In vivo beeldvorming methode om acute en chronische ontsteking Onderscheid

Immunology and Infection

Your institution must subscribe to JoVE's Immunology and Infection section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

We beschrijven een niet-invasieve beeldvorming methode voor het onderscheiden van inflammatoire fasen. Systemische toediening van luminol onthult gebieden van acute ontsteking afhankelijk MPO-activiteit in neutrofielen. Daarentegen injectie lucigenine maakt visualisatie van chronische inflammatie afhankelijk Phox activiteit in macrofagen.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Tseng, J. C., Kung, A. L. In vivo Imaging Method to Distinguish Acute and Chronic Inflammation. J. Vis. Exp. (78), e50690, doi:10.3791/50690 (2013).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Ontsteking is een fundamenteel aspect van vele menselijke ziekten. In deze video verslag, tonen we aan niet-invasieve bioluminescentie imaging technieken die acute en chronische ontsteking te onderscheiden in muismodellen. Met weefselschade of pathogeen invasie, neutrofielen zijn de eerste verdedigingslinie, spelen een belangrijke rol in het bemiddelen van de acute ontstekingsreactie. Aangezien de inflammatoire reactie verloopt monocyten geleidelijk migreren naar de plaats van verwonding en differentiëren tot rijpe macrofagen, die chronische ontsteking mediëren en weefselherstel bevorderen door het verwijderen weefselstukjes en die anti-inflammatoire cytokines. Intraperitoneale injectie van luminol (5-amino-2 ,3-dihydro-1 ,4-ftalazinedion, natriumzout) maakt detectie van acute ontsteking grotendeels gemedieerd door weefsel-infiltrerende neutrofielen. Luminol specifiek reageert met de superoxide die binnen de phagosomes neutrofielen bioluminescentie sinds gevolg van een myeloperoxidase (MPO) gemedieerde reactie. Lucigenine (bis-N-methylacridinium nitraat) reageert ook met superoxide om bioluminescentie genereren. Echter, lucigenine bioluminescentie is onafhankelijk van MPO en het uitsluitend steunt op fagocytensysteem NADPH oxidase (Phox) in macrofagen tijdens chronische ontstekingen. Samen luminol en lucigenine mogelijk niet-invasieve visualisatie en longitudinale beoordeling van diverse fagocyt populaties in zowel acute als chronische inflammatoire fase. Gezien de belangrijke rol van ontsteking bij een verscheidenheid van menselijke ziekten, geloven we dat niet-invasieve beeldvorming methode kan helpen onderzoeken de differentiële rol van neutrofielen en macrofagen in verschillende pathologische aandoeningen.

Introduction

Ontsteking is een sterk gereguleerd biologische respons bij een verscheidenheid van menselijke ziekten, met inbegrip van microbiële infectie 1, wondgenezing 2, 3 diabetes, kanker 4, 5 cardiovasculaire, neurodegeneratieve 6, 7 en auto-immuunziekten. Weefselontsteking vereist een goede coördinatie van de verschillende immuuncellen om pathogeen klaring, weefselherstel, en de resolutie van de ziekte te bereiken. Neutrofielen en macrofagen zijn belangrijke immuun mediatoren van weefselontsteking. In de acute fase van ontsteking, neutrofielen eerste responders verschillende schadelijke stimuli en weefselschade 8. De neutrofielen snel extravasatie van verkeer naar de plaats van verwonding, waar de cellen inactiveren microben door het vrijgeven antimicrobiële granules en fagocytose. Tijdens fagocytose, overspoelen neutrofielen microben in fagosomen, waarbinnen de cellen produceren hoge niveaus van Superoxide (O 2 · -). Phagosomal superoxide is de primaire bron van vele downstream reactive oxygen species (ROS). Bijvoorbeeld kan superoxide worden dismutated waterstofperoxide (H 2 O 2) door spontane dismutatie of superoxide dismutase (SOD) 9, 10. In neutrofielen, myeloperoxidase (MPO) zet verder waterstofperoxide antimicrobiële hypochloorzuur (HOCl) 11. Aangezien ontstekingsreacties blijven, monocyten geleidelijk migreren naar de plaats van verwonding en differentiëren tot rijpe macrofagen 2, waarvan fagocytosefunctietesten helpen verwijderen geïnactiveerde pathogenen en celresten. Bovendien, als een sleutelrol in de latere fase van ontsteking, macrofaag stimuleert weefselherstel door het produceren van anti-inflammatoire cytokines 12 door het genereren en extracellulaire ROS op een lager niveau 9. De ROS gegenereerd in deze latere fase reguleren weefselremodellering, nieuwe bloedvatvorming en reepitheliabiliseren 13.

Fagocyt NADPH oxidase (Phox) is de primaire bron van superoxide productie in zowel neutrofielen en macrofagen 9. Phox is een multi-subunit complex waarvan de assemblage wordt strak gereguleerd 9. De holoenzyme bevat meerdere cytosole regulerende subeenheden (p67 phox, p47 phox, p40 phox en RAC) en een membraan-gebonden heterodimeer cytochroom b 558 (bestaan ​​uit subunit CYBA en CYBB). Cytochroom b 558 is de reactie kern waarin het CYBB subeenheid (ook bekend als p91 phox en NOX2) voert de primaire redox kettingreactie 9. Interessant is dat de assemblage sites zijn verschillend tussen neutrofielen en macrofagen. In rustende neutrofielen, cytochroom b 558 is vooral aanwezig in het membraan van intracellulaire opslag granules 14. Tijdens fagocytose, neutrofielen assembleren de holoenzymes op phagosomes 9, die een hoog gehalte MPO activiteit aanwezig. De neutrofielen Phox verbruikt snel zuurstof en oefent zijn microbicidal macht door ROS productie, een fenomeen genaamd de respiratoire burst 11. Daarentegen macrofagen een lager MPO expressie en cytochroom b 558 wordt meestal gevonden in de plasmamembraan 15, 16. Zo neutrofielen produceren hoge niveaus van superoxide voor anti-microbiële activiteit, terwijl macrofagen produceren minder superoxide voor regulerende functies 15.

Omdat de ontsteking is een ingewikkeld in vivo proces, zouden niet-invasieve beeldvormende methoden die specifiek zijn voor de verschillende fasen van ontsteking kwantitatieve en longitudinale beoordeling van de ziekte modellen laten. Gebruik mechanistische studies hebben we eerder aangetoond dat het gebruik van twee chemiluminescente agentia, luminol (5-amino-2 ,3-dihydro-1 ,4-ftalazinedion) en lucigenine (bis-N-methylacridinium nitraat)Voor niet-invasieve beeldvorming van acute en late (chronische) stadia van ontsteking, respectievelijk 17. Luminol maakt visualisatie van neutrofielen MPO activiteit in de acute fase van ontsteking 18-20, terwijl lucigenine bioluminescentie kunnen worden gebruikt om macrofaagactiviteit in samenwerking ervan met de late fase of chronische ontsteking 17. In dit manuscript, gebruikten we twee experimentele inflammatiemodellen (sc PMA en sc LPS) om deze beeldvormende technieken demonstreren.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Opmerking: Alle dierlijke studies werden uitgevoerd onder erkende institutionele protocollen en richtlijnen verzorging van dieren.

1. Reagentia en oplossingen

  1. PMA oplossing sc inoculatie: Bereid een voorraadoplossing van forbol 12-myristaat 13-acetaat (PMA) en 5 mg / ml in DMSO. Bewaar de voorraad oplossing bij -20 ° C. Voor enting, ontdooi de stockoplossing en verdun tot 1 mg / ml PMA in PBS.
  2. LPS oplossing sc inoculatie: Los lipopolysaccharide (LPS van Salmonella enterica serotype enteritidis) in steriele PBS bij 1 mg / ml voor sc inoculatie.
  3. Luminol oplossing acute fase beeldvorming: Los luminol (5-amino-2 ,3-dihydro-1 ,4-ftalazinedion, natriumzout) in steriele fysiologische zoutoplossing (0,9% NaCl) bij 10 mg / ml. De oplossing kan bij -20 ° C worden bewaard voor gebruik.
  4. Lucigenine oplossing voor de chronische fase beeldvorming: Los lucigenine (bis-N-methylacridinium nitraat) in steriele fysiologische zoutoplossingbij 2,5 mg / ml. De oplossing kan bij -20 ° C worden bewaard voor gebruik.

2. Subcutane PMA Ontsteking Model

  1. Verdoven NCR naakt muizen in een inductie kamer met 1-2% isofluraan. Bevestig algemene anesthesie door het verlies van beweging en een constante ademhalingsfrequentie. Overdracht van een dier naar een neuskegel met isofluraan-gemengde gas geleverd en houdt het dier onder narcose.
  2. Gebruik een isopropylalcohol vegen schoon te maken en te desinfecteren de injectieplaats op de linker flank.
  3. Met behulp van steriele techniek, injecteer 50 ul van de PMA inoculatie oplossing (bevattende 50 ug PMA) in de subcutane ruimte op de linkerflank. Verwijder overtollig vocht uit de injectieplaats met behulp van een isopropylalcohol pad. Vermijd het gebruik van analgesie als het kan invloed hebben op ontstekingsreacties.
  4. Verplaats het dier terug naar de behuizing kooi en nauwlettend toezien op het herstel van de anesthesie. Om te helpen bij het herstel, gebruiken een verwarmingselement om het dier warm.

3. Subcutane LPS Ontsteking Model

  1. Verdoven C57BL/6J-muizen met 1-2% isofluraan in een inductie kamer. Zodra de vaststelling van algemene anesthesie, dragen een dier naar een neuskegel met isofluraan gas geleverd en houdt het dier onder narcose.
  2. Gebruik een isopropylalcohol Veeg de injectieplaats reinigen links voetzool.
  3. Met behulp van steriele techniek, injecteer 50 ul van de LPS inoculatie oplossing (bevattende 50 ug LPS) in de linker voetzool. Verwijder overtollig vocht uit de injectieplaats met behulp van een isopropylalcohol pad. Vermijd het gebruik van analgesie als het kan invloed hebben op ontstekingsreacties.
  4. Verplaats het dier terug naar de behuizing kooi en nauwlettend toezien op het herstel van de anesthesie. Gebruik een verwarmingselement om het dier warm te houden tijdens het herstel.

4. Bioluminescentie beeldvorming van ontsteking

  1. Verdoven van het dier in een inductie kamer met 1-2% isofluraan-mixed gas. Confirm algemene anesthesie door het verlies van beweging en een constante ademhalingsfrequentie.
  2. Terwijl het dier nog onder narcose, intraperitoneaal (ip) injectie de luminol-oplossing (10 mg / ml), of lucigenine oplossing (2,5 mg / ml) voor acute of chronische ontsteking beeldvorming, respectievelijk. De uiteindelijke dosis is 100 mg / kg voor luminol en 25 mg / kg voor lucigenine. Een lagere dosis van lucigenine (10-15 mg / kg) kan worden gebruikt om mogelijke toxiciteit enkele muizenstammen voorkomen. Tekenen van toxiciteit zijn kortademigheid en ademnood. De C57BL/6J stam heeft een lagere lucigenine tolerantie dan de NCR naakt stam.
  3. Breng de dieren in de beeldvorming kamer van een bioluminescentie imaging systeem.
  4. Voer sequentiële bioluminescentieweergave op 1 min. intervallen. Elke beeldvorming stap bestaat uit 1 min acquisitie tijd, f / stop = 1, binning = 16 en 0 seconden vertraging.
  5. Binnen de beeldopname paneel, om sequentiële multi-step beeldvorming inschakelen, klik op de volgorde instellen BUtton. Zorg voor voldoende beeldvorming stappen in de overname profiel naar maximale luminescentie-uitgang (meestal 15 een minuut stappen zal volstaan) te bepalen. De 15-min beeldvorming sectie laat voldoende tijd voor substraat absorptie en systemische circulatie.
  6. Verwijder het dier de beeldvorming kamer en verplaatsen naar de behuizing kooi. Om te helpen bij het herstel, gebruiken een verwarmingselement om het dier warm.
  7. Tijdens post-acquisitie-analyse, gebruikt u de imaging software pakket aan piek totale lichtgevende signaal te berekenen door middel van gestandaardiseerde regio van belang (ROI). De beelden zijn aanwezig als uitstraling in fotonen / sec / cm 2 / sr met minimale en maximale drempel aangegeven. Kwantitatieve gegevens worden gepresenteerd als totale flux in fotonen per seconde per ROI.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

We voerden longitudinale bioluminescentieweergave om acute en chronische ontsteking te beoordelen in experimentele ontsteking modellen. Forbol 12-myristaat 13-acetaat (PMA) is een krachtige proteïne kinase C (PKC) agonist die Phox voor superoxide anion productie activeert en triggers intense acute ontstekingsreacties 21. SC injectie van 50 mg van PMA in NCR naakt muizen veroorzaakt een snelle huidirritatie en acute ontsteking op injectieplaats 18, 22, 23. We voerden dagelijks beeldvorming voor 4 dagen met de eerste beelden verkregen zo vroeg als 3 uur na de PMA injectie. Figuur 1 blijkt de lengte-bioluminescentie beeldvorming met behulp van luminol en lucigenine als substraten. In een vroeg stadium van ontsteking (3 uur), zagen we significante luminol bioluminescentie aangeeft hoge niveaus van neutrofielen MPO-activiteit op de sites van PMA injectie. Geen significante lucigenine bioluminescentie werd waargenomen tijdens deze vroege stadia van ontsteking. Vanafdag 2, zagen we korstvorming en dus verminderde intensiteit van luminescentie. Zoals wondgenezing bleek (figuur 1A, dag 3 en 4), namen wij gestage toename lucigenine bioluminescentie (Figuur 1B). Deze resultaten illustreren dat luminol bioluminescentie is een acute fase van ontsteking, terwijl lucigenine bioluminescentie nauw verbonden met weefselherstel in de late stadia van ontsteking.

Onafhankelijk we sc geïnjecteerd 50 pg lipopolysaccharide (LPS) in de voetkussentjes van wildtype C57BL/6J-muizen en uitgevoerd longitudinale bioluminescentieweergave tot 10 dagen (Figuur 2A). LPS is een component membraan van Gram-negatieve bacteriën. SC inoculatie van LPS kan triggering sterke ontstekingsreacties door TLR4 receptor activatie en daaropvolgende inflammatoire chemokine / cytokine productie 24. In tegenstelling tot de PMA die direct activeert Phox voor superoxide production, LPS vergt een langere periode van tijd om volledig te activeren weefselinfiltrerend fagocyten 18. Aangezien neutrofielen de vroege responders microbe infectie observeerden we luminol verhoogde bioluminescentie tijdens de eerste 4 dagen van acute ontsteking, die na dag 5 (Figuur 2B) afgenomen. In tegenstelling, lucigenine bioluminescentie geleidelijk toegenomen in de late en chronische fase van ontsteking (Figuur 2B, dagen 5-10).

Samen tonen deze resultaten de mogelijkheid om differentiële substraatspecificiteit om acute en chronische inflammatoire fasen onderscheiden. Belangrijk is beeldvorming gemedieerd door de endogene enzymatische activiteiten van de immuuncellen, en er is geen noodzaak voor ectopische expressie van reporters.

Figuur 1
Figuur 1. In vivo longitudinale bioluminescentie beeldvorming van acute en late fase van de ontsteking. strong> (A) Wij veroorzaakte plaatselijke ontsteking van het weefsel door sc injectie van 50 ug PMA, en uitgevoerd dagelijkse luminol (100 mg / kg, ip) en lucigenine (25 mg / kg, ip) bioluminescentieweergave vanaf 3 uur na de PMA injectie. Significante achtergrond auto-luminescentie werd waargenomen op plaatsen van ontsteking zonder chemiluminescente agentia. (B) Kwantitatieve vertegenwoordiging van luminol en lucigenine bioluminescentie op de injectieplaatsen. In de acute fase van ontsteking, luminol signalen domineerde de bioluminescentie uitgang (3 uur). In de latere stadia van ontsteking, de injectieplaatsen hadden hogere lucigenine bioluminescentie tegenover luminol (dag 4). Error bars geven de standaarddeviaties van bioluminescentie metingen op elke imaging tijdstip. Klik hier om een grotere afbeelding te bekijken .

690fig2.jpg "/>
Figuur 2. (A) 50 ug LPS werd geïnjecteerd sc in de voetzolen van C57BL/6J-muizen. Longitudinale bioluminescentie beeldvorming met luminol en lucigenine werden dagelijks uitgevoerd gedurende 10 dagen. (B) Kwantitatieve weergave van luminol en lucigenine bioluminescentie bij LPS injectieplaatsen. Luminol bioluminescentie steeg gedurende de eerste 4 dagen van acute ontsteking. In de late / chronische fasen van ontsteking, luminol signalen snel af en lucigenine bioluminescentie geleidelijk verhoogd. Error bars geven de standaarddeviaties van bioluminescentie metingen op elke imaging tijdstip. Klik hier om een grotere afbeelding te bekijken .

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

In dit rapport demonstreren we een bioluminescentie methode voor niet-invasieve beeldvorming van ontsteking bij levende dieren. Gebruikmakend van twee luminescerende substraten, luminol en lucigenine, kan de werkwijze onderscheiden fasen van ontsteking. Luminol bioluminescentie wordt geassocieerd met neutrofielen in de acute fase van ontsteking, terwijl lucigenine bioluminescentie wordt gemedieerd door macrofagen in de chronische fase. Relatief kleine (MW = 177,16 g / mol) en elektrisch ongeladen, kan luminol gemakkelijk zowel plasma als phagosomal membraan 25-29 dringen. Bovendien, luminol luminescentie specifiek is voor de intracellulaire MPO activiteit neutrofielen 9. Anderzijds, lucigenine meestal ondoorlaatbaar membraan door zijn grotere omvang (MW = 510,5 g / mol) en twee positieve ladingen 25, 27-30.

Neutrofielen en macrofagen monteren de Phox holoenzyme op verschillende subcellulaire locaties. Hoewel beide reagentiaafhankelijk Phox om superoxide (O 2 · -) voorzien, de ongelijkheid in cel permeabiliteit en MPO-afhankelijkheid maakt de substraten aan inflammatoire fagocyten differentiëren in ziektemodellen. Neutrofielen drukken meeste Phox in het membraan van intracellulaire vesicles (phagosomes) 14, die een hoog gehalte MPO zijn ook aanwezig. Hierdoor wordt luminol bioluminescentie specifiek aan geactiveerde neutrofielen tijdens acute ontsteking. Daarentegen macrofagen assembleren Phox in het plasmamembraan als ze infiltreren en volwassen tijdens chronische ontsteking 15. Niet-doorlatende lucigenine kan direct communiceren met de extracellulaire superoxide geproduceerd door macrofagen om chronische inflammatoire bioluminescentie produceren.

Ontsteking is een ingewikkeld in vivo proces dat goede coördinatie van vele celtypes en verschillende extracellulaire signaalmoleculen vereist. In deze video verslag, laten we desynergetisch gebruik van zowel luminol en lucigenine, om acute en late (chronische) ontsteking fase volgen in diermodellen. Aangezien deze substraten zijn commercieel verkrijgbaar en relatief goedkoop, wij geloven dat deze relatief eenvoudige en robuuste weergavemethode kan gemakkelijk worden omgezet in vivo toepassingen in vele ziektegebieden. Van de nota, in vergelijking met PET, MRI en nabij-infrarood (NIR) fluorescerende beeldvorming technieken, de chemiluminescente methode is niet ideaal voor deep tissue imaging vanwege de substraten 'blauwe emissie spectra. Om penetratie te verbeteren, is onlangs aangetoond dat de blauwe chemiluminescentie emissie kan worden overgebracht naar co-bestuurde nanodeeltjes NIR emissie 31. Verdere aanpassing van hun chemische structuren zou kunnen versterken hun quantum efficiency voor een sterkere lichtopbrengst en verfijnen hun emissiespectra voor diepere penetratie.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

De auteurs verklaren geen belangenconflicten in deze studie.

Acknowledgements

Dit werk werd ondersteund door de Nancy Lurie Marks Foundation. Wij danken dr. Nancy E. Kohl voor kritische lezing van het manuscript. Wij danken Kin K. Wong voor zijn hulp bij de voorbereiding van dit videoverslag.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO P8139  
Lipopolysaccharide from Salmonella enterica serotype enteritidis Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO L2012  
Luminol (5-amino-2,3-dihydro-1,4-phthalazinedione, sodium salt) Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO A4685  
Lucigenin (bis-N-methylacridinium nitrate) Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO M8010  
IVIS Spectrum imaging system with Living Imaging 4.2 software package Caliper LS/Perkin Elmer, Hopkinton, MA  

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Premack, B. A., Schall, T. J. Chemokine receptors: gateways to inflammation and infection. Nat. Med. 2, 1174-1178 (1996).
  2. Singer, A. J., Clark, R. A. Cutaneous wound healing. N. Engl. J. Med. 341, 738-746 (1999).
  3. Wellen, K. E., Hotamisligil, G. S. Inflammation, stress, and diabetes. J. Clin. Invest. 115, 1111-1119 (2005).
  4. Weitzman, S. A., Gordon, L. I. Inflammation and cancer: role of phagocyte-generated oxidants in carcinogenesis. Blood. 76, 655-663 (1990).
  5. Ridker, P. M., Cushman, M., et al. Inflammation, aspirin, and the risk of cardiovascular disease in apparently healthy men. N. Engl. J. Med. 336, 973-979 (1997).
  6. Wyss-Coray, T., Mucke, L. Inflammation in neurodegenerative disease--a double-edged sword. Neuron. 35, 419-432 (2002).
  7. Hamilton, J. A. Colony-stimulating factors in inflammation and autoimmunity. Nat. Rev. Immunol. 8, 533-544 (2008).
  8. Harlan, J. M. Leukocyte-endothelial interactions. Blood. 65, 513-525 (1985).
  9. Bedard, K., Krause, K. H. The NOX family of ROS-generating NADPH oxidases: physiology and pathophysiology. Physiol. Rev. 87, 245-313 (2007).
  10. Rest, R. F., Spitznagel, J. K. Subcellular distribution of superoxide dismutases in human neutrophils. Influence of myeloperoxidase on the measurement of superoxide dismutase activity. Biochem. J. 166, 145-153 (1977).
  11. Hampton, M. B., Kettle, A. J., et al. Inside the neutrophil phagosome: oxidants, myeloperoxidase, and bacterial killing. Blood. 92, 3007-3017 (1998).
  12. Serhan, C. N., Savill, J. Resolution of inflammation: the beginning programs the end. Nat. Immunol. 6, 1191-1197 (2005).
  13. Jiang, F., Zhang, Y., et al. NADPH oxidase-mediated redox signaling: roles in cellular stress response, stress tolerance, and tissue repair. Pharmacol. Rev. 63, 218-242 (2011).
  14. Calafat, J., Kuijpers, T. W., et al. Evidence for small intracellular vesicles in human blood phagocytes containing cytochrome b558 and the adhesion molecule CD11b/CD18. Blood. 81, 3122-3129 (1993).
  15. Johansson, A., Jesaitis, A. J., et al. Different subcellular localization of cytochrome b and the dormant NADPH-oxidase in neutrophils and macrophages: effect on the production of reactive oxygen species during phagocytosis. Cell. Immunol. 161, 61-71 (1995).
  16. Kumar, A. P., Piedrafita, F. J., et al. Peroxisome proliferator-activated receptor gamma ligands regulate myeloperoxidase expression in macrophages by an estrogen-dependent mechanism involving the -463GA promoter polymorphism. J. Biol. Chem. 279, 8300-8315 (2004).
  17. Tseng, J. C., Kung, A. L. In vivo imaging of inflammatory phagocytes. Chem Biol. 19, 1199-1209 (2012).
  18. Gross, S., Gammon, S. T., et al. Bioluminescence imaging of myeloperoxidase activity in vivo. Nat. Med. 15, 455-461 (2009).
  19. Kielland, A., Blom, T., et al. In vivo imaging of reactive oxygen and nitrogen species in inflammation using the luminescent probe L-012. Free Radic. Biol. Med. 47, 760-766 (2009).
  20. Zhou, J., Tsai, Y. T., et al. Noninvasive assessment of localized inflammatory responses. Free Radic. Biol. Med. 52, 218-226 (2012).
  21. Karlsson, A., Nixon, J. B., et al. Phorbol myristate acetate induces neutrophil NADPH-oxidase activity by two separate signal transduction pathways: dependent or independent of phosphatidylinositol 3-kinase. J. Leukoc. Biol. 67, 396-404 (2000).
  22. Taylor, R. G., McCall, C. E., et al. Histopathologic features of phorbol myristate acetate-induced lung injury. Lab Invest. 52, 61-70 (1985).
  23. Fukaya, S., Matsui, Y., et al. Overexpression of TNF-alpha-converting enzyme in fibroblasts augments dermal fibrosis after inflammation. Lab Invest. 93, 72-80 (2013).
  24. Lu, Y. C., Yeh, W. C., et al. LPS/TLR4 signal transduction pathway. Cytokine. 42, 145-151 (2008).
  25. Aitken, R. J., Buckingham, D. W., et al. Reactive oxygen species and human spermatozoa: analysis of the cellular mechanisms involved in luminol- and lucigenin-dependent chemiluminescence. J. Cell. Physiol. 151, 466-477 (1992).
  26. Allen, R. C., Loose, L. D. Phagocytic activation of a luminol-dependent chemiluminescence in rabbit alveolar and peritoneal macrophages. Biochem. Biophys. Res. Commun. 69, 245-252 (1976).
  27. Caldefie-Chezet, F., Walrand, S., et al. Is the neutrophil reactive oxygen species production measured by luminol and lucigenin chemiluminescence intra or extracellular? Comparison with DCFH-DA flow cytometry and cytochrome c reduction. Clin. Chim. Acta. 319, 9-17 (2002).
  28. Dahlgren, C., Aniansson, H., et al. Pattern of formylmethionyl-leucyl-phenylalanine-induced luminol- and lucigenin-dependent chemiluminescence in human neutrophils. Infect. Immun. 47, 326-328 (1985).
  29. Dahlgren, C., Karlsson, A. Respiratory burst in human neutrophils. J. Immunol. Methods. 232, 3-14 (1999).
  30. Aerts, C., Wallaert, B., et al. Release of superoxide anion by alveolar macrophages in pulmonary sarcoidosis. Ann. N.Y. Acad. Sci. 465, 193-200 (1986).
  31. Zhang, N., Francis, K. P., et al. Enhanced detection of myeloperoxidase activity in deep tissues through luminescent excitation of near-infrared nanoparticles. Nat Med. (2013).

Comments

1 Comment

  1. Hi there,

    I am Hussain from Germany and working on similar research topic. Please give me a chance to watch this video, at least for one time.
    Sincerely
    Hussain

    Reply
    Posted by: Hussain A.
    September 11, 2013 - 9:07 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics