स्वतंत्र रूप से चूहों बर्ताव में पर्फोरेंट मार्ग दांतेदार गाइरस synapse के दीर्घकालिक potentiation

1Department of Engineering and Neuroscience Program, Trinity College
Behavior

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Summary

मस्तिष्क संबंधी बीमारियों के ट्रांसजेनिक और पीटकर माउस मॉडल सामान्य और असामान्य Neurophysiology में जीन की भूमिका का अध्ययन के लिए उपयोगी होते हैं. इस अनुच्छेद के दीर्घकालिक potentiation, ट्रांसजेनिक में, सीखने और स्मृति आबाद और neuropathology के माउस मॉडल बर्ताव आज़ादी से पीटकर सकता है जो एक सेलुलर तंत्र का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है जो तरीके का वर्णन करता है.

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Blaise, J. H. Long-term Potentiation of Perforant Pathway-dentate Gyrus Synapse in Freely Behaving Mice. J. Vis. Exp. (81), e50642, doi:10.3791/50642 (2013).

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Abstract

Synaptic प्रभावकारिता के दीर्घकालिक potentiation का अध्ययन, एक संभावित सेलुलर तंत्र अंतर्निहित सीखने और जानकारी भंडारण के रूप में इसे आकर्षक बनाने कि गुणों वाले एक गतिविधि पर निर्भर synaptic घटना, लंबे हिप्पोकैम्पस, प्रमस्तिष्कखंड में विभिन्न neuronal सर्किट के शरीर क्रिया विज्ञान को स्पष्ट करने के लिए इस्तेमाल किया गया है , और अन्य लिम्बिक और cortical संरचनाओं. इसे ध्यान में रखते, मस्तिष्क संबंधी बीमारियों के ट्रांसजेनिक माउस मॉडल सीखने, भावना और जानकारी में शामिल neuronal नेटवर्क में सामान्य और असामान्य synaptic संचार में जीन की भूमिका का एक बड़ा समझ विकसित करने के लिए दीर्घकालिक potentiation (एलटीपी) के अध्ययन का संचालन करने के लिए उपयोगी प्लेटफार्मों का प्रतिनिधित्व प्रसंस्करण. यह लेख मज़बूती से स्वतंत्र रूप से व्यवहार कर माउस में एलटीपी उत्प्रेरण के लिए तरीके का वर्णन करता है. इन तरीकों ट्रांसजेनिक के अध्ययन में इस्तेमाल किया जा सकता है और स्वतंत्र रूप से neurodegenerative रोगों के माउस मॉडल बर्ताव कर पीटा.

Introduction

जीन में हेरफेर करने के लिए प्रौद्योगिकी के विकास के लिए लगभग हर neurodegenerative और मस्तिष्क संबंधी बीमारियों के ट्रांसजेनिक और पीटकर माउस मॉडल का उत्पादन किया गया. यह पहले से माउस पशु मॉडल को बड़ा कृंतक प्रजातियों में इस्तेमाल electrophysiological अनुसंधान तकनीकों का अनुवाद जरूरी हो गया है. ऐसा ही एक neurophysiological जांच तकनीक विभिन्न नयूरोपथोलोगिकल विकारों में शामिल neuronal नेटवर्क के भीतर synaptic कनेक्शन की प्रभावकारिता का परीक्षण करने के लिए उपयोग दीर्घकालिक potentiation (LTP) है. इस प्रोटोकॉल स्वतंत्र रूप से चूहों बर्ताव में एलटीपी की विश्वसनीय electrophysiological जांच के लिए तकनीक का वर्णन करता है. दूसरों पर इस प्रोटोकॉल का लाभ यह सरल और आसानी से लागू है, यह महंगा कंप्यूटर नियंत्रित Microdrive प्रणालियों और न ही क्षेत्र प्रभाव ट्रांजिस्टर headstages का उपयोग न तो आवश्यकता नहीं है के रूप में भी नहीं बल्कि कम महंगा है, और, हमारे ज्ञान करने के लिए, है पुरानी electrophysiological रिकॉर्डिंग टी का पहला वीडियो प्रोटोकॉलओ स्वतंत्र रूप से चूहों बर्ताव में एलटीपी अध्ययन. यह अंत करने के लिए, हम इस लेख में स्वतंत्र रूप से व्यवहार कर चूहों में दीर्घकालिक potentiation के अध्ययन के लिए सरल तरीके का वर्णन है. इन तरीकों को आसानी से नयूरोपथोलोगिकल विकारों की ट्रांसजेनिक और पीटकर माउस मॉडल में अनुवाद किया जा सकता है.

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Protocol

इस प्रोटोकॉल 3 और 18 साल की उम्र और 30-50 ग्राम के लगभग शरीर के वजन के महीने) के चूहों के लिए उपयुक्त है. चूहे जैक्सन प्रयोगशाला (बार हार्बर, इ) से प्राप्त किया जा सकता है. सभी शल्य चिकित्सा और प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल ट्रिनिटी कॉलेज पशु की देखभाल और उपयोग समिति ने मंजूरी दे दी है और प्रयोगशाला पशु की देखभाल और उपयोग के लिए एनआईएच गाइड के अनुसार थे.

1. पशु तैयारी और शल्यचिकित्सा की प्रक्रियाओं

  1. Ketamine (25 मिलीग्राम / एमएल), xylazine (2.5 मिलीग्राम / एमएल) और acepromazine (0.5 मिलीग्राम / एमएल) युक्त संज्ञाहरण कॉकटेल तैयार करें. उसके बाद पेडल वापसी पलटा का उपयोग संज्ञाहरण के एक स्थिर गहराई बनाए रखने के लिए 0.2 मिलीग्राम / किग्रा इंजेक्शन से हर 45 मिनट पूरक पेट के निचले सही चक्र में 1 मिलीग्राम / किग्रा शरीर के वजन इंजेक्षन.
  2. एक इलेक्ट्रिक शेवर का उपयोग कर अपने कपाल पर फर शेविंग द्वारा शल्य चिकित्सा के लिए anesthetized माउस तैयार करें. मुंडा क्षेत्र कानों के बीच करने के लिए आंखों के बीच में शामिल करना चाहिए. Whiske दाढ़ी बनाने के लिए नहीं सुनिश्चित करेंवे माउस बैरल संवेदी प्रणाली का हिस्सा हैं के रूप में रु.
  3. सिर पर मुंडा क्षेत्र को Betadine द्वारा पीछा isopropyl शराब लागू करने के लिए रुई का प्रयोग करें. फिर, यह भी कपास swabs का उपयोग कर, सुखाने से आंखों को रोकने के लिए आंखों पर खनिज तेल की एक छोटी राशि लागू होते हैं.
  4. Stereotaxic फ्रेम तंत्र पर पशु के सिर माउंट करने के लिए शिशु चूहे कान कफ के बजाय नियमित कान सलाखों का प्रयोग करें. ऐसा करने के लिए, पहले बाएं कान कफ पर बाएं कान माउंट. फिर धीरे धीरे एक हाथ से पशु के सिर समर्थन और दूसरे हाथ से कान कफ से आगे बढ़ कर सही कफ पर सही कान आसानी. अगला, जानवर के शरीर के तहत एक हीटिंग पैड जगह है और शरीर का तापमान बनाए रखने के लिए 86 ° एफ के लिए यह निर्धारित किया है.
  5. फिर, के सिर की ओर ले जाने के प्रयास से द्विपक्षीय कठोरता के लिए जाँच करें. सिर कठोर है और पक्ष की ओर स्थानांतरित नहीं किया जा सकता है, लेकिन आसानी से नीचे धुरी है और कर सकते हैं जब पशु ठीक से stereotaxic फ्रेम पर मुहिम शुरू की है.
  6. धीरे आरामनाक / दांत पट्टी पर माउस थूथन विधानसभा कृन्तक नाक / दांत बार के दांत एपर्चर भीतर धीरे लेकिन सुरक्षित रूप से आराम कर रहे हैं सुनिश्चित बना रही है.
  7. एक बाँझ स्केलपेल का उपयोग करना, कान के बीच करने के लिए आंखों के मध्य से शुरू होने वाले एक midline चीरा बनाते हैं. स्केलपेल एक 45 डिग्री के कोण पर आयोजित की और कहा कि अत्यधिक रक्तस्राव का कारण होगा के रूप में खोपड़ी के माध्यम से अंतर्निहित प्रावरणी के माध्यम से नहीं बल्कि कटौती करने के लिए पर्याप्त दबाव लागू किया जा रहा है सुनिश्चित करें.
  8. प्रावरणी अलग और खोपड़ी को बेनकाब करने के लिए रुई का प्रयोग करें. खोपड़ी पर्वबिन्दु स्थलों और लैम्ब्डा (चित्रा 1 ए) स्पष्ट रूप से दिखाई जानी चाहिए. पशु शीर्षस्थान और लैम्ब्डा स्थलों वही dorsoventral (डीवी) स्थिति (+ 0.1 मिमी) पर कर रहे हैं कि इस तरह के नाक / दांत बार समायोजन करके खोपड़ी फ्लैट की स्थिति में है कि सुनिश्चित करें.
  9. क्षेत्र उजागर करने के लिए बाँझ खारा की एक छोटी राशि लागू करें और धीरे खोपड़ी को साफ करने के लिए कपास swabs का उपयोग करें. तो फिर पूरी तरह से शुष्क हवा की खोपड़ी के लिए 2-3 मिनट इंतजारआगे बढ़ने से पहले.
  10. शीर्षस्थान और लैम्ब्डा की DV स्थिति को मापने के लिए छोड़ दिया stereotaxic हाथ पर एक सुई माउंट. इन दो स्थलों की DV पोजीशनिंग एक दूसरे की 0.1 मिमी के भीतर होना चाहिए. यदि नहीं, तो stereotaxic फ्रेम की नाक पट्टी को समायोजित किया जा सकता है और नीचे इस लक्ष्य को हासिल करने के लिए.
  11. इसके पूर्वकाल पीछे (एपी), पार्श्व (LAT) और dorsoventral (डीवी) माप रिकॉर्ड करने के लिए शीर्षस्थान पर सुई की स्थिति. सुई सिर्फ खोपड़ी को छूता है और यह घुसना नहीं करता है सुनिश्चित करें.
  12. लैम्ब्डा के सापेक्ष हिप्पोकैम्पस के कोणीय बंडल और दांतेदार गाइरस (डीजी) में औसत दर्जे का पर्फोरेंट मार्ग (एमपीपी),: ऐसे लक्ष्य संरचनाओं के लिए निर्देशांक निर्धारित करने के लिए, 1 "Stereotaxic में माउस ब्रेन निर्देशांक" के रूप में एक माउस ब्रेन एटलस, का प्रयोग करें और पर्वबिन्दु, क्रमशः (भी 1 टेबल देखें). फिर, खोपड़ी पर इन बिंदुओं को चिह्नित करने के लिए एक ठीक बिंदु पेन या पेंसिल का उपयोग करें.
  13. इसके अलावा, खोपड़ी के contralateral तरफ दो अधिक अंक निशान. ये अंक Which जमीन (GND) और संदर्भ (रेफरी) के रूप में काम करेगा midline से लगभग 3 मिमी होना चाहिए और (चित्रा 1 ए, भी तालिका 1) एक दूसरे के सापेक्ष अनुलंबीय तैनात.
  14. छोड़ दिया stereotaxic हाथ से सुई मार्कर निकालें और एक stereotaxic पर्वत से लैस एक बिजली दंत ड्रिल के साथ बदलें. प्रत्येक चिह्नित बिंदु पर ड्रिल स्थिति और व्यास में लगभग 0.5 मिमी के छोटे गड़गड़ाहट छेद कर. ड्रिलिंग, एक दोहराव ऊपर और नीचे गति का उपयोग करें और ड्रिल मस्तिष्क की सतह को बेनकाब करने के लिए खोपड़ी प्रवेश कर गया है कि क्या अक्सर जब जांच.
  15. धीरे लेकिन दृढ़ता से वे सिर्फ यह मर्मज्ञ बिना cortical सतह को छूने कि इस तरह के (चित्रा 1 ए (# 0-80 स्टेनलेस स्टील मशीन शिकंजा में 1/8, सिर पताम रंदा slotted) contralateral छेद (GND और रेफरी) में से प्रत्येक में एक पेंच इलेक्ट्रोड ड्राइव ). इन दो स्क्रू इलेक्ट्रोड जमीन और संदर्भ के रूप में सेवा करते हैं.
  16. इलेक्ट्रो में माउंट उत्तेजक और रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोडडी छोड़ दिया और सही stereotaxic हथियारों पर धारकों, क्रमशः.
  17. फिर एक electrophysiological अंतर एम्पलीफायर (= 1000 लाभ, bandpass फिल्टर = 1 हर्ट्ज-3 kHz) और पैदा प्रतिक्रियाओं का दृश्य निरीक्षण के लिए एक डिजिटल आस्टसीलस्कप करने के लिए वर्तमान अलगाव और रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोड टर्मिनल के साथ एक electrophysiological उत्तेजक को उत्तेजक इलेक्ट्रोड टर्मिनल को जोड़ने. इसके अलावा, अंतर एम्पलीफायर को GND और रेफरी इलेक्ट्रोड टर्मिनलों कनेक्ट.
  18. और धीरे धीरे नेत्रहीन 600-800 UA के एक प्रोत्साहन के झटके को पैदा प्रतिक्रिया निगरानी जबकि 0.5 मिमी वेतन वृद्धि में उत्तेजक और रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोड दोनों कम. वे अपने संबंधित लक्ष्य DV स्थिति तक पहुँचने और एक टकसाली संकेत आस्टसीलस्कप (चित्रा 1 बी) पर मनाया जाता है जब तक प्रत्येक इलेक्ट्रोड कम करने के लिए आगे बढ़ें.
  19. बाद में, जगह में इलेक्ट्रोड टर्मिनलों धारण करने के लिए एक टोपी बनाने के लिए दंत ऐक्रेलिक सीमेंट का उपयोग करें, त्वचा से छू कि किसी भी दंत सीमेंट से साफ हो जाना चाहिएतुरंत. दंत सीमेंट पूरी तरह से एक स्वच्छ कृंतक पिंजरे में stereotaxic फ्रेम से पशु हस्तांतरण ठीक हो जाता है. कोर तापमान बनाए रखने के लिए एक हीटिंग दीपक या पैड का प्रयोग करें.
  20. यह होश आएगा जब तक पशु हर घंटे निगरानी करें. Flunixin का एक इंजेक्शन एक एनाल्जेसिक के रूप में दिलाई जा सकती है.

2. एलटीपी प्रेरण

  1. पशु 5-7 दिनों की सर्जरी से उबरने के लिए अनुमति दें. Soundproofing सामग्री के साथ outfitted एक फैराडे पिंजरे (122 सेमी x 43 सेमी x 43 सेमी) और इलेक्ट्रोड उत्तेजक / रिकॉर्डिंग सेटअप करने के लिए सुराग जोड़ने 5 चैनल घूर्णन कम्यूटेटर से मिलकर रिकॉर्डिंग वातावरण में पशु रखें.
  2. पशु (1.17 कदम देखें) उत्तेजक और रिकॉर्डिंग उपकरणों के लिए इलेक्ट्रोड को जोड़ने से पहले रिकॉर्डिंग वातावरण में 1-2 घंटे के लिए acclimate करने की अनुमति दें.
  3. उत्पादन 400 UA के लिए उत्तेजक नियंत्रण स्थापित और यकीन है कि वें बनाने पैदा प्रतिक्रियाएँ 10 के एक औसत के आयाम रिकॉर्डउत्तेजनाओं के बीच कम से कम 10 सेकंड बीत पर. पैदा की प्रतिक्रिया यों तो चित्रा 1C में दिखाया गया विधि का प्रयोग करें. 600, 800, 1000, 1200, और 1400 UA के लिए इस प्रक्रिया को दोहराएँ.
  4. उत्तेजना तीव्रता बनाम पैदा की प्रतिक्रिया का औसत आयाम की साजिश रचने के एक इनपुट / आउटपुट वक्र का निर्माण. इस साजिश से मापा अधिकतम आयाम के 50% से मेल खाती है जो उत्तेजना तीव्रता का निर्धारण. प्रयोग के शेष के लिए 50% तीव्रता का प्रयोग करें.
  5. फिर, 50% उत्तेजना तीव्रता का उपयोग कर, 5 की औसत आयाम प्रतिक्रियाओं 15 मिनट के लिए हर मिनट पैदा की रिकॉर्डिंग से एक आधारभूत प्राप्त करते हैं. फिर यकीन उत्तेजनाओं के बीच कम से कम 10 सेकंड बीत कि बनाते हैं.
  6. बाद में औसत दर्जे का पर्फोरेंट मार्ग को 5 हर्ट्ज की एक फट दर के साथ 400 हर्ट्ज पर दिया 10 दालों की 10 फटने से मिलकर धनुस्तंभीय उत्तेजना देने. गीला कुत्ते हिलाता सहित जब्ती के संकेत के लिए बारीकी से पशु मॉनिटर. पशु एक जब्ती experim है तोईएनटी समाप्त किया जाना चाहिए और उस जानवर से सभी डेटा अध्ययन के परिणामों से बाहर रखा जाना चाहिए.
  7. फिर, 5 की औसत आयाम प्रतिक्रियाओं 30 मिनट posttetanization के लिए हर मिनट पैदा रिकॉर्ड करने के लिए जारी है. उसके बाद, आधारभूत से परिवर्तन प्रतिशत (चित्रा 2) की गणना से 2.5 कदम में प्राप्त आधारभूत आयाम करने के लिए इस आयाम की तुलना करें.
  8. प्रयोगों के समापन के बाद, पशु पशु चिकित्सा अमेरिकन मेडिकल एसोसिएशन की इच्छामृत्यु पर दिशा निर्देशों के अनुरूप है जो isoflurane एक विधि की साँस लेना के माध्यम से euthanized है.

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Representative Results

. तालिका 1 इस प्रोटोकॉल में प्रयोग किया जाता के रूप में महानिदेशक और एमपीपी के लिए निर्देशांक चित्रा 1 ए खोपड़ी पर लक्ष्य संरचनाओं के लिए चिह्नों से पता चलता है पता चलता है,. भी जमीन और संदर्भ इलेक्ट्रोड के स्थान हैं दिखाया चित्रा 1 बी प्रतिनिधि प्रतिक्रिया निशान दोनों पूर्व पैदा दिखाता है और एक ही पशु में posttetanization. Posttetanization प्रतिक्रिया. चित्रा 1C प्रतिक्रिया आयाम यों इस्तेमाल किया विधि दिखाता एलटीपी प्रेरण 2 का संकेत है जो pretetanization प्रतिक्रिया से बड़ा है पैदा ध्यान दें. दरअसल, चित्रा 2 दोनों पूर्व और posttetanization समय अवधि में फैले एक समय के पाठ्यक्रम पर प्रतिक्रिया आयाम में प्रतिशत परिवर्तन को दर्शाता है. यह शिखर एलटीपी मूल्यों 100% से अधिक ध्यान दिया जाना है. बढ़ाया प्रतिक्रिया आयाम निम्नलिखित धनुष्टकार का उत्पन्न होना का ये परिणाम इस प्रोटोकॉल एलटीपी के अध्ययन के लिए सफल और इसलिए विश्वसनीय संकेत मिलता है किआज़ादी से बर्ताव माउस मॉडल में.

तालिका 1
औसत दर्जे पर्फोरेंट पथ (एमपीपी) और GND के लिए उन लैम्ब्डा के रिश्तेदार हैं, जबकि तालिका 1. निर्देशांक लक्ष्य संरचनाओं के लिए. पूर्वकाल पीछे (एपी) दांतेदार गाइरस (डीजी) और रेफरी के लिए निर्देशांक पर्वबिन्दु के सापेक्ष दिया जाता है. सभी DV निर्देशांक ड्यूरा नीचे cortical सतह के रिश्तेदार हैं.

आंकड़ा
चित्रा 1. इलेक्ट्रोड स्थान और पैदा की प्रतिक्रिया का प्रतिनिधि निशान. माउस SKU पर इलेक्ट्रोड के सापेक्ष स्थान की ए) ढांचे के चित्रणडालूँगा. बी) पैदा की प्रतिक्रिया की विशिष्ट निशान दोनों पूर्व और posttetanization. सी) एल्गोरिथ्म पैदा प्रतिक्रिया के आयाम यों इस्तेमाल किया.

चित्रा 2
औसत दर्जे पर्फोरेंट पथ दांतेदार गाइरस synapse में 2. एलटीपी चित्रा. एक स्वतंत्र रूप से व्यवहार कर माउस के एमपीपी-महानिदेशक synapse में एलटीपी प्रेरण के प्रतिनिधि परिणाम. एलटीपी प्रेरण का संकेत पैदा की प्रतिक्रिया आयाम की posttetanic उत्तेजना बढ़ाने पर ध्यान दें.

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Discussion

इस प्रोटोकॉल में, हम स्वतंत्र रूप से व्यवहार कर चूहों में डीजी में एलटीपी के अध्ययन के लिए एक विश्वसनीय और सरल विधि का प्रदर्शन किया. जाग चूहों में एलटीपी के कई अध्ययनों 3,4 प्रदर्शन किया गया है, वहीं बहुत कुछ कारण मुख्य रूप से चूहों में सीमित कपाल अचल संपत्ति और औसत वजन के लिए रिश्तेदार इलेक्ट्रोड headstages के वजन से उत्पन्न तकनीकी जटिलता को जाग चूहों में आयोजित किया गया है चूहों 5. आज़ादी Microdrive इलेक्ट्रोड सिस्टम या जंक्शन क्षेत्र प्रभाव ट्रांजिस्टर जरूरी पशु 6-10 इलेक्ट्रोड पेलोड बोझ को कहते हैं जो headstage में एकीकृत (JFET) preamplifiers या तो उपयोग किया चूहों बर्ताव में डीजी में एलटीपी दिखा दिया है कि कुछ अध्ययनों. वर्तमान प्रोटोकॉल का महत्व यह है कि यह Microdrive इलेक्ट्रोड प्रणाली के उपयोग या एक headstage JFET की टाल के रूप में स्वतंत्र रूप से चूहों बर्ताव में डीजी में एलटीपी उत्प्रेरण के लिए मौजूदा तरीकों पर एक सुधार का प्रतिनिधित्व करता है.

यह महत्वपूर्ण हैइस प्रोटोकॉल का महत्वपूर्ण कदम को उजागर करने के लिए उग्रवादी. इनमें शामिल हैं: यह द्विपक्षीय कठोर है कि इस तरह के stereotaxic फ्रेम में माउस के सिर के 1) बढ़ते (यह अभ्यास और तकनीक के साथ परिचय की आवश्यकता के रूप में इस कदम के सबसे कठिन हो सकता है), 2) इलेक्ट्रोड का इष्टतम स्थिति प्रतिक्रिया परिमाण अधिकतम करने के लिए कर सकते हैं शीर्षस्थान और लैम्ब्डा आमतौर पर शीर्षस्थान और लैम्ब्डा की dorsoventral स्थिति में अंतर कोई बड़ा मिमी 0.1 की तुलना में है कि इस तरह के stereotaxic फ्रेम दांत बार समायोजन करके प्राप्त किया जा सकता है, जो एक ही विमान में हैं बीमा है कि से बढ़ाया जा, 3) की रिकॉर्डिंग के चरण के दौरान प्रयोग, यह जानवरों रिकॉर्डिंग वातावरण की नवीनता एकत्र पैदा प्रतिक्रिया डेटा में उतार चढ़ाव इशारा हो सकता है क्योंकि समय रिकॉर्डिंग में पर्यावरण के लिए अभ्यस्त करने के लिए अनुमति दी जा सिफारिश की है कि, इलेक्ट्रोड के 4) उपयुक्त चयन संकेत गुणवत्ता और निष्ठा में सुधार होगा: द्विध्रुवी इलेक्ट्रोड ( 0.2 मिमी स्टेनलेस स्टील के साथ स्टेनलेस स्टील के चमड़े के नीचे ट्यूबिंग0.5 मिमी की टिप जुदाई) के साथ तार डालने monopolar इलेक्ट्रोड (epoxylite अछूता भी कतरा टंगस्टन तार) तंत्रिका ऊतक में रिकॉर्डिंग के लिए उपयोग किया जाता है, जबकि उत्तेजक के लिए पसंद कर रहे हैं, और 5) चूहों ketamine के एक मिश्रण की एक intraperitoneal इंजेक्शन का उपयोग anesthetized किया जा सकता है (25 मिलीग्राम / एमएल), xylazine (2.5 मिलीग्राम / एमएल) और acepromazine (0.5 मिलीग्राम / एमएल). इस संवेदनाहारी मिश्रण फिर संज्ञाहरण के एक स्थिर गहराई बनाए रखने के लिए 0.2 मिलीग्राम / किग्रा हर 45 मिनट के पूरक के बारे में 20 मिनट में आमतौर पर प्रभावी है जो 1ml/kg की एक खुराक में प्रशासित किया जाना चाहिए.

उल्लेख भालू जो इस प्रोटोकॉल की कुछ सीमाएं हैं. इस प्रोटोकॉल आयन चैनल तंत्र या एलटीपी आगे बढ़ाना हो सकता है कि रिसेप्टर प्रोटीन संश्लेषण पर कोई जानकारी नहीं देता है. इसलिए अल्प जानकारी दर्ज की जा रही जनसंख्या में न्यूरॉन्स की वास्तविक संख्या के विषय में उपलब्ध है. एक और सीमा पैदा प्रतिक्रियाओं जाग पशुओं में एकत्र किया जा रहा है के बाद से यह ascert करना मुश्किल है कि हैऐन और इस तरह के तनाव से निपटने, या नकली ज्ञानेन्द्रिय गतिविधि द्वारा दर्ज संकेत के प्रदूषण जैसे कारकों के प्रभाव को काटना. इन सीमाओं कि प्रतिक्रियाओं अन्यथा शांत जाग्रत सतर्कता राज्य के रूप में जाना जाता है, पशु निष्क्रिय लेकिन चेतावनी राज्य है केवल जब दर्ज हैं पैदा सुनिश्चित करने के द्वारा दूर किया जा सकता है.

बहरहाल, इस प्रोटोकॉल में वर्णित तकनीक मस्तिष्क विद्युत गतिविधि अंतर्निहित व्यवहार की जांच के लिए सबसे physiologically प्रासंगिक मंच प्रदान करते हैं. इस प्रोटोकॉल में उल्लिखित चरणों का पालन, किसी भी मस्तिष्क संरचना माउस मस्तिष्क 1 के एक एटलस द्वारा दिए गए के रूप में उचित निर्देशांक का उपयोग करके लक्षित किया जा सकता है. यह वयस्क चूहे stereotaxic फ्रेम उपयुक्त शिशु चूहे कान कफ बजाय नियमित कान सलाखों के लिए उपयोग किया जाता है, बशर्ते कि चूहों में इस्तेमाल किया जा सकता है कि नोट करना महत्वपूर्ण है. कान कफ माउस के कान को नुकसान पहुँचाए बिना सिर स्थिर होगा. अंत में, यहाँ प्रस्तुत तरीके readil हो सकता हैY मस्तिष्क संबंधी बीमारियों के एक मेजबान के ट्रांसजेनिक और पीटकर माउस मॉडल में electrophysiological जांच में अनूदित.

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Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.

Acknowledgments

डॉ. यूसुफ Bronzino, डा. खामिस अबू Hassaballah, श्री आरजे ऑस्टिन LaFrance, और सुश्री जेसिका Koranda: लेखक निम्न स्वीकार करना चाहते हैं.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Ketamine (100 mg/ml) Henry Schein 10177
Xylazine (20 mg/ml) Henry Schein 33197
Acepromazine (10 mg/ml) Henry Schein 2177
Dental acrylic powder Lang Dental Manufacturing Co. 1330CLR
Dental acrylic liquid Lang Dental Manufacturing Co. 1306CLR
Tungsten wire (0.127 mm) World Precision Instruments TGW0515
Stainless Steel Hypodermic Tubing (0.286 mm) World Precision Instruments 832400
Flunixin (50 mg/ml) Henry Schein 14165
Epoxilyte Superior Essex EP 6001-M
Stainless steel wire insert (0.2 mm) World Precision Instruments 792900
Stereotaxic frame apparatus Kopf Instruments Model 902
Ear cuffs (ear cups) Kopf Instruments Model 921
Electrophysiological stimulator Astro-Med, Inc. S88
Digital oscilloscope B K Precision Corp. 2542
Current isolation unit Astro-Med, Inc. PSIU-6
Differential amplifier World Precision Instruments, Inc. DAM-50
Commutator Plastics One SLC6
Dental drill Stoelting 58650

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References

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