat arasında normal olan, aktif olduğunda, sıçan grubu gövde içine tekrar yerleştirilebilir.

3. Sol Taraf Ara toplam nefrektomi

  1. Yedi gün sonra, aynı preparatlar olarak da 2.1 'den 2.5' e tarif sağ tarafı için de sol tarafta yapılır. Ameliyattan önce, sağ böbrek ağırlığının yaklaşık 2/3rds karşılık kaldırılması gerekiyor böbrek doku miktarı hesaplanır. Ameliyat öncesi jel köpük küçük parçalar (Spongostan, Johnson & Johnson, New Jersey) hazırlayın. Sol böbrek üst kutup etrafında keskin bir makas yerleştirin ve bir inme (makas konumu için, bkz. Şekil 3) en üst kutup rezeke. Jel köpük bir parça ile hemen kapak ve steril gazlı bez ile hafif baskı.
  2. 3.3 'de olduğu gibi böbrek alt kutup ile tekrarlayın.
  3. Cilt üzerinde pıhtılaşma önlemek için böbrek kaldırın. Kanama durana kadar steril gazlı bez ile jel köpük pedler hem de hafif basınç koruyun. Kanama devam zaman, başka bir köpük yastık ekleyin.
  4. Karın içinde yapışık jel köpük pedler ile kalan böbrek yerleştirin. Kas ve deri kapatın ve 2,9-2,12 izleyin.

4. Sham Cerrahi

  1. Sham çalışan kontrolleri böbrekler ortaya koymak için aynı prosedürü tabi. Bunun yerine böbrek kökünü kazıma ya da bir hafta sonra direkleri kesme, böbrekler her iki böbreküstü bezleri rahatsız etmemek için özen, bir hafta arayla decapsulated vardır. Yara kapatılması ve ameliyat sonrası bakım kimliği olan2.11 ve 2.12 için entical.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Subtotal nefrektomi sonra, toplam böbrek kütlesinin yaklaşık 1/6th bırakılır. Şekil 4 önceki iki deneylerde ortalama ve standart sapma ile doğru böbrek Çıkarılan parçanın ağırlığını gösterir. Bir UNX sonra hafta, sol böbrek hipertrofisi oluşur tutmalı; belirten 5/6th kaldırma daha az doğru böbrek her zaman sonuçlarının ağırlığına göre hesaplanan kaldırılması gerekiyor ağırlık. Bu ameliyat sırasında sol böbrek ağırlığını belirlemek mümkün olmadığı için ancak, bu orijinal böbrek kütlesinin yaklaşık 5/6th kaldırmak için en doğru yoldur.

Zamanla, CKD ile sıçan hipertansiyon, üremi, anemi, proteinüri ve GFR ve ERPF önemli bir azalma gelişir. 6 hafta sonra, kurulan CKD, kurtarma yöntemlerinin belirlenmesi için zaman noktası uygun bir geliştirmiştir. Zamanla, hipertansiyon ve proteinüri güçlü ilerleme görülmektedir ise hematokritve böbrek fonksiyon (GFH ve ERPF) hafif bozulma (Şekil 5) göstermektedir. Bizim deneylerde odaklanmak değil diğer belirtiler kalsiyum-fosfat ve lipid metabolizmasında bozukluklar, ve diğerleri sayılabilir. Sıçanların suşu bağlı olarak, CKD gelişimi belirgin şekilde 14, 15, 2 değişebilir. Biz yüksek tuz diyet ve hipertansiyon ve endotel disfonksiyonu ikna etmek için bir engelleyici NO ekledi.

Böbrek yetmezliğinin ilerlemesi idrar toplanması (protein ve kreatinin miktarının ölçümü için), kan (plazma üre ve kreatinin) ve sistolik kan basıncı ile izlenir. Biz telemetri yerine kuyruk manşet pletismografisi kullanırken hipertansiyon bu gelişme daha doğrusu takip edilebilir fark. Kreatinin klirensi hesaplanır ama tarafından renal fonksiyon belirlemek için altın standart yöntemin önemini vurgulayan, nedeniyle sıçanlarda 16 geniş tübüler kreatinin salgılanmasına GFR düşüş hafife eğilimi olabilir inulin ve PAH boşluk 17, 18, ​​19. Koeners ve ark. Tüm işlem 20 açıklanmıştır. Inulin ve PAH boşluk idrar örneğinde kendi konsantrasyonu (U), idrar akış hızı (V), ve plazma konsantrasyonu (P) hesaplanır. Bu plazma kreatinin, üre plazma veya kreatinin klirensi 13 değişikliklerden daha az belirgin iken, daha önce, klasik bir temizleme teknolojileri kullanarak bu modeldeki GFR ve ERPF belirgin bir azalma göstermiştir.

Şekil 1
Şekil 1. Böbrek fonksiyonu ve sonlandırma zaman noktası belirlemek için L-NNA bir zaman çizgisi, yüksek tuz diyeti, UNX ve SNX. Boyuna ölçümleri gösterilir. Uzun takip zaman SNX sonra gereklidir,% 6 NaCl diyet zaman içinde devam edilebilir.

98fig2.jpg "/>
Şekil 2. Böbreküstü bezi diseksiyonu. Kırmızı çizgi ile işaret olarak böbrek ve böbreküstü bezi ve üst geminin kutup yukarıya doğru hareket arasındaki yağ, yer forseps bu bozmadan böbreküstü bezi kaldırmak için. İnsan vücudu, 1918 Gray'in Anatomisi 20. ABD baskısı adapte Şekil.

Şekil 3,
Şekil 3,. Ara toplam nefrektomi. Kırmızı çizgiler kenarları kesme gösterir. İnsan vücudu, 1918 Gray'in Anatomisi 20. ABD baskısı adapte Şekil.

Şekil 4,
Şekil 4. Iki farklı deneylerde subtotal nefrektomi sonra kaldırılır böbrek dokusu yüzdesi. Exp 1, n = 16, Exp 2, n = 23.


CKD sıçanlarda böbrek yetmezliği Şekil 5. Geliştirme 6 hafta SNX sonra sona (sdashed hatları n = 5) vs sağlıklı kontrol (n = 5 pdashed hat) ve CKD sıçan vs sağlıklı TL (n = 8) 12 hafta SNX sonra sona kontroller (• n = 8). CKD sıçan hafta 1 hafta 4 ve yüksek tuz diyeti kadar L-NNA aldı sonlandırma (grafikler gösterilmemiştir) kadar. SNX GFR (E) ve ERPF (F) 13 hipertansiyon (tailcuff pletismografi ile ölçülür) (A), üre (B), anemi, (C) ve proteinüri (D) ve belirgin bir azalma neden olur. * Bonferroni grafikleri A, B ve D için son test ile iki yönlü ANOVA ile test her noktası için p <0.05 vs sağlıklı kontrol belirtilmiştir. Grafikler C, E ve F bir iki kuyruklu test edilmiştir6 ve 12 hafta süre noktası için t-testi. büyük rakam görmek için buraya tıklayın .

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Yüksek tuz diyeti ve geçici NOS inhibisyonu ile birlikte Lewis sıçanlarda renal kitle, bir 5/6th cerrahi olarak çıkarılması insan CKD benzer CKD bir modeli yol açar ve CKD medikal tedavinin nedensel mekanizmaları ve etkinliğinin çalışma sağlar.

5/6th nefrektomi modeli CKD, iyi bilinen ve geniş çapta tarif modelidir. Ancak, sadece böbrek kitle 5/6th kaldırarak tüm sıçan suşları acil böbrek yetmezliğine yol açmaz. Biz GFP + Lewis sıçan 21 durumu gibi CKD hücre bazlı tedavilerin etkilerini incelemek için Lewis sıçan kullanmak alıcı uygulanan donör hücrelerinin hücre-izleme (nonGFP +) sıçan sağlar. Lewis sıçan yavaş diğer suşlar 22, 15 'e kıyasla, böbrek hasarı ve CKD gelişimi geliştirilmesine oldukça dayanıklıdır. Bu insan CKD çeşitli yönleri benzer beri nedenle NO tükenmesi ve yüksek tuz diyeti ile renal kitle 5/6th çıkarılması kombineyüksek tuz alımı ve endotel disfonksiyonu gibi. Okuyucular yüksek tuzlu diyet ve / veya NO tükenmesi ile 5/6th nefrektomi birleştirerek ihtiyacını deneyler için kullanılan sıçanların gerginlik bağlı olduğunu akılda tutmak gerekir.

Bu, hayvan için daha az külfetli olarak kabul edilir daha az cerrahi ile ilişkili mortalite ile ilişkilidir ve hayvan deneysel komitesi tarafından tercih edilir gibi yerine tek adım prosedürü bir iki aşamalı bir prosedür içinde 5/6th nefrektomi. Biz, dikiş gevşeme, laparotomi yara enfeksiyonu riski ile ilişkili olarak böbrek ulaşmak için deri altı hernisi ve yan kesi göre bağırsaklara yapışıklıklar kanadını kesi yerine laparatomi tercih. Deneysel tasarım laparotomi ile müdahale içeriyorsa Ayrıca, - gibi SNX için kalan böbrek-performans laparotomilerin renal arter içine kemik iliği hücrelerinin yönetimi için deneysel çalışmalarda durum önceden değil birtekrar laparotomiler olarak ferable kaçınılmalıdır.

Renal kitle 5/6th cerrahi olarak çıkarılması ardından, pek çok kritik sorunları ortaya çıkabilir. UNX sırasında çevredeki yağ kolayca ayırmak çünkü böbrek stabilize zorluklar olabilir. Iki yöntem böbrek maruz elde etmek için de kullanılabilir. 1) yavaşça damar yönelik böbreğin alt kutbu aşağı hareket ettirerek böbrek damarları üzerinde kavrama almak için küçük forseps kullanın ve böbrek stabilize kadar dikkatli bir şekilde çekin. 2) dikkatli bir şekilde karın böbrek çekin künt forseps kullanın. Böbrek maruz kaldığı zaman, gazlı bez Bu işlem sırasında ortaya çıkabilecek kanamayı durdurmak için kullanılabilir. Kanama önlemek için, yağ güçlü böbrek bağlı böbrek, alt kutbunda yağ çekerek başlar.

Düğüm kayabilir gibi böbrek damar ve böbrek çıkarıldıktan sonra kanamayı önlemek için böbrek etrafında düğüm arasındaki alan oluşturmak için önemlidirhızla kan ile karın doldurma gelen kan akımı nedeniyle böbrek damarları,. Bir gazlı kanın temizlenmesi ve basınç kanamanın durdurulması için uygulanmalıdır kullanılabilir. Böbrek kavrama ve yeni bir bağ yerleştirmek için forseps kullanın. Kanama durana kadar böbrek damarları takip edilemez zaman, basınç korumak. Karın boşluğunda kanama nedeniyle su kaybını önlemek ve kas ve deri tabakası kapatmadan önce yaklaşık 5 dakika beklemek zorunda fizyolojik tuz 1 ml ekleyin. Şu günlerde dikkatle ekstra sıçan izleyin. Bağ böbrek ama böbrek damarlarının kanama çıkarılmasından sonra hala yerinde olduğunda, bağ uzun uçları damarlarından bağlamak için kullanılabilir.

Kanama devam ederse kutup diseksiyonu sonra, jel köpük pedler tutarak baskılara rağmen, bu büyük olasılıkla büyük bir renal arter veya renal pelvis sakatlığı nedeniyle zaman. Bu kanama, yara yeni jel köpük pedler yerleştirerek taşımak için özen ile durdurulabilirbüyük gemilerin hilusu yakın olduğundan kalıntısı kaldırma, ve uzun bir süre bekliyor sırasında köpük yastık.

Kan 2 gün sonrası cerrahi kadar idrarda izlenebilmektedir. Renal pelvis hasar veya büyük böbrek damar kanamaya devam edildiğinde, hematüri kalıcı bir iz olacaktır. Bu kanamayı durdurmak mümkün olmadığı için ameliyat sonrası kalıcı hematüri ile sıçan ötenazi olması gerekir. Kan renal pelvis içinde pıhtılaşmış vardır ve sonunda tıkanıklığa yol açan, üreter ve mesane yapışmasına neden çünkü hematüri ameliyat sonrası zaman noktası daha sonra da görülürse, bu kadar ameliyat sonrası 2 hafta oluşabilir, sıçan da ötenazi edilmelidir.

Böbrek yetmezliği daha hızlı gelişimi gerekli olduğunda, protokol tersine çevrilebilir, yani ilk olarak bir hafta sonra uninephrectomy takip kutup çıkarın. Bu tersine modeli diğer sıçan suşları kullanılmıştır, örneğin Liu ve ark görün. 24 tarafından incelenmiştir. Infarktüsü modeli yüksek renin açıklaması, bir kan basıncı daha fazla akut ve belirgin artış ve daha ilk glomerüler hasara 3 eşlik ediyor. Her iki modelde de, kronik stabil böbrek hastalığı bir devlet 4 boyunca gelişir8 hafta. Renal korteks Pıhtılaşma aynı zamanda renal kütle 25 azaltmak için kullanılabilir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Acknowledgements

Biz onu mükemmel teknik yardım için Krista den Ouden teşekkür ederim. Bu teknik, mali, Hollanda Böbrek vakıf, hibe C06.2174 tarafından desteklenmiştir. MCV Bilimsel Araştırma Hollanda örgütü (NWO) Vidi-hibe 016.096.359 tarafından desteklenmektedir.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Reagent
L-NNA Sigma-aldrich N5501
Spongostan dental: gel foam pads 1x1x1 cm Johnson&Johnson Ms0005
Ethicon Vicryl FS-2S naald 4/0 V392H p/36 Ethicon V303H
Ethicon Vicryl RB-1+ naald 5/0 V303H p/36 Ethicon V392H
Buprenorphine (0.3 mg/ml) Via local pharmacist ordered by Reckitt Benckiser pharmaceuticals unknown
Equipment
Student Tissue Forceps - 1x2 Teeth 12 cm Fine Science Tools (FST) 91121-12
Student Standard Pattern Forceps FST 91100-12
Mayo Scissors FST 14010-15
2X Semken Forceps FST 11008-13
Student Iris Scissors FST 91460-11
Olsen-Hegar Needle Holder FST 12002-14

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. AS, G. o, Chertow, G. M., Fan, D., McCulloch, C. E., Hsu, C. Y. Chronic kidney disease and the risks of death, cardiovascular events, and hospitalization. N. Engl. J. Med. 351, (13), 1296-1305 (2004).
  2. Fleck, C., Appenroth, D., et al. Suitability of 5/6 nephrectomy (5/6NX) for the induction of interstitial renal fibrosis in rats--influence of sex, strain, and surgical procedure. Exp. Toxicol. Pathol. 57, (3), 195-205 (2006).
  3. Griffin, K. A., Picken, M. M., Churchill, M., Churchill, P., Bidani, A. K. Functional and structural correlates of glomerulosclerosis after renal mass reduction in the rat. J. Am. Soc. Nephrol. 11, (3), 497-506 (2000).
  4. Kang, D. H., Kanellis, J., et al. Role of the microvascular endothelium in progressive renal disease. J. Am. Soc. Nephrol. 13, (3), 806-816 (2002).
  5. Baylis, C. Nitric oxide synthase derangements and hypertension in kidney disease. Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. 21, (1), 1-6 (2012).
  6. Bongartz, L. G., Braam, B., et al. Transient nitric oxide reduction induces permanent cardiac systolic dysfunction and worsens kidney damage in rats with chronic kidney disease. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 298, (3), 815-823 (2010).
  7. Fujihara, C. K., De N, G., Zatz, R. Chronic nitric oxide synthase inhibition aggravates glomerular injury in rats with subtotal nephrectomy. J. Am. Soc. Nephrol. 5, (7), 1498-1507 (1995).
  8. Fujihara, C. K., Sena, C. R., Malheiros, D. M., Mattar, A. L., Zatz, R. Short-term nitric oxide inhibition induces progressive nephropathy after regression of initial renal injury. Am. J. Physiol. Renal Physiol. 290, (3), F632-F640 (2006).
  9. Dikow, R., Kihm, L. P., et al. Increased infarct size in uremic rats: reduced ischemia tolerance? J. Am. Soc. Nephrol. 15, (6), 1530-1536 (2004).
  10. Elrashidy, R. A., Asker, M. E., Mohamed, H. E. Pioglitazone attenuates cardiac fibrosis and hypertrophy in a rat model of diabetic nephropathy. J. Cardiovasc. Pharmacol. Ther. 17, (3), 324-333 (2012).
  11. Haylor, J., Schroeder, J., et al. Skin gadolinium following use of MR contrast agents in a rat model of nephrogenic systemic fibrosis. Radiology. 263, (1), 107-116 (2012).
  12. Moriguchi, Y., Yogo, K., et al. Left ventricular hypertrophy is associated with inflammation in sodium loaded subtotal nephrectomized rats. Biomed. Res. 32, (2), 83-90 (2011).
  13. van Koppen, A., Joles, J. A., et al. Healthy bone marrow cells reduce progression of kidney failure better than CKD bone marrow cells in rats with established chronic kidney disease. Cell Transplant. (2012).
  14. Baylis, C., Corman, B. The aging kidney: insights from experimental studies. J. Am. Soc. Nephrol. 9, (4), 699-709 (1998).
  15. Szabo, A. J., Muller, V., Chen, G. F., Samsell, L. J., Erdely, A., Baylis, C. Nephron number determines susceptibility to renal mass reduction-induced CKD in Lewis and Fisher 344 rats: implications for development of experimentally induced chronic allograft nephropathy. Nephrol. Dial Transplant. 23, (8), 2492-2495 (2008).
  16. Darling, I. M., Morris, M. E. Evaluation of "true" creatinine clearance in rats reveals extensive renal secretion. Pharm. Res. 8, (10), 1318-1322 (1991).
  17. Levey, A. S. Measurement of renal function in chronic renal disease. Kidney Int. 38, (1), 167-184 (1990).
  18. Myers, G. L., Miller, W. G., et al. Recommendations for improving serum creatinine measurement: a report from the Laboratory Working Group of the National Kidney Disease Education Program. Clin. Chem. 52, (1), 5-18 (2006).
  19. Hostetter, T. H., Meyer, T. W. The development of clearance methods for measurement of glomerular filtration and tubular reabsorption. Am. J. Physiol. Renal Physiol. 287, (5), F868-F870 (2004).
  20. Koeners, M. P., Racasan, S., Koomans, H. A., Joles, J. A., Braam, B. Nitric oxide, superoxide and renal blood flow autoregulation in SHR after perinatal L-arginine and antioxidants. Acta. Physiol. (Oxf). 190, (4), 329-338 (2007).
  21. van den Brandt, J., Wang, D., Kwon, S. H., Heinkelein, M., Reichardt, H. M. Lentivirally generated eGFP-transgenic rats allow efficient cell tracking in vivo. Genesis. 39, (2), 94-99 (2004).
  22. Kreutz, R., Kovacevic, L., Schulz, A., Rothermund, L., Ketteler, M., Paul, M. Effect of high NaCl diet on spontaneous hypertension in a genetic rat model with reduced nephron number. J. Hypertens. 18, (6), 777-782 (2000).
  23. Liu, Z. C., Chow, K. M., Chang, T. M. Evaluation of two protocols of uremic rat model: partial nephrectomy and. 25, (6), 935-943 (2003).
  24. Griffin, K. A., Picken, M., Bidani, A. K. Method of renal mass reduction is a critical modulator of subsequent hypertension and glomerular injury. J. Am. Soc. Nephrol. 4, (12), 2023-2031 (1994).
  25. Meyer, F., Ioshii, S. O., et al. Laparoscopic partial nephrectomy in rats. Acta. Cir. Bras. 22, (2), 152-156 (2007).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Video Stats