נהלים לזיהוי פריוני זיהומיות לאחר המעבר דרך מערכת העיכול של מינים עופות

Published 11/06/2013
0 Comments
  CITE THIS  SHARE 
Immunology and Infection

Your institution must subscribe to JoVE's Immunology and Infection section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Summary

יש אוכלי נבלות פוטנציאל translocate פריונים ספגו מוח העברה זיהומיות בצואה שלהם לאזורים ללא מחלה. שלנו שיטות פירוט משמשות כדי לקבוע אם פריונים מרוסקים מותאמים עכבר יישארו זיהומיות לאחר מעבר למרות שמערכת העיכול של עורבים אמריקאים (brachyrhynchos Corvus), הצריכה נפוצה של בעלי חיים מתים.

Cite this Article

Copy Citation

Fischer, J. W., Nichols, T. A., Phillips, G. E., VerCauteren, K. C. Procedures for Identifying Infectious Prions After Passage Through the Digestive System of an Avian Species. J. Vis. Exp. (81), e50853, doi:10.3791/50853 (2013).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

חומר פריון זיהומיות (PRP מיל ') סביר להניח הגורם לאנצפלופתיה הקטלנית, ניווניות העברה ספג מחלות (TSE) 1. העברת מחלות TSE, כגון מחלה כרונית לבזבז (CWD), חזקה כי מבעלי החיים לבעלי החיים 2,3, כמו גם ממקורות סביבתיים 4-6. יש אוכלי נבלות וטורפים פוטנציאליים לtranslocate חומרי PRP Res באמצעות הצריכה והפרשה של נבלות מזוהמת CWD. מחקר שנערך לאחרונה תעד מעבר של חומר PRP Res דרך מערכת העיכול של עורבים אמריקאים (brachyrhynchos Corvus), נבלות בצפון אמריקה נפוצות 7.

אנו מתארים נהלים המשמשים לתיעוד מעבר של חומר PRP Res דרך עורבים אמריקאי. עורבי gavaged עם מרוסק מותאם עכבר RML מתח והצואה שלהם נאספו 4 ההודעה hr gavage. צואה עורב אז היו נקווית והזריקה לתוך intraperitoneallyעכברי C57BL / 6. עכברים היו במעקב יומי עד שהם באים לידי ביטוי סימנים קליניים של מרוסק של עכבר והיו מורדמים לאחר מכן. עכברים ללא תסמינים היו במעקב עד הודעה 365 ימי חיסון. ניתוח כתם מערבי נערך כדי לאשר את מצב מחלה. תוצאות הראה כי פריונים יישארו זיהומיות לאחר שנסעו דרך מערכת העיכול של עורבים ונמצאים בצואה, גרימת מחלה בעכברי מבחן.

Introduction

"ספגות מוח מדבק (TSE) הם הפרעות קטלניות זיהומיות ניווניות המשפיעות על חיות הבר, חיות בית, ובני אדם. הגורם המדבק של מחלות TSE נראה isoforms misfolded או פתוגניים (PRP Res) של חלבוני פריון 1. מחלות בעלי החיים TSE כוללות מחלה ממארת כרונית (CWD) בפרד צבי (hemionus Odocoileus), צבי לבן זנב (virginianus Odocoileus), איילים (elaphus Cervus), ואייל (alces Alces); מרוסק בכבשים ועזים; ספג מוח ( BSE) בבקר; אנצפלופתיה מינק העברה במינק Farmed; ספג מוח של חתולים בחתולים; ספגתי מוח פרסה אקזוטי בגן החיות אקזוטיות מעלה גירה ממשפחת Bovidae; וספג מוח בפרימטים לא אנושיים 8. המחלה אחת האדם TSE, מחלת קרויצפלד יקוב וריאנט, היא נדירה וחשבו שיירכשו על ידי צריכת PRP Res-contaminאוכל ated 9. באופן דומה, BSE יכול להדביק בני אדם, אם בשר מזוהם הוא נצרך 10. מבינים כל מחלות TSE, מרוסק וCWD הם שני עם מגיפות עצמית לקיום ומקורות לזיהום רק הונחו כמבעלי חיים לבעלי חי 2,3,11 כמו גם ממקורות סביבתיים 4-6. המחקר מצביע על כך שרוב המחלות TSE דורשות תקופות דגירה ממושכות בולטות מאירועי חשיפה טבעיים של חומר PRP Res לביטוי של סימנים קליניים 2-4,6,8 ומחסומי מינים לכאורה למזער, אבל לא לחסל את הפוטנציאל, שידור interspecies 12-14 .

זיהוי מנגנונים להתפשטות פריון זיהומיות חומרים (PRP מיל ') הוא חשוב ביותר עבור מתן תשובות לשאלות על איך מחלות TSE נעו על פני השטח. חקירות ניסיוניות הראו כי חרקי 15,16, עופות וחזירים 17, ועורבים אמריקאים (נוי Corvushyrhynchos) 7,18 הם נשאים או מפזרים פסיביים של חומר PRP Res. לאחרונה מעבר של חומר PRP Res דרך מערכת העיכול של עורבים תועד, הוכיח את התפקיד שהם עשויים לשחק בפיזור של מחלות TSE 7. תוצאות אלו להפוך אותו מתקבלות על הדעת שעורבים, נבלות, יכולים להיתקל, לצרוך, ולהעביר את חומר זיהומיות באמצעות תצהיר צואה, לאזורים ללא מחלה.

הנהלים אנו מדגימים כאן שימשו לתיעוד מעבר של חומר PRP Res דרך מערכת העיכול של עורבים ויקלו על היישום של שיטות אלה לנבלות אחרות ודגמי טורף מינים ספציפיים במחקר עתידי הקשורים באופן משמעותי. במחקר זה שיטות קונבנציונליות נעשו שימוש כדי לחקור את אמצעים בלתי שגרתיים של סחר בחומרי PRP מיל, אשר יכול לתרום להתפשטות והניטל הכולל של חומר PRP Res.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

הפרוטוקול שלנו מותאם מאחד שפרסמנו בעבר 7. כל ההליכים כרוכים בבעלי חיים אושרו על ידי הוועדה המוסדית טיפול בבעלי חיים ושימוש בארצות הברית מחלקת החקלאות (USDA), בעלי החיים וצמחי בריאות פיקוח השירות (כנימות), שירותים בטבע (WS), National Wildlife מרכז המחקר (NWRC).

1. העורב Gavaging

  1. הערכת זמן מעבר של 'חומר המוח פסאודו' דרך מערכת העיכול של עורבים אמריקאים.
    1. מערבבים 5 מיליליטר של מבושל ומקושקשים ביצה שלמה עם צבע כחול ועורב gavage 1 באמצעות 2 במחט gavage (איור 1).
    2. בדוק עורב כל 30 דקות עד צואה כחולה / מוכתם ירוקה הן כבר לא מופרשת.
  2. השג C57BL / 6 מוח עכבר RML (זן צ'נדלר) נגוע נגוע וחולה במחלה סופנית.
  3. צור 20% wt / כרך רגיל וhomogenate עכבר המוח הנגוע בhomogenizer בלנדר כדור עם 1xפוספט שנאגרו מלוח (PBS) וחרוזי זכוכית, אז צנטריפוגות ב3,000 XG דקות 1 כדי להסיר חומר חלקיקים גדול יותר. הסר supernatant ולדלל עם נפח שווה של 1x PBS ליצור 10% wt / כרך ב PBS סטרילית. להקפיא ב -80 ° C עד צורך.
  4. 17 שעה לפני gavage להסיר מזון, אך לא מים, מעטים עורב.
  5. באופן אקראי להקצות עורבים לקבוצות טיפול ובעל פה gavage כל עורב עם 5 מיליליטר של homogenate מוח עכבר הנורמלי או נגוע באמצעות 2 במחט gavage.
  6. העברה עורבת בכלובים בודדים ולאסוף וברכה כל הצואה בתוך כל כלוב למשך 4 שעות לאחר gavage (איור 2).
  7. Homogenize צואה נקוותה עבור כל עורב בhomogenizer בלנדר כדור עם חרוזי זכוכית עד שמרקם אחיד מושגת. * צואה העורב הן בעיקר נוזלית ויכולה להיות מעורבת בקלות.
  8. לכל עורב, לדלל 500 μl של homogenate צואה ל9.5 מיליליטר 1x PBS להיקף כולל של 10 מיליליטר.
  9. צנטריפוגה homogena הצואהטה ל15 דקות ב 1,400 XG ולחלץ את supernatant.
  10. כדי למזער את האיום של זיהום מיקרוביאלי המשני, טיפול supernatant עם 1 μl של 100 יחידות / מיליליטר פניצילין ו100 מיקרוגרם / מיליליטר סטרפטומיצין (Invitrogen, ניו יורק) לשל homogenate 100 μl ואז למקם תחת אור UV בטמפרטורת חדר למשך 20 דקות כדי להפחית את סיכון לזיהום נגיפי וחיידקיים. לאחר חשיפה לקרינת UV, דגימות sonicate בsonicator מגה פיקסל 3000 בהגדרת 70 ל30 שניות כדי לשבש את הקרום של כל חיידקים שנותרו.

2. עכבר הרכבת חיסון

  1. באופן אקראי להקצות עכברים לקבוצות לאחר הטיפול (טבלת 1):
    1. קבוצת 1 - עכברי טיפול חיוביים מחוסן intraperitoneally (IP) עם 1 מיליליטר של homogenate צואה מעורב פה gavaged עם המוח של עכבר 5 מ"ל נגוע.
    2. קבוצת 2 - עכברי טיפול שלילי מחוסן IP עם 1 מיליליטר של homogenate צואה מעורב פה gavaged עם מוח עכבר רגיל 5 מ"ל.
    3. לדלל infectehomogenate ד והנורמלי במוח עכבר לקבוצות 3 ו -4 ל1:100 w / v ב 1x PBS.
    4. קבוצה 3 - עכברי ביקורת חיוביים מחוסנת IP עם 1 מיליליטר של homogenate עכבר המוח הנגוע.
    5. קבוצת 4 - עכברי בקרה שלילית מחוסן IP עם 1 מיליליטר של homogenate עכבר המוח הנורמלי.
קבוצת הטיפול מספר בעלי חיים
קבוצת 1 צואה + העורב סקרייפי 100
קבוצה 2 סקרייפי - עורב צואה 25
קבוצה 3 מוח סקרייפי + עכבר 10
קבוצה 4 סקרייפי - מוח העכבר 5

. טבלת 1 מעמד סקרייפי של הבידוד (+ חיובי, שלילי -) ומספר בעלי החיים המשמשים 7.

  1. Intraperitoneally לחסן עכבר:
    1. עורף עכבר על ידי פרווה צוואר גב עם אגודל ואצבע מורה וסובב בעדינות לחשוף את הצד הגחוני.
    2. לרומם את הקצה אחורי של עכבר כך שהראש הוא מעט נמוך יותר.
    3. הכנס 25 מחט G 1 סנטימטר דרך עור, רוחב 1 סנטימטר של קו האמצע, ו 1-2 סנטימטר קדמי למפרק הע"כ באמצעות מזרק נעילת מחט.
    4. הזרק 1 מיליליטר לחסן לאט לתוך חלל גוף עכבר.

3. ניטור עכבר

  1. לפקח על עכברים יומיים עד שהם מביעים את הסימנים קליניים של scrapie עכבר. סימנים קליניים יכולים לכלול: קיפוזיס, אטקסיה, זנב קשיח, חוסר הטיפוח, רזון, ועייפות.
  2. ציון עכברים עבור כל אחד מ6 הסימנים הקליניים כאשר סימנים נראים לעין הם מאליו, שבו 0 = לא נראה לעין, 1 = בינונית, ו -2 = חמורים.
  3. להרדים עכברים כאשר ציונים יומיים הכולל עבור כל סימן להגיע ≥ 8 ליום 1, ≥ 6 ברציפות במשך 3 ימים, או ב365 ימים שלאחר החיסון (dpi).
  4. מוח קציר euthan מייד לאחראסיה ולאחסן ב -70 ° C.
  5. כדי לאשר את האבחנה מרוסקת, לעכל דגימות מוח עם 3 μl של 50 מיקרוגרם / מיליליטר של תמיסת proteinase-K (PK) בדילול כדלקמן: 3.1. μl PK, 12.5 μl של 500 mM EDTA, pH 8, 109.39 μl של 1x PBS במשך 30 דקות על 45 מעלות צלזיוס, ולאחר מכן להשבית PK ידי הוספת 8 חיץ טעינת μl ודוגרי דגימות ב 95 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות. דגימות עומס על 12% ג'ל SDS-PAGE, Electrophorese והעברה לממברנה Immobilon (PVDF) ובלוק עם 5% חלב ללא שומן ב0.2% Tween 20 PBS במשך שעה 1 בטמפרטורת חדר. ואז לבחון עם הנוגדן חד שבטי אנטי PRP Bar224 מצומדת לחזרת peroxidase, בדילול מלא בבלוק, במשך שעה 1 בטמפרטורת חדר. יש לשטוף את הממברנה במשך שעה 1 עם PBS-0.2% Tween 20. כדי להמחיש, דגירה דקות כתם 5 מערביות עם מצע chemiluminescent ותמונה על מערכת תיעוד ג'ל G-box.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

הנהלים המשמשים להוכיח כי מערכת העיכול של עורבים אינה מבטלת שעה PRP Res infectivity 4 לאחר gavage האוראלי של homogenate המוח המרוסק של 7. כל העורבים עשרים שgavaged עם חומר PRP Res לאחר מכן מועברים חומר PRP Res באמצעות צואה לעכברים. עכברים חולים זוהו על ידי ביטוי של סימני עכבר מרוסק קליניים ואישור מחלה הושלם על ידי ניתוח כתם מערבי.

חקירה של זמן השמירה של חומר מעובדים על ידי עורבים חשפה זמן מעבר דרך מערכת העיכול לעורב gavaged להיות 4 שעות, המבוססות על הנוכחות של צבע בצואה (איור 1). כל הצואה נאספו עם טפטפות חד פעמית ותקווה לכל עורב (איור 2). רעילות אקוטית מצואה עורב שלא טופלה התרחשה כאשר supernatant צואה גלם שהוזרק לעכברים ה-IP בדיקת טייס. על ידי טיפול בלחסן צואה עם פניצילין וstreptomycin, אור UV, וsonication להקל על בעיה זו.

כל העכברים מחוסן גם עם מוח המרוסק חיובי עכבר (9/9) או צואה מעורבים-מחוסן מרוסקים (66 * / 84) פיתחו סימנים קליניים ונבדקו חיובי על ידי ניתוח כתם מערבי (איור 3), הממחישים מרוסק שעברו בקלות דרך מערכת עיכול של עורבים ומחלות שנגרמו. * שמונה עשר עכברים מתו בתוך 3 ימים מיום החיסון, סביר להניח בשל רעילות. עכברים כולם מלבד אחד (1/23) מרוסקים שלילית מחוסן היו שליליים על ידי ניתוח כתם מערבי. אנו משערים כי בעכבר זה היה מחוסן בשוגג עם צואה מרוסקת חיובית עורב במקום צואה מעורב מרוסק-שלילית.

איור 1
איור 1. עורב מאופק באופן ידני וgavaged בעל פה עם 5 מיליליטר של ביצה שלמה מעורבב עם צבע כחול (א) ו בlue / מוכתם ירוק צואה 4 ההודעה hr gavage (ב '). לחץ כאן לצפייה בתמונה גדולה יותר.

איור 2
איור 2. אוסף צואה עורב עם פיפטה לפני הומוגניזציה. לחץ כאן לצפייה בתמונה גדולה יותר.

איור 3
איור 3. . כתם נציג Page-SDS המערבי של מוח עכבר ממבדק homogenate מוח עכבר NBH-רגיל, מרוסק שלילית, כלוב TX 4 - מוח מעכבר מחוסן עם צואה מעורבת מחוסן מרוסק. עם (+) וwithout (-). עיכול PK (proteinase K) לחץ כאן לצפייה בתמונה גדולה יותר.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

אנו מדגימים הליך לתעד מעבר של חומר PRP Res דרך מערכת העיכול של עורבים. אנחנו השתמשנו בשיטות מקובלות כדי לקבוע אם יש לי עורב היכולת translocate חומרי PRP Res לאזורים גיאוגרפיים ללא מחלה. אחרים העריכו התנגדות של PRP Res למעלי גירת 19-21 ומכרסם 22,23 נוזלי עיכול, אשר שניהם לא הצליחו לחסל אותו. יישום עתידי של שיטות אלו צריכים להיות מוחל על טורפים אחרים 24 כפי שהם יכולים גם פוטנציאל נתקלים בחומרי PRP Res בפגרים ולהעביר את החומר הזה על פני הנוף לסייע להתפשטות של מחלות פריון.

הוספנו צבע מאכל כחול לביצה המקושקשת חומר "מוח פסאודו ', שמספק דרך פשוטה להעריך זמן מעבר משוער של מוח עכבר הומוגני דרך מערכת העיכול של עורבים. אנחנו מייעצים לאחרים בהתחשב בטכניקה זו כדי ins הראשוןpect צבע צואה הקיימת של בעלי חיים מחקר ולאחר מכן להשתמש בצבע מאכל שהוא מנוגד ביותר. זה יאפשר זיהוי קל של חומר מוכתם בצבע מזון שעבר דרך בעלי חיים במחקר. אנחנו בחרנו להשתמש בצבע מאכל כדי להעריך זמן מעבר, אבל אחרים השתמשו פיגמנט ניאון 25, תחמוצת ברזל 26, סמני פלסטיק צבעוניים 27, ופתיתים צבעוניות מתכתיות (כלומר נצנצים) 28.

עכברי מזעור האיום של זיהום מיקרוביאלי המשני מצואה עורב ובצורה נכונה יחסינו הם נקודות המוצא מרכזיות ללימודי עכבר פריון שדורשים תקופות דגירה ארוכות. אם אחד משיקולים אלה מופרים, תמותת עכבר מוקדמת עלולה לגרום.

עוד כלי אפשרי לחקירה הוא חלבון סידורי misfolding הגברה מחזורית או sPMCA להעריך דגימות צואה עורב לאורך הזמן להקים כמה זמן אחרי עורבים gavage אוראליים להעביר חומר זיהומיות, עםאת הצורך במבדק עכבר. ההתקדמות שחלה באחרונה בניתוח הצואה PMCA ידי Pulford, et al. עולה כי הגברה של רמות דקה של פריונים ניתן לאתרם בצואת יונק 29, דבר המצביע PMCA עשוי גם להיות כלי שימושי להערכת צואת עופות. מבדק העכבר וגישת sPMCA יכולים לשמש כדי להעריך infectivity שייר בצואה של העורבים gavaged עם חומר נגוע CWD. קו עכבר מהונדס cervidized יידרש ותוך מוחי לעומת חיסון intraperitoneal היה נותן תוצאות מהירים יותר.

אוכלי נבלות עופות, כגון עורב, נשרים ועיטים, יכולים לשחק תפקיד בהתפשטות המחלות TSE, כלומר CWD בצפון אמריקה. מינים אלה יכולים לצרוך רקמת CWD חיובי מפגרים או קרביים חולים (במקרה של cervids-נהרג צייד) וtranslocate חומר זיהומיות בצואה שלהם לאזורים נטולי CWD או אוכלוסיות של cervids. כמנהג של האכלת תבואה לcervids, בטבע או בשביהגדרות, מושך אל עורבים שיכולים לעשות את צורך על מקור המזון ולצרוך בשוגג על ידי cervids, היא אפוא בפועל בסיכון גבוה (תצפית אישית VerCauteren). יתר על כן, אם כי סיכוייהם של בעלי החיים ללא CWD נתקלים בחומרי PRP Res באמצעות תצהיר צואה אקראי עשויים להיות נמוכים, אזורים בהם עורבים ולכן הצואה שלהם מרוכזים, כמו מתחת לאתרי קינון קהילתיים, עלולים להפוך לאזורים בעלי סיכון גבוה להעברת מחלה מאז פריונים כל כך עיקשים בסביבה 30,31.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

אין ניגודי האינטרסים הכריזו.

Acknowledgements

ברצוננו להודות לס ורנר למתן העורבים שימש במחקר זה ובמשרד החקלאות, כנימות, צוות טיפול בבעלי החיים WS, NWRC לטיפול בבעלי חיים וניטור. לדבר או שימוש במוצר אינו מצביע על תמיכה של משרד חקלאות אמריקנית. מימון למחקר זה מסופק על ידי משרד החקלאות האמריקאי, כנימות, שירותים הווטרינריים.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
RML Chandler strain mouse-adapted scrapie Rocky Mountain Laboratories
RC57BL/6 mice Hilltop Lab Animals
American crows wild captured
Pen/Strep Invitrogen 15140-122
Phosphate buffered Saline Invitrogen 70011-044
Sonicator Misonix
Proteinase-K solution Roche 3115887001
Loading buffer Invitrogen NP0007 and 0009
Bis-tris SDS PAGE 12% gel Invitrogen NP0342
Immobilon PVDF membrane Millipore 1SEQ00010
Tween 20 Sigma Aldrich P2287
Bullet blender homogenizer Braintree Scientific BBX24B
2.3 mm Zirconia/silica beads BioSpec Products 11079125Z
Bar224 anti-PrP monoclonal antibody Cayman Chemical 10009035
Superblock Thermo Scientific 37517
chemiluminescent substrate Millipore WBKLS0500
G-box gel documentation system Syngene

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Prusiner, S. B. Novel proteinaceous infectious particles cause scrapie. Science. 216, (4542), 136-144 (1982).
  2. Miller, M. W., Williams, E. S., et al. Epizootiology of chronic wasting disease in free-ranging cervids in Colorado and Wyoming. Journal of Wildlife Diseases. 36, (4), 676-690 (2000).
  3. Miller, M. W., Williams, E. S. Horizontal prion transmission in mule deer. Nature. 425, (6953), 35-36 (2003).
  4. Sigurdson, C. J., Adriano, A. Chronic Wasting Disease. Biochimica et Biophysica Acta. 1772, (6), 610-618 (2007).
  5. Miller, M. W., Williams, E. S., Hobbs, N. T., Wolfe, L. L. Environmental sources of prion transmission in mule deer. Emerging Infectious Diseases. 10, (6), 1003-1006 (2004).
  6. Mathiason, C. K., Hays, S. A., et al. Infectious prions in pre-clinical deer and transmission of chronic wasting disease solely by environmental exposure. PLoS ONE. 4, (6), e5916 (2009).
  7. VerCauteren, K. C., Pilon, J. L., Nash, P. B., Phillips, G. E., Fischer, J. W. Prion remains infectious after passage through digestive system of American crows (Corvus crachyrhunchos). PLoS ONE. 7, (10), e45774 (2012).
  8. Imran, M., Mahmood, S. An overview of animal prion diseases. Virology Journal. 8, (493), (2011).
  9. Watts, J. C., Balachandran, A., Westaway, D. The expanding universe of prion disease. PLoS PATHOGENS. 2, (3), e26 (2006).
  10. Bruce, M. E., et al. Transmissions to mice indicate that 'new variant' CJD is caused by the BSE agent. Nature. 389, (6650), 498-501 (1997).
  11. Ryder, S., Dexter, G., Bellworty, S., Tongue, S. Demonstration of lateral transmission of scrapie between sheep kept under natural conditions using lymphoid tissue biopsy. Research in Veterinary Science. 76, (2004), 211-217 (2004).
  12. Collinge, J. The risk of prion zoonoses. Science. 335, (6067), 411-413 (2012).
  13. Beringue, V., Vilotte, J. L., Laude, H. Prion agent diversity and species barrier. Veterinary Research. 39, (47), (2008).
  14. Harrington, R. D., Baszler, T., et al. A species barrier limits transmission of chronic wasting disease to mink (Mustela vison). The Journal of General Virology. 89, (4), 1086-1096 (2008).
  15. Wisniewski, H. M., Sigurdarson, S., Rubenstein, R., Kascsak, R. J., Carp, R. I. Mites as vectors for scrapie. Lancet. 347, (9008), 1114 (1996).
  16. Post, K., Riesner, D., Walldorf, V., Mehlhorn, H. Fly larvae and pupae as vectors for scrapie. Lancet. 354, (9194), 1969-1970 (1999).
  17. Matthews, D., Cooke, B. C. The potential for transmissible spongiform encephalopathies in non-ruminant livestock and fish. Revue Scientifique Et Technique-Office International Des Epizooties. 22, (1), 283-296 (2003).
  18. Jennelle, C. S., Samuel, M. D., Nolden, C. A., Berkley EA, Deer carcass decomposition and potential scavenger exposure to chronic wasting disease. Journal of Wildlife Management. 73, (5), 655-662 (2009).
  19. Scherbel, C., Pichner, R., et al. Degradation of scrapie associated prion protein (PrPSc) by the gastrointestinal microbiota of cattle. Veterinary Research. 37, (5), 695-703 (2006).
  20. Jeffrey, M., Gonzaález, L., et al. Transportation of prion protein across the intestinal mucosa of scrapie susceptible and scrapie-resistant sheep. Journal of Pathology. 209, (1), 4-14 (2006).
  21. Nicholson, E. M., Richt, J. A., Rasmussen, M. A., Hamir, A. N., Lebepe-Mazur, S., Horst, R. L. Exposure of sheep scrapie brain homogenate to rumen-simulating conditions does not result in a reduction of PrP(Sc) levels. Letters in Applied Microbiology. 44, (6), 631-636 (2007).
  22. Motes C, M. aluquerde, Grassi, J., et al. Excretion of BSE and scrapie prions in stools from murine models. Veterinary Microbiology. 131, (1-2), 205-211 (2008).
  23. Kruger, D., Thomzig, A., Lenz, G., Kampf, K., McBride, P., Beekes, M. Faecal shedding, alimentary clearance and intestinal spread of prions in hamsters fed with scrapie. Veterinary Research. 40, (1), 4 (2009).
  24. Mathiason, C. K., Nalls, A. V., et al. Susceptibility of domestic cats to chronic wasting disease. Journal of Virology. 87, (4), 1947-1956 (2013).
  25. Bjorndal, K. A. Flexibility of digestive responses in two generalist herbivores, the tortoises Geochelone carbonaria and Geochelone denticulate. Oecologia. 78, (3), 317-321 (1989).
  26. Clark, R. G., Gentle, G. C. Estimates of grain passage time in captive mallards. Canadian Journal of Zoology. 68, (11), 2275-2279 (1990).
  27. Dierenfeld, E. S., Koontz, F. W. Feed intake, digestion and passage of proboscis monkey (Nasalis larvatus) in captivity. Primates. 33, (3), 399-405 (1992).
  28. Thompson, A. K., Samuel, M. D., Van Deelen, T. R. Alternative feeding strategies and potential disease transmission in Wisconsin white-tailed deer. Journal of Wildlife Management. 72, (2), 416-421 (2008).
  29. Pulford, B., Spraker, T. A., et al. Detection of PrPCWD in feces from naturally exposed Rocky Mountain elk (Cervus elaphus nelsoni) using protein misfolding cyclic amplification. Journal of Wildlife Diseases. 48, (2), 425-433 (2012).
  30. Hicks, R. E. Guano deposition in an Oklahoma crow roost. Condor. 81, (3), 247-250 (1979).
  31. Aldous, S. E. Winter habits of crows in Oklahoma. Journal of Wildlife Management. 73, (4), 290-295 (1944).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Video Stats