MR Imagen Molecular del cáncer de próstata con un agente de contraste dirigidos Pequeño Molecular CLT1 Péptido

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Summary

Para demostrar la imagen molecular del cáncer de MR con un pequeño péptido agente de contraste de MRI específica a las proteínas plasmáticas coagulados en estroma tumoral en un modelo de cáncer de próstata de ratón dirigido.

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Wu, X., Lindner, D., Yu, G. P., Brady-Kalnay, S., Lu, Z. R. MR Molecular Imaging of Prostate Cancer with a Small Molecular CLT1 Peptide Targeted Contrast Agent. J. Vis. Exp. (79), e50565, doi:10.3791/50565 (2013).

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Abstract

Matriz extracelular del tumor tiene abundancia de proteínas relacionadas con el cáncer que se pueden utilizar como biomarcadores para el diagnóstico por imagen molecular del cáncer. En este trabajo, hemos demostrado el cáncer de RM molecular eficaz con un pequeño péptido molecular dirigida Gd-DOTA complejo monoamida como objetivo MRI agente de contraste específico a las proteínas plasmáticas coagulada en el estroma tumoral. Se realizó el experimento de evaluación de la eficacia del agente para la detección no invasiva de tumor de próstata con la RM en un modelo ortotópico de cáncer de próstata PC-3 de ratón. El agente de contraste diana era eficaz para producir la mejora del contraste significativa del tumor a una dosis baja de 0,03 mmol Gd / kg. El péptido agente de contraste de resonancia magnética específica es prometedor para la RM molecular del tumor de próstata.

Introduction

De formación de imágenes eficaz de dianas moleculares relacionados con el cáncer es de gran importancia para mejorar la precisión de la detección del cáncer antes y diagnóstico. La resonancia magnética (MRI) es una poderosa técnica de imagen clínica con alta resolución espacial y no la radiación de ionización 1. Sin embargo, ningún agente de contraste específico está disponible para la imagen molecular del cáncer MR clínica. El diseño innovador y el desarrollo de agentes de contraste de resonancia magnética dirigidos avanzarían en gran medida la aplicación de la imagen molecular del cáncer de MR. Se han hecho esfuerzos significativos para desarrollar agentes de contraste dirigidos para formación de imágenes MR de los biomarcadores expresados ​​en la superficie de las células cancerosas. Debido a la relativamente baja sensibilidad de la RM y la baja concentración de estos biomarcadores, es un reto para generar la mejora del contraste suficiente para MR efectiva de imagen molecular usando pequeños agentes de contraste diana molecular 2,3. Con el fin de obtener la mejora suficiente, varios sistemas de administración de such como liposomas, nanopartículas y conjugados de polímeros con una alta carga útil de paramagnéticas Gd (III) quelatos se han preparado para aumentar la concentración local de agentes de contraste en los sitios diana de 4,5. Aunque estos sistemas de suministro fueron capaces de generar mejora significativa del tumor en modelos animales, sus grandes tamaños resultaron en eliminación lenta e incompleta desde el cuerpo, resultando en la acumulación prolongada de Gd (III) iones tóxicos, que pueden causar graves problemas de seguridad 6. Recientemente, algunos estudios han demostrado que las limitaciones de la RMN para imágenes moleculares se pueden superar mediante la selección de biomarcadores moleculares adecuados con alta expresión local en las lesiones y el uso de pequeños agentes moleculares que pueden ser excretados fácilmente 7,8. La característica clave de estos agentes es que se dirigen a los marcadores moleculares abundantemente presentes en los tejidos enfermos con poca presencia en los tejidos normales. Una alta concentración de agentes de contraste se puede unir a estos objetivos, lo que resulta en sufiaumento del contraste ciente para imagen molecular MR eficaz. Dado que su tamaño es menor que el umbral filtración renal, agentes de contraste no unidos pueden ser fácilmente excretados del cuerpo con un menor ruido de fondo. Hemos seleccionado un biomarcador relacionado con el cáncer universales, las proteínas del plasma coagulado, que existen en abundancia en el estroma del tumor, y no suelen estar presentes en los tejidos normales 9. Se sintetizó un agente de contraste diana que contiene un pequeño péptido de direccionamiento CGLIIQKNEC (CLT1), que mostró una fuerte unión específica para el modelo de tumor de próstata PC3 10, y cuatro quelatos de monoamida Gd-DOTA. En este caso, se propone una metodología para el cáncer de RM molecular para detectar tumores en ratones.

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Protocol

Protocolo de adaptación de un estudio previo 11.

1. Conjugación de Gd-DOTA para CLT1 Péptido

  1. Uso de la síntesis de péptidos en fase sólida estándar, sintetizar CLT1 péptido (CGLIIQKNEC) a partir de aminoácidos protegidos con Fmoc en una resina de cloruro de 2-clorotritilo (1,0 mmol).
  2. Después de la adición de aminoácido final, ciclar el péptido lineal en-resina con talio (III) trifluoroacetato (1,09 g, 2,0 mmoles, 2 equivalentes) en DMF (20 ml) a 0 º C durante 2 h.
  3. Siguiente, conjugado de PEG y lisina secuencialmente a la N-terminal de CLT1 péptido (1,0 mmoles) en resina haciendo reaccionar secuencialmente con Fmoc-NH-PEG-COOH (3,0 mmoles), Fmoc-Lys (Fmoc)-OH (3,0 mmoles), y un segundo lote de Fmoc-Lys (Fmoc)-OH (6 mmol).
  4. Eliminar Fmoc con piperidina. Añadir DOTA-tris (t-Bu) (4,58 g, 8,0 mmoles, 2 equivalentes a cada grupo amino) para reaccionar con los cuatro aminas libres de la dendrímero de lisina en la resina durante 2 horas.
  5. Finalmente, escindir y desproteger el productode la resina por tratamiento con un cóctel de ácido trifluoroacético, agua, y triisobutylsilane (TIS) (20 ml, 95/2.5/2.5) durante 8 h a TA. Eliminar la resina por filtración seguido de lavado con ácido trifluoroacético (TFA). Añadir los filtrados combinados gota a gota a éter frío de etilo (200 ml), se centrífuga, y se lavan con éter etílico 4x. Secar al vacío para dar un sólido incoloro (1,99 g, rendimiento del 61%).
  6. Se purifica el producto bruto por HPLC preparativa usando un gradiente de 0-40% de disolvente B (0,1% de TFA en acetonitrilo) en disolvente A (solución acuosa de TFA al 0,1%) durante 20 min y 40-90% de disolvente B en disolvente A durante 10 min .
  7. Disolver CLT1-dl-(DOTA) 4 (250 mg, 0,077 mmol) en agua DI (15 ml) y ajustar el pH a 6 con 1 M de NaOH. Añadir Di-s (OAc) 3 0,4 H 2 O (472 mg, 0,462 mmol, 1,5 equivalentes a DOTA monoamida) en porciones a la solución, mientras se mantiene el pH a 6 con 1 M de NaOH. Se agita la solución de reacción a TA durante 48 h.
  8. Complejo Gd residual (III) con el correoácido thylenediaminetetraacetic (EDTA) (90 mg, 0,31 mmoles), y purificar el producto crudo con una columna de exclusión por tamaño para dar el producto final CLT1-dl-(Gd-DOTA) 4 (169 mg, 57%).

2. Caracterización de los agentes de contraste

  1. Mida Gd (III) el contenido con la espectroscopia de emisión óptica con plasma acoplado inductivamente.
  2. Adquirir láser de desorción / ionización espectros de masas asistida por matriz de tiempo de vuelo (MALDI-TOF) en el modo lineal con ácido 2,5-dihidroxibenzoico (2,5-DHB) como una matriz.
  3. Medir los tiempos de relajación de la solución acuosa de los agentes de contraste de CLT1-dl-(Gd-DOTA) 4 y un agente de control de nontargeted sCLT1-dl-(Gd-DOTA) 4 con diferentes concentraciones a 60 MHz (1,5 T) con un relaxometer a 37 ° C. Utilice una secuencia de pulsos de inversión-recuperación para medir T 1 y una secuencia de Carr-Purcell-Meiboom-Gill con 500 ecos para medir T 2. Calcula T 1 y T 2 relaxividades de thagentes e de las laderas de las parcelas de 1 / T 1 y 1 / T 2 frente a las concentraciones de D-os.

3. Cultivo Celular y Desarrollo del Modelo Animal con ortotópico PC3 próstata Tumor

  1. PC3 Cultura células de cáncer de próstata con la expresión constitutiva de la proteína de fluorescencia verde (GFP) en medio RPMI suplementado con 5% de suero bovino fetal y penicilina / estreptomicina / fungizona, la cosecha por tripsinización y se resuspende a una densidad de 2,5 x 10 4 células / l de PBS.
  2. Mantener los ratones machos NIH atímicos desnudos (4-5 semanas de edad) en la Instalación Athymic Animal Core, de la Universidad Case Western Reserve (CWRU) de acuerdo con un protocolo de los animales, aprobado por el Comité de Cuidado de Animales y el empleo Institucional CWRU.
  3. Las superficies quirúrgicas se pulverizaron con una solución de clorhexidina al 2% y luego se cubre con cortinas absorbentes. Guantes quirúrgicos estériles fueron usados ​​durante el procedimiento. Antes de la cirugía los animales, IP inyectar Avertin (250 mg / kg) a anesthetize los ratones. Alternativamente, la ketamina / xilazina / acepromazina se puede utilizar a una concentración de 50/5/1 mg / kg. Pomada oftálmica se aplicó a la del ratón para mantener la humedad adecuada durante la anestesia.
  4. Iniciar la cirugía mediante la reducción de una pequeña incisión a través de la piel y el peritoneo a lo largo de la línea media inferior a una longitud de aproximadamente 1 cm, utilizando un bisturí estéril. Un paño quirúrgico estéril se cubrió alrededor del sitio de la incisión durante las cirugías de supervivencia.
  5. Exteriorizar suavemente y estabilizar los lóbulos dorsales próstata para exponer la próstata. Se inyecta la suspensión de células PC3-GFP en PBS (20 l) en la próstata con una aguja de calibre 30. Finalmente cerrará la incisión con herida autoclip 12.
  6. Para el monitoreo post-procedimiento, observar a los animales dos veces al día durante 1 semana. Los signos de la enfermedad son la falta de alimentación, la recogida de orina de color oscuro alrededor de la uretra y la marcha inestable, que podría indicar una infección u obstrucción de la vejiga en las grapas.
  7. Después de 10 días, retire tél grapas utilizando un removedor de grapas. Monitorear los animales diariamente para evaluar el tamaño del tumor y cualquier evidencia de dolor, como la pérdida de peso, problemas de conducta, y los defectos de motor. La eutanasia a los animales que mostraron un tamaño del tumor superior al límite permitido éticamente o evidencia de dolor durante el crecimiento del tumor.

4. La confirmación de un tumor especificidad de unión de los péptidos con Fluorescencia de Imagen e Histología

  1. Después de la inoculación de células tumorales, permitir que aproximadamente 4 semanas de crecimiento del tumor antes de comenzar con la formación de imágenes. Antes de la inyección de las sondas de péptidos, adquirir imágenes de fluorescencia de GFP con ratones vivos en un generador de imágenes de fluorescencia para verificar la presencia de tumor.
  2. Iv inyectar Rojo Texas péptidos marcados a la ratones portadores de tumor a una dosis de 10 nmol / ratón.
  3. Sacrificar los ratones 2 horas más tarde por dislocación cervical, recoger el tumor y los órganos principales, y de inmediato la imagen de un generador de imágenes de fluorescencia. Utilice filtros de luz verde para GFP (excitación: 444-490 nm; emisiones: filtro de paso largo nm 515; ajustes de adquisición: 500 a 720 en pasos de 10 nm) y filtros de luz roja de Texas Red (excitación: 576-621 nm; emisiones: filtro de paso largo nm 635, la adquisición ajustes: 630-800 en 10 pasos nm). 10 ms tiempo de exposición de las buenas prácticas agrarias y 150 ms para Rojo Texas.
  4. Inmediatamente después de la medición de la fluorescencia del tejido conjunto, recoger los tejidos tumorales, fijar con formalina, y criosección en rodajas de 5 micras.
  5. Después de enjuagar con PBS, montar con 1 gota de medio de montaje que contiene 4 ',6-diamino-2-fenilindol (DAPI), imagen inmediatamente en un microscopio láser confocal de barrido.

5. Imagen de Resonancia Magnética (MRI)

  1. Aproximadamente 4 semanas después de la inoculación de las células tumorales, permiten que los tumores crezcan hasta 0,3 hasta 0,6 cm de diámetro. Utilice un escáner 7 T MRI con un volumen de la radio frecuencia (RF) de la bobina para la RM estudio.
  2. Anestesiar el ratón con una mezcla de isoflurano en oxígeno del 2% en una cámara de inducción con isoflurano. Ophthalmic ungüento se aplicó a la del ratón para mantener la humedad adecuada durante la anestesia.
  3. Inserte una aguja de calibre 30 en un largo tubo de 1,0 m lleno de solución salina heparinizada. Coloque el catéter hecho a sí mismo en la vena de la cola del ratón.
  4. Coloque el ratón en el imán y mantener bajo anestesia por inhalación con un 1,5% de isoflurano en oxígeno a través de un cono de la nariz.
  5. Coloque un sensor respiratorio conectado a un sistema de monitoreo en el abdomen para controlar la frecuencia y profundidad de la respiración. Mantener la temperatura del cuerpo a 37 ° C por soplado de aire caliente en el imán a través de un sistema de control de realimentación.
  6. Comience con la sección de imágenes sagital utilizando una secuencia de localización para identificar la ubicación del tumor (TR / TE = 200/3.7 ms, FOV = 3,0 cm, grosor de corte = 2,2 mm, rebanada número = 16, promedio = 2, flip = ángulo de 45 °, matriz = 128 x 128).
  7. Utilice una secuencia de supresión de grasa gradiente potenciada en T1 2D para obtener imágenes axiales 2D para CE-MRI (TR / TE = 151.2/1.9 ms, FOV = 3,0 cm x 3,0 cm, sespesor piojos = 1,2 mm, número de segmento = 12, promedio = 1, flip = ángulo de 80 °, la matriz = 128 x 128).
  8. Después de la adquisición de imágenes MR de línea de base previa a la inyección, comenzar a inyectar el agente vectorizado o el agente de control a una dosis de 0,03 mmol Gd / kg por lavado con 200 l de solución salina.
  9. Seguir adquiriendo imágenes CE-MRI en diferentes momentos durante un máximo de 30 min.

6. Procesamiento y Análisis de Imágenes

  1. Utilice el software de imágenes para análisis de imágenes.
  2. Dibuje las regiones de interés (ROI) en todo el tumor y los riñones en el plano de la imagen bidimensional y medir la intensidad media de la señal.
  3. Para cuantificar los datos CE-MRI, medir tumor o aumento del contraste de los riñones (ΔSNR) mediante el cálculo del incremento de la post-contraste SNR sobre pre-contraste SNR usando la siguiente ecuación: ΔSNR = (S t / σ t) - (S 0 / σ 0), donde S 0 y S t denotan la señal en la tumo o los riñones antes y después de contraste, y σ 0 y σ t son la desviación estándar del ruido medido desde el fondo de aire antes y después de contraste.
  4. Calcular los valores p usando la prueba t de dos colas del estudiante, asumiendo la significación estadística de p <0.05.

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Representative Results

La Figura 1 muestra la síntesis del agente de contraste dirigidos CLT1-dl-(Gd-DOTA) 4 y el esquema general del experimento. CLT1-dl-(Gd-DOTA) 4 muestra la capacidad de relajación mucho más alto que el Gd-DOTA clínica (Tabla 1). A 1,5 T, la capacidad de relajación T 1 por gadolinio de CLT1-dl-(Gd-DOTA) 4 en PBS (pH 7,4) es de aproximadamente 3 veces mayor que la de Gd-DOTA 10. Maestro de imagen confirma la fuerte unión específica de Rojo Texas etiquetado CLT1 (CLT1-TR) a tumor con baja unión a los órganos y tejidos normales, mientras que la no específica revueltos péptido (sCLT1-TR) muestra muy poca unión del tumor (Figura 2). La Figura 3 muestra pre típica y el contraste después de la inyección mejorada (CE) T imágenes potenciadas en 1. El agente dirigido da lugar a una mayor y más largo mejora en el tejido tumoral en comparación con agentes revueltos no dirigidas. Aumento del contraste en la vejiga urinaria aumenta gradualmente a lo largotiempo, lo que indica que los agentes de contraste se excretan a través de la filtración renal. Análisis de la señal cuantitativa revela que el agente vectorizado produce mejora de la señal más significativa en el tejido tumoral que el agente de control (p <0,05) hasta 30 min. El estudio de biodistribución muestra el agente tiene una retención mínima Di-s en los principales órganos y tejidos 2 días después de la inyección. Nuestros datos preliminares muestran que CLT1 dirigido agentes de contraste de MRI se pueden entregar específicamente al tumor en dosis relativamente baja (un tercio de la dosis clínica).

r 2 (mM -1. s -1) r 1 (mM -1. s -1) Contenido de Gd (mmol-Gd / g)
por Di-s por molécula por Di-s pmolécula er
CLT1-(Gd-DOTA) 4 10.1 ± 1.0 40,4 ± 3,0 13.0 ± 3.1 52.0 ± 9.6 1,05 ± 0,10
sCLT1-(Gd-DOTA) 4 11,5 ± 1,4 46,0 ± 5,0 12.4 ± 0.3 49,6 ± 1,3 0,97 ± 0,08
Gd-DOTA 4 2.9 * 2.9 * 3.2 * 3.2 *

Tabla 1. Propiedades fisicoquímicas de los agentes de contraste de resonancia magnética específicos y revueltos a 1,5 T, 37 ° C (* capacidades de relajación de Gd-DOTA en agua a 37 ° C son de referencia 10).

Figura 1
> Figura 1. Representación gráfica del procedimiento de síntesis y la experimentación en general. Haz clic aquí para ver más grande la figura .

Figura 2
Figura 2. Tumor de unión de CLT1-TR. Targeted CLT1-TR (A) y no específica sCLT1-TR (B) se inyectaron por vía intravenosa a ratones atímicos desnudos portadores de ortotópico de próstata PC3-GFP a una dosis de 10 nmol / ratón. Después de 2 horas, se recogieron y tumores y diferentes órganos fotografiado. Imágenes fluorescentes verdes son a partir de células tumorales PC3-GFP. Imágenes fluorescentes rojos son de CLT1-TR (A) y sCLT1-TR (B) sondas. 1. tumor; 2. bazo; 3. corazón; 4. riñón; 5. testículo; 6. hígado; 7. de pulmón; 8. muscular; 9. cerebro.565fig2highres.jpg "target =" _blank "> Haga clic aquí para ver más grande la figura.

Figura 3
Figura 3. Ponderadas en T1 representativos axiales imágenes 2D gradiente de tumor de próstata humano PC-3 ortotópico antes y después de la inyección intravenosa de CLT1-dl-(Gd-DOTA) 4 (A) y sCLT1-dl-(Gd-DOTA) 4 (B) por lo 0,03 mmol Gd / kg en ratones nu / nu. Tumor marcado con círculo rojo y la vejiga marcado con un círculo verde. Haz click aquí para ver más grande la figura .

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Discussion

Pasos críticos

La selección de biomarcadores adecuada y focalizada en los pequeños Péptido

Para desarrollar con éxito un agente de contraste objetivo con el tamaño pequeño, dos puntos clave deben ser considerados. En primer lugar, es importante seleccionar biomarcadores moleculares adecuados que son abundantemente presente en los tejidos enfermos con poca presencia en los tejidos normales. Nuestro biomarcador relacionado con el cáncer se selecciona, las proteínas del plasma coagulado, cumple con este requisito. En segundo lugar, los pequeños agentes moleculares dirigidas seleccionados deben tener una alta afinidad de unión de los marcadores biológicos de manera que los agentes de contraste suficientes pueden unirse a estos objetivos, lo que resulta en aumento de contraste suficiente. En este estudio, hemos elegido el CLT1 péptido de unión al coágulo que muestra una fuerte unión específica a las proteínas del plasma coagulado en el tumor 11.

Agente de contraste Síntesis

La síntesis de péptidos implica bueyidizing dos grupos tiol en la molécula de péptido lineal para formar péptido final CLT1 cíclico. Mientras que la ciclación del péptido se lleva a cabo normalmente en solución a baja concentración para minimizar la agregación de potencial, dimerización y oligomerización, ciclación en-resina se aprovecha del fenómeno de pseudo-dilución, así como la eliminación de los reactivos por simple lavado y filtración 13. En nuestro procedimiento de síntesis, nos encontramos con que la ciclación en resina utilizando talio (III) trifluoroacetato funciona bien con un alto rendimiento y poco dimerización, aunque talio (III) trifluoroacetato es muy tóxica y se debe tener cuidado al manipularlo. Un segundo enfoque utiliza DMSO al 20% en solución a baja concentración de péptido. Sin embargo se necesitan más medidas para eliminar el DMSO, y liofilizar la solución de gran volumen requieren más tiempo. Mediante el uso de uno u otro método, que es crucial para asegurarse de la completa formación de enlace disulfuro intramolecular. Cuando los complejos de ligando peptídico con Di-s, los tioles libres pueden induciragregaciones sustanciales porque los metales traza en la memoria intermedia de catalizar la oxidación de aire, dando como resultado la sobreoxidación de la cisteína para formar de polimerización 14. Esto disminuye por lo general de manera espectacular el rendimiento y la pureza del producto final. Para que la formación de la banda disulfuro completa segura, primero tenemos que utilizar las condiciones de oxidación suaves para evitar la formación de puentes disulfuro intermoleculares que resulta en la formación de oligómeros dímero o superior. En segundo lugar, el tiempo suficiente tiempo de reacción debe mantenerse para asegurarse de que todos los grupos tiol se oxidan antes de la etapa de conjugación Di-s.

Animal del modelo y canulación de la vena de la cola de ratones

Preparación del modelo de tumor de los animales y la cola canulación venosa también son aspectos muy importantes de este procedimiento. Durante la cirugía, la herramientas / banco debe mantenerse limpio y estéril para evitar la posible infección que podría herir o matar a los ratones. Con el fin de evitar mover el ratón, antes y después de la inyecciónción, es necesario para canular ratón vena de la cola. Para preparar el catéter para la canulación, romper una aguja de calibre 30 desde el cubo e inserte el extremo romo en un tubo de 1,0 m de largo, y conectar otro extremo de la tubería a una jeringa cargada con 1% de solución salina heparinizada. Empuje la jeringa para llenar el tubo. Dilatar la cola con agua caliente (~ 105 ° F). Inserte la aguja en la vena. Expulsión de la sangre en el tubo indica inserción exitosa del catéter. Para verificar que la aguja está en la vena, empujar suavemente la jeringa y la solución salina puede ser fácilmente inyectado, la vena se borra con la inyección de una pequeña cantidad de solución salina. Fijar el catéter en su lugar con cinta adhesiva antes de mover el ratón para el escáner.

Limitaciones y modificaciones posibles

Existen varias limitaciones en nuestro estudio actual. En primer lugar, a partir de los resultados preliminares se observa que CLT1 lava muy rápidamente desde el sitio de acceso aunque shOWS de unión al tumor excelente. in vivo degradación proteolítica probable causa de la inestabilidad de CLT1. Modificación de CLT1 para proteger contra la degradación proteolítica debería mejorar su estabilidad y prolongar su tiempo de lavado in vivo. Uso de aminoácidos de tipo D para reemplazar los aminoácidos de tipo L naturales es una estrategia potencial para lograr este objetivo. En segundo lugar, el estudio actual no aclara qué componentes exactos de las proteínas del plasma coagulado el péptido se une a CLT1. Finalmente, se sintetizan los agentes de contraste principalmente mediante la síntesis en fase sólida con un rendimiento relativamente bajo y alto costo. Desarrollo de un método de síntesis en fase líquida debe aumentar el rendimiento y reducir el costo.

Aplicaciones

Estamos desarrollando técnicas para la detección precisa de pequeños tumores malignos con un mejor contraste de resonancia magnética. RM con el agente dirigido proporciona una alternativa más eficaz y más seguro para la imagen molecular del cáncer.

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Disclosures

No hay conflictos de interés declarado.

Acknowledgements

Este trabajo es apoyado en parte por la Asociación Americana del Corazón GRA Primavera 09 Postdoctoral Fellowship (09POST2250268) y el NIH R01 CA097465. Apreciamos altamente Dr. Wen Li y el Dr. Vikas Gulani para la prueba de protocolo de la RM y la configuración, y la Sra. Yvonne Parker por su asistencia en la implantación del tumor.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
REAGENTS
Fmoc protected amino acids EMD Chemicals Inc
DOTA-tris(t-Bu) TCI America
PyBOP, HOBt, HBTU Nova Biochem
DIPEA, Thallium(III) trifluoroacetate, TIS Sigma-Aldrich Corp.
Texas Red, succinimidyl ester, single isomer Invitrogen T20175
EQUIPMENTS
Agilent 1100 HPLC system Agilent
ZORBAX 300SB-C18 PrepHT column Agilent
ICP-–S Optima 3100XL Perkin-Elmer
MALDI-TOF mass spectrometer Bruker AutoflexTM Speed
Maestro FLEX In Vivo Imaging System Cambridge Research Instrumentation, Inc.
Biospec 7T MRI scanner Bruker

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References

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