एक एवियन प्रजातियों की पाचन प्रणाली के माध्यम से पारित होने के बाद संक्रामक prions की पहचान के लिए प्रक्रिया

Published 11/06/2013
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Immunology and Infection

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Summary

सफाई कर्मियों के रोग से मुक्त क्षेत्रों के लिए उनके मल में संक्रामक संक्रामक spongiform encephalopathy prions सरकाना करने की क्षमता है. हम माउस अनुकूलित scrapie prions अमेरिकी कौवे की पाचन तंत्र (Corvus brachyrhynchos), मरे हुए जानवरों का एक आम उपभोक्ता हालांकि पारित होने के बाद संक्रामक रहते हैं, तो यह निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल विस्तार तरीकों.

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Fischer, J. W., Nichols, T. A., Phillips, G. E., VerCauteren, K. C. Procedures for Identifying Infectious Prions After Passage Through the Digestive System of an Avian Species. J. Vis. Exp. (81), e50853, doi:10.3791/50853 (2013).

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Abstract

संक्रामक prion (पीआरपी को छोड़कर) सामग्री संभावना घातक, neurodegenerative संक्रामक spongiform encephalopathy (त्से) रोग 1 का कारण है. पुरानी बर्बाद रोग (CWD) के रूप में त्से रोगों के संचरण, पशु 2,3 करने के लिए पशु से और साथ ही पर्यावरण सूत्रों 4-6 से माना जाता है. सफाई कर्मियों और मांसाहारी खपत और CWD दूषित लाश के उत्सर्जन के माध्यम से पीआरपी रिस सामग्री सरकाना करने की क्षमता है. हाल ही में काम अमेरिकी कौवे की पाचन तंत्र (Corvus brachyrhynchos), एक आम उत्तरी अमेरिकी मेहतर 7 के माध्यम से पीआरपी रिस सामग्री के पारित होने के दस्तावेज़ तैयार किया है.

हम अमेरिकी कौवे के माध्यम से पीआरपी रिस सामग्री के पारित होने के दस्तावेज़ के लिए प्रयोग किया जाता प्रक्रियाओं का वर्णन. कौवे आरएमएल तनाव माउस अनुकूलित scrapie साथ gavaged थे और उनके मल 4 घंटा पद नलिका - पोषण एकत्र किए गए थे. क्रो मल में तो जमा और intraperitoneally थे इंजेक्शनC57BL 6 / चूहों. वे माउस scrapie के नैदानिक ​​लक्षण व्यक्त की और उसके बाद euthanized थे जब तक चूहे दैनिक निगरानी की गई. स्पर्शोन्मुख चूहों 365 दिनों के बाद टीका तक निगरानी की गई. पश्चिमी धब्बा विश्लेषण रोग की स्थिति की पुष्टि करने के लिए आयोजित किया गया था. परिणाम prions परीक्षण चूहों में रोग के कारण, कौवे के पाचन तंत्र के माध्यम से यात्रा के बाद संक्रामक रहते हैं और मल में मौजूद हैं कि पता चला.

Introduction

संक्रामक spongiform encephalopathies (त्से) वन्य जीवन को प्रभावित करने वाले घातक संक्रामक neurodegenerative विकारों, घरेलू पशुओं, और मनुष्यों हैं. त्से रोगों के संक्रामक एजेंट prion प्रोटीन 1 की misfolded या रोगजनक isoforms (पीआरपी को छोड़कर) प्रतीत होता है. भेड़ और बकरियों में scrapie; गोजातीय spongiform encephalopathy (पशु त्से रोगों खच्चर हिरण (Odocoileus hemionus), सफेद पूंछ हिरण (Odocoileus virginianus), एल्क (सर्वस elaphus), और मूस (Alces alces) में पुरानी बर्बाद रोग (CWD) शामिल घरेलू पशुओं में बीएसई); farmed मिंक में संक्रामक मिंक मस्तिष्क विकृति, बिल्लियों में बिल्ली के समान spongiform encephalopathy, nonhuman primates 8 में और spongiform encephalopathy, विदेशी चिड़ियाघर में विदेशी ungulate spongiform encephalopathy परिवार Bovidae की ruminates. एकल मानव त्से रोग, संस्करण Creutzfeldt-Jakob रोग, दुर्लभ और पीआरपी रेस-contamin लेने द्वारा अधिग्रहीत होने लगा हैपैदा खाद्य 9. दूषित गोमांस 10 सेवन किया जाता है इसी प्रकार, यदि बीएसई मनुष्यों को संक्रमित कर सकते हैं. सभी त्से रोगों की, scrapie और CWD जानवर से जानवर 2,3,11 करने के साथ ही पर्यावरण सूत्रों 4-6 से माना जाता है आत्मनिर्भर महामारी और संक्रमण के लिए स्रोतों के साथ केवल दो हैं. रिसर्च सबसे त्से रोगों नैदानिक ​​लक्षण की अभिव्यक्ति के लिए पीआरपी रिस सामग्री की प्राकृतिक जोखिम की घटनाओं से उल्लेखनीय विस्तारित ऊष्मायन अवधि की आवश्यकता 2-4,6,8 और स्पष्ट प्रजातियों बाधाओं को कम, लेकिन, interspecies संचरण 12-14 के लिए क्षमता को खत्म नहीं पता चलता है कि .

संक्रामक prion (पीआरपी को छोड़कर) सामग्री के प्रसार के लिए तंत्र की पहचान त्से रोगों परिदृश्य के पार ले जाने के बारे में सवाल का जवाब देने के लिए अत्यंत महत्वपूर्ण है. प्रायोगिक जांच 15,16, मुर्गी पालन और सूअर 17, और अमेरिकी कौवे (Corvus Brac कीड़े सुझाव दिया है किhyrhynchos) 7,18 पीआरपी रिस सामग्री के निष्क्रिय वाहक या dispersers हैं. कौवे की पाचन तंत्र के माध्यम से पीआरपी रिस सामग्री के पारित होने हाल ही में वे त्से रोगों 7 के प्रसार में खेल सकते भूमिका का प्रदर्शन, प्रलेखित किया गया है. ये परिणाम, कौवे, एक मेहतर, मुठभेड़ सकता है कि यह प्रशंसनीय बनाने का उपभोग, और रोग से मुक्त क्षेत्रों के लिए, मल बयान के माध्यम से संक्रामक सामग्री के परिवहन.

हम यहाँ का प्रदर्शन प्रक्रियाओं कौवे की पाचन प्रणाली के माध्यम से पीआरपी रिस सामग्री के पारित होने के दस्तावेज़ के लिए इस्तेमाल किया गया है और बहुत से संबंधित भविष्य के अनुसंधान में अन्य मेहतर और मांसभक्षी प्रजाति विशेष मॉडलों के लिए इन तरीकों के आवेदन की सुविधा होगी. इस अध्ययन में पारंपरिक तरीकों पीआरपी रिस सामग्री के प्रसार और समग्र बोझ के लिए योगदान कर सकता है जो पीआरपी रिस सामग्री, तस्करी के एक अपरंपरागत साधन जांच करने के लिए इस्तेमाल किया गया.

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Protocol

हमारे प्रोटोकॉल हम पहले 7 प्रकाशित एक से अनुकूलित है. जानवरों को शामिल सभी प्रक्रियाओं संयुक्त राज्य अमेरिका के कृषि विभाग (यूएसडीए), पशु और पादप स्वास्थ्य निरीक्षण सेवा (APHIS), वन्यजीव सेवा (था), राष्ट्रीय वन्यजीव अनुसंधान केंद्र (NWRC) की संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया.

1. क्रो Gavaging

  1. अमेरिकी कौवे की पाचन तंत्र के माध्यम से 'छद्म मस्तिष्क सामग्री' के पारित होने के समय का अनुमान है.
    1. पकाया जाता है और चित्रा (1) नलिका - पोषण सुई में एक 2 का उपयोग कर नीले रंग की डाई और नलिका - पोषण 1 क्रो के साथ पूरे अंडे तले के 5 एमएल मिलाएं.
    2. नीले / ग्रीन दाग मल उत्सर्जित नहीं किया जा रहा है जब तक कौवा हर 30 मिनट की जाँच करें.
  2. असंक्रमित और बीमार आरएमएल (चांडलर तनाव) से संक्रमित C57BL 6 / माउस दिमाग प्राप्त करते हैं.
  3. 1x साथ एक गोली ब्लेंडर homogenizer में एक सामान्य 20% wt / वॉल और संक्रमित माउस मस्तिष्क homogenate उत्पन्नफॉस्फेट buffered खारा (पीबीएस) और कांच के मोती, बड़ा तो बात कण को ​​दूर करने के लिए 1 मिनट के लिए 3000 XG पर अपकेंद्रित्र. सतह पर तैरनेवाला निकालें और बाँझ पीबीएस में एक 10% wt / वॉल उत्पन्न करने के लिए 1x पीबीएस के एक बराबर मात्रा के साथ पतला. जब तक जरूरत -80 डिग्री सेल्सियस पर स्थिर.
  4. पूर्व नलिका - पोषण करने के लिए 17 घंटे कौवा कलम से, पानी नहीं खाना निकालने के लिए, लेकिन.
  5. बेतरतीब ढंग से उपचार समूहों को कौवे आवंटन और मौखिक रूप से नलिका - पोषण सुई में एक 2 का उपयोग कर सामान्य या संक्रमित या तो माउस मस्तिष्क homogenate के 5 मिलीलीटर के साथ प्रत्येक कौवा gavage.
  6. स्थानांतरण व्यक्ति पिंजरों को कौवे और 4 घंटे बाद नलिका - पोषण (चित्रा 2) के लिए प्रत्येक पिंजरे के भीतर सभी मल इकट्ठा और पूल.
  7. एक समान बनावट हासिल की है, जब तक कांच के मोती के साथ एक गोली ब्लेंडर homogenizer में प्रत्येक कौवा के लिए जमा मल homogenize. * क्रो मल ज्यादातर तरल होते हैं और आसानी से मिलाया जा सकता है.
  8. प्रत्येक कौवा के लिए, 10 मिलीलीटर की कुल मात्रा के लिए 9.5 मिलीलीटर 1x पीबीएस में मल homogenate के 500 μl पतला.
  9. मल homogena अपकेंद्रित्र1,400 XG पर 15 मिनट के लिए ते और सतह पर तैरनेवाला निकालें.
  10. एक माध्यमिक सूक्ष्म जीवाणु संक्रमण के खतरे को कम homogenate के 100 μl प्रति 1 100 इकाइयों की μl / एमएल पेनिसिलिन और 100 माइक्रोग्राम / एमएल स्ट्रेप्टोमाइसिन (Invitrogen, सीए) के साथ सतह पर तैरनेवाला के इलाज के लिए तो कम करने के लिए 20 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर पराबैंगनी प्रकाश के तहत जगह वायरल और बैक्टीरियल संक्रमण का खतरा. यूवी जोखिम के बाद, किसी भी शेष रोगाणुओं की झिल्ली को बाधित करने के लिए 30 सेकंड के लिए 70 की स्थापना पर एक 3000 सांसद sonicator में sonicate नमूनों.

2. माउस टीका

  1. बेतरतीब ढंग से इलाज के बाद समूह (तालिका 1) के लिए चूहों का आवंटन:
    1. समूह 1 - सकारात्मक इलाज चूहों मौखिक रूप से 5ml संक्रमित माउस दिमाग के साथ gavaged कौवे से मल homogenate के 1 मिलीलीटर के साथ (आईपी) intraperitoneally टीका.
    2. समूह 2 - नकारात्मक इलाज चूहों मौखिक रूप से 5ml सामान्य माउस दिमाग के साथ gavaged कौवे से मल homogenate के 1 मिलीलीटर के साथ आईपी टीका.
    3. Infecte पतला1:100 डब्ल्यू / 1x पीबीएस में वी के समूह 3 और 4 के लिए डी और सामान्य माउस मस्तिष्क homogenate.
    4. समूह 3 - सकारात्मक नियंत्रण चूहों संक्रमित माउस मस्तिष्क homogenate के 1 मिलीलीटर के साथ आईपी टीका.
    5. समूह 4 - नकारात्मक नियंत्रण चूहों सामान्य माउस मस्तिष्क homogenate के 1 मिलीलीटर के साथ आईपी टीका.
उपचार समूह जानवरों की संख्या
समूह 1 Scrapie + क्रो मल 100
समूह 2 Scrapie - क्रो मल 25
समूह 3 Scrapie + माउस ब्रेन 10
समूह 4 Scrapie - माउस ब्रेन 5

. तालिका 1 Scrapie inoculum की स्थिति (नकारात्मक सकारात्मक +, -) और जानवरों की संख्या 7 इस्तेमाल किया.

  1. Intraperitoneally माउस टीका लगाना:
    1. धीरे कूड़ा अंगूठे और तर्जनी के साथ पृष्ठीय गर्दन फर से माउस और उदर पक्ष को बेनकाब करने के लिए बारी बारी से.
    2. सिर से थोड़ा कम है तो माउस के पीछे अंत तरक्की.
    3. 1 सेमी त्वचा, midline की 1 सेमी पार्श्व के माध्यम से 25 ग्राम सुई डालें, और 1-2 सेमी पूर्वकाल sacroiliac संयुक्त करने के लिए एक सुई ताला सिरिंज का उपयोग कर.
    4. 1 मिलीलीटर माउस शरीर गुहा में धीरे धीरे टीका लगाना इंजेक्षन.

3. माउस निगरानी

  1. वे माउस scrapie के नैदानिक ​​लक्षण व्यक्त जब तक दैनिक चूहों मॉनिटर. क्लीनिकल लक्षण शामिल हो सकते हैं: कुब्जता, गतिभंग, कड़ी पूंछ, सौंदर्य की कमी, दुर्बलता, और सुस्ती.
  2. 0 दृश्यमान = कोई नहीं, 1 = मध्यम, और 2 = गंभीर जहां स्पष्ट संकेत स्पष्ट हैं जब 6 नैदानिक ​​लक्षणों में से प्रत्येक के लिए चूहों स्कोर.
  3. प्रत्येक हस्ताक्षर के लिए कुल दैनिक स्कोर को 1 दिन के लिए ≥ 8 तक पहुँचने जब चूहों euthanize ≥ 6 लगातार 3 दिनों के लिए, या 365 पर दिन टीका (डीपीआई) के बाद.
  4. हार्वेस्ट दिमाग तुरंत बाद euthan-70 डिग्री सेल्सियस पर एशिया और दुकान
  5. एक scrapie निदान की पुष्टि के रूप में निम्नानुसार पतला proteinase कश्मीर समाधान (पी) के एक 50 माइक्रोग्राम / एमएल के 3 μl के साथ मस्तिष्क के नमूने को पचाने के लिए: 3.1. μl पी, 500 मिमी EDTA के 12.5 μl, पीएच 8, 45 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट के लिए 1x पीबीएस के 109.39 μl, तो 8 μl लोड हो रहा है बफर जोड़ने और 5 मिनट के लिए 95 डिग्री सेल्सियस पर नमूने incubating द्वारा पीके निष्क्रिय. एक 12% एसडीएस पृष्ठ जेल, Electrophorese और कमरे के तापमान पर 1 घंटे के लिए पीबीएस में 0.2% के बीच 20 में Immobilon (PVDF) झिल्ली और 5% नोनफेट दूध के साथ ब्लॉक को हस्तांतरण पर लोड नमूने हैं. फिर कमरे के तापमान पर 1 घंटे के लिए Superblock में पतला हॉर्सरैडिश peroxidase, संयुग्मित Bar224 विरोधी पीआरपी मोनोक्लोनल एंटीबॉडी के साथ जांच. पीबीएस 0.2% बीच 20 से 1 घंटे के लिए झिल्ली कुल्ला. कल्पना एक छ बॉक्स जेल प्रलेखन प्रणाली पर chemiluminescent सब्सट्रेट और छवि के साथ वेस्टर्न ब्लॉट 5 मिनट सेते हैं.

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Representative Results

इस्तेमाल किया प्रक्रियाओं कौवे की पाचन तंत्र scrapie मस्तिष्क homogenate 7 की मौखिक नलिका - पोषण के बाद पीआरपी रिस संक्रामकता 4 घंटा समाप्त नहीं करता है कि प्रदर्शित करता है. पीआरपी रिस सामग्री के साथ gavaged गया कि सभी बीस कौवे बाद में चूहों को मल के द्वारा पीआरपी रिस सामग्री प्रेषित. रोगग्रस्त चूहों नैदानिक ​​माउस scrapie लक्षण और रोग की पुष्टि के पश्चिमी धब्बा विश्लेषण द्वारा पूरा किया गया की अभिव्यक्ति द्वारा की पहचान की गई.

कौवे के द्वारा किया जाता सामग्री की अवधारण समय की जांच मल में डाई की उपस्थिति (चित्रा 1) के आधार पर 4 घंटा, होना करने के लिए एक gavaged कौवा के लिए पाचन तंत्र के माध्यम से पारित होने के समय पता चला. सभी मल डिस्पोजेबल pipettes साथ एकत्र की है और प्रत्येक क्रो (चित्रा 2) के लिए जमा थे. अनुपचारित कौवा मल से तीव्र विषाक्तता कच्चे मल सतह पर तैरनेवाला पायलट परीक्षण चूहों में आईपी इंजेक्ट किया गया था जब हुई. पेनिसिलिन और stre के साथ मल टीका लगाना इलाज करकेptomycin, पराबैंगनी प्रकाश, और sonication हम इस समस्या क्रमशः समाप्त.

या तो scrapie पॉजिटिव माउस मस्तिष्क (9/9) या scrapie-टीका कौवे से मल के साथ inoculated सभी चूहों (66 * / 84) नैदानिक ​​लक्षण विकसित और (चित्रा 3) पश्चिमी धब्बा विश्लेषण द्वारा सकारात्मक परीक्षण किया है, आसानी से पारित कर दिया है कि scrapie illustrating कौवे और कारण रोग का पाचन तंत्र. * अठारह चूहों की संभावना के कारण विषाक्तता के लिए, टीका के 3 दिन के भीतर मृत्यु हो गई. सभी लेकिन एक (1/23) scrapie नकारात्मक टीका चूहों पश्चिमी धब्बा विश्लेषण द्वारा नकारात्मक थे. हम इस माउस अनजाने एक scrapie नकारात्मक कौवा से scrapie पॉजिटिव कौवा मल के बजाय मल के साथ inoculated गया था कि परिकल्पना है.

चित्रा 1
चित्रा 1. क्रो नीले रंग की डाई (ए) और बी के साथ मिश्रित पूरे अंडे के 5 एमएल के साथ स्वयं को रोका और मौखिक रूप से gavagedlue / मल 4 घंटा पद नलिका - पोषण (बी) ग्रीन से सना हुआ. बड़ी छवि को देखने के लिए यहां क्लिक करें .

चित्रा 2
चित्रा 2. पूर्व homogenization के लिए विंदुक के साथ क्रो मल संग्रह. बड़ी छवि को देखने के लिए यहां क्लिक करें .

चित्रा 3
चित्रा 3. . Bioassay से माउस मस्तिष्क के प्रतिनिधि एसडीएस पृष्ठ पश्चिमी धब्बा NBH सामान्य माउस मस्तिष्क homogenate, scrapie नकारात्मक, सीए पिंजरे 4 - एक scrapie-टीका कौवा से मल के साथ inoculated एक माउस से मस्तिष्क. (+) और withou साथT (-). पी (proteinase कश्मीर) पाचन बड़ी छवि को देखने के लिए यहां क्लिक करें .

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Discussion

हम कौवे की पाचन तंत्र के माध्यम से पीआरपी रिस सामग्री के पारित होने के दस्तावेज़ के लिए एक प्रक्रिया का प्रदर्शन. हम कौवे रोग मुक्त भौगोलिक क्षेत्रों के लिए पीआरपी रिस सामग्री सरकाना करने की क्षमता है, तो यह निर्धारित करने के लिए पारंपरिक तरीकों का इस्तेमाल किया. दूसरों को इसे खत्म करने में विफल रहा है, जो दोनों के 19-21 और कृंतक 22,23 पाचन तरल पदार्थ, जुगाली करनेवाला के लिए पीआरपी रेस के प्रतिरोध का मूल्यांकन किया है. वे भी संभावित लाश में पीआरपी रिस सामग्री मुठभेड़ और prion रोगों के प्रसार को सुविधाजनक बनाने के परिदृश्य में इस सामग्री परिवहन सकता है के रूप में इन तकनीकों का भविष्य आवेदन अन्य मांसाहारी 24 को लागू किया जाना चाहिए.

हम कौवे की पाचन तंत्र के माध्यम से homogenized माउस मस्तिष्क के लगभग बीतने के समय का आकलन करने के लिए एक सरल तरीका प्रदान, हमारे तले अंडा 'छद्म मस्तिष्क' सामग्री को नीले रंग भोजन गयी. हम पहले भारतीय नौसेना पोत को इस तकनीक पर विचार दूसरों को सलाहअध्ययन जानवरों की मौजूदा मल का रंग पहलू और फिर सबसे विषम है कि खाना रंग का उपयोग करें. इस अध्ययन जानवरों के माध्यम से पारित कर दिया गया है कि खाद्य रंग दाग सामग्री की आसान पहचान के लिए अनुमति देगा. हम पारित होने के समय का अनुमान लगाने का खाना रंग का उपयोग करने के लिए चुना है, लेकिन दूसरों फ्लोरोसेंट रंगद्रव्य 25, फेरिक ऑक्साइड 26, रंग की प्लास्टिक मार्करों 27, और रंग का धातु गुच्छे (यानी चमक) 28 इस्तेमाल किया है.

क्रो मल से एक माध्यमिक सूक्ष्म जीवाणु संक्रमण के खतरे को कम करने और सही ढंग से inoculating चूहों लंबी ऊष्मायन अवधि की आवश्यकता है कि माउस prion पढ़ाई के लिए महत्वपूर्ण अंक शुरू कर रहे हैं. इन कारणों में से किसी का उल्लंघन कर रहे हैं, जल्दी माउस मृत्यु दर परिणाम की संभावना है.

जांच के लिए एक अन्य संभावित उपकरण मौखिक नलिका - पोषण कौवे के साथ, संक्रामक सामग्री पारित कितनी देर के बाद स्थापित करने के लिए समय के साथ क्रो मल के नमूनों का मूल्यांकन करने के लिए चक्रीय प्रवर्धन या sPMCA misfolding धारावाहिक प्रोटीन हैएक माउस bioassay के लिए जरूरत के बाहर. पुलफोर्ड ने PMCA मल विश्लेषण में हाल के अग्रिमों, एट अल. PMCA भी एवियन मल के मूल्यांकन के लिए एक उपयोगी उपकरण हो सकता है, सुझाव prions के मिनट के स्तर के प्रवर्धन स्तनपायी मल 29 में पता लगाया जा सकता है कि संकेत मिलता है. माउस bioassay और sPMCA दृष्टिकोण CWD संक्रमित सामग्री के साथ gavaged कौवे के मल में अवशिष्ट संक्रामकता का मूल्यांकन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. एक cervidized ट्रांसजेनिक माउस लाइन की आवश्यकता है और intraperitoneal टीका बनाम intracerebral किया जाएगा और अधिक तेजी से परिणाम देना होगा.

ऐसे कौवे, गिद्ध, और ईगल्स के रूप में एवियन मैला ढोने वालों, अर्थात् CWD उत्तरी अमेरिका में, त्से रोगों के प्रसार में एक भूमिका निभा सकता है. इन प्रजातियों (शिकारी मारे cervids के मामले में) रोगग्रस्त शवों या अंतड़ियों से CWD पॉजिटिव ऊतक उपभोग और CWD मुक्त क्षेत्रों या cervids की आबादी के लिए उनके मल में संक्रामक सामग्री सरकाना सकता है. में, cervids को अनाज खिलाने के अभ्यास के रूप में जंगली या बंदीसेटिंग्स, खाद्य स्रोत पर ख़ारिज कर सकते हैं और अनजाने cervids से भस्म हो जो कौवे को आकर्षित करती है, इस प्रकार एक उच्च जोखिम व्यवहार (VerCauteren व्यक्तिगत अवलोकन) है. यादृच्छिक मल बयान के माध्यम से पीआरपी रिस सामग्री का सामना CWD मुक्त जानवरों की बाधाओं कम हो सकता है, हालांकि इसके अलावा, कौवे और इस प्रकार उनके मल केंद्रित कर रहे हैं उन क्षेत्रों में जहाँ, सांप्रदायिक बसेरा साइटों नीचे की तरह, prions के बाद से रोग संचरण के लिए उच्च जोखिम वाले क्षेत्रों का हो सकता है पर्यावरण 30,31 में तो लगातार कर रहे हैं.

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Disclosures

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

Acknowledgements

हम इस अध्ययन और यूएसडीए में इस्तेमाल कौवे प्रदान करने के लिए एस वर्नर धन्यवाद देना चाहूंगा, APHIS, जानवरों की देखभाल और निगरानी के लिए था, NWRC जानवरों की देखभाल करने वाले स्टाफ. उल्लेख या एक उत्पाद का उपयोग यूएसडीए बेचान संकेत नहीं करता है. इस अध्ययन के लिए अनुदान यूएसडीए, APHIS, पशु चिकित्सा सेवा द्वारा प्रदान किया गया.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
RML Chandler strain mouse-adapted scrapie Rocky Mountain Laboratories
RC57BL/6 mice Hilltop Lab Animals
American crows wild captured
Pen/Strep Invitrogen 15140-122
Phosphate buffered Saline Invitrogen 70011-044
Sonicator Misonix
Proteinase-K solution Roche 3115887001
Loading buffer Invitrogen NP0007 and 0009
Bis-tris SDS PAGE 12% gel Invitrogen NP0342
Immobilon PVDF membrane Millipore 1SEQ00010
Tween 20 Sigma Aldrich P2287
Bullet blender homogenizer Braintree Scientific BBX24B
2.3 mm Zirconia/silica beads BioSpec Products 11079125Z
Bar224 anti-PrP monoclonal antibody Cayman Chemical 10009035
Superblock Thermo Scientific 37517
chemiluminescent substrate Millipore WBKLS0500
G-box gel documentation system Syngene

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References

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