一种新型声带生物反应器的构建与鉴定

1Biomedical Engineering Program, University of Delaware, 2Department of Materials Science and Engineering, Delaware Biotechnology Institute, University of Delaware
Bioengineering

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Zerdoum, A. B., Tong, Z., Bachman, B., Jia, X. Construction and Characterization of a Novel Vocal Fold Bioreactor. J. Vis. Exp. (90), e51594, doi:10.3791/51594 (2014).

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Abstract

Introduction

人类的声带,上皮层构成,固有层(LP)和声带肌肉,是一种将来自肺部的气流进入的声波产生声音的专门的软组织。1声带定期正常发声期间振荡,表现出高达30%的菌株在基本频率范围从100至300赫兹。2成人声带唱片是肤浅(SLP)组成的梯度结构,中间(ILP)和深(DLP)层。进一步分类组的上皮和SLP为粘膜层,并结合ILP和DLP到声韧带。3 SLP层主要包含一种无定形矩阵稀疏分散的胶原纤维,而韧带富含成熟的胶原蛋白和弹性纤维提供足够的强度。4的结构和新生儿声带力学从他们成熟的同行有所不同显著。虽然机制•调控声带发育和成熟都还没有完全理解,实验证据指出,以发声来源的机械应力的决定性作用。

几个医疗条件,包括滥用嗓音,感染,化学刺激和手术过程中,可能会损坏声带。声带疾病影响美国人口估计有3-9%。目前的治疗方法声带疾病是有限的5和基于干细胞的组织工程方法已经成为一种很有前途的战略恢复声带功能。间充质干细胞(MSCs)是一个合适的替代品主要声带成纤维细胞的声带组织工程。6-9干细胞的命运规范和随后的组织发展是由它们驻留在特定的利基,其中的机械条件是介个至关重要的因素。10机械力的组织形态发生一个重要的监管机构第二平衡,特别是对于那些定期进行装载11从组织工程的角度来看的组织,它已被证明,暴露于生理相关的机械刺激促进干细胞分化和组织特异性基质重塑。12-15

组织培养物的生物反应器被设计来模拟所需的生理环境,细胞或组织生长的体外 。对声带组织工程,这是特别重要的,以重新创建phonating声带的机械环境。一个理想的声带生物反应器应有效地提供振动提示来培养细胞,让轻便的控制频率,振幅和振动持续时间。 Titze和同事设计了一种声带生物反应器(T1生物反应器 )16,结合了静态拉伸与高频(20-200赫兹)振动来刺激基质蛋白的细胞产量。使用设置克该生物反应器,Webb和同事研究了17的10天,100赫兹的振动对皮肤成纤维细胞中透明质酸(HA)为基础的水凝胶培养的影响。构建体进行振动表现出升高的表达HA合酶-2(HAS2),核心蛋白聚糖,纤维调节和基质金属蛋白酶1(MMP1),相对于静态控件。被发现的刺激作用是时间依赖性的。最近,使用了功率放大器,一个函数发生器,一个封闭的扬声器和一个沿圆周锚硅油膜,该振荡空气传送到贴壁细胞我们组18组装声带生物反应器(J1生物反应器 )。培养在生物反应器中的J1新生儿包皮成纤维细胞,进行1小时的振动,在60,110或300赫兹,带有一个在平面应变高达0.05%。的定量PCR结果显示,一些细胞外基质基因的表达被适当地改变以响应变化的振动频率和幅度。

这些生物反应器的设计,而耐人寻味,有一些局限性。例如,在T1的系统需要大量的连接器和棒的机械耦合的,从而限制了最大频率达到的。此外,细胞可以经受不期望的机械搅拌和流体扰动变得复杂的数据解释。 J1的生物反应器,在另一方面,具有相对较低的能量转换效率,而不是用户友好。此外,频繁的振动分离从底层硅油膜细胞载货结构。这里报道的J2声带生物反应器,基于相同的原理为J1版本设计的,被优化的一致性和可重复性。在空气动力学中单独装配的振动室,其中的MSC-纤维状填充的聚(ε-己内酯)(PCL)支架是effectiv产生的发声-模拟振动伊利抵押。激光多普勒Vibrometry(LDV)允许用户以验证膜/支架组件的振动模式。在我们的演示中,干细胞暴露在200 Hz的正弦振动与1小时的按1小时 - 解除(OF)模式,共12小时,每天的7天。细胞反应所施加的振动线索进行了系统研究。总体而言,J2声带提供了最人性化的功能,允许动态细胞培养的研究,高通量和可重复的方式进行。

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Protocol

1,生物反应器组件(视频1)

  1. 使铝模(圆口模头+隔离销)与预先确定的内部和外部尺寸( 图1)。
  2. 从步骤1.1使用模具,制造硅膜(直径:42毫米,厚度:1.5毫米, 图1)与一个根深蒂固的套筒(直径:12毫米,厚度〜0.25毫米,形由图1中的隔离销)在使用市售的有机硅弹性体包的中间。
  3. 使一对丙烯酸的块( 图2(4,5))与一个圆形开口(直径:24毫米)的中间,雕刻顶部(1.8厘米厚)和底部(0.9厘米厚)相匹配的凸脊和凹槽的块10
  4. 夹着一对丙烯酸块之间的有机硅膜。使用微型扭力起子设置为一个恒定的力(35 CN米)四角螺丝将部件固定。因此,水密,24米米,宽18毫米深的振动室被创建( 图2C)。
  5. 通过底部亚克力块上另一套角落的螺丝安装一个3“扩展的范围微型低音单元( 图2D,8Ω/20W)振动室的下方。在这一点上,一个单独的振动模块组装。
  6. 复制七个额外的振动模块。切成的棒放置在均匀间隔的圆孔(:7厘米,厚度为2厘米直径的)扬声器碱基加盖其中四个到的两个固定铝条(40厘米×10厘米×2.5厘米)1。通过在铝条的侧将螺钉插入各圆孔稳定各扬声器。
  7. 单独由一个扬声器选择器控制扬声器。通过连接线连接到扬声器主体的正极和负极输入端,然后在选择相应的输出各个扬声器连接到选择器。扬声器选择器允许从t信号他函数发生器,通过功率放大器后,可以一次( 图2E)到达所有8个扬声器。
  8. 将两个腔室阵列,扬声器选择器和相关的电子设备中的抗湿度外壳。房子整个组件在商业细胞培养孵化器。
  9. 输送主电缆(通过医用级PVC管),通过过滤器组件在所述培养箱的背面连接在功率放大器与扬声器选择。

2,支架制备及表征

  1. 溶解PCL粒料在氯仿中于15重量%的浓度。加载溶液到10ml注射器上铺21政钝端针。
  2. 锁定在注射器上一个可编程注射泵和设置流速为1毫升/小时。
  3. 从针穿过放置铝箔覆盖的集电极水平,具有针尖 - 集电极的距离〜18厘米。
  4. 钳位正阿利鳄鱼夹,以将针的中间,和接地鳄鱼夹在铝集流体,然后将电压上的高电压电源在15千伏。注意:高电压,保持从针的距离。
  5. 依次打开注射泵和电源;快速清洁/删除用干纸巾稳定纤维喷射之前围绕所述针的尖端处的残余聚合物溶液和泰勒锥19形成。
  6. 让纤维积聚在铝集流体的厚度为〜250-300微米(〜当前纺丝条件下7小时)。储存在真空干燥器中得到的支架1-2天以除去任何残留溶剂。
  7. 图像中的支架,溅镀上金,用扫描电子显微镜显示一致的纤维形态。10

3,生物反应器组装与表征

  1. 冲一圆盘(直径:8毫米),四臂(长度:2毫米)出来的初纺PCL垫( 图2A)由第一使用12毫米直径的活检穿孔器切割圆盘的外直径。然后使用第二个,8毫米活检穿孔,使均匀地分布在圆刀片将比分那里的武器将被切断4个2毫米长的切口。后与8​​毫米冲得分,用手术刀刀片切割臂的边缘向外。将支架放入硅胶膜通过扩展武器槽(视频1)。用平头镊子轻轻按压表面变平的插入支架。
  2. 附上一小片薄铝箔(8毫米×2毫米,垂直形状, 图2B)到PCL支架来辅助激光反射。
  3. 固定组装硅油膜/ PCL支架(如在步骤1.4中详述)中的振动室。加入1.5毫升的水在室内,以振动之前滋润PCL支架。
  4. 使用函数发生器,引入振动标志ALS( 例如,200赫兹的正弦波的峰值-峰值电压0.1 V的,VPP),以夹心丙烯酸室。使用电压表来精确地测量电压,每个扬声器的输入。注:从函数发生器的Vpp的读数将不同于最终电压传送到扬声器。
  5. 组装单点LDV并固定光纤激光传感器头的云台的三脚架。角度传感器头,使得它指向垂直于桌面。通过同轴电缆连接LDV传感器头数据采集模块,然后通过USB模块的笔记本电脑。
  6. 将激光束聚焦在垂直于硅膜( 图2B图3),各预定点。
  7. 使用数据采集软件,记录中间膜的位移。请从“选项”菜单中的“采集设置”;然后改变测量模式为“FFT221;接下来,单击主工具栏中的“连续测量”,然后点击形成在所选择的频率( 图6D)来记录位移的峰值。
  8. 绘制正常中期膜的位移(瓦特0)作为横跨基底的相对位置的函数。构建使用地8.5数据分析软件的表面振动轮廓的三维色彩映射表。

4,振动细胞培养

  1. 子培养人骨髓来源的MSC在T150组织培养瓶在4,000-5,000细胞/ cm 2在MSC维持培养基的初始接种密度。
  2. 经过7-8天的细胞培养物(以〜85%汇合),胰蛋白酶消化细胞用细胞解离试剂如的Accutase,计数使用血细胞计数,离心(440×g离心5分钟),并在重悬细胞沉淀新鲜的MSC维持培养基以4.5×10 6细胞/ ml的浓度。
  3. 沉浸在PCL scaffoLD在70%乙醇的O / N。之后将溶剂蒸发,暴露支架的两侧,以杀菌紫外灯(254纳米)为5-8分钟。
  4. 浸泡在PCL支架在20微克/毫升纤维连接蛋白溶液在37℃1小时。将纤连蛋白包被的支架插入硅氧烷膜。汇编为在步骤1中所详述的生物反应器。
  5. 分发40微升的细胞悬液均匀地涂在有抵押的PCL支架。使细胞增加一个额外的1.5毫升新鲜传媒振动腔前1-1.5小时重视。
  6. 文化海安载货PCL支架体外静态3天,静态培养完成后刷新媒体。
  7. 选定施加振动政权的蜂窝结构。注:作为一个例子,细胞经受在200赫兹1小时的按1小时-解除(OF)振动与〜40微米AW 0每天12小时为7天。结构受到震动刺激被指定为振样品和那些丘尔红色静态在相同的振动室作为静态控件(统计)。

5,生物评价

  1. 从每一个腔室收集200微升的细胞培养基每隔一天(第1天,3,5和7),并从同一个样品池的等分试样一起(每800微升)。
  2. 量化基质金属蛋白酶1(MMP1)和HA使用MMP1 ELISA开发工具包和透明质酸竞争ELISA试剂盒,分别按照制造商的过程的细胞产量。同时,吸附法生产可溶性弹性蛋白前体继之前报道的ELISA方法。8
  3. 当最后一个振动周期在7天结束后,迅速取出从振动室使用尖锐镊子蜂窝结构,并简要冷磷酸盐缓冲液(PBS,4℃)冲洗。
  4. 对于活/死染色,孵化用碘化丙啶(在PBS 1:2,000)的结构和SYTO-13(在PBS中1:1000)同时进行5分钟,在RT。图像染色结构与多光子共聚焦显微镜。
  5. 另外,嵌入式冻结干冰的PBS漂洗细胞结构和提取继先前报道的协议进行基因分析细胞总RNA。9
  6. 验证使用紫外可见分光光度计提取的RNA的数量和质量。 RNA样品与1.8-2.2 A260/A280和A260/A230比值被用于随后的定量PCR分析。
  7. 反转录的RNA(500毫微克/样品)插入使用市售的反转录试剂盒的cDNA。
  8. 执行上使用市售的PCR主混合物继先前详细过程的实时序列检测系统进行PCR反应。8
  9. 使用商业定量PCR数据分析软件分析定量PCR结果。为了保证数据分析的可靠性,多参考基因(YWHAZ,磷酸三丁酯,PPIA)被用作整型ernal控件和特异性引物效率的差异考虑在内。8

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Representative Results

通过静电纺丝制备的PCL支架包含微米尺寸的空隙孔和具有4.7微米( 图4A)的平均直径的随机缠结纤维。在更高的放大倍率,纳米级凹槽和孔是在单根纤维( 图4B)可见。与纤连蛋白支架的涂层提高了亲水性,有利于初始细胞粘附/在PCL支架(未发表的观察)传播。

具有期望的频率(f,100-300赫兹)和电压正弦的波形(VPP:0-0.125 V)被引入到每个振动腔室下部的扬声器,和聚硅氧烷膜的底部和一纸锥之间密闭的空气迷你低音单元被驱动到振荡。空气振动被传递到的PCL支架具有或不具有细胞。 LDV用于分析所述支架的振动特性在给定的f和Vpp的,考虑到水(1.33)的折射率。20 图5示出了正常的位移(W 0)在PCL支架的中心为Vpp的一个函数 f。的振动频率被选择以反映人类基本来讲频率。21有瓦特0之间的线性关系和VPP在0-0.125 V对于所有测试的频率范围内。在给定的峰峰值,瓦特0减小 f的增加从100到300赫兹。

一个特定的振动条件(f = 200赫兹,VPP = 0.1 V)选择用于进一步分析。的速度分布为时间( 图6A)的函数示出了引入到扬声器的正弦信号由PCL支架具有高保真捕获。在PCL支架的中心纵向振荡为52毫米/秒的峰值速度,66米/秒2(〜6.7克)的峰值加速度和约40微米的正常位移。在100,300,400和500赫兹的谐波信号的幅度中的至少一个命令比在基本频率(200赫兹)下。然而,如果Vpp的值过高(0.15 V)时,可比强度的基本频率的多个谐振峰被检测到( 图7)。穿过支架振动曲线是通过从总的在PCL表面的径向方向73的代表点( 图3)监视正常位移创建。在3D色彩映射表( 图8)表明,在膜的表面上检测到的振动是轴对称的相对中心和其静止位置上。正常位移被发现从中心单调减少到那里的膜被固定的边缘。

干细胞培养在PCL支架都选择了振动条件下培养。细胞经受7-哒Ÿ刺激保持相似的活力和增殖特性的静态控件( 图9),确认该纤维支架为细胞相容性及施加的振动导致在不损失可行性。细胞对刺激的振动被检查在mRNA水平在必要声带ECM蛋白,如弹性蛋白(ELN)的,透明质酸合成酶-1(HAS1),COL3A1MMP1( 图10)的表达方面。的振动导致在第7天2.3倍增加ELN表达,相对于静态控件。振动刺激也适度增加COL3A1的表达。值得注意的是,主要的细胞外基质重塑酶,HAS1MMP1的表达是显著的振动信号增强。具体来说,动态处理导致〜1.7和〜16.3 HAS1MMP1一个倍表达(均P <0.05),分别比其在7天的静态控件。总体而言,振动对HAS1MMP1的诱导效应,从第3天到第7天加强。

为了进一步证实了定量PCR的结果,HA,水溶性弹性蛋白和MMP1的细胞产量通过ELISA在翻译水平( 图11)被量化。动态培养细胞产生4.2±0.1微克/(每干支架重量)后7天内振动可溶性弹性蛋白毫克,而静态控件仅积2.7±0.2微克/毫克)弹性。平均而言,7天的振动导致2.2和4.7倍的HA和MMP1分泌,相对于相应的静态控件。

视频1:一个3D模拟呈现出J2生物反应器的组装。该视频由Autodesk 3ds Max的设计(Congfei谢提供 )创建的。

“FO:保持together.within页=”总是“> 图1
图1的照片示出了用于制造硅油膜与根深蒂固套铝模具的尺寸Ø:直径d:厚度/深度,H:高度请点击此处查看该图的放大版。

图2
。图2的流程图显示了生物反应器组件(A)的四臂形PCL支架的照片,(B)的照片示出了PCL支架固定在振动腔室与测振仪激光聚焦在腔室的底部;( C)横截面振动室的人看法。 1:PCL支架(红色); 2:硅油膜(青色); 3:铝固定式; 4:顶级亚克力块; 5:底部亚克力块; 6:迷你低音单元;振动模块(四)侧视图(E)照片显示整个组件。这个数字已经被修改Tong 10版权所有2013年,玛丽安力博特公司请点击此处查看该图的放大版本。

图3
图3。插图径向标记硅油膜的单点LDV测量。这个数字已经被修改Tong 10版权所有2013年,玛丽安力博特公司


PCL支架在不同放大倍数的图4。SEM照片(A)600X,(B)7,000 X。这个数字已经被修改Tong 10版权所有2013年,玛丽安力博特公司请点击此处查看该图的放大版本。

图5
图5。在硅膜的中央(瓦特0)正常的位移作为所施加的频率的(100,200和300赫兹)的函数和驱动电压(Vpp = 0-0.125 V),该图已被修改从Tong 10版权所有2013年,马 RY安力博特公司

图6
在硅膜的中心 f = 200赫兹,VPP = 0.1 V(A)速度剖面作为时间的函数检测图6。振动特性(B)速度剖面作为频率的函数(C)加速度作为频率的函数(D)正常位移(W 0)作为频率的函数。这个数字已经被修改Tong 10。版权所有2013年,玛丽安力博特公司请点击此处查看该图的放大版本。

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图7。在膜的中心(瓦特0)检测到的频率的函数,当200赫兹的正弦波被导入到微型低音扬声器以VPP = 0.15 V.正常位移

图8
使用从所有地点收集的正常位移数据进行表面网格构造图8。3D色彩表上所标示的PCL支架,这个数字已经被修改Tong 10版权所有2013年,玛丽安力博特公司

图9
图9。细胞活力,通过活/死染色观察,7天后的震动。这个数字已经被修改塘ét铝,10版权所有2013年,玛丽安力博特公司请点击此处查看该图的放大版本。

图10
图10。细胞响应的振动刺激的人声相关折,ECM基因的表达而言,相对基因表达(倍数变化)标准化为第3天和第7天(虚线基线)的各自静态控制。 **:显著性差异(p <0.05)3天和第7天,#之间:显著变化(P <0.05)相对于基线。数据代表平均值的平均值±标准误差(SEM中,n = 4)。双尾学生t-检验用于统计学分析,以p <0.05被作为显著二叔考虑fference(下同)。这个数字已经被修改Tong 10版权所有2013年,玛丽安力博特公司

图11
每干脚手架重量ECM分子的HA(一)图11。生化定量,易溶ELN(B)和MMP1(C)通过干细胞对统计和VIB条件7天下的PCL支架体外培养的产生。总含量(mg)表示为平均值±标准差,n = 4时从代表审判#:。显著提高(P <0.05)相比,统计控制。这个数字已经被修改Tong 10版权所有2013年,玛丽安力博特公司

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Discussion

功能性声带组织在体外成功的工程需要声带般的微环境介导多能细胞的行为的娱乐。人们普遍认为组织或器官的结构反映他们需要执行的功能。对于22声带组织,提出发声过程中发生的高频振动来对组织成熟的重要。在我们的研究中,PCL支架是用来提供一个带样结构支撑而声带生物反应器被设计成引入生理学相关的机械信号到培养的干细胞。这里描述的(J2)的生物反应器,通过电磁单个扬声器产生的振动和空气动力学能量转移到培养细胞中。相比我们之前的设计中,18当前系统将每个样品孔的正下方的振动刺激源,使FORA更高效的能量转换。其结果是,一个更大的显著正常位移和更高的加速度在使用目前的系统来实现。模块化的设计也最大限度地减少系统的变化和机械扰动在不同的振动室。

我们的设计依赖于硅膜以提供所述振动信号。因此,重要的是保持膜的完整性和均匀性。后的前体溶液倒入铝模具中,希望通过拖动载玻片整个模具表面以除去过量的液体。一致的膜,没有任何残存气泡可以通过降低固化温度,同时增加固化时间生产。此外,70%的乙醇溶液,可用于暂时溶胀的膜在铝的界面,以允许容易地移除固化的有机硅。为了适应蜂窝结构的三维动态培养,位于中央的细槽我š模塑成硅膜,使得PCL支架可以沿周边固定在振动腔室。槽的几何形状是可调节的;从而在蜂窝结构的形状可以相应地调整,以更好地模仿天然声带的几何形状。23如果PCL支架并不紧紧地固定在硅膜中,在PCL和在外部区域上检测到的硅的LDV信号膜不会完全重叠。当组装该生物反应器中,所有元件被固定并拧紧,以相同的程度,以避免不希望的运动和腔室,以最小化到腔室的变化是重要的。

为了验证生物反应器的效用,干细胞被培养在PCL支架和7天受到间歇性(的)振动。的振动过一段每天数小时的被用来重现重语音用户的发言的情况, 例如 ,专业的唱 ERS和教师。23不像先前报道声带生物反应器,我们不会造成任何不利影响或生理创伤的细胞。

200Hz的振动被发现差异调节细胞外基质的重要组成部分细胞的生产。弹性蛋白是整个声带唱片发现的关键结构蛋白,并赋予韧性和弹性。24间质无定形组分,如HA,有助于正确的组织的粘弹性和防止瘢痕形成的维护。25,26的MSCs进行在7天的治疗产生显著量较高的弹性比静态培养对口。 HA生物合成也是对振动敏感,证实了关于医管局HAS1和ELISA结果定量PCR结果。这些结果表明,通过生物反应器中启用的振动刺激,有利于生产的抗瘢痕形成的分子。

jove_content“>平衡ECM的营业额依赖并发基质沉积和降解。27 III型胶原蛋白是主要的网状胶原纤维在声带发现,提供了组织与承重性能。28本文应用于提高基因表达的7天震动COL3A1,但在幅度比弹性蛋白的低得多,因此,所施加的振动的差异调节参与胶原蛋白III和弹性蛋白的合成的细胞机器。有趣的是,MMP1,涉及基质降解和组织的主要蛋白酶之一重塑27 ,是振动线索高度敏感。这些结果吻合较好,对振动诱导的MMP1通过上调细胞包埋在HA基质以前的报告。29总体而言,由声带生物反应器中产生的振动刺激深受促进平衡调解功能的MSC声带般的矩阵。

以上总之,新的声带生物反应器这里介绍的是模块化的,用户友好的,允许在一个可重复的方式进行动态的细胞培养。然而,在目前的设计存在一些局限性。首先,振动振幅,虽然从J1版本提高,相比于声带组织仍然很小。第二,我们的生物反应器不模拟声带正常发声时的双边冲突。第三,我们的纤维的PCL支架并不能反映组织的各向异性。今后的工作是致力于改善设计,以更好地模仿原生发声条件。同时,对于3D动态培养最佳制度将探讨在体外成功地功能声带组装。

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Disclosures

没有竞争的经济利益存在。

Acknowledgements

我们感谢杰弗里·卡普兰博士为他的共焦成像的培训和咨询。我们也感谢凯克电子显微镜实验室和超英博士倪扫描电镜的协助。这项工作是由卫生(NIDCD,R01DC008965和R01DC011377)国家研究院​​资助。 ABZ承认美国国家科学基金会综合研究生教育和研究培训实习资助(IGERT)计划。

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Silicone elastomer kit Dow Corning Sylgard 184 Cure the membrane at 100 °C for 2 hr
PCL Sigma Aldrich 440744-500G Mn ~80 kDa, dissolve O/N
Chloroform Sigma Aldrich C7559-5VL
Human bone marrow-derived MSCs Lonza PT-2501 Received with passage 2
MSC maintenance media Lonza PT-3001 10% FBS in basal media supplemented
with L-glutamine, gentamicin and amphotericin
Accutase cell dissociation reagent Life Technologies A11105-01
Ethanol Sigma Aldrich E7023-500ML
Fibronectin Sigma Aldrich F2006-1MG
MMP1 DuoSet ELISA kit R&D systems DY901
HA ELISA kit Echelon Biosciences  K-1200  
PBS Life Technologies 14190-136
Propidium iodide  Life Technologies P1304MP
Syto-13  Life Technologies S7575
QuantiTect reverse transcription kit  Qiagen 205311
SYBR Green PCR master mix Life Technologies 4309155
Replacement speaker DAYTON audio
(via Parts Express)
DS90-8 Paper cone, full range (80-13,000 Hz), 85 dB
Ergo Micro torque screwdriver Mountz # 020377 Torque range: 20-120 cN·m
Stereo speaker selector RadioShack 40-244 Maximum power handling 50 W
Function generator  Agilent  33220A Frequency range 1 µHz-20 MHz
Power amplifier  PYLE audio PylePro PT2400 Frequency response: 10 Hz-50 kHz, two speaker
channels
Cell culture incubator  Thermo Fisher  Steri-Cult 3307
Syringe pump  New Era Pump Systems NE-300
High voltage power supply Spellman CZE 1000R Output voltage: 0-30 kV
Scanning electron microscope  JEOL-USA JSM-7400F
Desk gold sputter coater Denton Vacuum DSK00V-0013
Doppler laser vibrometer  Polytec PDV-100 Non-contact velocity measurement (0-22 kHz)
PCR sequence detection system  Applied Biosystems ABI7300
Multiphoton confocal microscope Zeiss Zeiss 510Meta NLO
UV-VIS Spectrophotometer  NanoDrop Products
via Thermo Scientific
ND-2000
VibSoft Data Acquisition Software Polytec Acquisition bandwidth up to 40 MHz
Origin 8.5 data analysis software  OriginLab
qbasePlus qPCR data analysis software  Biogazelle V2.3
Aluminium alloy  McMaster-Carr Alloy 6061
Acrylic blocks McMaster-Carr
Polycarbonate anti-humidity chamber McMaster-Carr Impact-Resistant Polycarbonate
screws  McMaster-Carr
Electronic cable/wire
Medical grade PVC tubing US Plastic Corp. Tygon S-50-HL Clear, biocompatible
10 ml Syringe  Becton Dickinson 309604
21 G Blunt ended needle Small Parts NE-213PL-25 1-1/2" length
Alligator clip adapters  RadioShack 270-354 Fully insulated
8 mm Biopsy punch Sklar Surgical Instruments 96-1152 Sterile, disposable
12 mm Biopsy punch Acuderm (via Fisher Scientific) NC9998681
Tissue culture flasks Corning Cell culture treated

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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