Een Menselijke * These authors contributed equally

Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Atherosclerose is een chronisch ontstekingsproces. Dit manuscript illustreert een eenvoudig te ex vivo model te gebruiken om verse arteria carotis of coronaire plaques onderzoeken. De ex vivo model maakt het onderzoeken van potentiële stoffen op de inflammatoire milieu in humane atherosclerotische laesies en de resultaten worden geanalyseerd op verschillende manieren.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Erbel, C., Okuyucu, D., Akhavanpoor, M., Zhao, L., Wangler, S., Hakimi, M., Doesch, A., Dengler, T. J., Katus, H. A., Gleissner, C. A. A Human Ex Vivo Atherosclerotic Plaque Model to Study Lesion Biology. J. Vis. Exp. (87), e50542, doi:10.3791/50542 (2014).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Atherosclerose is een chronische ontstekingsziekte van het vaatstelsel. Er zijn verschillende methoden om de inflammatoire verbinding in atherosclerotische laesies bestuderen. Muismodellen zijn een belangrijk instrument om ontstekingsprocessen in atherosclerose te onderzoeken, maar deze modellen last van de fenotypische en functionele verschillen tussen de muizen en menselijke immuunsysteem. In vitro cel experimenten worden gebruikt om specifiek te evalueren celtype-afhankelijke veranderingen veroorzaakt door een stof van belang, maar kweekafhankelijke variaties en het onvermogen om de invloed van specifieke moleculen komen in de context van de inflammatoire verbinding in atherosclerotische laesies tegen de gevolgen van de resultaten. Bovendien meten niveaus van een molecuul van belang in menselijk bloed helpt om de klinische relevantie te onderzoeken, maar dit betekent geen systemische en lokale ontsteking. Daarom hebben we hier beschrijven een plaquette cultuur model voor de menselijke atherosclerose biologie studerenex vivo. Kortom, vers plaques verkregen van patiënten die endarteriëctomie of CABG en opgeslagen in RPMI medium op ijs tot gebruik. De monsters worden in kleine stukjes gesneden, gevolgd door willekeurige verdeling in een 48-well plaat, dat RPMI medium naast een stof van belang, zoals cytokines en chemokines, alleen of in combinatie voor bepaalde perioden. Na incubatie kan de plaque stukken schok worden ingevroren voor mRNA isolatie, ingebed in paraffine of oktober voor immunohistochemie vlekken of vernield en gelyseerd voor western blotting. Bovendien kunnen cellen worden geïsoleerd uit de plaque voor flowcytometrie analyse. Bovendien kunnen supernatanten worden verzameld eiwit meting door ELISA. Concluderend, de gepresenteerde ex vivo model opent de mogelijkheid om verdere studie inflammatoire letsels biologie, wat kan leiden tot identificatie van mechanismen nieuwe ziekte en therapeutische doelwitten.

Introduction

Atherosclerose als een chronische ontstekingsziekte is een van de belangrijkste doodsoorzaken in de geïndustrialiseerde landen 1-2. Complicaties van atherosclerose, in het bijzonder acute coronaire syndromen, zijn gekoppeld aan scheuren van kwetsbare laesies, waardoor atherotrombose en vatafsluiting 3. Aangeboren en adaptieve immuniteit lijken in alle fasen van atherosclerose 2,4-5 te worden betrokken. Hoewel er aanzienlijke vooruitgang is geboekt bij de behandeling van myocardinfarct, effectieve preventie van atherosclerose en cardiovasculaire gebeurtenissen zijn nog steeds niet opgelost. Aldus bestuderen letsels biologie is essentieel voor het verhogen van onze kennis over de pathofysiologie van atherosclerose en identificatie van nieuwe therapeutische doelwitten en ontwikkeling van nieuwe therapieën mogelijk.

In veel gevallen worden muismodellen gebruikt om de pathofysiologie van specifieke ziekten onderzoeken. Echter, het bestuderen van atherosclerose met behulp van muismodellen is Accompanied door verscheidene beperkingen: (1) Meestal atherosclerotische muizen krijgen een hoog cholesterol dieet. Het cholesterolgehalte in deze modellen niet vergelijkbaar met die bij patiënten met verhoogde cholesterol serumspiegels 6. (2) Er bestaan ​​aanzienlijke verschillen tussen de muizen en menselijke immuunsysteem; dus Foxp3 is een specifieke marker van muizen regulatoire T-cellen, terwijl de menselijke Foxp3 expressie in menselijke T-cellen niet noodzakelijkerwijs verleent een regelgevend fenotype 7. Ook de Th1/Th2 paradigma zoals gedefinieerd in mensen niet volledig overdraagbaar op muizen T-cellen. (3) Een aantal merkers die worden gebruikt om muizen monocyten en macrofagen als F4/80 en markers van klassieke (M1) identificeren tegen alternatieve (M2) activeringspatronen niet bestaat in humane myeloïde cellen 8. (4) Genexpressie van muizen en menselijke perifere bloedmonocyten gevonden aanzienlijk verschillend 9 te zijn.

Dus, om ons inzicht in vergrotenchronische ontstekingsprocessen in menselijke atherosclerose, moeten we gebruik van modellen die met menselijk weefsel, bloed of cellen te maken. Hier beschrijven we een model van menselijke plaque weefselkweek, die onderzoek naar mogelijke nieuwe stoffen in het concept van menselijke inflammatoire letsels biologie maakt.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. Bereid medium als volgt

  1. Cultuur Medium: RPMI medium.
  2. Voeg 10% foetaal kalfsserum (FCS).
  3. Voeg 100 U / ml penicilline G en 100 g / ml streptomycine.

2. Opslag van vers plaque cilinder tot gebruik

  1. De carotis endarteriëctomie functioneren van patiënten met of zonder ischemische symptomen (beroerte, voorbijgaande ischemische aanval) met een significante carotisstenose zal worden gedaan door vasculaire chirurgen en coronaire endarterectomy tijdens CABG door hartchirurgen. Halsslagader / coronaire plaques moeten geheel worden verwijderd om de plaque structuur behouden zoals eerder 5 beschreven.
  2. Na plaque extirpation plaats het model in een medium gevulde buis en op te slaan op ijs (plaque moet volledig worden bedekt met gemiddeld) tot gebruik.

3. Plaque verwerking

  1. Gebruik voldoende celkweekschaal (bijv. 60 mm)en voeg 5 ml RPMI medium.
  2. Plaats de plaque weefsel in de cultuur schotel (plaque moet volledig bedekt zijn met gemiddeld).
  3. Houd de plaque weefsel zorgvuldig de randen van het weefsel door steriele pincet.
  4. Snijd de randen van de plaque monster met een steriele scalpel.
  5. Verdeel plaque weefsel in de helft.
  6. Beoordeel de morfologie van de laesie macroscopisch (verkalkt, vetrijke, gescheurd, trombus, fibrose).
  7. Analyseer de exacte plaque morfologie na de ex vivo experiment met immunohistochemie. Gebruik de AHA-classificatie 10.
  8. Gooi plaques met ernstige verkalking of fibrose.
  9. Snijd de plaque weefsel in homologe stukjes (3 x 3 x 3 mm).
  10. Shock bevriezen twee plaque stukjes en bewaar ze in vloeibare stikstof voor de fundamentele waarden van de laesie tot gebruik.
  11. Bereid een 48-well plaat.
  12. Voeg 500 ul RPMI-medium aan elk putje voor het experiment gebruikt.
  13. Gebruik eent minste twee plaque stukken voor elke groep.
  14. Voeg de inhoud van belang (bijvoorbeeld specifieke cytokines en chemokines).
  15. Gebruik niet gestimuleerde plaque stukken als controles.
  16. Willekeurig plant de toegeëigend aantal plaque stukken in de putten.
  17. Cultuur de plaquette stukken voor aangegeven tijdstippen.
  18. Voor de plaque weefsel stimulatie experiment met Lipopolysaccharide (LPS)
    1. Gebruik de volgende tijdstippen: 3 uur, 8 uur en 24 uur.
    2. Gebruik 2 plaque stukken voor de LPS en twee voor de gestimuleerde groep voor elk tijdstip respectievelijk.
    3. Voeg 1 ug / ml lipopolysaccharide.
  19. Tijdens de incubatie onderhouden van de 48-puts plaat bij 37 ° C in bevochtigde lucht met 5% CO2.

4. Na de aangegeven tijd de oogst plaque weefsel stukken

  1. Shock bevriezen de plaquette stukken voor mRNA-isolatie en cDNA-synthese (voor gedetailleerde informatie-zie protocol paragraaf 5).
  2. Verzamel de bovenstaande vloeistof en opgeslagen bij -20 ° C. ELISA analyse.
  3. Voor western blotting, smash en lyseren plaque weefsel. Filter de lysaat door een 0,65 micrometer en 0,1 micrometer centrifugaal filter apparaat.
  4. Plaque weefsel verankeren in weefsel-tec of paraffine voor immunohistochemie kleuringen.

5. RNA-extractie uit gekweekte plaque stukken

  1. Gebruik een TissueLyser voor homogenisatie.
  2. Isoleer het RNA met de kit (zie materialen tabel) volgens de instructies van de fabrikant.
  3. Bepaal de RNA hoeveelheid en kwaliteit van de monsters met spectrofotometer.
  4. Gebruik Boehringer cDNA kit voor reverse transcriptie volgens de instructies van de fabrikant.
  5. Voor kwantitatieve PCR, gebruiken bijvoorbeeld het Roche real-time PCR kit met SYBR Green.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Hier presenteren we een aantal figuren dat de resultaten van de ex vivo plaquette kweken demonstreren. Om veranderingen in het milieu inflammatoire reactie op het middel van belang in het ex vivo model experiment bepalen, meten we verschillende moleculen waarvan bekend is voornamelijk betrokken bij atherogenese zijn. Als vertegenwoordiger pro-atherogene cytokines we kiezen TNFa, IL6 en IFNg 2,11. Daarnaast maken we gebruik van von Willebrand factor en tissue factor om pro-trombotische veranderingen te evalueren. Teneinde voorts de ontwikkeling van plaque instabiliteit veroorzaakt door een gemachtigde van belang matrix metallopeptidase 9 (MMP9) niveaus worden geanalyseerd richten. Chemoattractance is een belangrijke stap in plaque progressie en regressie 11 dus onderzoeken we de niveaus van CCL2, ook wel monocyt chemotactisch eiwit-1 (MCP-1), beginsel chemoattractant voor monocyten / macrofagen. Na cel aantrekkingskracht cel rollen en adhesie zijn de volgende stappen.Daardoor we kiezen ICAM-1. Door het verder analyseren van de signaalwegen beïnvloed door de betrokken stof gebruiken we extracellulaire-signaal gereguleerde kinases (ERK1 / 2), algemeen voor en geactiveerd door veel verschillende stimuli zoals cytokines, apoptose, differentiatie, virusinfectie en liganden voor heterotrimere G-eiwit -gekoppelde receptoren 12.

Ten eerste tonen we tijdsafhankelijke veranderingen van de inflammatoire verbinding met ongestimuleerde gekweekte atherosclerotische laesies door kwantitatieve real-time polymerase-kettingreactie (qRT-PCR) (figuur 1) geanalyseerd. Tijdens plaque kweken, kan een verhoging van de activiteit van de inflammatoire letsels milieu worden waargenomen. Geen verschil werd gevonden na 3 uur versus geen cultuur (gegevens niet getoond). Na 8 uur van plaque cultuur, vonden wij slechts een geringe opwaartse regulatie van enkele moleculen zoals IL6, maar niet die van TNF-a en IFN g, terwijl na 24 uur, was er een opregulatiediverse moleculen zoals TNF a, IL6 en IFN g. Met name de langere tijd van plaque cultuur hoger de variatie molecuul expressie.

Ten tweede, de haalbaarheid beïnvloeden de inflammatoire milieu in atherosclerotische laesies aangetoond, presenteren wij de resultaten van plaque stukjes geïncubeerd met 1 ug / ml LPS gedurende 3 uur, gemeten met qRT-PCR (Figuur 2). Gestimuleerde plaque stukken diende als een negatieve controle . Wij vonden dat LPS veroorzaakte een duidelijke toename van de kwaliteit van de activering van het inflammatoire verbinding in atherosclerotische laesies. Verschillende cytokinen (IL6, TNF een enz. figuur 2A-B), chemokinen (CCL2 enz., niet getoond), adhesie (ICAM1 niet weergegeven), plaque destabiliseren (Matrix metallopeptidase 9 (MMP9), niet getoond) en pro- trombotische moleculen (von Willebrand factor, figuur 2C,

Ten derde, om eiwitovervloed evalueren, supernatanten van gekweekte letsels werden geanalyseerd met behulp van ELISA en sloeg plaque weefsels door western blotting (Figuur 3D). In figuur 3A-C tonen wij ELISA analyse van IFN-g, MCP-1 en TNF-a in de supernatant van gekweekte specimens geïncubeerd met LPS of control voor 8 uur. Bovendien western blot analyse voor (gefosforyleerde) ERK 1/2 van gebroken en lysated plaque weefsels, hetzij gestimuleerd met LPS of de controle wordt aangetoond in figuur 3D.

Figuur 1
Figuur 1. Effect van plaque kweken op inflammatoire letsels verbinding in de tijd. Atherosclerotische plaque stukken werden onmiddellijk shockeren bevroren of gekweekt voor 8of 24 uur en expressie van cytokinen aangegeven IL6 (A), IFN g (B) en TNF a (C) werd geanalyseerd met qRT-PCR. De getoonde resultaten geven het gemiddelde van vijf onafhankelijke experimenten. Vijf atherosclerose stukken voor elke groep werden gebruikt voor het aangegeven tijdstip. Waarden zijn genormaliseerd om b-actine en uitgedrukt als cDNA kopieën / 1000 b-actine exemplaren. De resultaten worden weergegeven als staafdiagrammen weergeven van gemiddelde en de 25 e en 75 e percentiel als dozen en 10 e en 90 e percentiel als snorharen. *: P <0.01.

Figuur 2
Figuur 2. LPS stimulatie gekweekte plaque stukken induceerde een toename van verschillende inflammatoire moleculen. Plaque stukken werden geïncubeerd met 1 ug / ml LPSof gestimuleerde 3 uur en qRT-PCR geanalyseerd. De getoonde resultaten geven het gemiddelde van vijf onafhankelijke experimenten. Twee stukken voor elke groep werden gebruikt. Waarden zijn genormaliseerd om b-actine en uitgedrukt als cDNA kopieën / 1000 b-actine exemplaren. De resultaten worden weergegeven als staafdiagrammen weergeven van gemiddelde en de 25 e en 75 e percentiel als dozen en 10 e en 90 e percentiel als snorharen. *: P <0.01.

Figuur 3
Figuur 3. Eiwit expressie in de gekweekte supernatant van plaque. Representatieve ELISA metingen van cytokines IFN-g (A), TNF-a (B) en MCP-1 (C) in het supernatant van plaque stukken behandeld met LPS gestimuleerde of 8 hr worden getoond. De getoonde resultaten geven het gemiddelde van vijf onafhankelijke experimentelets. De resultaten worden weergegeven als staafdiagrammen weergeven van gemiddelde en de 25 e en 75 e percentiel als dozen en 10 e en 90 e percentiel als snorharen. Bovendien representatieve Western blotting voor (gefosforyleerde) ERK 1/2 van LPS gestimuleerde of controleren gekweekte atherosclerotische laesies na 3 uur wordt gedemonstreerd in figuur 3D. De kolom grafieken weergeven van gemiddelde + SEM als snorharen vertegenwoordigen het gemiddelde van vijf onafhankelijke experimenten. *: P <0.01.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Hier presenteren we een ex vivo plaque cultuurmodel de invloed van potentieel relevante stoffen atherosclerose biologie onderzoeken. Het grote voordeel van deze ex vivo werkwijze is de mogelijkheid om de invloed van genoemde verbindingen op de inflammatoire cellen en hun cellulaire interactie en ontstekingsreacties en stromen in humane atherosclerotische lesies geëvalueerd. Verschillende bruikbare methoden (bijv. RT-PCR, western blot, immunohistochemie, flowcytometrie, ELISA) helpen om een uitgebreide analyse van de impact van de stof van de rente op atherosclerose ontsteking bieden.

De ontstekingsprocessen in muizen atherosclerose zijn goed begrepen, mede dankzij muismodellen overexpressie of ontbreken bepaalde genen van belang 11. Echter, de bevindingen niet altijd nauw aan bij de mens 6-9,13. Atherosclerotische muizen krijgen meestal een pathologische hoge cholesterol dieet 6. Bovendien is bekend dat het immuunsysteem van mensen en muizen wezenlijke verschillen 7-9. Hier presenteren we een ex vivo plaque cultuurmodel, waardoor studie van de invloed van een stof van belang op inflammatoire compound in humane atherosclerotische letsels zoals getoond door Niessner et al.. 14. Bovendien kunnen diverse andere methoden worden gebruikt om de resultaten van een plaque cultuur experiment vergelijkbaar met muizen studies analyseren. Daarom is de ex vivo model opent de mogelijkheid om muizen te vervangen in vivo studies in sommige gevallen en kan een uitstekende methode overbrugging tussen een vermeende atherosclerose bevorderen molecuul in het systeem van muizen en translatie menselijke biologie vertegenwoordigen.

De menselijke ex vivo model voor atherosclerose is niet vergelijkbaar met in vitro cel experimenten. Cellijnen kunnen gemakkelijk worden opgeslagen en gekweekt, maar fenotypisch en functionally niet identiek aan primaire cellen. Verse cellen kunnen worden verkregen door regelmatig bloed gelijk, maar het is soms moeilijk te kweken ervan en cultuur onderworpen aan vele factoren. Bovendien, door in vitro celkweek experimenten, is het niet mogelijk de invloed van specifieke moleculen op de inflammatoire verbinding in atherosclerotische lesies. Dus in vitro experimenten zijn belangrijk voor initiële (translatie) stap voor humane biologie onderzoeken, maar niet de functie van het molecuul van belang het begrip menselijke atherosclerose, vooral cellulaire interactie en invloed op inflammatoire cascades en traject binnen atherosclerotische laesies verder te analyseren .

Monaco et al.. Opgericht een belangrijke korte termijn kweeksysteem van cellen geïsoleerd uit humane atherosclerotische weefsel 15. Ze hebben een enzymatische mengsel van collagenase, elastase en DNase gebruikt. Deze methode maakt het onderzoek van lesionale cel-cel experimenten, signalering pathway-analyse en genoverdracht studies met adenovirale vectoren. Maar het is nog onbekend hoe de enzymatische mengsel beïnvloedt de cellen, dwz grad van activering, oppervlakte markerexpressie etc. Daarnaast kan men zich afvragen of de resultaten van deze experimenten afspiegeling van de werkelijke processen in atherosclerotische laesies. Bovendien zal de oorspronkelijke locatie van de cellen worden vernietigd door enzymatische mengsel en de korte kweeksysteem heeft dezelfde beperkingen als de cel in vitro experimenten.

Voor specifieke cel of cel populatie studies in een atherosclerotische laesie, is het mogelijk de laser capture microdissectie methode. De cel of verbinding van belang zal het weefsel worden gesneden met behulp van een infrarood-of UV-laser en RNA, DNA of eiwit analyse kan worden uitgevoerd. De laser capture microdissectie lijkt niet de cellen beschadigen het celoppervlak receptor expression etc. Het voordeel van deze methode is de analyse van een cel of een locatie plaats binnen een atherosclerotische laesie. Maar het is niet mogelijk om de cellen verder te evalueren, zoals in vitro studies.

De ex vivo model impliceert een breed scala van mogelijke methoden voor het meten en analyseren van de bevindingen. Real time polymerase kettingreactie kan worden uitgevoerd na RNA-isolatie en cDNA synthese van het gen expressieniveau onderzocht zoals getoond door Niessner et al.. 14. Immunohistochemie is een gevestigde instrument om het eiwitniveau om de eiwitexpressie en cellulaire oorsprong in atherosclerotische laesies blijken evalueren. Western blotting kan worden gebruikt om signaalwegen analyseren. Daarnaast celisolatie door ontsluiting in een enzym oplossing opent de mogelijkheid om stroom te voeren cytometrie analyse om verder te analyseren voor het type bijvoorbeeld cel, cellulair subtypes en graad van activering. Bovendien, na celisolatiespectratyping vertegenwoordigen een goede methode om T-cel-receptor variabiliteit verder te analyseren. Bovendien, na digestie magnetische celisolatie is een bewezen hoogwaardig Werkwijze celscheiding specifieke cellulaire subtypen verdere in vitro studies of microarray analyse. Eindelijk, kan bovenstaande vloeistoffen worden verzameld voor eiwit meting door ELISA. Concluderend, de ex vivo model is een waardevol hulpmiddel om de exacte wijzigingen in het ontstekingsproces milieu in humane atherosclerotische lesies.

De ex vivo model is gebaseerd op endarterectomy monsters. Met atherosclerotische plaques verkregen van verschillende individuen kan een grotere mate van differentiële cellulaire samenstelling en dus grotere variatie van de niveaus van genen / eiwitten van belang. Het is dus belangrijk om vetrijke of ingewikkeld plaque samples plaats fibrosclerotic laesies 10, omdat de ontstekingsreactie aanmerkelijk lager fibrosclerotic lesions. Het is daarom van groot belang voor de plaque morfologie beoordelen voordat analyseren van de resultaten van plaque cultuur experimenten.

Bovendien, elk specimen monster omvat verschillende stadia van de ontwikkeling van atherosclerose / progressie van de eerste endotheeldisfunctie en lipide-accumulatie stap richting vette strepen en ontwikkeling van een necrotische kern gescheurde plaques. Aldus, teneinde de heterogeniteit van de plaque weefsel te minimaliseren, is het noodzakelijk om de randen, die in het algemeen eerste stappen van atherogenese vertegenwoordigen snijden.

Het kan niet worden uitgesloten dat de snij veroorzaakt weefselschade reacties. Maar onze plaque weefselkweek experimenten toonden vergelijkbare genexpressie niveaus van de gekweekte plaque weefsel van niet-gekweekte plaque weefsels. Zo, dit onderstreept dat de huidige methode is een goed hulpmiddel om de ontstekingsreactie milieu in atherosclerotische laesies te onderzoeken.

De cultuur vanplaque stukken is beperkt tot een periode van maximaal een dag. Als plaque weefsel meer dan een dag wordt gekweekt, de variatie van de resultaten drastisch. Bovendien, na 3 dagen de plaque samenstelling en morfologie instort.

Er zijn beperkingen die moeten in gedachten worden gehouden bij de toepassing van dit model. De ex vivo model is een goede methode om de ontstekingsreactie milieu in atherosclerotische laesies te bestuderen. Toch zijn belangrijke componenten ontbreken in deze context. Geen hemodynamische kenmerken zijn van toepassing en systemische invloeden zijn totaal ontbreekt. Bovendien, met deze methode is het alleen mogelijk om op korte termijn veranderingen te onderzoeken, maar mist een lange termijn analyse vanwege de ineenstorting van de plaque morfologie.

Tot slot presenteren we hier een methode die nuttig zijn voor onderzoekers die geïnteresseerd zijn in het onderzoek naar mogelijke nieuwe moleculen op humane atherosclerotische laesie ontsteking zal zijn. De ex vivo plaquette cultuur model doet gekenmerkt door verschillen tussen de muriene en humane immuunsysteem, maar het geeft ons de mogelijkheid om de cellulaire wisselwerking in de context van atherosclerotische lesies te analyseren en geven de mogelijkheid om lokale lesionale inflammatoire cascades en paden te onderzoeken. De ex vivo plaquette cultuur hier beschreven methode is eenvoudig te gebruiken en is reproduceerbaar en kan helpen om nieuwe ziektemechanismen en therapeutische targets te identificeren en te valideren.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

De auteurs hebben geen conflicten te onthullen.

Acknowledgements

Wij danken Nadine Wambsganss voor een uitstekende technische bijstand. Dit werk werd ondersteund door de Duitse Research Foundation (DFG) ER 682/2-1 en een onderzoeks-stipendium van de Duitse Vereniging voor Cardiologie aan C. Erbel evenals een onderzoek stipendium van de Duitse Academic Service Heidelberg naar L. Zhao.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
RPMI medium Gibco 21875-091
FCS Gibco 10270-106
Penicillin-streptomycin Sigma P-4458
15 ml Tube Sarstedt 62,554,502
Culture dish (60 mm) Orange Scientific 5550200
LPS Sigma L4516
Cell culture plates 48-well Greiner 677102
Scalpel - single use Feather FEA200130011
TissueLyser Precellys 24 Dual Cat. No. EQ03119.200.RD010.0
RNeasy (Mini) Kit  Qiagen Cat. No. 74104
Boehringer cDNA kit  Roche Diagnostics Cat. No. 11483188001
Nanodrop spectrophotometer  Thermo Fisher Scientific

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Lusis, A. J. Atherosclerosis. Nature. 407, 233-241 (2000).
  2. Hansson, G. K., Libby, P. The immune response in atherosclerosis: a double-edged sword. Nat Rev Immunol. 6, 508-519 (2006).
  3. Virmani, R., Kolodgie, F. D., Burke, A. P., Farb, A., Schwartz, S. M. Lessons from sudden coronary death: a comprehensive morphological classification scheme for atherosclerotic lesions. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 20, 1262-1275 (2000).
  4. Erbel, C., et al. Expression of IL-17A in human atherosclerotic lesions is associated with increased inflammation and plaque vulnerability. Basic Res Cardiol. 106, 125-134 (2011).
  5. Erbel, C., et al. Functional profile of activated dendritic cells in unstable atherosclerotic plaque. Basic Res Cardiol. 102, 123-132 (2007).
  6. Bentzon, J. F., Falk, E. Atherosclerotic lesions in mouse and man: is it the same disease. Curr Opin Lipidol. 21, 434-440 (2010).
  7. Tran, D. Q., Ramsey, H., Shevach, E. M. Induction of FOXP3 expression in naive human CD4+FOXP3 T cells by T-cell receptor stimulation is transforming growth factor-beta dependent but does not confer a regulatory phenotype. Blood. 110, 2983-2990 (2007).
  8. Raes, G., et al. Arginase-1 and Ym1 are markers for murine, but not human, alternatively activated myeloid cells. J Immunol. 174, 6561-6562 (2005).
  9. Ingersoll, M. A., et al. Comparison of gene expression profiles between human and mouse monocyte subsets. Blood. 115, 10-19 (2010).
  10. Stary, H. C. Natural history and histological classification of atherosclerotic lesions: an update. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 20, 1177-1178 (2000).
  11. Galkina, E., Ley, K. Immune and inflammatory mechanisms of atherosclerosis. Annu Rev Immunol. 27, 165-197 (2009).
  12. Suganuma, T., Workman, J. L. MAP kinases and histone modification. J Mol Cell Biol. 4, 348-350 (2012).
  13. Libby, P., Ridker, P. M., Hansson, G. K. Progress and challenges in translating the biology of atherosclerosis. Nature. 473, 317-325 (2011).
  14. Niessner, A., et al. Synergistic proinflammatory effects of the antiviral cytokine interferon-alpha and Toll-like receptor 4 ligands in the atherosclerotic plaque. Circulation. 116, 2043-2052 (2007).
  15. Monaco, C., et al. Canonical pathway of nuclear factor kappa B activation selectively regulates proinflammatory and prothrombotic responses in human atherosclerosis. Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 5634-5639 (2004).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics