Author Produced

הכנת מיכה נתמכת יפידים bilayers לרזולוציה גבוהה מיקרוסקופיה אופטית הדמיה

Bioengineering

Your institution must subscribe to JoVE's Bioengineering section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

אנו מציגים שיטה של ​​הכנת bilayers שומנים נציץ נתמך למיקרוסקופיה ברזולוציה גבוהה. מיכה הוא שקוף ושטוח בקנה מידה אטומי, אבל כמעט ולא משתמש בהדמיה בגלל טיפול בקשיים; ההכנה שלנו תוצאות בתצהיר גם של הגיליון נציץ, ומפחיתה את החומר המשמש בהכנת bilayer.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Matysik, A., Kraut, R. S. Preparation of Mica Supported Lipid Bilayers for High Resolution Optical Microscopy Imaging. J. Vis. Exp. (88), e52054, doi:10.3791/52054 (2014).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

bilayers שומנים נתמך (SLBs) נמצא בשימוש נרחב כמודל ללימוד תכונות קרום (הפרדת פאזות, אשכולות, דינמיקה) והאינטראקציה שלה עם תרכובות אחרות, כגון תרופות או פפטידים. עם זאת מאפייני SLB שונים בהתאם לתמיכה בשימוש.

טכניקות המשמשות בדרך כלל להדמית SLB ומדידות הן מיקרוסקופיה הקרינה מולקולה בודדת, FCS ומיקרוסקופ כוח אטומי (AFM). מכיוון שרוב מחקרי הדמיה אופטיים מתבצעים על תמיכת זכוכית, תוך AFM דורש משטח שטוח מאוד (בדרך כלל נציץ), תוצאות של טכניקות אלה לא ניתן להשוות באופן ישיר, שכן המאפיינים של הטעינה והחלקות של חומרים אלו משפיעים במידה רבה דיפוזיה. למרבה הצער, ברמה הגבוהה של מיומנות ידנית הנדרשת לחיתוך והדבקת פרוסות דקות של נציץ לשקופית הזכוכית מציגה משוכת לשימוש השגרתי של נציץ להכנת SLB. למרות שזה יהיה שיטת הבחירה, נציץ והכין כזהמשטחים לעתים קרובות בסופו של דבר להיות לא אחיד (גלי) וקשה לתמונה, במיוחד עם מרחק עבודה קטן, עדשות צמצם מספריות גבוהות. כאן אנו מציגים שיטה פשוטה לשחזור להכנת משטחים נציץ דקים ושטוחים לתצהיר שלפוחית ​​שומנים בדם והכנת SLB. בנוסף, קאמרי המותאם אישית שלנו דורש כמויות קטנות מאוד של שלפוחית ​​להיווצרות SLB. התוצאות הכוללות ההליך בייצור יעיל, פשוט וזול של משטחי bilayer שומנים באיכות גבוהה, כי הם ישירות דומים לאלה המשמשים במחקרי AFM.

Introduction

המטרה הכללית של הפרוטוקול הנוכחי היא להראות שיטה להכנת משטחים נציץ להדמיה ברזולוציה גבוהה של שומנים בדם bilayers נציץ נתמך (SLBs) באמצעות מיקרוסקופ אופטי סך הקרינה ההשתקפות פנימית (TIRFM) או confocal, אשר יכול גם להיות משולב עם כוח אטומי מיקרוסקופ (AFM).

SLBs הוא מודל המשמש באופן נרחב למחקרים רבים של אשכולות שומנים בדם, הפרדה פאזות, דינמיקה של מרכיבי bilayer או האינטראקציות שלהם עם פפטידים, חלבונים או תרכובות אחרות 1-5. מצעים שונים עשויים לשמש להיווצרות SLB (כלומר זכוכית, נציץ, דו תחמוצת הצורן, פולימרים), בהתאם לאופי של המחקר 4,6-8. מחקרי קרום אופייניים להסתמך על שיטות הדמיה המבוססת על מיקרוסקופיה, כגון TIRFM וAFM. לפיכך, להדמית TIRFM, משטח זכוכית הוא בחירה אופיינית בגלל הזכוכית היא שקופה. הכנת הזכוכית היא קלה יחסית, ואיכות התוצאות היא בעיקרנקבע על ידי פני השטח יסודיים ניקוי לפני התצהיר של שלפוחית ​​שומנים. AFM בשל הרזולוציה הגבוהה הצירית דורש משטחים נציץ. מיכה הוא מינרל סיליקט, עם קרוב ל מחשוף בסיס מושלם. לפיכך, נציץ ביקע הטרי הוא שטוח אטומי, המאפשר תצפית של הפרשי גובה קרום אפילו בקנה המידה תת ננומטר 9.

מחקרי דיפוזיה תוך שימוש בשיטות כגון מתאם ספקטרוסקופיה פלואורסצנטי (FCS), אחת מולקולת מעקב (SMT), והתאוששות הקרינה לאחר photobleaching (FRAP) הראו עם זאת, כי דינמיקת הקרום השומני תלויה במידה רבה בסוג של משטח עליו הם מופקדים, לפיה זכוכית ותציץ יכול לתת תוצאות שונות באופן נרחב 10,11. הבדלים אלה כוללים לא רק את מקדמי דיפוזיה של בדיקות הקרום, אלא גם את זיהוי של אוכלוסיות נפרדות של חלקיקים לשדר עם תעריפים שונים, ואולי גם מעבר בין מדינות שונות.

כך,ההשוואה הישירה של תוצאות שהושגו תוך שימוש בטכניקות TIRFM וAFM היא לעתים קרובות בעייתית, אלא אם כן אותו המשטח (במקרה נציץ זה) משמש. אמנם יש כמה מחקרים שבם ההדמיה bilayer TIRFM וAFM נערכה על אותו המשטח נציץ 12,13, נציץ ומשמש רק לעתים נדירות למיקרוסקופיה אופטית, בעיקר בגלל בעיות טיפול. הכנה נציץ דורשת חיתוך ביד לעלונים דקים, אשר לאחר מכן מודבקים על coverslip באמצעות דבק אופטי 12. שיטת אולם זה דורשת קצת תרגול כדי להשיג תוצאות משביעות רצון. יתר על כן, המשטחים שהושגו הם לעתים קרובות גליים ועבים, מה שהופך אותם קשה לשימוש עם מרחק עבודה נמוך, עדשות צמצם מספריות גבוהות.

משטחי מיכה מוכנים כפי שתואר בפרוטוקול זה הם דקים מאוד (~ 220 מיקרומטר, כולל עובי coverslip של 170 מיקרומטר) ושטוח מאוד, הימנעות "גלי", שהוא קריטי להדמיה ברזולוציה גבוהה מוצלחת. הם יכולים לשמשעבור setups TIRFM או confocal. יתר על כן, ניתן להעביר את אותו הדגימות לAFM, ואפילו צילמו בו זמנית עם TIRFM / confocal ו AFM. שילוב של שתי טכניקות אלו מאפשרת קשר ישיר של דיפוזיה התנהגות עם מבנה קרום bilayer 14. מכיוון שמשטחים נציץ הם ביקע טריים, שהם נקיים ואינם דורשים זמן רב, בצורה גרועה לשחזור, והליכי ניקוי שעלול להיות מסוכנים (פרוטוקולי ניקוי זכוכית בדרך כלל כוללים כימיקלים כגון פתרון Piranha, חומצה גופרתית, נתרן / אשלגן הידרוקסידי). הרכבה של חדר קטן, גם תואר בפרוטוקול, מפחית את עוצמת הקול של שלפוחית ​​הנדרשת להיווצרות bilayer יעילה פחות מ50 μl. לבסוף, את כל התהליך של הרכבה משטח הוא לא זמן רב (הכנה לוקחת פחות מ 30 דקות), ואינה דורשת רמה גבוהה של מיומנות ידנית, כפי שעושה מחשוף נציץ קונבנציונלי והדבקה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. מיכה ושקופיות הכנה

  1. מקום מס '1 וחצי (0.17 מ"מ) coverslips למדף מכתים.
  2. Sonicate במשך 30 דקות בחומר ניקוי 2% ב60 ° C.
  3. שטוף 20 פעמים עם מים deionized.
  4. הסר שקופיות באמצעות מלקחיים ומכה יבש באמצעות אוויר או חנקן דחוס.
  5. חותכים גיליון נציץ לתוך 10 x 10 מ"מ חתיכות מרובעות באמצעות מספריים או סכין גילוח.
  6. חותכים כל חתיכה נציץ לתוך 2-3 עלונים דקים באמצעות סכין גילוח.
    הערה: שלב זה דורש שימוש בסכין חד.

2. עצרת מיכה וקאמרי הרכבה

  1. שקופית נקייה מיקרוסקופית זכוכית עם אתנול.
  2. עלון דבק נציץ לחתוך בשלב 1.6 לשקופית זכוכית באמצעות דבק אופטי. דבק צמיגות נמוך מומלץ לפזר טוב יותר את הירידה ומדביק את המיקה.
  3. לרפא תחת מנורת UV, 10 דקות.
    הערה: הדבק הוא נרפא על ידי אור UV עם ספיגה מקסימלית בטווח של 350 ל380nm ואנרגיה המומלצת requIRED לריפוי מלא הוא 4.5 J / 2 סנטימטר. עם זאת, מקורות אור שונים יכולים לשמש לצעד זה (ראה חומרים המסופקים על ידי ספק דבק).
  4. לחשוף את משטח נציץ נקי על ידי הסרת כמה השכבות הראשונות עם סקוטש.
  5. מניחים טיפה קטנה (~ 20 מיקרומטר) של דבק אופטי על גבי המשטח נציץ.
    הערה: בשלב זה, דבק צמיגות גבוה עם רמת autofluorescence הנמוכה מומלץ. הניסיון שלנו הראה כי שימוש בשילוב של נמוך (שלב 2.2) ודבקי צמיגות גבוהים מגביר את היעילות באופן משמעותי מפיצול נציץ (שלב 2.7).
  6. מניח בעדינות coverslip נוקה לאחרונה על הירידה של דבק, הימנעות בועות אוויר, בואו נתפשר על דקות 1.
  7. לרפא תחת מנורת UV, 10 דקות.
    הערה: לאחר שלב זה, את הכריך של שקופיות זכוכית, נציץ וcoverslip ניתן לאחסן לתקופה ארוכה יחסי של זמן (עד מספר שבועות). להמשיך לשלב הבא ממש לפני הכנת SLB בפועל, כדי לוודא שהמשטח נציץ הוא טרי.
    הערה: הדבק הוא נרפא על ידי אור UV עם ספיגה מקסימלית בטווח של 350 ל380nm והאנרגיה המומלצת הנדרשת לריפוי מלא הוא 4.5J/cm 2. עם זאת, מקורות אור שונים יכולים לשמש לצעד זה (ראה חומרים המסופקים על ידי ספק דבק).
  8. באמצעות סכין exacto, בעדינות לרדת מאופני coverslip משקופיות זכוכית הצד כפי שמוצג בסרטון. ברוב המקרים, שכבה דקה ושטוחה של נציץ תישאר מחוברת לcoverslip. מיכה מצורף לשקופית זכוכית ניתן לעשות שימוש חוזר (חוזר מצעד 2.4).
  9. בדוק את איכות פני השטח על ידי עין בלתי מזוינת או תחת מיקרוסקופ לנתח, על מנת לוודא כי שכבה נציץ עדיין דבוקה לcoverslip ולא הוסרה לחלוטין במהלך הפיצול בשלב 2.8. מה שהופך את שריטה קטנה עם מלקחיים או לנתח מחט יעזור להבחין בין הדבק שבו יש עקביות שונה במובחן מיציץ.
  10. הוצא את אטם גומי ממיליליטר בקבוקון כובע 1.5 ולהדביק את הכובע הפוך אל פני השטח באמצעות אופטידבק או לק, ולרפא עם מנורת UV, או שאוויר יבש 10 דקות, בהתאמה.
    הערה: אם המדגם הוא מוכן לבו זמנית אופטי (TIRFM או confocal) עם ההדמיה AFM, מיליליטר בקבוקון כובע 1.5 עשוי להיות קטן מדי כדי לעלות על ראש AFM על הבמה מיקרוסקופ. במקרה זה, הכובע עשוי להיות מוחלף על ידי כל O-טבעת פלסטיק בקוטר גדול יותר, מתאימה לראש AFM גובר. במקרה כאשר הניסוי דורש הסרת המכסה מבלי לפגוע במשטח נציץ, גריז סיליקון יכול לשמש במקום דבק או לק.

3. גיבוש נתמך יפידים bilayer (SLB)

  1. הנח פתרון יפוזום מוכן טרי לתוך תא עם משטח. ההיקף המינימאלי הנדרש להיווצרות SLB הוא ~ 30 μl.
    הערה: לפרטים נוספים על יפוזום והיווצרות SLB, עיין בפרוטוקולים שפורסמו, כגון כגון התיק ואח' 2014 15..
  2. להמשיך עם היווצרות SLB באמצעות פרוטוקול רצוי. במהלך דגירה והדמיה, החדר יכול להיות ממוקם בחום לחסום או במה מיקרוסקופ מחוממת כדי לשמור דרושה כדי לשמור על השומנים בשימוש מעל לטמפרטורת ההתכה שלהם טמפרטורה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

דיפוזיה ההתנהגות של בדיקות שומנים בדם ניאון בSLBs היא שונה בהתאם למצע. TIRFM בשילוב עם טכניקת SMT הוא שיטה יקר המאפשר הדמית תנועות חלקיקים וחילוץ מקדמי דיפוזיה שלהם. אותות מולקולה אחת של בדיקה Sphingomyelin-ATTO647N לשדר בdOPC bilayer (1,2-dioleoyl-SN-glycero-3-phosphocholine) נתמך על זכוכית ואציץ מוצגים במצורפת דמות אנימציה. המשטח נציץ נערך על פי הפרוטוקול שהוצג כאן. כדי להעריך עיוותים אופטיות, רוחב מלא במחצית המרבית (FWHM) נמדד ובממוצע לכל פונקצית 20 נקודת התפשטות (כוחות הביטחון הפלסטיניים) באמצעות ImageJ גודל כוחות הביטחון הפלסטיניים הפסיפס 2D תוסף 16,17. FWHM המדוד לזכוכית ואציץ היה 441nm ו464nm בהתאמה (איור 1). הבדל 22nm ברזולוציה בין הדמיה על זכוכית ואציץ הוא לא משמעותי. בשני המקרים, centroid כוחות הביטחון הפלסטיניים מכל מולקולת ניאון אחד יכול להיות ממוקםlized במסגרות רצופות, וצמוד למסלולי חלקיקים לאורך זמן עם פסיפס החלקיקים Tracker ImageJ תוסף 16,17. איור 2 מראה מסלולי מדגם של חלקיקים לשדר פני bilayer נתמך על שני המשטחים. התקות הממוצעים מרובעות (MSDS) של חללית הניאון לשדר בקרום dOPC נתמך על זכוכית ואציץ היו זממה באיור 3. בשל קיומן של אוכלוסיות מרובות שני מודל אוכלוסייה היה בשימוש כדי לחלץ מקדמי דיפוזיה מהירים ואיטיים, על פי שיטה המתוארת על ידי שוץ (איור 4, איור 5) 18. מקדמי דיפוזיה ופיצוליהם חולצו באמצעות תוכנת TrackArt 19 ומסוכמים בטבלה 1.

התוצאות מדוגמא זו להוכיח את קיומן של שתי מדינות נפרדות של החללית לשדר: מהירה ואיטי. מקדם דיפוזיה של האוכלוסייה מהירה הוא בערך 1 .5 פעמים גבוהות יותר על נציץ מאשר על זכוכית. הרכיב האיטי לעומת זאת, הוא כמעט ללא תנועה על זכוכית (<0.01 מיקרומטר 2 / sec), בהשוואה ל D של ~ 1/10 האוכלוסייה מהירה רק על נציץ.

איור 1
1. גודל איור ממוצע כוחות הביטחון הפלסטיניים. פרופיל עוצמת כוחות הביטחון הפלסטיניים ממוצע ל20 נקודות נמדדו על זכוכית (קו שחור מוצק) ומיקה (קו אדום מקווקו). הרוחב המלא במחצית המרבית (FWHM) של העצמה המנורמלת לזכוכית ואציץ היה מוערך להיות 441 ננומטר ו464 ננומטר, בהתאמה. הבדל 22nm עולה כי אין ירידה משמעותית ברזולוציית הדמיה בין שני משטחים אלה. פרופיל עוצמת כוחות הביטחון הפלסטיניים נמדד באמצעות תוסף פסיפס כוחות הביטחון הפלסטיניים 2D כלי ImageJ 16,17. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

s = "jove_content"> איור 2
איור 2. מסלולים לדוגמא. מסלולי מדגם SM-ATTO647N לשדר בbilayer השומנים dOPC נתמך על זכוכית () ומיקה (ב '). על bilayer הזכוכית נתמך, הבדיקה לעתים קרובות משותקת על פני השטח, מדי פעם עוברת למצב המהיר לשדר. בדיקות לשדר בbilayer נציץ נתמך, בניגוד לכך, הם משותקים על פני השטח רק לעתים נדירות. במקום זאת, הם נוטים לעבור בין המדינה לשדר מהירה ואיטית. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 3
איור 3. Mean התקות מרובעות. מתכוון לעקור מרובע מפעלים של חלקיקי SM-ATTO647N לשדר על זכוכית (■) ומיקה (●) נתמכת bilayer dOPC. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 4
איור 4. התפלגות הסתברות מצטברת מתאימה. התפלגות הסתברות מצטברת (CPD) של התקות מרובעות ומתאימה למודל דיפוזיה דו מעריכי (שתי אוכלוסייה) של חלקיקי SM-ATTO647N לשדר על זכוכית () ומיקה (ב ') תמכה bilayers dOPC. הפצות והתקפים מוצגים רק לזמן בפיגור החמישי (t = 50 msec Δ). חישובים ועלילות מתקבלים באמצעות TrackArt 19 תוכנה.כחוש וגבוה "> לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 5
חלקות איור 5. MSD וחלקות שבריר. MSD למהיר (r 1 2) ואיטי (r 2 2) לשדר אוכלוסייה וחלק קטן מהאוכלוסייה מהירה (F 1) מחושבת מהתקפי CPD. תוצאות מוצגות בנפרד עבור חלקיקי SM-ATTO647N לשדר על זכוכית () ומיקה (ב ') תמכה bilayers dOPC. חישובים וחלקות התקבלו באמצעות TrackArt 19 תוכנה. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

אוכלוסיית 1 (מהיר) אוכלוסיית 2 (לאט)
D 1 (מיקרומטר 2 / sec) חלק (%) D 2 (מיקרומטר 2 / sec) חלק (%)
זכוכית 1.840 ± 0.031 65.19 ± 0.56 0.006 ± 0.001 34.81 ± 0.56
נציץ 53.88 ± 0.26 0.176 ± 0.002 46.12 ± 0.26

טבלת 1. מקדמי דיפוזיה. סיכום של נתונים סטטיסטיים דיפוזיה. מקדמי דיפוזיה לאוכלוסיות איטיות ומהירה ופיצוליהם. חישובים בוצעו בתוכנת TrackArt תוך שימוש במודל שתי אוכלוסייה. מסלולים הוכרו ומקושרים באמצעות תוסף פסיפס החלקיקים Tracker ImageJ.

איור אנימציה:. דיפוזיה מולקולות בודדת בסרט בהילוך האיטי TIRFM של Sphingomyelin-ATTO647N לשדר בbilayer dOPC נתמך על זכוכית (משמאל) ומיקה (מימין). בר סולם הוא 5 מיקרומטר.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

פרוטוקול זה מתאר שיטה להכנת משטחים נציץ חלקים ודקים לתצהיר bilayer שומנים והדמיה ברזולוציה גבוהה. הטכניקה דורשת מיומנויות ידניות מינימליות, מוגבלות בעיקר לפירוק זהיר של כריך הזכוכית נציץ זכוכית (שלב 2.8), שהוא קריטי לקבלת משטח נציץ באיכות גבוהה. בדיקה של נציץ ביקע טרי נדרשה תמיד, בשלב זה, שכן הוא מאפשר ליציץ להתנתק מהדבק האופטי ללא ביקוע, והשאירה את האזורים חשופים של דבק אופטי. שעלול לגרום לתצהיר לא רצוי של bilayer בדבק במקום במיקה. המשטח נציץ הוכן באמצעות השיטה המתוארת היא עם כמה יוצאים מן הכלל במקביל אל פני השטח coverslip, אם לשפוט לפי איכות ההדמיה האופטית הגבוהה והאחידה שהשגנו; ולכן אנו לא רואים צורך באימות נוספת.

יכול להיות מותאם אישית השלב האחרון בהרכבה הקאמרית. ההדרכה וידאו תערוכותמכסה פלסטיק בקבוקון זכוכית 1.5 מיליליטר המשמש כחדר, אולם זה יכול להיות תחליף עם כל אובייקט של צורה דומה וממדים רצויים, למשל עבור ההדמיה AFM-TIRFM/confocal בו זמנית, שבו לדוגמא עם בעלה יש להתאים לראש AFM . הרכבה של תא מותאם אישית ניתן לדלג, אם הדמיה היא שיש לבצע שימוש בתקן, תא לתא מתכת 35 מ"מ. אולם במקרה הזה, יש לו מכסה זכוכית עגולה 25 מ"מ לשימוש, ונפח הרבה יותר גדול של פתרון יפוזום היה נדרש להיווצרות SLB.

התוצאות שהוצגו כאן מראות כי הדמיה של מולקולה בודדת ומעקב ניתן לעשות זאת בקלות על משטחים נציץ מאוד שטוחים דקים מספיק כדי להיות נוח להדמית TIRFM, על פי הפרוטוקול להכנת שטח המתואר. אותה ההכנה יכולה להיות מיושמת על טכניקות אחרות, כוללים מיקרוסקופיה אופטית ברזולוציה גבוהה, כגון ספקטרוסקופיה הכוללת הפנימית מתאם הקרינה השתקפות (TIR-FCS). חשוב לציין, הכנת SLBsared באותה הדרך (או אפילו בדיוק אותו דגימות) ניתן להשתמש בשני מערכי הניסוי, קריטריון הכרחי להשוואה ישירה של תוצאות שהתקבלו בשיטות שונות, למשל AFM, SMT, FCS, וFRAP.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

יש המחברים אין לחשוף.

Acknowledgements

יש הסופרים לא תודות.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Bath Sonicator Fisher Scientific FB15051
Coverslips 24 x 50 mm - No H1.5 Marienfeld 102222
DOPC Avanti Polar Lipids 850357
Hellmanex III (detergent) Hellma Analytics 320.003
Mica V-1 Grade SPI Suppliers 1872-CA
Optical Adhesive (high viscosity) Norland Products NOA63
Optical Adhesive (low viscosity) Norland Products NOA60
Sphingomyelin-ATTO647N AttoTec AD 647N-171
UV lamp Synoptics Ltd. GelVue GVM20 The lamp was set to 100% power

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Giocondi, M. -C., et al. Surface topography of membrane domains. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes. 1798, 703-718 (2010).
  2. Garcia-Saez, A. J., Schwille, P. Surface analysis of membrane dynamics. Biochim Biophys Acta. 1798, 766-776 (2010).
  3. Plochberger, B., et al. Cholesterol slows down the lateral mobility of an oxidized phospholipid in a supported lipid bilayer. Langmuir. 26, 17322-17329 (2010).
  4. El Kirat, K., Morandat, S., Dufrêne, Y. F. Nanoscale analysis of supported lipid bilayers using atomic force microscopy. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes. 1798, 750-765 (2010).
  5. Szmodis, A. W., Blanchette, C. D., Longo, M. L., Orme, C. A., Parikh, A. N. Thermally induced phase separation in supported bilayers of glycosphingolipid and phospholipid mixtures. Biointerphases. 5, 120-130 (2010).
  6. Strulson, M. K., Maurer, J. A. Microcontact printing for creation of patterned lipid bilayers on tetraethylene glycol self-assembled monolayers. Langmuir. 27, 12052-12057 (2011).
  7. Satriano, C., et al. Plasma oxidized polyhydroxymethylsiloxane--a new smooth surface for supported lipid bilayer formation. Langmuir. 26, 5715-5725 (2010).
  8. Bag, N., Sankaran, J., Paul, A., Kraut, R. S., Wohland, T. Calibration and limits of camera-based fluorescence correlation spectroscopy: a supported lipid bilayer study. Chemphyschem: a European Journal of Chemical Physics and Physical Chemistry. 13, 2784-2794 (2012).
  9. Singh, S., Keller, D. J. Atomic force microscopy of supported planar membrane bilayers. Biophysical Journal. 60, 1401-1410 (1991).
  10. Przybylo, M., et al. Lipid Diffusion in Giant Unilamellar Vesicles Is More than 2 Times Faster than in Supported Phospholipid Bilayers under Identical Conditions. Langmuir. 22, 9096-9099 (2006).
  11. Scomparin, C., Lecuyer, S., Ferreira, M., Charitat, T., Tinland, B. Diffusion in supported lipid bilayers: influence of substrate and preparation technique on the internal dynamics. Eur Phys J E Soft Matter. 28, 211-220 (2009).
  12. Oreopoulos, J., Yip, C. M. Combined scanning probe and total internal reflection fluorescence microscopy. Methods. 46, 2-10 (2008).
  13. Shaw, J. E., Slade, A., Yip, C. M. Simultaneous in situ total internal reflectance fluorescence/atomic force microscopy studies of DPPC/dPOPC microdomains in supported planar lipid bilayers. J Am Chem Soc. 125, 11838-11839 (2003).
  14. Skaug, M. J., Faller, R., Longo, M. L. Correlating anomalous diffusion with lipid bilayer membrane structure using single molecule tracking and atomic force microscopy. J Chem Phys. 134, (2011).
  15. Bag, N., Yap, D. H., Wohland, T. Temperature dependence of diffusion in model and live cell membranes characterized by imaging fluorescence correlation spectroscopy. Biochimica et Biophysica Acta. (2013).
  16. Sbalzarini, I. F., Koumoutsakos, P. Feature point tracking and trajectory analysis for video imaging in cell biology. J Struct Biol. 151, 182-195 (2005).
  17. Linkert, M., et al. Metadata matters: access to image data in the real world. J Cell Biol. 189, 777-782 (2010).
  18. Schutz, G. J., Schindler, H., Schmidt, T. Single-molecule microscopy on model membranes reveals anomalous diffusion. Biophys J. 73, 1073-1080 (1997).
  19. Matysik, A., Kraut, R. TrackArt: the user friendly interface for single molecule tracking data analysis and simulation applied to complex diffusion in mica supported lipid bilayers. BMC Research Notes. 7, (2014).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics