En Alkali-brenner Injury Modell av Corneal neovaskulariseringen i mus

* These authors contributed equally
Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Neovaskularisering (NV) av hornhinnen kan komplisere flere visuelle patologier. Utnytte en kontrollert, alkali-brannskader modell, kan en målbar nivå av hornhinnen NV bli produsert for mekanistiske studier av hornhinnen NV og evaluering av mulige behandlingsformer for neovaskulære lidelser.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Anderson, C., Zhou, Q., Wang, S. An Alkali-burn Injury Model of Corneal Neovascularization in the Mouse. J. Vis. Exp. (86), e51159, doi:10.3791/51159 (2014).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Under normale forhold, er hornhinnen avascular, og denne åpenhet er viktig for å opprettholde god synsskarphet. Neovaskulariseringen (NV) av hornhinnen, noe som kan være forårsaket av traumer, keratoplasty eller smittsomme sykdommer, bryter ned den såkalte "angiogent privilegium 'av hornhinnen, og danner grunnlaget for flere visuelle patologier som kan selv føre til blindhet. Selv om det er flere behandlingstilbud tilgjengelig, den grunnleggende medisinsk behov presentert av hornhinnen med våt patologi forblir udekket. For å utvikle sikre, effektive og målrettede terapier, er en pålitelig modell av hornhinnen NV, og farmakologisk intervensjon er nødvendig. Her beskriver vi en alkali-brannskader på hornhinnen neovascularization modell i musen. Denne protokollen tilveiebringer en fremgangsmåte for påføring av en kontrollert alkali-brannskader på hornhinnen, administrering av en forbindelse av farmakologisk interesse, og visualisering av resultatet. Denne metoden kan vise seg instrumenttal for å studere mekanismer og muligheter for intervensjon i hornhinnen NV og andre med våt lidelser.

Introduction

Korneal blindhet er den fjerde vanligste årsaken til blindhet, ansvarlig for omtrent 4% av alle tilfeller en. Hornhinnen neovascularization (NV) spiller en betydelig rolle i mange av disse patologi, inkludert postherpetisk keratitt (den ledende smittsomme årsak til blindhet i Vesten) og trachoma (den ledende årsak til smittsomme blindhet på verdensbasis) 2. Nåværende behandlingsformer inkluderer steroider, ikke-steroide antiinflammatoriske legemidler (NSAIDs), anti-VEGF terapi, og ciklosporin A samt konvensjonelle eller laser kirurgiske teknikker tre. Men den sterkt ødeleggende natur hornhinnen NV basert patologi, det sparsommelige kirurgiske fasiliteter til å kunne behandle hornhinne NV, og mangelen på en sterkt utføre legemiddelalternativ ledet en fersk ekspert rundebords å konkludere med at, til tross for de bevarte terapier, den grunnleggende medisinsk behov presentert av disse patologi forblir udekket fire.

Den menneskelige hornhinnenbestår av fem lag, tre cellulære lag (epitelial, stromal og endotel) og 2-grensesnitt (Bowman membran og Descemefs membran). Den fungerer som en mekanisk barriere og refraktiv overflate for øyet. Den gjennomsiktige natur er konsekvensen av en hårfin balanse mellom komponentene og er integrert i sin rette funksjon fem. Normalt avascular, mottar hornhinnen blod fra microvessels kjører langs ytterkanten som er matet fra ciliary og oftalmologiske arterier. Cornea NV oppstår når en stimulus fremmer angiogenese av fartøyene som tillater dem å vokse mot midten av hornhinnen og derved begrense syn 6.. Hornhinnen angiogenese inkluderer hemangiogenesis og lymphangiogenesis, som resulterer i innvekst av blodkar og lymfekar fra limbale vaskulære arkade mot midten av hornhinnen. Dette fører til en nedbryting av hornhinnen "angiogent privilegium", en økning på hornhinne og fibrose, forstyrrelse av hornhinnen layers, og ødem 7. De nøyaktige utløsere av hornhinnen NV er mange, alt fra en respons på infeksjonssykdommer som trachoma til en kjemisk indusert tilstand forårsaket tradisjonelle medisiner, industrielle kjemikalier, eller til og med kjemiske stridsmidler.

De molekylære mekanismer av denne prosessen er ikke, som ennå, fullt preget; har imidlertid noen viktige spillere blitt identifisert. Under normale forhold hornhinnen besitter en unik "angiogent privilegium 'vedlikeholdes av en redundant matrise av anti-angiogenic faktorer (som løselig VEGF-R1) 8. Imidlertid, som svar på en ekstern stimulus (for eksempel skade), vil det være en lokal oppregulering av pro-angiogene faktorer (for eksempel VEGF-A). Dette tips balansen mellom pro-og anti-angiogenic faktorer som ligger til grunn for hornhinnen angiogent privilegium, og fører til hemangiogenesis, lymphangeogenesis, og betennelser, derfor forårsaker hornhinneskade og blindhet 9.

<p class = "jove_content"> Gitt udekket medisinsk behov for dette svært ødeleggende patologi, er det av interesse for feltet for å ha en pålitelig dyremodell av hornhinnen NV. Her presenterer vi en slik modell: kontrollert alkali-brannskader. Ulike øye-skade modeller basert på bruk av filter papir ringer har blitt brukt siden 1970-tallet ti. I 1989 ble en gruppe med Harvard Medical School oftalmologer karakterisert en standard modell av en sentral hornhinne alkali-forbrenning i kanin basert på å suge en del av sirkulært filterpapir med natriumhydroksyd (NaOH), og å anvende den på hornhinnen til en bestemt rekke konsentrasjoner 11. Siden da, har denne teknikken blitt tilpasset for bruk i mus 12-14. Nylig, Wang lab studert de terapeutiske effektene av histon-deacetylase (HDAC) inhibitor SAHA i patogenesen av corneal NV bruke en mus corneal alkali-brannskade-modell 15. Metodikken av musen hornhinnen alkali-brannskader modell presenteres her ble byggethovedsakelig på den forut arbeidet til to andre papirer 14,16.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Merk: Følgende protokoll og representative resultater bruke HDAC inhibitor SAHA som et eksempel sammensatte. Imidlertid er denne protokollen på ingen måte begrenset til bruken av SAHA, og er anbefalt som en generell fremgangsmåte for å teste effekten av oppløselige forbindelser på corneal neovaskularisering. Mindre modifikasjoner må gjøres for graden av fortynning, så vel som frekvensen og varigheten av anvendelsen. I tillegg vil forbindelser som er lett oppløselige i vann være i stand til å bli administrert i fravær av DMSO.

Etisk Uttalelse: Alle dyreforsøk bør kun utføres i samsvar med nasjonal lovgivning og institusjonelle regelverk. Denne protokollen ble godkjent for bruk ved Tulane University Institutional Animal Care og bruk komité.

En. Utarbeidelse av materialer (i Order of bruk)

  1. Klipp et stykke av cellulose filterpapir (11 mikrometer) til 2 mm sirkler.
  2. Forbered en 1 M løsning av NaOH vedå oppløse 20 g NaOH i 500 ml destillert H2O Oppbevares i romtemperatur. FORSIKTIG: NaOH løsninger er etsende og kan forårsake alkali-brenner.
  3. Tilbered en bedøvelse cocktail ved å fortynne 10 ml 100 mg / ml ketamin og 2,5 ml av 20 mg / ml xylazin i 37,5 ml av 1 x PBS i en sluttkonsentrasjon på 20 mg / ml ketamin og 4 mg / ml xylazin.
  4. Tilbered en 0,5% oppløsning av proparacaine hydroklorid (for topisk smertestillende) ved å oppløse 500 mg av proparacaine-hydroklorid i 100 ml filtrert PBS.
  5. Forbered 1 x PBS ved å oppløse 8 g NaCl, 0,2 g KCl, 1,44 g Na HPO 2 til 4, og 0,23 g NaH 2 PO 4 i 900 ml destillert H2O Juster til 7,4 pH. Bring løsningen til et sluttvolum på 1000 ml med destillert H2O og filter for å sikre sterilitet.
  6. Forbered 1000 x stamløsninger av SAHA på ~ 100 mM i dimetylsulfoksyd (DMSO) ved å oppløse 26,4 mg av SAHA i 1 ml DMSO. Tynn ut til en 1x (~ 10 mm)oppløsning i PBS filtrert for hver gangs bruk. Oppbevar stamløsning ved -20 ° C i opptil en måned. FORSIKTIG: DMSO er et kjent toksin og mutagen.
  7. Forbered en 4% løsning av Paraformaldehyde (PFA) for fiksering. Under en kjemisk hette, oppløses 4 g av PFA i 90 ml PBS. Bringe blandingen til 65 ° C og titrere til en pH på 7,4. Når PFA har løst seg opp, bringer løsningen til et sluttvolum på 100 ml. Oppbevar ved 4 ° C i opptil en måned. FORSIKTIG: PFA er en kjent for å være allergifremkallende, kreftfremkallende, og giftig.
  8. Forbered 1x blokkeringsbuffer ved å fortynne 5 ml geiteserum og 500 pl av Triton X-100 i 94.5 ml av PBS.
  9. Forbered 1x vaskebuffer ved å fortynne 500 ul Triton X-100 i 99,5 ml PBS.

2. Alkali-Burn Injury & Compound Treatment

  1. Sug et rundt stykke av filterpapir, ~ 2 mm i diameter, i en løsning av 1 M NaOH.
  2. Anesthetize musen med en injeksjon av 100 mg / kg ketamin og 5 mg / kg xylazin, which er ~ 100 mL av bedøvelse cocktail fra trinn 1,3 per 25 g mus. Anestesi bør ta ~ 1-2 min for å stille inn anestesidybden kan bestemmes ved forsiktig å klemme tå eller halen av dyret, dersom anestesien er tilstrekkelig bør det ikke være noen reaksjon. Merk: Det må utvises forsiktighet for å sikre at musen ikke bukke under for anestesi indusert hypotermi.
  3. Ved hjelp av en pipette, lokalt påfør en dråpe 0,5% proparacaine hydrochloride til hornhinnen overflaten for lokal smertelindring.
  4. Ved hjelp av sterile pinsetter, plukke opp et stykke av NaOH fuktet filterpapir. Hvis du legger merke til overflødig NaOH klamrer seg til eller drypper fra filterpapir, kort trykk på gjennomvåt filterpapiret på et tørt stykke filterpapir for å absorbere overflødig. Plasser stykke av NaOH fuktet filterpapir på den sentrale hornhinnen. La det stå i 30 sek for å generere en akutt alkali-brenning på ~ 2 x 2 mm 2 i området. En kirurgisk mikroskop er nyttig i riktig plassering av filterpapir. Merk: Bare ett øye på musen should bli skadet med den andre tjener som en kontroll.
  5. Fjern filterpapiret. Ved hjelp av en 10 ml sprøyte, skylles forsiktig øyet med 10 ml av 1 x PBS to ganger for å vaske bort gjenværende 1 M NaOH.
  6. Umiddelbart bruke en dråpe 1x SAHA arbeidsløsning (eller et kjøretøy kontroll bestående av PBS utvannet DMSO inneholder ingen SAHA) lokalt på hornhinnen. Gjenta søknad 3x/day for 14 dager. Merk: i denne perioden en aktuell antibiotika salve anbefales ikke da det kan forstyrre utviklingen av skaden og levering av det sammensatte. Bruk en væske antibiotisk oppløsning, for eksempel 3% gentamicinoppløsning, i stedet.
  7. Gå direkte til Clinical Assessment (Protokoll 3 nedenfor) eller ofre musen og enucleate øynene hornhinnens flat mount (Protokoll 4 nedenfor) eller konvensjonell parafin / frossen histologi.

Tre. Clinical Assessment

  1. Utfør en daglig undersøkelse av musene i en blindet måte under et kirurgisk mikroskop og scorer corneal NV basert på hornhinne, NV, og fartøystørrelse. Bruk minst to observatører og spille inn en sluttresultatet som er gjennomsnittet av de to.
    1. Resultat hornhinne på en skala fra 0-4. 0 = helt klare; 1 = litt disig, iris og elev lett synlig; 2 = litt ugjennomsiktig, iris og elev fortsatt påvisbar; 3 = ugjennomsiktig, elever knapt påviselige; og 4 = helt ugjennomsiktig med ingen utsikt over eleven.
    2. Score NV på en skala fra 0-3. 0 = ingen Ringsbehandling; På hornhinnen limbus 1 = Ringsbehandling; 2 = Ringsbehandling spenner over hornhinnen limbus og nærmer hornhinnen sentrum; 3 = Ringsbehandling spenner over hornhinnen sentrum.
    3. Resultat fartøystørrelse på en skala fra 0-3. 0 = ingen Ringsbehandling; 1 = Ringsbehandling påvisbare etter kirurgisk mikroskop; 2 = Ringsbehandling lett sees under kirurgisk mikroskop; 3 = Ringsbehandling lett synlige uten mikroskop.
  2. Ved hjelp av et digitalt kamera, ta representative bilder av øyet på 7 dager og 14 dager.

4.Flekker på hornhinnen og flat Mounts

  1. Fiks enucleated øye i 4% PFA i minst 1 time ved 4 ° C.
  2. Overfør øyet til 1x PBS og bruke pinsett for å forsiktig fjerne overflødig vev.
  3. Ved hjelp av et kirurgisk mikroskop, å bruke en nål (18 gauge) eller mikro-kniv for å perforere pericorneal område av øyet (Bemerk at dette skal slippe fluid fra øyet).
    1. Fra perforeringen gjort i kapittel 4.3.1 bruke et par av kirurgisk saks for å klippe den fremre delen av øyet (hornhinnen) fra bakre del.
  4. Overfør hornhinnen tilbake i 4% PFA for fiksering over natten ved 4 ° C.
  5. Kast 4% PFA (FORSIKTIG: PFA er farlig og må deponeres i henhold til institusjonelle forskrifter) og skyll hornhinnen tre ganger med 1x PBS for å fjerne eventuelle rester av PFA.
  6. Inkuber i 1x blokkering buffer i minst 2 timer ved romtemperatur for å permeabilize vev og forhindre ikke-spesifikk binding av det primære antistoffet.
    1. Påfør primære antistoff i 1x blokkeringsbuffer, til en 100 til 500 gangers fortynning. (F.eks rotte-anti-mus-PECAM-en for å detektere blodårer på 1:100, kanin-anti-mus-LYVE-en for å detektere lymfekar på 1:500, og / eller rotte anti-mouse-F4/80 for detektering av makrofager på 1:100). Inkuber ved 4 ° C over natten.
    2. Vask 1x seks ganger med vaskebuffer i 1 time hver gang ved romtemperatur til fullstendig fjerne ubundet primære antistoff.
    3. Påfør et sekundært antistoff i 1x blokkering buffer på en 500-1000 fold fortynning. (For eksempel et 488 nm fluorescerende merket geite-anti-rotte-IgG på 1:800 eller et 594 nm fluorescerende merket geite-anti-kanin-IgG på 1:800). Inkuber ved 4 ° C over natten.
    4. Vask tre ganger med 1 x PBS i 1 time hver ved romtemperatur til fullstendig fjerne ubundet sekundært antistoff.
  7. Overfør hornhinnen i frisk PBS og 1x, ved hjelp av en kirurgisk mikroskop, omhyggelig lage fire innsnitt fra periferien mot centeh. Dette bør dele hornhinnen inn i fire kvadranter av omtrent lik størrelse (den resulterende formen bør se heller som en sommerfugl) og la den ligge flatt på et lysbilde.
  8. Monter med en monteringsmedium hensiktsmessig for fluoriserende bildebehandling. For best resultat, bør prøvene bli fotografert umiddelbart og digitale fotografier tatt, men kan lagres i flere uker beskyttet mot lys ved 4 ° C.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Etter at alkali-forbrenning, oppstår corneal NV på en forutsigbar, tidsavhengig måte. Figur 1 viser sterk forskjell både i neovaskularisering og korneal opasitet mellom en ubehandlet dyr (figur 1A), og et dyr behandlet med HDAC-inhibitor SAHA (figur 1B ) ved den 7. dag tidspunkt.

Figurene 2A og 2B viser en hornhinnen flat montering av en ubehandlet kontroll øye med primær PECAM-1 og LYVE-1-farging og sekundær Alexa Fluor 488 og 594 farging (henholdsvis). Figurene 2C og 2D viser den samme fargingen på et øye behandlet daglig med den HDAC inhibitor Saha merk den dramatiske nedgangen i både hemangiogenesis og lymphangiogenesis.

Tall 3A og 3B gir en detaljert titt på de to flekker. PECAM-en serverer en markør for blood skip (figur 3A), mens LYVE-en binder seg spesifikt til lymfekar (Figur 3B). En overlapping av de to felter er vist i figur 3C, slik at sammenligning av hemangiogenesis g. lymphangiogenesis, så vel som en sammenligning av de forskjellige celle-morfologi.

Etter PFA fiksering (trinn 4.1), kan du bruke vanlige snitt protokoller (ikke beskrevet i protokollen ovenfor) for å generere enten frosset eller parafin innebygde deler av øyet. Selv om dette ikke tillater den samme grad av kvantifisering av invasjon som en flat monterings gjør, kan sagittal seksjoner av hornhinnen viser deg hornhinnetykkelse og relative dybde av rørene i øyet. Figurene 3D-F viser sagittal, frosne seksjoner av hornhinnen og enten F4/80 (makrofag flekker), DAPI (nukleær farging), eller en sammenslåtte bildet.

Figur 1 Figur 1. Progresjon av hornhinnen neovascularization sju dager etter alkali-brannskader. (A) Representant bilde av en ubehandlet øye. (B) Representant bilde av et øye behandlet tre ganger per dag med vår sammensatte av interesse (den HDAC inhibitor SAHA). Merk forskjellen i hornhinne og neovaskularisering. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Fig. 2
Figur 2. Representative bilder av en ubehandlet kontroll (A og B) og en SAHA behandlet (C og & #160; D) hornhinne syv dager etter alkali-brenner skade (A og C) Bredt feltbilde av vaskulær endotelcelle farging med PECAM-1.. (B og D) Bredt felt bilde av lymfatisk endotelceller farging med LYVE-en. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 3
Figur 3. (A) Vascular endothelial cell farging med PECAM-1. (B) lymfatisk endotel celle farging med LYVE-1. (C) Fusjonert PECAM-1/LYVE-1 farging. (D) F4/80 farging av makrofager i en sagittal frosne delen. (E) DAPI staining av cellekjernen i en sagittal kutt frosset delen. (F) Fusjonert F4/80 og DAPI farging. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Protokollen presenteres her resulterer i reproduserbare nivåer av hemangiogenesis, lymphangiogenesis, og betennelse, noe som gjør det til et ideelt system for å studere disse tre (beslektede) prosesser. Selv om denne metoden gir sentralisert hornhinne NV, flere metoder som har blitt utviklet for å gi mer rettet NV, nemlig suturering av hornhinnen 17 og implantert vekst-faktor uttrykke pellets 18, kan også være av interesse. Vår protokollen er designet for bruk i den voksne mus, og gir en enkel å bruke dyremodell samtidig tillater en lab for å dra full nytte av en rekke molekylære og transgene teknikker ennå ikke tilgjengelig for større pattedyr. Ovennevnte protokoll og representative resultater detalj bruk av mus på en C57BL/6J bakgrunn. Albino-mus vil også være egnet, og kan sørge for lettere avbildning; tyder imidlertid på en fersk studie at neovaskulært respons av albino mus ikke kan være så dramatisk 19. Videre, i motsetning til flereandre neovaskulariserende modeller, kan hornhinnen NV scores med undersøkelse gjennom et kirurgisk mikroskop eller selv med det blotte øye. Hvis en strengere kvantifisering av omfanget av neovaskularisering er nødvendig, kan digitale bilder av farget flat mount analyseres via en rekke programvarepakker, kan et eksempel på hvordan du kan gjøre det med photoshop CS4 sees i Conner, et al. siste Natur Protokoller papir "Kvantifisering av oksygen-indusert retinopati i musen" 20.

Proparacaine hydroklorid er en aminoester analgetikum anvendes som en aktuell løsning (det er mulig at andre medlemmer av denne familie vil være like akseptabelt). Selv om dyret er plassert under generell anestesi for prosedyren, vi anser som ekstra aktuell smertelindring en etisk nødvendighet å hindre angre smerte på hornhinnen. Det er viktig at PBS brukes til å fortynne din sammensatte og skylle øyet filtreres og holdt feilfri gjennom the prosedyre (se etter synlige tegn på forurensning før hver bruk). PBS kalles for basert på individuelle lab tradisjon; en tilsvarende balanserte saltløsning skal oppnå det ønskede resultat. Likeledes kan revisjoner av immunhistokjemi protokoll som presenteres her bli kalt for hvis antistoffer fra andre kilder benyttes (dvs. graden av fortynning er nødvendig).

De mest teknisk utfordrende deler av denne fremgangsmåte er den innledende plassering av NaOH fuktet filterpapir og disseksjon av hornhinnen. Vi anbefaler at begge teknikker bli praktisert før selve prosedyren. Filterpapiret må plasseres i midten av hornhinnen for å fremme en lik grad av neovaskularisering fra alle sider. Noen grad av offset vil skape en høy grad av variasjon fra mus til mus. Hornhinnen disseksjon krever en god del fingerferdighet. Øyet er egnet til å deformeres som reaksjon på et forsøk på å perforere pericorneal region.Vi anbefaler å bruke en skarp, tynn kanyle til å foreta den første kutt og slippe ut trykket inne. Etter en innledende punktering er gjort, kan et par kirurgiske sakser settes inn i hullet og brukt til å skjære langs en tenkt linje som skiller den bakre av øyet fra det bakre øyenkoppen. Arbeide sakte og forsiktig bør gi en intakt hornhinnen.

Det skal bemerkes at mens den primære hensikten med denne protokollen er å analysere effekten av forskjellige forbindelser i behandling av korneal alkali-brannskader det har også potensiale til å bli brukt til å studere corneal såret re-epitheliaztion, korneal fibrose og limbale epitelial stammen cellefornyelse. Videre fungerer den som en generell modell for å utforske mekanismene for patologisk hemangiogenesis, lymphangiogenesis, og betennelser. Den relative letthet med hvilken protokoll kan bli utført, så vel som dens ikke-invasiv karakter, gir en tiltalende mulighet for in vivo sammensatte screening, effekt tests, og karakterisering av transgene musemodeller med hensyn på patologisk angiogenese.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har ingenting å avsløre.

Acknowledgments

Vi er takknemlige for Dr. Xinyu Li hjelp i utarbeidelsen av manuskriptet. SV ble støttet av et oppstartsfond fra Tulane University, presidentens Forskningsrådet New Investigator Award fra UT Southwestern Medical Center, NIH Grant EY021862, en karriereutvikling award fra Forskningsrådet for å hindre blindhet fundament, og en Bright Focus Award i aldersrelatert makuladegenerasjon Forskning .

Materials

Name Company Catalog Number Comments
1 ml Syringe BD 309659
18 G Needle BD 305918
10 ml Syringe BD 306575
25 G Needle BD 305916
Anti-F4/80 (rat anti-mouse) AbD Serotech MCA497RT
Anti-LYVE-1 (rabbit anti-mouse) Abcam ab14917
Anti-PECAM-1 (rat anti-mouse) BD 553370
Anti-IgG Alexa 488 (goat anti-rat) Invitrogen A11006
Anti-IgG Alexa 594 (goat anti-rabbit) Invitrogen A11012
Camera Tucsen TCC 5.0 ICE
Coverslips Fisher 12-548-B
DMSO Sigma D4540-1L Caution: Mutagenic, Toxic
Forceps (Blunt), Iris WPI 15915
Forceps (Sharp), Dumont #4 WPI 500340
KCl Fisher P217-500
Ketamine Solution MedVet RXKETAMINE Controlled substance, proper license required for use.
Light Source for Microscope AmScope LED-14M-YA
Microscope (Stereo 7X-45X) AmScope SM-1B
Mounting Medium, VECTASHIELD Vector H-1000
NaCl Fisher S271-10
NaH2PO4 Fisher S397-500
NaOH Fisher S318-1 Caution: Corrosive
Paraformaldehyde P6148-500G Caution: Allergenic, Carcenogenic, Toxic
Proparacaine Hydrochloride Sigma P4554-1G
Scissors (5 mm blade), Vanas WPI 14003
Goat Serum MPBio 92939249
Microscope Slides Fisher 12-550-15
Triton X-100 Sigma T8787-100ML
Whatman Grade 1 Filter Paper Whatman 1001-6508
Xylazine Solution MedVet RXANASED-20

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Pascolini, D., Mariotti, S. Global estimates of visual impairment. Br. J. Ophthalmol. 96, (5), 614-618 (2010).
  2. Whitcher, J., Srinivasan, M., Upadhyay, M. Corneal Blindness: A Global Perspective. Bull. World Health Org. 79, (3), 214-221 (2003).
  3. Gupta, D., Illingworth, C. Treatments for corneal neovascularization: a review. Cornea. 30, (8), 927-938 (2011).
  4. Cursiefen, C., et al. Consensus statement on indications for anti-angiogenic therapy in the management of corneal diseases associated with neovascularisation: outcome of an expert roundtable. Br. J. Ophthalmol. 96, (1), 3-9 (2012).
  5. Delmonte, D., Kim, T. Anatomy and Physiology of the Cornea. J. Cataract Refract. Surg. 37, (3), 588-598 (2011).
  6. Cursiefen, C., Seitz, B., Dana, M. R., Streilein, J. W. Angiogenesis and lymphangiogenesis in the cornea. Pathogenesis, clinical implications and treatment options. Der Ophthalmologe. 100, (4), 292-229 (2003).
  7. Chang, J., Gabison, E., Kato, T., Azar, D. Corneal Neovascularization. Curr. Opin Ophthalmol. 12, (4), 242-249 (2001).
  8. Ambati, B., et al. Corneal Avascularity is due to Soluble VEGF Receptor-1. Nature. 443, (7114), 993-997 (2006).
  9. Cursiefen, C., et al. VEGF-A Stimulates Lymphangiogenesis and Hemangiogenesis in Inflammatory Neovascularization via Macrophage Recruitment. J. Clin. Invest. 113, (7), 1040-1050 (2004).
  10. Jiri, O. Paper Strips and Rings as Simple Tools for Standardization of Experimental Eye Injuries. Ophthal. Res. 1975, (7), 363-367 (2009).
  11. Ormerod, L., Abelson, M., Kenyon, K. Standard Models of Corneal Injury Using Alkali-Immersed Filter Discs Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 30, (10), 2148-2153 (1989).
  12. Saika, S., et al. Therapeutic effects of adenoviral gene transfer of bone morphogenic protein-7 on a corneal alkali injury model in mice. Lab. Invest. 85, (4), 474-486 (2005).
  13. Ferrari, G., Bignami, F., Giacomini, C., Franchini, S., Rama, P. Safety and efficacy of topical infliximab in a mouse model of ocular surface scarring. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 54, (3), 1680-1688 (2013).
  14. Sosne, G., Christopherson, P., Barrett, R., Fridman, R. Thymosin-beta4 modulates corneal matrix metalloproteinase levels and polymorphonuclear cell infiltration after alkali injury.Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 46, (7), 2388-2395 (2005).
  15. Li, X., et al. Inhibition of Multiple Pathogenic Pathways by Histone Deacetylase Inhibitor SAHA in a Corneal Alkali-Burn Injury Model. Mol. Pharm. 10, (1), 307-318 (2013).
  16. Yoeruek, E., et al. Safety, penetration and efficacy of topically applied bevacizumab: evaluation of eyedrops in corneal neovascularization after chemical burn. Acta Ophthalmol. 86, (3), 322-328 (2008).
  17. Bucher, F., Parthasarathy, A., Bergua, A., Onderka, J., Regenfuß, B., Cursiefen, C., Bock, F. Topical Ranibizumab inhibits inflammatory corneal hem- and lymphangiogenesis. Acta Ophthalmol. (2012).
  18. Hajrasouliha, A., Sadrai, Z., Chauhan, S., Dana, R. b-FGF induces corneal blood and lymphatic vessel growth in a spatially distinct pattern. Cornea. 31, (7), 804-809 (2012).
  19. Rogers, M., et al. The albino mutation of tyrosinase alters ocular angiogenic responsiveness. Angiogenesis. 16, (3), 639-646 (2013).
  20. Connor, K., et al. Quantification of oxygen-induced retinopathy in the mouse: a model of vessel loss, vessel regrowth and pathological. Nat. Protoc. 4, (11), 1565-1573 (2009).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics