الفخذ نخاع العظم الطموح في الفئران لايف

Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Chung, Y. R., Kim, E., Abdel-Wahab, O. Femoral Bone Marrow Aspiration in Live Mice. J. Vis. Exp. (89), e51660, doi:10.3791/51660 (2014).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Protocol

وأجريت كافة الإجراءات الحيوانية وصفها في هذا البروتوكول وفقا للمبادئ التوجيهية لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية وتمت الموافقة من قبل لجنة رعاية الحيوان واستخدام المؤسسية (IACUCs كانت) في مركز ميموريال سلون كيترينج للسرطان.

1. تطلع نخاع العظم (BM) خلايا من عظم الفخذ

  1. تخدير الماوس الذي سيخضع الفخذ تطلع نخاع العظام مع isoflurane و(1-4٪) تدار مع المرذاذ الدقة. عمق التخدير وينبغي رصد كل 5-10 دقيقة في جميع أنحاء الداخلي من خلال مراقبة أنه لا يوجد تغيير في معدل التنفس المرتبطة التلاعب الجراحية و / أو الأذن، أخمص القدمين، وذيل قرصة. وبفعل التخدير مع isoflurane والمحافظة وأيضا في جميع أنحاء الإجراء مع isoflurane و. جرعة ما قبل إجرائية وقائية من البوبرينورفين بجرعة 0.05-0.1 ملغ / كغ تحت الجلد كل 6-12 ساعة يمكن استخدامها لمنع الألم الذي يصاحب الإجراء باعتباره صفةفريق الأمم المتحدة القطري إلى كاربروفين.
  2. تطبيق مرهم للعين للعيون من الماوس الحث التالية التخدير لمنع جفاف القرنية.
  3. يتم قص الفراء بعناية من مساحة الجلد ما يقرب من 150٪ أكبر من مساحة الموقع الطموح المنشود. تتم إزالة الفراء فضفاضة مع الشاش رطبة. يرجى الحفاظ على الماوس على لوحة تعميم الماء الدافئ أو غيرها من سطح يسيطر حراريا آمنة لمنع انخفاض حرارة الجسم أثناء العملية.
  4. تطهير الساق بأكملها التي تحتوي على عظم الفخذ الذي سيخضع الطموح مع ثلاث مجموعات من الدعك بالتناوب (بالتناوب إما مع بوفيدون اليود (بتدين) أو الكلورهيكسيدين (Nolvasan) فرك و 70٪ ايزوبروبيل أو الايثانول 70٪ غارقة الإسفنج الشاش).
  5. الرطب 0.5 مل حقنة السلين (حجم: 0.5 سم مكعب؛ قياس: 27.5 G) مع الفوسفات مخزنة المالحة عقيمة (PBS) قبل الشفط BM. ملء المحاقن مع 200-500 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني وطرد على الفور برنامج تلفزيوني. كرر هذا الإجراء 2-3 روتتراوح.
  6. إبقاء عازمة الساق من عظم الفخذ عن طريق دفع الساق مع أي البنصر أو الإصبع الخامس. تأكيد ان طائرة مخدر مناسبة تم تحقيقه. يقام الحقنة باستخدام الإبهام والسبابة. وهذا يسمح للاللقم أن تتعرض ويسهل إدخال الإبرة.
  7. بعد ترطيب حقنة، أدخل الإبرة من خلال الوتر الرضفي بحيث يتم إيداع الإبرة بشكل آمن بين اثنين من اللقم من عظم الفخذ. من خلال عقد diaphysis بالقرب من الكردوس عظم الفخذ مع الإبهام والسبابة، يتم إدخال الإبرة إلى رمح من عظم الفخذ بسهولة.
  8. قطب الإبرة إلى الخارج وإلى أعلى بحيث يكون بالتوازي مع رمح من عظم الفخذ. هذا الإجراء يسهل استرجاع محتويات نخاع العظام من عظم الفخذ رمح.
  9. تحويل اتجاه عقارب الساعة وعكس عقارب الساعة إبرة بينما دفعت به ببطء في تجويف نخاع الفخذ. تأكيد الموضع الصحيح للإبرة عن طريق تحريك بلطف سيRINGE أفقيا.
  10. برفق على المكبس إبرة الظهر، وخلق الضغط السلبي، في حين تتحرك الإبرة ذهابا وإيابا داخل تجويف BM. ملاحظة: إن حجم BM يستنشق تكون حوالي 5 ميكرولتر الذي يتوافق عادة إلى 0.4-0.8 × 10 6 خلايا وحيدات النوى. وسوف يتم تأكيد الطموح الناجح بصريا من خلال ظهور الدم في الجزء العلوي من الإبرة في قاعدة الحقنة. إذا رأيت أي الدم في حقنة فمن المرجح أن العظم أو الأنسجة جزء صغير عالق في الإبرة. هذا يمكن إزالته من الإبرة عن طريق تحريك المكبس صعودا وهبوطا في برنامج تلفزيوني (وهذا هو أحد الأسباب التي تجعل ينبغي حقنة مملوءة مسبقا مع برنامج تلفزيوني قبل الشفط BM). إذا لا يمكن فكها الأنسجة من حقنة، واستخدام إبرة حقنة جديدة و(مرة أخرى تبلل المحاقن مع 200-500 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني).
  11. مرة واحدة ويستنشق BM بنجاح من عظم الفخذ، وإزالة الإبر والمحاقن من عظم الفخذ والفأرة.
  12. التحرك يستنشق BM إلى أنبوب microfuge العلاقات العامةefilled مع 500 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني. بالنسبة لمعظم التطبيقات، ثم ينبغي أن تبقى الخلايا BM على الجليد حتى مزيد من المعالجة إذا كان ذلك ممكنا.
  13. بعد الانتهاء من هذا الإجراء، وإدارة مسكن مع كاربروفين 5 ملغ / كغ تحت الجلد. ثم إزالة الماوس من التخدير ووضع على وسادة ساخنة حتى تعافى تماما. ملاحظة: يجب أن يكون هناك أي مضاعفات أو استغاثة من ذوي الخبرة باتباع الإجراء الطموح إذا فعلت بشكل صحيح.
  14. قبل أن تعود الفئران إلى منطقة السكن، وضمان أنها قادرة على تجول والوصول إلى الطعام والماء. مراقبة الفئران لعلامات الضائقة أو إجراء آخر العدوى في ساعة 24 المقبلة. وتشمل علامات: النزيف المستمر، وفقر الدم والخمول. إذا رأيت أي من هذه العلامات إجراء آخر، يجب أن يتم التخلص من الحيوانات (ق). ملاحظة: يمكن تكرار تطلع BM / أخذ العينات ولكن يجب أن يتم تنفيذ الإجراء تكرار على عظم الفخذ المعاكس لمنع الصدمات المتكررة لنفس الساق. هناك القليل من المعلومات المتاحة عن الابequency أن تطلع BM لا يمكن أن يؤديها. ويتكرر الفخذ تطلع نخاع العظام عموما لا أكثر من مرة كل 2 أسابيع.

2. تقييم المحتوى الخلوي في خلايا يستنشق BM

  1. بيليه الخلايا التي تم استردادها من BM الطموح ومكان في أنبوب microfuge بواسطة الطرد المركزي في 300 x ج لمدة 5 دقائق في 4 درجة مئوية أو RT.
  2. نضح طاف ثم resuspend وبيليه في 500 ميكرولتر من الدم الحمراء ACK العازلة تحلل الخلية ("الأمونيوم كلوريد البوتاسيوم" تحلل العازلة).
  3. احتضان الخلايا في الحمراء العازلة تحلل الخلية لمدة 10 دقيقة ثم قم بإضافة 1 مل من برنامج تلفزيوني وتدور باستمرار الخليط مرة أخرى في 300 x ج لمدة 5 دقائق في 4 درجة مئوية أو RT. ملاحظة: يتكون هي lysed بيليه خلايا الدم الحمراء من خلايا وحيدات النوى الآن BM. هذه يمكن معلق لFACS تلطيخ، عد الخلايا، زراعة الأعضاء، تحليل cytospin و / أو أي استخدام آخر (تماما كما خلايا BM تحصد من الفئران ضحى ستستخدم).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

وقد استخدمت الفخذ BM تطلع ماوس C57/B6 الحية للحصول على خلايا وحيدات النوى BM تليها الحصاد BM التقليدية من نفس الماوس بعد التضحية. الخلايا وحيدة النواة BM حصلت عليها طريقتين ثم تم تحليلها من قبل (1) التحليل الخلوي للخلايا BM، (2) تحديد التكرار النسبي للخلايا الجذعية / السلف المكونة للدم (HSPCs)، و (3) فيفو السابقين ثقافة HSPCs فرزها. في الأخير التجربة،-النسب السلبية Sca1 + ج-KIT تم فرز + (LSK) خلايا من خلايا وحيدات النوى التي حصل عليها تطلع BM وكذلك من الحصاد BM التقليدية. 150 خلايا LSK التي حصل عليها كل طريقة وبعد ذلك في وسائل الإعلام مطلي شبه صلبة تحتوي على ميثيل السيتوكينات-النخاعي محمر لمدة 7 أيام في مكررة التقنية. البيانات هو مبين في الشكل 1 A، B يوضح أن أنواع ونسب مماثلة من الخلايا الأكبر وHSPCs شوهد من قبل المورفولوجي وتحليل تدفق cytometric باستخدام إما الفخذ تطلع BM BM أو الحصاد التقليدية.

من أجل تحديد كميا نسبة LSK والخلايا الاصلية النخاعي ينظر التقليدية مع الحصاد نخاع العظم الفخذي مقابل نخاع العظام، وقارنا نسبة LSK والنائب مجموعات سكانية فرعية كما تردد من إجمالي الخلايا الحية في 3 تطلعات مستقلة والمحاصيل نخاع التقليدية. هذه البيانات، المعروضة في الشكل 1C، يكشف عن انخفاض في LSK والنائب مجموعات سكانية فرعية من نخاع العظام التي جمعتها تطلع الفخذ بالمقارنة مع الحصاد نخاع التقليدية (على الرغم من أن هذا الفرق لم يكن كبيرا لأية مجموعة من السكان إحصائيا).

أسفر فرز الخلايا LSK متبوعا فيفو السابقين الثقافة في ميثيل في أعداد مماثلة مستعمرة وأنواع الخلايا التي تم الحصول عليها عن طريق الفخذ تطلع نخاع العظام والحصاد BM التقليدية (كما هو موضح في الشكل 1D). أنواع مستعمرة وحظ وتشمل تعداد كفو-GEMM (ومحببة، كرات الدم الحمراء، الوحيدات، megakaryocyte حدة تشكيل مستعمرة)، كفو-GM (ومحببة، الوحيدات مستعمرة تشكيل وحدة)، وBFU-E (محمر وحدة تشكيل تنفجر).

الشكل 1
الشكل 1. نخاع العظم الفخذي (BM) تطلع في الفئران الحية لتسهيل فحص محتويات نخاع دون التضحية الفئران. (A) رايت بالغيمزا الملطخة cytospins الخلايا وحيدات النوى الحصول عليها من خلال BM تطلع الفئران الحية. ويمكن الحصول على حوالي 0.4-0.8 × 10 6 خلايا وحيدات النوى في كل الطموح الفخذ الفردية. هو موضح هنا عادة ما نخاع محتويات wildtype 6 أسابيع الفئران C57/B6 القديمة التي تم الحصول عليها بواسطة طموح BM الفخذ (يمين) مقابل التقليدية العزلة الخلية BM من خلال التضحية من الفئران (يسار) (شريط النطاق يمثل 10 ميكرون). (B) تطلع الفخذ BM توفر عدد كاف من الخلايا للتقييممنة الجذعية المكونة للدم من / السلف مقصورة كما هو موضح هنا (اليمين: خلايا من BM نضح؛ من الزمن: الخلايا التي حصلت عليها من نخاع الحصاد من الفئران ضحى). -النسب السلبية هيئة السلع التموينية-1 + ج-KIT + (LSK) الخلايا التي تحتوي على الخلايا الجذعية المكونة للدم، فضلا عن النسب السلبية هيئة السلع التموينية-1-C-KIT + الأسلاف النخاعي وأنواع فرعية على النحو المحدد من قبل CD34 وFcγR التعبير وقد تم تحليل (بوابة الوالد يعيش ، خلايا النسب السلبية). النسب المئوية أظهرت الرجوع إلى في المئة من الخلايا داخل البوابة. (C) الكمي لLSK (خلايا، السلف النخاعي (MP) الخلايا، والأسلاف النخاعي المشتركة (النسب السلبية هيئة السلع التموينية-1-C-KIT + CD34 + FcγR المتوسطة +)، الخلايا الاصلية-محببة بلعم (النسب السلبية هيئة السلع التموينية-1-C-KIT + CD34 + FcγR +)، والخلايا الاصلية-النواء محمر (النسب السلبية هيئة السلع التموينية-1-C-KIT + CD34-FcγR)، كما تردد من الخلايا الحية من الحصاد نخاع التقليدية (ن = 3) والفخذ تطلع نخاع العظام (ن = 3). أشرطة الخطأ تمثل معيار ديviation. (D) والصور، ممثل ميثيل مستعمرة فحص النتائج بعد أسبوع واحد من الطلاء 150 خلايا الدم النخاعي في LSK / محمر يحتوي على ميثيل (أعلاه) وأعداد وأنواع المستعمرات وحظ باستخدام خلايا LSK من كل أسلوب. أنواع مستعمرة وحظ وتشمل تعداد كفو-GEMM (ومحببة، كرات الدم الحمراء، الوحيدات، النواء وحدة تشكيل مستعمرة)، كفو-GM (ومحببة، الوحيدات مستعمرة تشكيل وحدة)، وBFU-E (محمر وحدة تشكيل تنفجر). الرجاء الضغط هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

المسلسل الطموح BM هو إجراء روتيني حاسمة لتحقيق السريرية للاضطرابات الدموية في البشر. القدرة على إجراء أخذ العينات المسلسل شابهه من BM في الفئران لتوصيف التركيب الخلوي ومكونات BM طوال التجارب المطولة هو بالمثل قيمة للغاية. هذا الإجراء مفيد لتوصيف وHSPC دون التضحية الماوس ولكن أيضا للكشف عن وجود أنواع الخلايا إضافية في BM في الحالات التي قد لا تكون محتويات الدم المحيطي عاكسة للخلايا المقيمين في BM. وقد استخدم المسلسل الطموح BM بشكل فعال جدا لهذا الغرض في وقت لاحق في رصد وجود خلايا الإنسان xenografted في الفئران المناعة على سبيل المثال 3. بالنظر إلى أن 0.4-0.8 × 10 6 خلايا عادة استرجاع مع كل طموح BM، وهذه الخلايا يمكن استخدامها لعدد من الأغراض بما في ذلك تحليل الخلوي (الشكل 1A)، ودياتدفق معرفي الخلوي (الشكل 1B)، وتدفق cytometric فصل الخلايا تليها زيادة استخدام المصب من الخلايا التي تم فرزها بما في ذلك ثقافة الخلايا (الشكل 1C)، واستخراج الحمض النووي، واستخراج البروتين لفحوصات موجهة نحو توصيف البروتين من أعداد الخلايا محدودة، وأبعد من ذلك زرع من استخراج الخلايا. في نفس الوقت، من المهم أن نلاحظ أن عدد HSCs استرجاع في كل الطموح الفخذ محدودة بسبب العدد الكلي للخلايا استرجاع في هذا الإجراء. على سبيل المثال، النظر في تعريف HSCs كما هو والنسب السلبية Sca1 + + cKIT CD150 + CD48-CD244 الخلايا، وتواتر HSCs ما يقرب من 10 HSCs/100، 000 الخلايا 7. بناء على هذا التردد، ومن المتوقع أن يتم استرجاع مع كل إجراء تطلع حوالي 40-80 HSCs. أيضا، كما لوحظ في الشكل 1C، وتواتر LSK والخلايا الاصلية هو أقل من ذلك، وإن كان لا تصل دلالة إحصائية، في نخاع العظامث الخلايا التي تم الحصول عليها عن طريق الفخذ تطلع نخاع العظام مقارنة مع التقليدية الحصاد نخاع العظام. نعتقد يرتبط هذا الانخفاض النسبي في LSK وتردد السلف ينظر مع الطموح بالنسبة إلى العمليات الجراحية الحصاد نخاع العظم للتلوث مع الدم المحيطي الذي يحدث مع الفخذ تطلع نخاع العظام. وتجدر الإشارة إلى هذه القيود من الفخذ تطلع نخاع العظم في تقييم السكان الخلية نادرة في نخاع. واحدة علما إضافية هي أن قمنا بإجراء هذا الإجراء عادة في الفئران من 6 أسابيع من العمر أو أكثر. ونحن نعتقد أن هذا الإجراء سيكون بشكل متزايد تحديا تقنيا مع الفئران أقل من 6 أسابيع من العمر.

كما يناسب هذا الأسلوب جيدا لتقييم الخيمرية من BM بدلا من الدم المحيطي في سياق تجربة إعادة تنافسية مستمرة. في هذه المقايسات، يتم اختبار القدرة الوظيفية للفي شهادة الثانوية العامة من مجموعة التجريبية من الفئران ضد عدد مجموعة معروفة من شهادة الثانوية العامة و# 8217؛ ق مع قراءات كونها هامشية الخيمرية الدم وكذلك من الخيمرية في شهادة الثانوية العامة (انظر مراجعة من قبل Purton وآخرون 8). الخيمرية من الدم المحيطي قد النقيض من الخيمرية في BM إذا الاضطرابات التي تؤثر على المكونة للدم نتيجة مقصورة الخلايا الجذعية في ضعف تمايز في HSPC في ناضجة الخلايا الدموية. بالنظر إلى أن لم يتم تأسيس نهائية تكون الدم حتى 16 أسابيع على الأقل بعد زرع 9 والتي الخيمرية قد تتغير حتى بعد فترات أطول من الوقت 10، والتقنيات التي تسهل الوصول في وقت سابق إلى المقصورة HSPC مثل يتضح هنا قد يكون من المفيد بشكل خاص. في مثال واحد مؤخرا، وزرع الخلايا BM تنافسية من الفئران مع متماثل الحذف بعد الولادة من Dnmt3a بواسطة Challen وآخرون. كشفت خفض الخيمرية من الفئران Dnmt3a الصفرية في الدم المحيطي ولكن زيادة متناقض في شهادة الثانوية العامة الخيمرية من Dnmt3aالصفرية في شهادة الثانوية العامة في BM 11. وكانت هذه النتيجة تدل على وجود خلل تمايز Dnmt3a - / - في شهادة الثانوية العامة على الرغم من الزيادة في التجديد الذاتي. وعلاوة على ذلك، كان ينظر هذه النتيجة فقط في التضحية توقيت المتلقي الفئران زرعها في المسلسل تجارب زرع تنافسية على فترات كل 16 أسابيع. لذا المقايسات التي تسمح لأخذ العينات من الخلايا BM بالتوازي مع الدم الطرفية دون الحاجة إلى التضحية من الفئران والسماح المراقبة المستمرة من الفئران هي مفيدة للغاية.

كما ذكر في وقت سابق، والتقنية أثبتت هنا هو مماثل لتقنية تستخدم للحقن intrafemoral مباشرة في تجويف نخاع الفضاء من الفئران 2،3. وقد ثبت الحقن المباشر intrafemoral أن تكون مفيدة جدا في تسهيل دراسات طعم أجنبي الإنسان في الفئران حيث تم عرضه على توفير وتحسين engraftment في مقارنة مباشرة مع الحقن في الوريد 6،12،13. هذه التقنية قد تسمح حتىإد لتحديد فئة لم تكن معروفة سابقا من ملء بسرعة HSCs الإنسان.

حاليا ليس من المعروف ما إذا كان أخذ العينات المتكررة من BM في الفئران من خلال نفس الفخذ يؤثر على التركيبة الخلوية من BM أو عدد خلايا نخاع استرجاع مع تطلعات المتكررة. وعلاوة على ذلك، فإن الحد الأدنى من الوقت المستحسن لإجراء عمليات الشفط تكرار من نفس الفخذ ليست معروفة. عند تنفيذ المتكررة الفخذ تطلعات نخاع العظم في نفس الماوس، بالتناوب عظم الفخذ تستخدم لطموح BM وتنفيذ المسلسل حرف هاء BM على فترات> 2 أسابيع. ركزت بذل المزيد من الجهود على فهم الآثار المحتملة، إن وجدت، مسلسل الفخذ إجراءات تطلع BM في الفئران على فترات محددة على أنواع وعدد الخلايا التي تم استردادها من BM أو بنية BM المطلوبة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

والكتاب ليس لديهم ما يكشف.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
PBS PAA H15-002
Bovine serum albumin PAA K41-001
ACK lysis buffer Homemade in 1 L. Adjust pH 7.2 ~ 7.4 and filter sterile with 0.22 μm vacuum filter.
8.3 g Ammonium chloride Fisher Scientific A661-500
1 g Potassium bicarbonate Fisher Scientific P184-500
200 μl 0.5 M EDTA pH 8 Gibco 15575-038
RPMI 1640 PAA E15-842
0.5 ml Tuberculin syringe 27.5 G Becton Dickinson 305620
Sterile cell strainer 70 μm Fisher Scientific 22363548
Isoflurane, USP Attane NDC:66794-014-25
Blunt-end needle Stemcell Technologies 28110
PrecisionGlide needle 23 G Becton Dickinson 305193
3 ml Syringe Luer-Lok tip Becton Dickinson 309657
Non-tissue culture treated plate, 6 Well Becton Dickinson 351146
12 x 75 mm 5 ml tubes  Becton Dickinson 352054 FACS staining
12 x 75 mm 5 ml tubes with cell-strainer cap Becton Dickinson 352235 FACS staining
NK1.1 APC-Cy7 Biolegend 108723
CD11b APC-Cy7 Biolegend 101225
CD45R (B220) APC-Cy7 Biolegend 103223
CD3 APC-Cy7 Biolegend 100222
Ly-6G and Ly-6C (Gr-1) APC-Cy7 Biolegend 108423
Ter119 APC-Cy7 Biolegend 116223
CD19 APC-Cy7 Biolegend 302217
CD4 APC-Cy7 BioLegend 317417
CD117 (c-KIT) PE BioLegend 105808
Ly-6A/E (Sca-1) PE-Cy7 Biolegend 122513
CD34 APC Biolegend 128612
CD16/32 e450 eBioscience 48-0161-82
DAPI (4′,6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride) Sigma-Aldrich 32670
MethoCult GF M3434 STEMCELLTECHNOLOGIES 3434 For methocellulose culture
Carprofen Crescent Chemical Company C11045850 1 dose (5mg/kg) 
Flow cytometer, LSRFortessa Becton Dickinson
Puralube vet ointment (sterile petrolatum ophthalmic ointment) Dechra-US 17033-211-38

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Sundberg, R., Hodgson, R. Aspiration of bone marrow in laboratory animals. Blood. 4, 557-561 (1949).
  2. Schmitz, M., Bourquin, J. -P., Bornhauser, B. C. Alternative technique for intrafemoral injection and bone marrow sampling in mouse transplant models. Leukemia & lymphoma. 52, 1806-1808 (2011).
  3. Warner, J. K., et al. Direct evidence for cooperating genetic events in the leukemic transformation of normal human hematopoietic cells. Leukemia. 19, 1794-1805 (2005).
  4. Chiu, P. P., Jiang, H., Dick, J. E. Leukemia-initiating cells in human T-lymphoblastic leukemia exhibit glucocorticoid resistance. Blood. 116, 5268-5279 (2010).
  5. Guan, Y., Gerhard, B., Hogge, D. E. Detection, isolation, and stimulation of quiescent primitive leukemic progenitor cells from patients with acute myeloid leukemia (AML). Blood. 101, 3142-3149 (2003).
  6. Nolta, J. A. The gold standard improves: a better assay for HSCs. Blood. 106, 1141-1142 (2005).
  7. Kiel, M. J., et al. SLAM family receptors distinguish hematopoietic stem and progenitor cells and reveal endothelial niches for stem cells. Cell. 121, 1109-1121 (2005).
  8. Purton, L., Scadden, D. Limiting factors in murine hematopoietic stem cell assays. Cell stem cell. 1, 263-270 (2007).
  9. Dykstra, B., et al. Long-term propagation of distinct hematopoietic differentiation programs in vivo. Cell stem cell. 1, 218-229 (2007).
  10. Jordan, C., Lemischka, I. Clonal and systemic analysis of long-term hematopoiesis in the mouse. Genes & development. 4, 220-232 (1990).
  11. Challen, G., et al. Dnmt3a is essential for hematopoietic stem cell differentiation. Nature genetics. 44, 23-31 (2012).
  12. Hess, D. A., et al. Selection based on CD133 and high aldehyde dehydrogenase activity isolates long-term reconstituting human hematopoietic stem cells. Blood. 107, 2162-2169 (2006).
  13. Mazurier, F., Doedens, M., Gan, O. I., Dick, J. E. Rapid myeloerythroid repopulation after intrafemoral transplantation of NOD-SCID mice reveals a new class of human stem cells. Nat Med. 9, 959-963 (2003).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics