Fare Adrenal Kromafin Cell Hücre bağlı Kapasitans Ölçümler Yöntemleri

Neuroscience

Your institution must subscribe to JoVE's Neuroscience section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Varga, K. T., Jiang, Z., Gong, L. W. Methods for Cell-attached Capacitance Measurements in Mouse Adrenal Chromaffin Cell. J. Vis. Exp. (92), e52024, doi:10.3791/52024 (2014).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Introduction

Sinaptik nörotransmiter içeren sinaptik veziküllerin ekzositozu aracılık eder ve bu veziküller uzun vadede nöronal iletişim sağlamak için sinir terminal içinde yerel endositik geri dönüşüm geçmesi gerekmektedir. Sinaptik vezikül döngüsü, bir bütün olarak, hücresel haberleşme daha iyi bir kavramaya yönelik gerekli bir temel teşkil eden moleküler makine anlaşılması, sinaptik iletim temel rolü göz önüne alındığında. Hücre modeli sistemleri arasında, adrenal kromafin hücre sinaptik vezikül geri dönüşüm altında yatan moleküler makineler içine en kesin içgörü bazı sağlamıştır. Ekzositoz, nörotransmitter açıklamasında son adım, son derece okudu ve adrenal chromaffin hücrenin 1,2 kullanımı yoluyla incelenmiştir. Aslında, salgı granüllerin oluşumuna, hedefleme, yerleştirme ve füzyon orkestra moleküler oyuncu büyük çapta div uygulanmasından tespit edilmiştirkromafin hücreleri 1 erse teknikleri. Ayrıca, Ekzositoz katılan protein makine tek-vezikül çözümü için izin için bir fırsat sağlayarak, kromaffin hücre vezikül füzyonu 3 soruları yanıtlamak için güçlü bir model kalır.

Hücre bağlı kapasitans ölçümleri ilk Ekzositoz 3 sırasında tek vezikül füzyon çözümünde kullanılmıştır. ~ Çapı 60 mil gösterilmiştir kadar küçük veziküller Ekzositoz hücre konfigürasyonda bağlı olarak 4-7 yama kelepçe tekniğiyle birlikte hücre zarı admitans ölçümleri ile tespit edilebilir. Admittans bir devre ya da cihaz, bir akımın akmasına izin verecek kadar kolay bir ölçüsü olarak tanımlanır; Bu empedansının tersidir. Böylece, giriş ölçümler membran kapasitans anlaşılmasını sağlamak. Bu, plazma membranı içine veziküler membranın eklenmesi ile gerçekleştirilir; Bu birleşme yüzeyinde değişiklikler ortayaalan 8. Her bir füzyon vezikül membran kapasitans 9,10 kademeli bir artışa neden olur. Ayrıca, bu geçiri ölçüm membran iletkenliğini ve eksositotik olay 3 sırasında füzyon gözenek iletkenlik sağlar. Bu tekniğin Ekzositoz sırasında tek vezikül kinetiği belirlenmesi eşsiz bir araç sağladı gibi, bizim laboratuvar son zamanlarda tek kesecikler 11,12 endositozu algılamak için bu kavramı başvurdu.

Bizim özel ilgi birçok hücreleri 13 ve nöronal terminalleri 14,15 sinaptik vezikül endositoz için bir ana yol olarak temel bir temizlik bileşeni olarak kabul edilmiştir klatrin aracılı endositoz (CME), olduğunu. CME Ancak kinetiği nedeniyle tekil endositik olayların izlenmesinde teknik sınırlamalara tam olarak anlaşılamamıştır, biyolojik olarak önemli olduğu bilinmektedir. Kromaffin hücreleri ve nöronlar arasındaki 1 ekzositik mekanizmalarında benzerlikler dikkate alındığında, plchromaffin hücreleri fisyon mekanizmalar büyük olasılıkla nöronlarda sinaptik vezikül endositoz için geçerli olabilir ausible. Hücre bağlı kapasite ölçümleri bireysel endositik olayları izlemek ve en yöntemleri çözemiyorsanız fisyon kinetik analiz için kullanılmıştır. Bizim hücre bağlı kayıtlarında, 20 kHz'de bir sinüs dalgası tutma potansiyelinden üzerine biner, ve çıkış akımı yükseltici kilitli iki fazdan, başka bir kanalda bir kanal ve membran kapasitans membran iletkenliği ayrılır 16- 18. Membran iletimini ve kapasitanstaki değişimlere kaynaktan, tek bir olasılıkla kabarcık kıstırma önce plazma zarına içe vezikül bağlayan boru şeklindeki zar boynuna karşılık fisyon-gözenekli, kinetiğini hesaplayabilir. Topluca, bu teknik bize CME sırasında vezikül fisyon düzenleyici mekanizmaları incelemek için fırsat verir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

NOT: Chicago Illinois Üniversitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanan tüm prosedür, Ulusal Sağlık Enstitüleri kurallarına uygun olarak gerçekleştirilmiştir.

1. Çözümleri ve Kültür Medya Hazırlıklar

  1. Altı aya kadar -20 ° C'de tüm çözümleri tutun. 3 aya kadar 4 ° C 'de kültür ortamı tutun.
  2. DMEM ile 100 ml ITSX (İnsülin-Transferrin-Selenyum takviyesi-) 1 Pen-strep çözeltisi ve 1 ml kültür ortamı karıştırılarak 100 ml hazırlayın.
  3. DMEM, 250 mi, 100 mM CaCl2, 2.5 ml ve 50 mM EDTA, 2.5 ml enzim çözeltisi karıştırarak hazırlayın.
  4. DMEM, 225 ml FBS, 25 ml, 625 mg albumin ve 625 mg tripsin inhibitörü karıştırılarak inaktivasyonu çözeltisi hazırlayın.
  5. 154 mM NaCl, 5,6 mM KCl, 5,0 mM HEPES, 3.6 mM NaHCO3, 5,6 mM glikoz, bir Locke çözeltisi hazırlayın. NaOH ile 7.3 pH ayarlayın.
  6. 50 mg / ml 'lik bir poli-D-lisin (PDL) çözeltisi hazırlayın. Kat lamelleri, 1 mg / ml 'lik bir nihai konsantrasyon kullanın.
  7. 140 mM NaCI, 5 mM KCI, 2 mM CaCI2, 1 mM MgCl2, 10 mM HEPES-NaOH, 10 mM glukoz, hücre dışı bir çözelti hazırlayın. ~ 310 nmol / kg 'lık bir ozmolarite NaOH ile 7.3 pH ayarlayın.
  8. 50 mM NaCI, 100 mM TEACl, 5 mM KCI, 2 mM CaCI2, 1 mM MgCl2, 10 mM HEPES, bir pipet çözeltisi hazırlayın. ~ 290 nmol / kg 'lık bir ozmolarite NaOH ile 7.3 pH ayarlayın.

2. Adrenal İzolasyon

  1. Büyük ve küçük diseksiyon makas ve forsepsle iki çift bir çift otoklava. Bütün bu işlemler sırasında eldiven giyin ve bir buz kovası diseksiyon tepsiye yerleştirin.
  2. Gün, 0-3 alındığı fareler kullanır. Dekapitasyon basınçlı CO 2 tankı ile hayvan öldürülür.
  3. Cervi'de gelen omurga aşağıdaki yavru geri kesmek için makas küçük kümesi yararlanın cal bölgeyi kaudale. Deri altında yüzeysel kesilir ve vücut boşluğuna delmek değil emin olun.
  4. Sonraki uzak omurga soyma cilt bu kaslar omurga net bir görünümü var maruz böylece. Buradan, servikal spinal kord bir transectional kesim yapmak ve daha sonra omurga kenarları boyunca iki paralel kesim yapmak.
  5. Hayvanın ana gövdesini tutan forseps bir çift, omuriliğe kapmak ve böbrekler maruz dek omurga geri soymak için forseps diğer çifti kullanın.
  6. Bu noktada, böbreklerin üstüne böbreküstü bezleri görselleştirmek. Daha sonra dikkatli bir Locke çözeltisi ile doldurulmuş bir konik tüp içine her hayvandan iki bezi yerleştirin.
    NOT: Bazen bezleri forseps sadık olacaktır. Bu durumda, yavaşça Forseps ve Locke çözelti içine bezlerinin bertaraf edilmesine yardımcı olmak için başka bir çift forseps kullanır. Bezleri 2 saat kadar bu durumda muhafaza edilebilir.
e "> 3. Doku sindirimi

  1. Bu arada, kabarcık, 15 dakika boyunca% 5 CO2 +% 95 O2 ile enzim solüsyonu kullanımdan önce. Dengelenmiş çözüm pembemsi / turuncu renk içine bir parlak pembe renk döner emin olun.
  2. 20-25 ünite / ml 'lik bir nihai konsantrasyonda taze olarak kabarcıklar halinde enzim çözeltisine papain ekleyin. , Papain ile enzim çözeltisi içerisinde 37 ° C'de 40-60 dakika boyunca, her bir hayvandan bezlerinin her çift inkübe edin.
  3. Her tüpe inaktivasyon çözeltisi% 75 ilave edildikten sonra 10 dakika boyunca 37 ° C'de inkübe edin. Bu inkübasyon papain enzim aktivitesini eylemsiz hale getirir.
  4. Inaktivasyonu çözeltisi ile 10 dakika süreyle inkübe edildikten sonra, yavaşça yeni etiketli tüpe aktarın ve bezleri bezleri kültür ortamı ile 3 kez yıkayın.

4. Hücre Ayrılma ve Kaplama

  1. Yıkama işleminden sonra, kültür ortamı içine 200 ul iki bezi yerleştirin ve sonra yavaşça bezleri ve titreaşağı 200 ul pipet pipet ucu ile artık çözelti içinde dokusunun büyük bir parçası kalmayıncaya kadar.
    Not: titre zaman, 200 ul pipet ucu aşağıya doğru bir kuvvet ile tüpün alt bezleri ve muhafaza ve yavaşça doku girerler. , Yavaş, sürekli darbeleri kullanmak için belirli olun asla hızlı veya ani pipetlerken.
  2. 450 ul kadar kültür ortamı toplam hacmi getirmek için ek bir 250 ul kültür ortamı ekleyin.
  3. Plaka, bir 60 x 15 mm kültür tabağına yerleştirilir yedi ila 12 mm PDL önceden kaplanmış lamelleri, her biri üzerine, bu, hücre-ihtiva eden çözelti, 60 ul.
  4. Bir kez kaplama, hücre canlılığı için bir ortam sağlamak için 30 dakika boyunca% 5 CO 2 sürekli bir akış / arz ile 37 ° C ayarlanır ve muhafaza kuvöz içine koyunuz. İnkübasyondan sonra, yavaşça kültür kabı içine önceden ısıtılmış kültür ortamı 5 ml ilave edilir ve 24 saat süreyle tekrar inkübatör içine yemeğin geri hücre ataşe öncesinded kayıtları.
    Not: Hücreler tipik olarak, en fazla 4 gün boyunca elektrofizyolojik kayıtları için kullanılabilir.

5. Hücre Tanımlama ve gigaohm Seal Oluşumu

  1. Hücre dışı çözelti içine 12 mm'lik bir örtücü cam yerleştirin. Bütün böbreküstü bezleri hücre hazırlanması için kullanılan bu yana, kortikal hücreleri (küçük ve) hücreleri kromafin daha sönük kültür içinde kromaffin hücreleri (kahverengimsi / bej rengi ve mükemmele yakın bir dairesel formlu, genellikle çok parlak (Şekil 1) karıştırın.
  2. Programlanabilir P-97 çektirmenin kullanarak dört aşamada yama pipetler çekin. Daha sonra cam kapasitenin azaltılması ve yardımcı olacak bir erimiş mum içine pipet ucu batırın pipet içerisinden ucu "darbe-away" lehçe bu balmumu ateş.
    Not: Yama pipet çözeltisi ile doldurulan, yama pipetler genellikle yaklaşık 2 M? Bir dirence sahiptir.
  3. Birkaç metre içinde hücreye yakın yama pipet Yaklaşımicrons. Hücreye bağlı bir konfigürasyon elde etmek için, hücreye yakın yama pipet yaklaşması sırasında herhangi bir hafif hücre deformasyon için bak. Bir GΩ mühür elde edilinceye kadar nazik vakum uygulayın.

6. Hücre-Ekli Kapasite Kayıtlar

  1. Bir mühür ortaya GΩ sonra, EPC-7 artı yama-kenet büyütücü kullanımı ile hücre bağlı kayıt yapmak ve iki fazlı bir analog kilidi amplifikatör (ekipman ekli tabloya bakınız). Kilit-amplifikatör 50 mV (rms) genlik ve 20 kHz frekans ile bir sinüs dalgası uygulayın.
  2. 1 msn zaman sabiti ve 24 db de kilit-amplifikatör çıkış filtre ayarlayın. Kilit-amplifikatör gibi nazik emme bakliyat tarafından üretilen geçici kapasite değişiklikleri sadece yama iletkenlik (Re) iz içine hiçbir projeksiyon ile yama kapasitans (Im) iz görünür ki (Şekil 2) fazını ayarlayın.
    NOT: bir yeniden sistemin kalibrasyonu için ayrıntıları bakın19 Ference.
  3. "Aşağıya doğru" adımlar (Şekil 3) ile tipik kapasite değişiklikleri belirlemek.
    NOT: Bir katı kayıt Tek veziküllerini içselleştirerek gösterir birçok aşağıya doğru adımlarla bir "merdiven" tipi benzerliği olarak görülecektir. Yama işlemi eylem akım tipik olarak en hücrelerinden kaydedilmiş olacağından mekanik uyarım olarak hizmet vermektedir.
  4. Bu dosya içinde aa / gg / yıl ve kendi bireysel numaralandırma (xx) gibi her hücre bağlı kayıt: Bireysel tarih dahil klasörler gibi dosyaları isim.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Hücre canlılığı ve gigaohm sızdırmazlık kalitesinin hücre bağlı kapasitans kayıtlarının kalitesini belirlemek için önemlidir. Bu nedenle, önceki elektrofizyolojik kayıtları ve tipik yaşayabilir hücrelerin, Şekil 1 'de gösterilmiştir etkili ve verimli bir hücre kültürünü temin etmek önemlidir. Teori ve zaman yüksek kaliteli bir yalıtım elde edilir gigaohm yararlı olacaktır. Bir açık protokol Aşama 5.3 'te tarif edildiği gibi Patch-Pipeti hücre yaklaşmaktadır hücre deformasyon görüldüğünde, yüksek kaliteli bir sızdırmazlık elde etmek için daha iyi bir olasılığı vardır. 3 ile bağlantılı çok sayıda aşağıya doğru adımlarla membran kapasitans tipik bir kaydını gösteren Şekil Tek vezikül endositoz.

Şekil 1
Canlı fare adrenal kromafin hücreleri Şekil 1. örnekleriHücre kültürü sonra 24 saat. 3 canlı kromaffin hücrelerine Oklar. , bu rakamın büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Şekil 2
Hücre bağlı kayıtlarında Şekil 2. Faz ayarı. Başlangıç ​​aşaması ayarında, nazik emmelerde geçici hem kapasitans (Im) ve iletkenlik (Re) izleri değişiklikleri ve Re izlemesi projeksiyonlar neden bir 23 ° faz tarafından iptal edilir shift. , bu rakamın büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Şekil 3,
Şekil 3. Tipik bir cTek vezikül endositozla ilişkili birden aşağı adımlarla, ile kayıt ell bağlı kapasitans. , bu rakamın büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Hücre bağlı kapasite ölçümleri başarılı bir şekilde yüksek kalitede ses kayıtları elde etmek için bazı kritik adımları gerektirir: böbreküstü bezlerinden hazırlanmış 1) canlı ve sağlıklı hücreleri; Lamelleri 2) PDL kaplama; 3) gigaohm yalıtım oluşturma; 4) sistem gürültü seviyesi; ve 5) faz düzeltme.

Hayvan ameliyatı için bir potansiyel yapabilirsiniz değişiklikler en uygun dirayeti cerrahi yaklaşımı ayarlamak ve diseksiyon sırasında zarar görmesini önlemektir. Elektrofizyolojik kayıtlar için kullanılacaktır hücreleri böbreküstü bezinin medulla münhasıran gelmek gibi Ayrıca, bulma ve böbreküstü bezleri kaldırılması yeterli uygulama zorunludur. Enzimi sindirimi için,% 5 CO2 +% 95 O 2 solüsyonu köpürtülmesi ile enzim çözeltisinin denge sağlaması için önemlidir. Silindire bağlı boru hiçbir sızıntıları ile yeterli ve sıkı olduğundan emin olun. Ayrıca, emin olun ki son,n çözümü düzgün bütün 15 dakika köpüren zamanında yerleştirilir; Bu uygun bir hava akışını yönlendirmek üzere borunun sonunda körleştirilmiş olan bir 20 G iğne ucunun yerleştirilmesi ile elde edilebilir. Dahası, bu adım için ek süre tüp içinde çözüm taşma gibi hava akımı o kadar güçlü değil sürece zarar vermez. Hücre titrasyon uygulama alacak bir başka önemli bileşenidir. Aşırı titre halinde hücrelerin çoğunluğu hasar görebilir; titrasyon yeterli değilse tersine, ayrışmış dokulardan çok az tek bir izole hücre olacaktır. Etkili titre için, titre gibi bezleri hafifçe 200 ul pipet geçirilir emin, aşağı 7-8x kadar pipetle 200 ul pipet kullanmak ve.

PDL kaplama için, bir zaman lamelleri yeterli kaplama sağlamak için 3 saat kadar lamelleri PDL kuluçka süresini uzatabilirsiniz. PDL kaplama eklemek hücrelerin kromafin için kritikve hücre kaplama sonra lamelleri üzerinde büyür. PDL kaplama yeterli değilse, hücrelerin en gigaohm yalıtım oluşturma zorlaştıracaktır lamel, ayırmak edilecektir.

Yama teknik özel bir süreç gibi hücre kayıtları bağlı, her zaman değiştirilebilir ve geliştirilebilir. Yumuşak ve ince, emme ve hücre yama pipet temas içinde olduğunda gigaohm conta oluşumunu kolaylaştırarak kritiktir. Çok fazla emme ucu yama hücre temas yok edecek ve aşırı durumlarda, hücreler, Patch-pipetinin içine emilebilir. Bu çok kolay bir bütün hücre yapılandırma içine değiştirerek veya bir çok büyük dönen çok az bir direnç tarafından osiloskopta görülecektir; uygulama, yüksek kaliteli gigaohm conta oluşumunu elde etmek için büyük önem taşımaktadır.

Yüksek sızdırmazlık direnci hücre bağlı kayıtlarında gürültü seviyesini en aza indirmek için kritik olsa da, aşağıdaki iki aşama da vardırTek endositik olayları çözmek için gürültü seviyesinin düşürülmesi önem: (1) Yama pipet çözümde, TEACl voltaj kapılı K + kanallarının bloke etmek için kullanılır; (2) pipet ucu yapışkan balmumu ile kaplanır ve pipet içindeki mum ısı taşlama işlemi ile kaldırılabilir.

Protokol aşama 6.2 detaylı faz ayarlama kayıt sürecinin ilk aşaması kurmak için kritik olsa da, bu adım ideal olmayabilir. Bu nedenle, bireysel olaylar için fisyon-gözenek analizi sırasında faz düzeltme gerçekleştirmek için önemlidir. -65 MV bir dinlenme membran potansiyelinde, tam-hücre kayıtları tipik bir fare kromafin hücresi, fare kromafin hücrelerinin membran iletimini ~ hesaplar 5 pF bir giriş kapasitansı ve 500 M?, Bir giriş direnci olduğunu göstermektedir 0,4 pS / fF. Bu 1 fF bir kapasite büyüklüğü ile bir endositik olay ~ 0.4 pS membran iletkenliği net zarara neden olacağını ima eder. Bu değer en kıyasla ihmal edilebilirypical 50-100 pS iletkenlik değişim zarı hücre bağlı kayıtları endositik fisyon-gözenekli kapanması ile ilişkili. Bu nedenle, bizim faz düzeltme bize böyle öncesi ve sonrası fisyon-gözenek kapatma aynı seviyede olduğunu zar iletkenliği taban çizgisini ayarlamak için izin verir eminiz; Bu süreç bizim veri analizi içine <% 1 hata getirebilir.

Özet olarak, burada açıklanan protokol hücre bağlı kapasitans kayıtları model sistem olarak fare kromafin hücreleri kullanılarak tek bir vezikül endositoz izlemek için kullanılabilir gösterilmiştir. Bu teknik bir endositoz sırasında vezikül fizyon için düzenleyici mekanizmaların analiz etmeyi sağlar.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının olmadığını beyan ederim.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Poly-D-Lysine Sigma P0899
DMEM 15066024 Keep out of UV
Dulbecco’s Modified Eagle Medium Life Technologies
Cover Glass Carolina Biological 633029 12 mm
Penicillin Streptomycin Life Technologies 15140122 100 ml
Insulin-Trans-Sel-X Life Technologies 51500056 Only thaw on ICE!
Papain Worthington 39S11614
EPC-7 plus patch amplifier HEKA
BNC-2090 data acquisition board National Instruments
Igor data acquisition software Wavemetrics
P-97 pipette puller Sutter Instruments
Microforge Scientific Instruments
Borosilicate glass capillaries Sutter Instruments B150-110-10 Outer diameter: 1.5 mm
Inner diameter: 1.10 mm
Length: 10 cm

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Rettig, J., Neher, E. Emerging roles of presynaptic proteins in Ca++-triggered exocytosis. Science. 298, 781-785 (2002).
  2. Gong, L. W., et al. Phosphatidylinositol phosphate kinase type I gamma regulates dynamics of large dense-core vesicle fusion. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102, 5204-5209 (2005).
  3. Lindau, M., Alvarez de Toledo, G. The fusion pore. Biochimica et Biophysica Acta. 1641, 167-173 (2003).
  4. Albillos, A., et al. The exocytotic event in chromaffin cells revealed by patch amperometry. Nature. 389, 509-512 (1997).
  5. Lollike, K., Borregaard, N., Lindau, M. Capacitance flickers and pseudoflickers of small granules, measured in the cell-attached configuration. Biophys J. 75, 53-59 (1998).
  6. Lollike, K., Borregaard, N., Lindau, M. The exocytotic fusion pore of small granules has a conductance similar to an ion channel. The Journal of cell biology. 129, 99-104 (1995).
  7. Dernick, G., Gong, L. W., Tabares, L., Alvarez de Toledo, G., Lindau, M. Patch amperometry: high-resolution measurements of single-vesicle fusion and release. Nat Methods. 2, 699-708 (2005).
  8. Neher, E., Marty, A. Discrete changes of cell membrane capacitance observed under conditions of enhanced secretion in bovine adrenal chromaffin cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 79, 6712-6716 (1982).
  9. Gong, L. W., de Toledo, G. A., Lindau, M. Exocytotic catecholamine release is not associated with cation flux through channels in the vesicle membrane but Na+ influx through the fusion pore. Nature Cell Biology. 9, 915-922 (2007).
  10. Gong, L. W., Hafez, I., Alvarez de Toledo, G., Lindau, M. Secretory vesicles membrane area is regulated in tandem with quantal size in chromaffin cells. The Journal of Neuroscience : the Official Journal of the Society for Neuroscience. 23, 7917-7921 (2003).
  11. Yao, L. H., et al. Actin polymerization does not provide direct mechanical forces for vesicle fission during clathrin-mediated endocytosis. The Journal of Neuroscience : the Official Journal of the Society for Neuroscience. 33, 15793-15798 (2013).
  12. Yao, L. H., et al. Synaptotagmin 1 is necessary for the Ca2+ dependence of clathrin-mediated endocytosis. The Journal of Neuroscience : the Official Journal of the Society for Neuroscience. 32, 3778-3785 (2012).
  13. McMahon, H. T., Boucrot, E. Molecular mechanism and physiological functions of clathrin-mediated endocytosis. Nature reviews. Molecular Cell Biology. 12, 517-533 (2011).
  14. Murthy, V. N., De Camilli, P. Cell biology of the presynaptic terminal. Annu Rev Neurosci. 26, 701-728 (2003).
  15. Granseth, B., Odermatt, B., Royle, S. J., Lagnado, L. Clathrin-mediated endocytosis is the dominant mechanism of vesicle retrieval at hippocampal synapses. Neuron. 51, 773-786 (2006).
  16. Rosenboom, H., Lindau, M. Exo-endocytosis and closing of the fission pore during endocytosis in single pituitary nerve terminals internally perfused with high calcium concentrations. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 91, 5267-5271 (1994).
  17. MacDonald, P. E., Eliasson, L., Rorsman, P. Calcium increases endocytotic vesicle size and accelerates membrane fission in insulin-secreting INS-1 cells. Journal of Cell Science. 118, 5911-5920 (2005).
  18. Zhao, Y., Fang, Q., Straub, S. G., Lindau, M., Sharp, G. W. Hormonal inhibition of endocytosis: novel roles for noradrenaline and G protein G(z). J Physiol. 588, 3499-3509 (2010).
  19. Debus, K., Lindau, M. Resolution of patch capacitance recordings and of fusion pore conductances in small vesicles. Biophys J. 78, 2983-2997 (2000).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics