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Myocutaneous 국소 빈혈 reperfusion 상해의 쥐 모델 : 현장 가로 직근 abdominis의 Myocutaneous 플랩의

1Department of Surgery, Royal Infirmary of Edinburgh, 2Department of Nephrology, Royal Infirmary of Edinburgh
Medicine

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Summary

무료 조직 전송이 널리 종양학 절제술 및 외상 후 형태와 기능을 복원하는 재건 수술에 사용됩니다. 수술하기 전에이 조직을 전처리하는 것은 결과를 향상시킬 수 있습니다. 이 문서에 설명

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Edmunds, M. C., Wigmore, S., Kluth, D. In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury. J. Vis. Exp. (76), e50473, doi:10.3791/50473 (2013).

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Abstract

무료 조직 전송은 로컬 옵션이나 그 필요한 복합 조직에 순종하지 복잡한 결함을 복구하는 재건 수술의 황금 표준입니다. 허혈 재관류 손상 (IRI)의 부분 피판 실패의 알려진 원인과 효과적인 치료가 없습니다. 이 부상의 실험 모델을 구축하는 것은 비용이 많이 드는 증명할 수있는 재정적으로 큰 포유 동물은 종래 이러한 절차의 기술적 어려움이 일반적으로 경험 microsurgeon을 고용 필요에 의해 사용되는 전문 지식 필요하므로. 이 출판물 및 비디오 미세 전문 지식을 필요로하지 않는 쥐의​​ IRI의 모델을 효율적으로 사용하는 방법을 보여줍니다. 이 절차는 atraumatic 클램프는이 수술과 관련된 허혈 - 재관류 손상을 재현하기 위해 이용되는 가로 abdominis의의 myocutaneous (TRAM) 플랩 현장 모델입니다. 레이저 도플러 영상 (LDI) 스캐너 플랩 관류 및 이미지 프로세싱 softwa를을 평가하기 위해 사용된다다시 부상의 주요 결과 측정 등의 비율 지역 피부 생존을 평가하는 이미지 J.

Introduction

이 프로토콜의 목적은 중재 전략을 조사 할 수 있도록 할 수있는 방법을 무료 조직 전송에서 관찰 된 허혈 - 재관류 손상의 신뢰성과 재현성 모델을 보여주는 것입니다.

무료 조직 전송받는 사이트에서 네이티브 혈관 절편의 절단하고 혈관의 문합과 그 조직의자가 이식 다음 조직의 고립 된 블록의 혈관 박리로 정의됩니다. 절차는 FTT로 알려져 있고, 조직은 피판이라고 전송되는.

무료 조직 전송은 로컬 옵션 부적합하거나 사용할 수없는 복잡한, 복합 결함의 교정을위한 황금 표준 방법입니다. 1-4 국소 빈혈 reperfusion 상해 (IRI)는, 무료 조직 전송에 피할 수없는 실패 5,6 플랩에 기여하고 더이 효과적인 치료. 피판 수술의 선택 과목 성격은 pharmacologi의 관리를 허용IRI에 대한 전제 조건에 칼 에이전트.

내피 세포 활성화 및 신진 대사 장애에 의한 미세 혈관을 통해 손상된 흐름 IRI 결과, 7 모세 혈관 투과성 및 후속 간질 부종 7, 염증 세포의 유입, 염증 중재자의 8 릴리스, 반응성 산소 종 9 보수 증착 증가했다. 10 저산소증이 복잡한 과정 후속 재관류 손상은 궁극적으로 세포 죽음에 이르게한다. myocutaneous IRI의 모델을 평가하는 임상 결과에 대한 전략을 컨디셔닝의 효과를 가능하게합니다. 최근의 연구는 사람을 대상으로 기존의 동물 실험에서 관찰 된 분자 변화를 비교하여 인간의 IRI에 대한 대리로 IRI 연구의 동물 모델의 사용을 확인했다. 10,11

쥐 가로 rectus의 abdominis의 myocutaneous (TRAM) 플랩은 우선 독일어 12 1993 1987에 설명 된영어 13. 이 모델은 IRI 무료 조직 전송과 관련된 줄이기 위해 다양한 전략을 조사하는 저렴한, 강력한 모델로 폭 넓은 인기를 13-25되었습니다. 이러한 연구 14,17-22 대부분은, 깊은, 열등에 따라 unipedicled 전차 플랩으로 설계되었습니다 . 수술 후 후속의 다른 길이 (2~10일) -이 연구에서 데이터의 상복부의 혈관 경 15-18,20-22 비교는 서로 다른 크기의 피부 섬 (30cm 2 10.5)의 사용에 의해 복잡합니다. 이러한 연구의 제어 팔 평균 총 비율 지역 플랩 괴사는 69 ± 6.2 % (± SEM을 의미)입니다. 그것은이 여섯 신문의 모든 혈관 경을위한 캐리어로 직근 abdominis의 근육을 고용하지만, 분할하고 혈관을 microanastomose 또는 클램프, 노출되지 않도록주의해야한다. 장 등은. 23 우수 상복부의 혈관에 따라 실제, 무료 쥐 전차 플랩을 설명 보유하고있는 F바퀴가 제기 혈관 나누어 myocutaneous 플랩 전송 및 사타구니 혈관 microanastomosed 하였다. 0.5 mm 구경 혈관 -이 어려운 기술은 0.45 microanastomosis을 요구했다. 만 다섯을 수행하고이 67 % 살아 남았다. 23등으로 설명 모델. 그것이 정말 FTT 동안 발생한 부상을 거울로 23 인간의 자유 TRAM 피판을위한 훌륭한 모델입니다.했다 쥐 전차 플랩의 다른 출판 모델은 더 정확하게 인간 pedicled TRAM 동안 발생한 상해를 반영하지만, 정확하게 혈관 고정하거나 분할 절대로 경하고 재관류 다음 허혈성 기간을 거치지 않고 이러한 플랩으로 IRI를 반영하지 않습니다 microanastomosis을 수행했습니다. 이 프로토콜 및 비디오 IRI가 microclamps를 사용하여 복제 된 쥐의 전차를 사용하여 무료 조직 전송의 새로운 모델을 설명합니다. 이보다 충실 경 전차 전임자보다 IRI 복제하지만 performi보다 기술적으로 쉽다NG microanastomosis. Microclamps 널리 IRI 고체 장기 이식과 관련된 다시 이식 연구자들에 의해 사용되어왔다; 26-33 그러나, 이것은이 쥐 전차 플랩에 설명 된 것은 이번이 처음이다.

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Protocol

모든 수술은 영국의 홈 오피스 에딘버러의 수의학 대학 의학과에 의해 설정된 지침에 따라 수행됩니다.

1. 수술 셋업 노트

  1. 깨끗한 외과 수술, 가운, 스크럽 모자와 마스크로 변경합니다. 70 % 이소 프로필 알코올의 2 % 클로르헥시딘과 장비를 포함한 수술실의 모든 표면을 청소합니다.
  2. 수술에 앞서, 모든 수술 소모품 및 절차에 사용되는 악기를 압력솥. 작업 당 무균 팩은 다음을 포함한다 : 3 커튼, 거즈,면 끝 도포, 실리콘 시트 및 수술 악기, 특정 수술 재료 및 도구 및 그림 1의 표를 참조하십시오. 쥐 무게와 절차를 완료하기 전에 피하 주사 1 시간을 관리 할 부 프레 노르 핀의 적절한 볼륨 (0.04 ㎎ / ㎏) 밖으로 측정. 레이아웃, 외과 동안 피하 유동성 관리를위한 3 x 1 ML의 주사기ERY 2 개, 6-0 Vicryl 봉합사 1 개, 5-0 Ethilon 봉합, 눈금자 및 10 블레이드 일회용 메스, 4 멸균 마커 - 5 멸균 장갑의 쌍 휴대용 소작 단위입니다.
  3. 장소 4는 개의 x 10 ㎖ 멸균, 물을 욕조에있는 0.1 Mpix, JPG 0.9 % 생리 식염수 작은 유리 병는 37 ° C.에 따뜻하게 이 피하 유체 교체를 위해 사용됩니다 (1 ML / ㎏ / HR) 및 수술 부위를 세척 할 것. homeothermic 담요, 직장 프로브, 열 램프, 운영 현미경 및 마취 장비를 설정합니다. 레이저와 자사의 소프트웨어를 켜고, 다른 마취 장비 설치 및 동물 스캔하는 동안 누워 것입니다하는 블랙 매트 아래에 열 패드를 놓습니다.
  4. 250-300그램 무게 남성, 루이스 쥐를 사용합니다. 어떤 수술 전 12 시간 빛 어두운주기 음식과 물을 광고 무제한으로 7 일 동안 집에 쥐가 수행됩니다.

2. 마취 및 피부 준비

  1. 마취 장비의 유도 챔버에 쥐를 배치하고에 대한 1L/min O 2와 함께 4 % isoflurane을 관리합니다마취 유도 2 ~ 3 분. 챔버에서 마취 쥐를 제거하고 깨끗한 온수 매트에 누운 놓습니다. 코 콘을 사용하여 1.5 %의 isoflurane을 유지합니다. 절차를 수행하는 동안 각막 마모를 방지하기 위해 lacrilube 또는 유사한 에이전트를 적용합니다. 동물이 진행하기 전에 적절하게 마취인지 확인하는 발 패드 핀치 테스트를 수행합니다. 절차의 각 중요한 단계 전에 마지막 테스트를 반복하고 그에 따라 흡입 마취제의 농도를 조정합니다.
  2. 전체 복부 표면이 노출되도록 가깝게 전기 면도기를 사용하여 전방 복부를 면도. 공급 업체에서 권장하는 기간 동안 크림을 depilating 적용됩니다. 크림을 제거하고 철저 크림의 모든 흔적을 제거하기 위해 예열 멸균 식염수로 피부를 씻어. 피부에 70 % 이소 프로필 알코올의 2 % 클로르헥시딘을 적용하고 계속 진행하기 전에 건조 할 수 있습니다. 이는 외과 사이트 감염에에 대한 현재의 증거를에 근거를 둔 우리의 단위에있는 표준 피부 준비이다. 34하시기 바랍니다 D귀하의 수의학 부서와 함께 iscuss 피부 준비 프로토콜을 선출하기 전에 당신의 유닛에 표준 절차 것입니다.
  3. 장소 2 드레이프는 중 하나를 쥐의 측면과 그 (것)들을가 멸균 유지하기 위해주의를 기울입니다. 멸균 장갑을 착용하고 조수의 도움으로 멸균 팩을 엽니 다. 모두 한 드레이프의 악기와 봉합, 거즈,면 도포 구, 실리콘 시트 및 기타 눈금자와 멸균 마커 펜을 놓습니다.
  4. 참조 점으로 흉부의 검상 부부와 꼬리를 사용하여 정중선을 식별합니다. 중간 선을 표시합니다. 조류 늑골의 검상 돌기 아래에 0.8 cm를 측정하고이 점을 표시합니다. 이 시점에서 중간 선에 수직 인 선을 그립니다. 1cm와 2cm 왼쪽과 정중선의 오른쪽 밖으로 플랩 마크의 중심으로 정중선을 가지고. 지점에서 정중선에 평행 한 수직선을 그립니다. 원래 수평선 아래 4cm를 측정하고 또 다른 평행을 그립니다. 이러한 지시 사항에 따라 4 동일한 스트립으로 나누어 4 x 4 개의 센티미터 플랩은 묘사되어 있습니다(그림 2을 참조).

3. 레이저 도플러 영상

  1. 조심스럽게 LDI 스캐너에서 두 번째 마취 장비의 코 콘에 쥐를 이동합니다. isoflurane을 1.5 %, 1L/min O 2시에 마취를 계속합니다. 레이저의 전원을 켜고 스캔을 시작하기 위해 제조 업체의 지침을 따르십시오. 스캔 한 파일을 저장 한 후 첫 번째 장비로 쥐를 반환하고 윤활유 부드러운 흰색 파라핀을 사용하여 homeothermic 담요 직장 프로브를 다시 삽입합니다.

4.에서 현장 전차 플랩 - IRI의 Myocutaneous 모델

  1. 다시 스크럽 손과 신선한 멸균 장갑을 넣어. 나머지 무균 드레이프의 중심에서 5 cm 직경의 원을 잘라 주름 잡아 드리 워진 멸균 필드를 만들 노출 복부를 통해이 문제를 배치합니다.
  2. 왼쪽 측면 표시된 가장자리에 (그림 3AB) 아래로 절개를 확인합니다. 지혈을 얻을 수 있습니다. 가로 선 아래로 유사한 절개를 만들기정중선의 왼쪽에. 지혈을 얻을 수 있습니다.
  3. 지방 덮고은 왼쪽 직근 칼집 볼 수 있어야합니다. 주의 집게 및 미세 홍채 가위를 사용하면이 지방 아래 얻을. 왼쪽 전방 직근 칼집 통해 오는 천공이 손상되지 않도록주의하십시오. 같은 해부에 의해 연 비행기는 바로 앞쪽에 복벽 근막 이상입니다. 경계가 여백의 주위에이 비행기에서 해부 계속합니다. 왼쪽의 장골 포사에있는 큰, 피상적 인 곡절 악센트의 장골의 혈관가-이러한가 묶여 또는 불로 지 졌죠 할 수 있습니다는 자리 잡고 있습니다. 다음주의 내측 절개를 확장하고 만 멀리 왼쪽 직근의 외측 한계로. 핑크에서 가까운 흰색 (그림 3C)이 시점에서 분명한 색깔 변화가있다. 조심스럽게 멸균 식염수 지역을 관개하고 지혈이 지역에 촉촉한 거즈를하기 전에 달성되었는지 확인합니다.
  4. 반대측 측면에의 절차를 반복하되,이 시간은 t를을 확장리네아 알바 (중간 선) ㅇ. 오른쪽 직근 abdominis의 근육 (그림 3D)의 중심부에 발생하는 모든 musculocutaneous 천공을 확인하고 부식주의하십시오. 이가 제대로 완료되지 않은 경우에는 수술 후 혈종 및 스퓨리어스 결과를 초래할 수 있습니다. 마찬가지로, 지혈을 달성 관개와 제기 플랩에 촉촉한 거즈를 놓습니다.
  5. 왼쪽 전방 직근의 하연 (그림 3EF)로 돌아갑니다. 본 가장 열등한 구멍을 부식. microscissors를 사용하여 전방 직근 칼집에있는 작은 (약 0.6 cm X 0.6 cm) 창을 삭감하고 그래 페 집게를 곡선 뾰족한 진행합니다. 후방 칼집을 위반하기 전에 근육이 밖으로 얇게 만까지 근육의 옆 가장자리 아래로 천천히 해부 무딘. 그런 다음 집게를 회전 근육의 배는 포셉의 곡선 가장자리 꼭대기과 팁을 중간 마진에서 무료로 될 때까지 내측 해부 무딘. 대략 피드LY 6 포셉의 문턱에 5-0 Ethilon의 CM과 하 직근 칼집을 묶어. 이 단계가 완료되면 myocutaneous 플랩은 하나의 지배적 인 혈관 깊은 우수한 상복부의 혈관에 격리됩니다. 촉촉한 거즈로 커버.
  6. 부드러운 모서리, (그림 3G)를 가진 타원형으로 실리콘 시트를 잘라. 이러한은 플랩의 fasciocutaneous 부분 아래에 노출 된 영역의 대부분의을 커버하기에 충분히 큰해야한다. 그러나주의는 피부 가장자리 타원형의 긴장과 내측 곡선없이 폐쇄 할 수 있도록주의해야한다는 남아 천공을 통해 방해하는 흐름을 방지하기 위해 다시 페어링해야 ​​할 수도 있습니다. 이것들은 6-0 Vicryl (그림 3H)의 장소에서 봉합된다. 촉촉한 거즈로 커버.
  7. 간단한 사용하는 것은 열 및 물 손실 (그림 3I을) 줄이기 위해 플랩 '아웃 면목이'5-0 Ethilon의 봉합을 중단. 촉촉한 거즈로 커버.
  8. 의 왼쪽에있는 우량하게 상처을 확장조류 늑골의 검상 돌기 (그림 3I). 시야를 개선하기 위해 사분면이를 봉합.
  9. 우수, 왼쪽 전방 직근 칼집을 공개하는 피개 지방을 잘라. 이 칼집에있는 작은 (0.6 cm X 0.6 CM) 창을 (그림 3J) 잘라. 수직으로 단단히 느슨한 섬유로 포장의 경사와 일관성 볼에 근육 섬유 궤도의 변화까지 내측 상처를 확장합니다.
  10. 이 두 근육 사이에 조심스럽게 곡선 집게를 삽입하고 무딘 절개로 비행기를 엽니 다. 만까지 기본 깊은, 우수한 상복부 동맥 및 정맥 (그림 3K) 표시하려면 왼쪽 직근 abdominis의 근육의 뱃속을 통해 절단이 곡선 포셉의 우수한 표면과 같은주의를 잘라.
  11. , 운영 현미경 미세 장비 및 높은 전력을 사용하여 조심스럽게 동맥과 정맥을 분리하고 주변의 지방을 제거.
  12. 에 atraumatic 아클 랜드 클램프를 Apply (적용)rtery 및 정맥 (B-1, "V"유형) 및 30 분 허혈성 기간을 카운트 다운을 타이머를 시작합니다. 고정 경을 관개하고 거즈로 커버. 우리는 이러한 베라파밀이나 pabavarine 같은 혈관 확장기를 사용하지 않았지만, 혈관 경련 문제가 될 것, 이러한 약물이 고려되어야한다.
  13. 부 프레 노르 핀 (0.04 ㎎ / ㎏) 및 예열, 멸균 생리 식염수를 (1 ML / kg / hr)까지 관리 할 수​​ 있습니다.
  14. 왼쪽 상단에서 시작, 6-0 Vicryl subcuticular 봉합이 중지 조류 늑골의 검상 돌기에서 하차 매기와 장소에 플랩을 봉합.
  15. 30 분 허혈 시간이 지나면 조심스럽게 클램프를 제거하고 예열 식염수 경 관개. 그 흐름이 다시 설정되었습니다 확인합니다. 이 허혈성 시간이 UK 홈 오피스 당국에 의해 규정 된되었다 것을주의하시기 바랍니다. 다른 기관에서 근무하는 연구자들은이 시간을 연장 할 수 있습니다. 허혈 시간을 확장하는 것은 가능성이 더 임상 결과로 이어질 것입니다.
  16. 6-0 Vicryl로 다시 제자리에 직근의 절단 가장자리를 봉합.이가 혈관의 꼬임로 이어질 수 있습니다로 너무 많은 장력을 적용 할하지 않도록주의을 가져 가라.
  17. (그림 3K) 피부에 아래의 모든 매듭를 묻어에주의을 복용 피하 봉합를 완료합니다.
  18. 상처 영역을 청소하고 건조 할 수 있습니다. 플랩 영역을 다시 그립니다.
  19. 수술 후 이미지를 얻기 위해 동물을 다시 스캔합니다.
  20. 축산 단위로 반환하기 전에 복구 1 시간 동안 예열 인큐베이터 (37 ° C)에서 동물의 눈과 장소에 lacrilube을 다시 적용합니다.

프로토콜에서 중요한 단계

절차의 핵심은 깊고 우수한 상복부의 혈관을 식별합니다. 이 첨부 영화에서 분명하게 표시됩니다. 간단히, 창은 길이 방향으로 실행되는 기본 근육 섬유를 노출 전방 직근 칼집으로 잘라입니다. 내측 근육 섬유 궤도의 변화 전방 직근 칼집의 표면 박리를 확장하여 f를 관찰경사에 평행 ROM. 근육 섬유의 두 묶음의 교차점에 종료, 곡선, 그래 페 집게 (또는 유사) 무딘 삽입합니다. 옆 해부 무딘. 근육 섬유 다발 사이 비행기에서 개최 된 곡선 포셉의 상부 표면에, 마이크로 가위를 사용하여 잘라. 그래 페의 제거에 깊은, 우수한 상복부 동맥 포셉과 정맥 직근 abdominis의 근육 몸의 중간에서 관찰됩니다. 지방 덮고에게 마이크로 악기를 사용하여 혈관을 제거하고 클램프를 적용합니다.

쥐 전차 플랩 fasciocutaneous 부분은 플랩 전체 두께 피부 이식으로 수행 할 수 있도록 허용 할 정도로 얇은입니다. 이 문제를 방지하려면이가 IRI 얇고 유연한 실리콘 시트가 플랩의 fasciocutaneous 부분 아래에 배치됩니다. 35이 단계는 채택 된 쥐 전차 모델을 착수 다른 연구자에 의해. 17,21,25의 진정한 모델인지 확인

쥐 throu의 씹GH 노트, 그래서 모든 봉합이 subcuticular 있는지 확인하고 모든 매듭이 묻혀있다. 다른 연구자에 의해보고 된 피판의 세심한 봉합 autocannabilism을 수행에 방지 할 수 있습니다. 24

부 프레 놀핀의 다음과 같은 관리는 isoflurane을 1 % (1L/min O 2) 유지 보수 마취를 줄일 수 있습니다.

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Representative Results

쥐 모델은 큰 동물 모델보다 더 경제적이며, 36 자연 질병 저항과 유전자 조작 할 수 있습니다. 같은 설치류와 같은 느슨한 피부의 동물, 등 인간과 돼지 같은 고정 피부 동물에 비해 피부의 혈액 공급의 다른 배열을 가지고 생각했다. 느슨한 피부 동물의 피부는 대조적으로 덮고있는 피부 (그림 4)에 피하 지방을 통과하는 직접 피부 혈관이 주로 공급되고, 고정 된 피부 동물 근본적인 근육을 통해 과정 피개 외피를 공급하는 혈관을 통해 피부의 혈액 공급을 유도 musculocutaneous 천공을 통해 (그림 4). 따라서 느슨한 피부 동물 플랩 연구에 이용 될 수 있는지 우려가 있었다. 그러나 angiosomes에 테일러의 작품은 musculocutaneous 천공을 통해 인간과 같은 유사한 방식으로 제공되는 쥐의 피부의 은밀한 부분이 있다고했다.앞쪽에 복벽있는 플랩을 기반으로 횡 직근 myocutaneous (TRAM)는 하나의 영역입니다. 37,36,15는

관련 해부학

우수, 깊은, 상복부의 혈관 쥐와 6 ~ 10 천공의 경 지배적 인 혈관이 피개 외피를 공급하는 전방 직근 칼집을 통과한다. 쥐 13,15 뛰어난 깊은 상복부의 혈관 수준에서 직근 abdominis의 근육을 입력하십시오 검상 돌기의 및 치골을 향해, ​​구경에 점감, 계속합니다. 전방 복부의 측면 여백은 표면 열등과 뛰어난 상복부 및 회선 장골 혈관에 의해 공급된다. 37 초크 혈관을 통해 musculocutaneous 천공에 의해 제공이 직접 피부 나뭇 가지와 외피의 해당 영역에서 제공하는 지역 사이의 생리적 중복이 있습니다. 38이 해부 및 생리 혈관 지역과 일치하지만, 인간에 설명 된 인간의 지배적 인 혈관 경 오히려 우수한 상복부 동맥보다 열등하다. 39

횡 방향 직근 abdominis의 myocutaneous (TRAM) 플랩

가로 직근 abdominis의 플랩은 1974 년에 유방암의 급진적 인 절제술 후 재건 설명했다. 40이 myocutaneous 플랩이 깊은 상복부의 혈관에 기초하고 rectus의 abdominis의 근육과 피개 외피의 일부를 포함하고 있습니다. 이 문서 전반에 걸쳐 전차 플랩 영역이라는 네 개의 동일한 영역으로 나눌 수 있습니다. 그들은 당 Schlefen 등으로 I-IV를 번호가 같은 것 : 영역 I (ZI)는 직접 혈관 경에 의해 제공 직근 abdominis의 근육을 덮고있는 외피이며, 존 II (ZII)은 반대측 직근 abdominis의를 덮고있는 외피를 설명, 존. III (ZIII) 지대 I에 측면 지역에; 및 Zone IV (ZIV) 지대 II에 측면 지역은 (를 참조하십시오 41

레이저 도플러 이미징 평가 혈류

레이저 도플러 영상은 플랩에 혈액 흐름을 평가하는 비 침습적 방법을 제공합니다. 단색 광원이 레이저 헤드에서 방출된다 42-45. 이 사건 등 (그림 6 파랑) 조직 내 적혈구로 이동합니다. 변화의 정도는 적혈구의 속도와 관련이 있습니다. 이동 빛 (그림 6 녹색) 스캐너 헤드 내 사진 검출기에 의해 검출과 관류의 측정으로 변환됩니다. 이들은 임의의 단위 관류 장치 (PU), 그리고 훨씬 날씨 맵 상기 관류와 같은 이미지로 변환 된 데이터가 색상 (그림 7)가 할당 내림차순 각 값에서 등급을 매긴다에 나와 있습니다. 생성 된 색지도 플랩의 서로 다른 영역 사이의 상대적 관류를 보여줍니다. 각 악기는 신중 스와 보정그 CH 비교는 동일한 스캐너가 고용 될 때 주제 사이에 만든이 될 수 있습니다

쥐가 수술 후 레이저 도플러 혈류 무어 LD12 (무어 악기, 섹스, UK) 스캐너 수술 전 사용 이미지, 즉시 수술 후 24에서 48 시간을 받았다.

관심 (ROI)의 영역이 LDI 이미지에 중첩 할 수 있습니다 LDI 스캐너 (그림 7) 계산 그 지역의 평균 관류와 함께 제공되는 소프트웨어를 사용하여.

비율 영역 괴사 일차 결과 측정 이미지 J 분석

이미지 J이이 지역을 측정하고 연속적으로 (그림 8) 각 시점에서 일반 또는 완전히 necrosed 각 영역의 비율을 피부 면적을 계산하는 데 사용할 수있는 Health.46 국립 연구소의 오픈 액세스 이미지 처리 프로그램 의례 .

부상의 평가

피부 괴사의 가장 높은 비율은 다른 연구와 일치 영역 IV (그림 9와 10에있는 대표 데이터를 참조)에서 발견되었다. 16,22,24,25,47 이러한 연구 결과는 괴사의 패턴와 함께 해당하는 확인 인간의 TRAM 플랩에 임상 적으로보고 된 그 이는 임상 문제에의 충실한 표현을이다. 14는 총 백분율 영역 플랩 괴사가 37.86이었다 ± 5.4 % (± SEM을 의미).

피부에 혈액의 변화

LDI 관류 스캔은 전차 플랩 모델에서 혈액 흐름을 평가하기 위해 사용되었다. 이 관류 (그림 911) 평가의 간단하고 비 침습적 및 재현 방법입니다. 관류는 58.4로 감소 ± 0.49 %는 (n = 10, ± SEM을 의미) 즉시 수술, 56.98 ± 24 시간과 92.4에서 0.41 % ± 0.6 %는 전체 플랩 수술 전 값과 비교. 플랩 위스콘신에의 영역 수술 직후와 24 시간 검사에서 일 낮은 관류 괴사 이후에 (그림 9 참조) 48 시간에 개발할 영역을 나타냅니다.

그림 1
그림 1. 장비 셋업은. 빨간색 유도 챔버 마취 장비는 책상 뒤에 볼 수 있습니다. 쥐 코 콘을 통해 유지 마취 부정사 누워있다. 가열 램프는 주위 온도를 높이기 위해 사용됩니다. 쥐 위에 운영 현미경입니다. 쥐의 왼쪽에있는 쥐의 오른쪽에 거즈, 봉합 등와 함께 멸균 드레이프입니다하는 것은 수술 악기와 함께 무균 드레이프이다. 코어 온도는 하버드 장치 장치 (날카로운 물건 빈의 앞에에있는 블랙 박스)에 부착 된 homeothermic 담요 (쥐 아래) 및 직장 프로브를 사용 유지 관리됩니다.

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그림 2. 플랩 경계와 영역을 표시하면. 면도 쥐가 부정사 배치됩니다. 중간 선은 식별 (파란색 점선) 표시됩니다. 라인은 조류 늑골의 검상 돌기 아래의 정중선 0.8 cm에 수직으로 표시됩니다. 4 라인은 1cm 간격, 정중선에 평행하게 그려져 있습니다. 마지막 줄은 병렬 그려진 사각형을 완성하는 두 번째 행 아래 4cm가.입니다 큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오 .

그림 4
그림 3. 단계-에 의해-단계를 수술 접근 방식. 이전에 (3A) 설명 된대로 플랩가 묘사되어 있습니다. 왼쪽 측면 여백 절개 (3B)과 해부 PL에서 내측으로 계속됩니다왼쪽의 직근 (3C)의 측면 마진에 앞쪽에 복부 벽에 근막에 ANE 즉시 피상적. 동일한 단계는 반대측 측에 실시하지만, 해부는 리네아 데 콘셉 시온에 알바 (정중선), (3D)에 내측으로 계속했다되어 있습니다. 오른쪽 직근 abdominis의 근육의 중심에서 발생하는 musculocutaneous 천공을 부식. 작은 창은 왼쪽 직근 칼집 (3E)와 (3 층) 전원 연결 하 직근의 하부 측면으로 잘라입니다. 실리콘 시트는 다음 잘라 플랩 (3G H)의 fasciocutaneous 부분 아래 위치에 봉합합니다. 플랩는 그런 다음 (3-I) 아웃 '말뚝을 박는 다'입니다. 단계를 (3GI는) (3EF) 전이나 단계를 이후에 수행 할 수 있습니다. 작은 창는 왼쪽, 전방 직근 칼집 (3-J)의 우수한 측면으로 잘라입니다. 노출 된 근육은 다음이다주의 깊게 조사 하였다. 경사와 밀접하게 느슨하게 포장 섬유에 포장 병렬에서 근육 섬유 궤도의 변화가 내측으로 볼 수 있습니다. 이러한 근육의 평면 사이의 곡선 그래 페 집게를 통과하고 옆으로 해부 무딘. 혈관 경을 노출이 집게의 폐쇄, 상부 표면에 잘라. 주변의 지방을 제거하고 클램핑 혈관을 노출합니다. 동맥 및 정맥 (3K)에 아클 랜드 클램프를 배치하고 허혈성 시간 기간을 아래로 계산합니다. 바로 최근까지 클램프 위의 영역을 떠나 subcuticular 봉합을 시작합니다. 할당 기간 후 클램프를 제거하고 왼쪽 rectus의 abdominis의 근육의 무료 끝을 나란히 놓는다. subcuticular 봉합 (3 L을) 완료합니다.

그림 5
그림 4. 루스에서 고정 및 느슨한 피부 동물의 피부 혈액 공급. 피부의 혈액 공급와 같은 쥐와 같은 전자 피부의 포유 동물은 오히려와 같은 인간과 돼지과 같은 고정 피부 포유 동물에있는와 같은 musculocutaneous 천공보다 직접 피부 나뭇 가지를 통해 주로이다. 이러한 이유로를 들어 쥐은 역사적으로 플라스틱 외과 연구를 위해 선호되지 않았습니다. 이것은 구식 개념 등 전방 복벽으로 쥐의 특정 영역 것으로 표시되었습니다 musculocutaneous 천공에 의해 제공됩니다 따라서 플랩 모델에 사용하기 적합한 지역이다. 큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오 .

그림 6
그림 5. 횡 방향 abdominis의의 myocutaneous 플랩의 영역은과 같은 Schlefen 등 알에 의해 설명. 1천9백83인치 빨간색 화살표는 (이 경우 왼쪽의, 우수한, 깊은 상복부의 혈관에있는) 혈관 척추 경를 나타냅니다. 파란색 로마 숫자는 t을 표시그는 4 영역은 같은 그 혈관 척추 경에 상대적으로 자신의 위치를​​ 기반으로 I-IV을 번호가 매겨진 : 지대 I (ZI는) 직접 혈관 척추 경에 의해 공급 된 직근 abdominis의의 근육을 덮고 외피이다; 지대 II (ZII는) 반대측을 덮고 외피을 대해 설명합니다 직근 abdominis의; 지대 III (ZIII) 지대 I에 측면 지역에; 영역에 II에 및 Zone IV (ZIV) 측면.

그림 7
그림 6. 레이저 도플러 이미징 스캐너. 무어 LD12 스캐너는 단색 빛 (파란색 화살표) 피부 내에서 이동 적혈구에 의해 이동되는 소스를 전송하여 관류를 평가한다. 변화의 정도는 적혈구의 속도와 관련이 있습니다. 이 이동 표시 등 (녹색 화살표)을 계산 한 영역에서 사진 스캐너와 관류에 의해 감지됩니다. 미러는 전체 앞쪽에 복벽 될 수 있도록 순차적 인 방식으로 빔을 이동약 7 분에서 스캔.

그림 2
그림 7. LDI 소프트웨어를 사용하여 평균 관류를 평가. 다음 도구 모음 (빨간색 화살표) 관심 영역 (ROI) 선택 도구 (파란색 십자가 사각형, 다각형 도구의 오른쪽에 2 아이콘)에서 다각형 아이콘을 선택합니다. 마우스를 사용하여이 그림의 4 영역이 표시됩니다, ROI의 주위에 그립니다. 다음 ROI로 이동하기 전에 다시 파란색 사각형과 사각형을 클릭합니다. 그림과 같이 일단 모든 원하는 ROI를가 새 창에서 각 투자 수익 (ROI)에 대한 도구 모음의 중심에있는 통계 icon (그 숫자가 메모장 아이콘)과 평균 관류 통계 것이다 팝업으로 눌러 선택됩니다.

그림 8. 이미지 J 분석을.

> 그림 8-1
그림 8-1. 이미지 J-선택 직선 도구입니다., 직선 도구를 선택합니다 같이 플랩의 중앙 아래로 선을 그릴은. 큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오 .

그림 8-2
8-2을 그림. 이미지를 J-설정 스케일은 1. 도구 바에서와 메뉴 드롭 다운 설정 스케일을를 선택합니다에서 분석을 선택합니다. 큰 그림을 보려면하기 위해 여기를 클릭하십시오 .

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8-3을 그림. 이미지를 J-설정합니다 규모의 2. 창을 팝업에 4 cm에 스케일을로 설정합니다. 큰 그림을 보려면하기 위해 여기를 클릭하십시오 .

그림 8-4
8-4 그림. 이미지 다각형 도구 및 관광 개요 영역을 J-선택합니다. 다각형 도구를 선택합니다 (아이콘을 강조 표시)과 관심의 영역을 설명합니다. 영역 IV의 전체 둘레는이 예제에 나와있는 것은. 큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오 .

법이지 "> 그림 8-5
8-5 그림. 이미지 J-면적 측정 1. 도구 모음에서와 메뉴 선택 측정 드롭 다운에서 분석을 선택합니다. 큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오 .

그림 8-6
8-6 그림. 이미지 J-측정 영역 2. 지역은 별도의 결과 창에 표시됩니다. 큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오 .

PG "고도 ="그림 8-7 "FO : 콘텐츠 너비 ="5 인치 "FO : SRC ="/ files/ftp_upload/50473/50473fig8-7highres.jpg "/>
그림 8-7. 전체 괴사 영역에 대한 이미지 J-반복합니다. 이전 2 단계를 반복하지만 이번에는 necrosed 영역을 설명합니다. 이 예제는 영역 IV에있는의 전체 괴사가 설명 보여줍니다. 비율을 전체 괴사를 계산하려면 이전에 후자의 가치를 나누고 100을 곱합니다. 큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오 .

그림 9
그림 9. .이 절차 캡션을 대표하는 이미지의 몽타주 : 각 행은 서로 다른 주제를 나타냅니다. 사진 (왼쪽) 및 해당 LDI 이미지는 (오른쪽) (르에서 4 서로 다른 시간 점에 표시됩니다수술 전, 수술 후, 24 시간에서 수술 후 48 시간에서) 오른쪽 피트 그것은 괴사 영역 ZIV 및 III에서 지속적으로 발생하는 것이 분명하다. 바닥에 컬러 스케일 오른쪽 색상과 해당 관류 장치를 보여줍니다. 빨간 높은 관류, 블루 낮은 관류). 큰 그림을 보려면 여기를 클릭하십시오 .

그림 10
10을 그림. 대표 결과 피부 괴사가 48 시간에 총 플랩 영역의 백분율로 표시 캡션 :. 플랩의 백분율 지역 전체 괴사는 임상 적으로 평가하고 48 시간에서 이미지 J 소프트웨어를 사용하여 측정 하였다. 평균과 SEM는과 같이, n은 = 10.

그림 11
그림 11. 대표하세요 결과 레이저 도플러 영상 캡션 :. 레이저 도플러 영상은 대조군 사전 수술에서 플랩의 관류 단위로 측정 평균 혈류를 표시하려면, 수술, 24 및 48 시간에서. 평균과 SEM는과 같이, n은 = 10.

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Discussion

수정 및 문제 해결

여기에 제시 프로토콜은 해당 프로세스의 추가 이해를 가능하게 실험 시스템 무료 조직 전송에서 볼 IRI를 재현 IRI를 개량하고 결과를 개선 수단을 조사 할 수있는 방법을 제공합니다. 그것은 비 지배적 깊은 열등 경 상복부 또는 것은 허혈 시간이 증가 된 경우에 기초한다면 이것은 쉽게 더 심각한 부상을 생산하기 위해 수정할 수 있습니다.

기술의 한계

쥐의 전방 복벽 유방 재건 전차 플랩 수술을받은 대부분의 여성의 앞쪽에 복벽보다 훨씬 적은 피하 지방이있다. 컨디셔닝 요법의 효과는 결과 측정으로 피부 괴사 및 관류를 사용하여 평가 될 수 있도록이 문서에서 설명하는 모델은 myocutaneous 피판의 허혈 재관류 손상의 모델로 특별히 설계되었습니다.이 문서에 설명 된 절차와 같은 중요한 지방 구성 요소를 플랩이 의도적으로 큰 유방 재건에 대한 프로젝션을 만들 수확 할 때 인간의 전차 플랩에 발생하는 지방 괴사로하지 특히​​ 모델 문제를 않습니다.

미세 혈관의 직접적인 생체 관측이 프로토콜에서 설명되지 않고 cremaster 근육 모델 48과 osteomyocutaneous 플랩 설명했습니다. 연구원은 특히 흥미있는 경우에 7,49-51 TRAM 모델은 myocutaneous 플랩 모델 이 모델 osteomyocutaneous 플랩 적합하지 않습니다 만, 다른 모델은 문헌에 설명되어 있습니다. 50

다른 방법에 관하여 의미

대부분의 게시 된 쥐 TRAM 모델은 혈관 경을위한 캐리어로 경 선택한 혈관을 둘러싼 직근 abdominis의 근육을 사용합니다. 13-22,24,25 그들은 ACC하지 않습니다플랩 재관류 다음에 국소 빈혈의 진정한 기간을 거쳐되지 않습니다로 urately IRI를 반영합니다. 따라서,이 프로토콜에 설명 된 모델은 재생, 제어 myocutaneous의 IRI를 제공이 논문에 비해. 연구원은 또한 23 그러나 이것은 기술적으로 매우 깊은 우수, 상복부 동맥 및 정맥 측정 0.45 각각 0.5 mm로 요구하고 사타구니 혈관 피판으로 이것을 수행했습니다. 이 프로토콜은 간단한 모델을 나타냅니다.

미래의 애플 리케이션

무료 조직 전송의 결과를 개선하는 연구는 주로 컨디셔닝 전략에 초점을 맞추고있다. 이러한 전략은 '교육'더 나은 무료 조직 전송 수술을 견딜 수있는 전송 조직이 개선 결과의 목적으로 수술 전 고용하거나 시작됩니다. 이것이 달성 될 수있는 두 가지 방법이 있습니다 :. 약물 또는 허혈 52이 작업의 많은이 있습니다쥐보다 작업하기 집에 더 비싸고 더 어렵 돼지에서 수행 된. 이 문서에서 설명하는 프로토콜은 집에 쉬운 실험 동물에서 이러한 전략을 테스트하고 유전자 조작 동물과 함께 작동 할 가능성이 함께하고있는 작업을 할 수 있습니다.

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Disclosures

우리는 어떤 공시가 없습니다.

Acknowledgements

본 연구는 의학 연구위원회 교부금 G1000299에 의해 투자되었다.

해당 저자는 수술하는 동안 지원을 위해 게리 Borthwick는 에든버러 대학교, 감사드립니다.

저자는 헬렌 더글러스와 이안 맥케이의 조언을 인정 좋아하고 저희가 깊은 열등한 상복부 (디엡) 플랩 절차 (Canniesburn 성형 수술 장치, 글래스고 로열 병원, 84 성 거리, 글래스고 G4 0SF, UK) 관찰 할 수있다.

저자는 또한이 기사의 동영상을 제작 자신의 도움 에든버러 대학에서 게리 흑인에게 감사의 말씀을 전합니다.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Moor LD12 laser doppler imaging scanner http://gb.moor.co.uk/product/moorldi2-laser-doppler-imager/8
Complete homeothermic blanket system with flexible probe. Small. 230 VAC, 50 Hz 507221F www.harvardapparatus.com
Graeffe forceps 0.8 mm tips curved 11052-10 2, http://www.finescience.de
Acland clamps 00398 V B-1 ’V’ pattern clamps used on both artery and vein. http://www.merciansurgical.com/acland-clamps.pdf
Clamp applicator CAF-4 http://www.merciansurgical.com/acland-clamps.pdf
Gemini cautery unit 726067 www.harvardapparatus.com
Micro-vessel dilators 11 cm 0.3 mm tips 00124 D-5a.2 http://www.merciansurgical.com
Micro Jewellers Forceps 11cm angulated 00109 JFA-5b http://www.merciansurgical.com
Micro Jewellers Forceps 11 cm straight 00108 JF-5 http://www.merciansurgical.com
Acland Single Clamps B-1V (Pair) 396 http://www.merciansurgical.com
Micro Scissors Round Handles 15 cm Straight 67 http://www.merciansurgical.com
Iris Scissors 11.5 cm Curves EASY-CUT EA7613-11 http://www.merciansurgical.com
Mayo Scissors 14 cm Straight Chamfered Blades EASY-CUT EA7652-14 http://www.merciansurgical.com
Derf Needle Holders 12 cm TC 703DE12 http://www.merciansurgical.com
Ethilon 5-0 W1618 http://www.farlamedical.co.uk/
Vicryl rapide 6-0 W9913 http://www.millermedicalsupplies.com/
Instrapac - Adson Toothed Forceps (Extra Fine) 7973 http://www.millermedicalsupplies.com/
Castroviejo needle holders 12565-14 http://s-and-t.ne
Heat Lamp http://www.chicken-house.co.uk
Silicone sheeting 0.3 mm translucent http://www.silex.co.uk/
Image J software http://rsbweb.nih.gov/ij/
Zeiss OPMI pico http://www.zeiss.co.uk/
Operating microscope
Vet tech solution isofluorane rig http://www.vet-tech.co.uk/
Vet tech solution isofluorane rig http://www.vet-tech.co.uk/

DOWNLOAD MATERIALS LIST

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