Author Produced

Mus nyretransplanterte: Modeller av allograft-avstøting

* These authors contributed equally
Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Tse, G. H., Hesketh, E. E., Clay, M., Borthwick, G., Hughes, J., Marson, L. P. Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection. J. Vis. Exp. (92), e52163, doi:10.3791/52163 (2014).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Introduction

Vellykket nyretransplantasjon for behandling av nyresvikt ble først beskrevet i 1955 mellom eneggede tvillinger 1, siden da har det blitt en revolusjonerende behandling for pasienter med terminal nyresvikt i hele verden, og tilbyr både forbedring i lengde og livskvalitet to. Men langsiktig graft overlevelse har vært hemmet av en rekke patologiske prosesser som resulterer i kronisk allograft skade tre.

Avvisning av transplantert nyre hos mennesker er fortsatt en viktig årsak til sykelighet, til tross for betydelige forbedringer i immunosupporessive regimer. Sikte på å utvikle en musemodell for nyretransplantasjon er å nøye replikere prosessen og patologi funnet i menneskelig nyretransplantasjon fire. Skoskiewicz et al. Først beskrev musemodell for nyretransplantasjon i 1973 fem. Selv avanserte mikrokunnskaper er nødvendig, er det en verdifull tOOL av flere grunner: musen genomet har blitt godt karakterisert og det er et stort utvalg av eksperimentelle metoder og teknikker tilgjengelig for musestudier.

Mange grupper ved hjelp av musemodell for nyretransplantasjon har brukt den transplanterte nyre som et livsunderstøttende organ, men i andre studier og i vår beskrevne metodikk en av mottakerens mus har native nyrer er igjen in situ for varigheten av eksperimentet 4. Fordelen er at musen gjennomgår en enkelt anestesi og operasjon og dermed redusere sykelighet til musen og risikoen for å dø av en annen prosedyre. I tillegg musen ikke lider av de negative virkningene av gradvis nyresvikt.

Selv om modeller av allogen avvisning eksistere i andre organer som hjerte og hud, disse er ikke alltid direkte relevant for nyretransplantasjon. Det er dokumentert at disse modellene lokke fram ulike moduser og dydynamikk for avvisning, for eksempel den tiden løpet av avvisning i hjerte allograft og renal allograft skiller seg vesentlig i visse belastningskombinasjoner seks. Vi har beskrevet akutte nyre allograft avvisning mønstre i BALB / c givere til ikke-transgene FVB / NJ mus, denne modellen viste cellular mediert skade med opphopning av T-celler og makrofager 7. Alternativt har vi også beskrevet en modell av kronisk allograft skade som viser interstitiell fibrose og tubulær atrofi, dette resulterer fra transplantere en nyre fra C57BL / 6 BM12 givere inn C57BL / 6 mottakere, som disse musene er preget av en enkelt MHC klasse II loci mis -match åtte.

Flere aspekter av transplantasjon har blitt studert ved hjelp av musemodell for nyretransplantasjon inkludert akutt avvisning, cellulær og humoral avvisning, iskemi reperfusjonsskade, og trialing nye terapeutiske midler. Vi har endret den kirurgiske technique å redusere driftstiden og forbedre den enkle operasjonen. Spesielt har vi beskrevet samtidig giver og mottaker preparatet og en forenklet vaskulær anastomose teknikk ved å benytte en kontinuerlig aorta patch anastomose. Denne videoen og manuskript vil gi viktige poeng til hjelp i etableringen av denne teknikken.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Egnede nasjonale og lokale institusjonelle etikk bør være på plass før du utfører dyreforsøk. Spesielt i Storbritannia de følgende forsøk ble foretatt under Dyr (vitenskapelige prosedyrer) Act 1986 Hvor to microsurgeons er tilgjengelig for å operere samtidig giver kirurg skal utføre trinn 1,1 til 1,16 og deretter 3,1 til 3,5, mens mottakeren kirurgen utfører 2.1-2.8 . For en enkelt operatør fremgangsmåten kan følges sekvensielt.

1. Donor Forberedelse

Merk: Fremgangsmåten som presenteres her er for en donor C57BL / 6 BM12 og mottaker C57BL / 6 hannmus i alderen 8 til 16 uker gamle med en kroppsvekt større enn 20 g. Men denne prosedyren kan reproduserbart utført på en rekke forskjellige musestammer. Dataene presenteres i representative resultater delen ble innhentet fra C57BL / 6, C57BL / 6 BM12 og BALB / c mus.

  1. Gjennomføre prosedyrer using sterile kirurgiske instrumenter og forbruksartikler (autoklaveres), med mål å holde driftsområde så sterilt som mulig. Utfør donor preparatet samtidig med mottakerens preparatet hvis to kirurger er tilgjengelige.
  2. Anesthetize mus med en intraperitoneal injeksjon (31G nål) av medetomidin (0,5 mg / kg) og ketamin-hydroklorid (200 mg / kg). Dette resulterer i en anestesiplanet som er opprettholdt i 4 timer å gi nok tid for hele fremgangsmåten å bli utført. Supplerende anestesi er ikke nødvendig.
  3. Kontroller at musen er bedøvet (ingen respons på tå klype).
  4. Barbere musa mage og fjerne løst hår med klebrig tape.
  5. Plasser musen på ryggen på en drapert sterilt oppvarmet matte og løst immobilisere lemmer med sterile maskeringstape.
  6. Overvåk musen gjennom hele prosedyren for forbrenninger. Hvis det er mulig bruke en ikke-elektrisk varmekilde.
  7. Påfør et øye smøremiddel og SAnitize bukveggen med en fortynnet jod løsning.
  8. Lag en midtlinjen snitt i buken å gå inn i bukhulen og sette inn en 3 cm Calibri mage retractor.
  9. Påfør varmet saltvann for å holde tarmen og kirurgiske området fuktig og unngå unødvendig tørking av indre organer.
  10. Dekk til mus med sterile forheng og flytte tarmene til operatørens venstre (høyre muse) for å avsløre aorta, vena cava og venstre nyre.
  11. Påfør en trappet forcep til magen og trekk overlegent å avsløre de store fartøy og venstre nyre fullt. Pakke fuktig sterile vattpinner (2 mm x 2 mm) inn i magen for å trekke vev bort fra operasjonsområdet, som lever lobes, sædblærene og tarm.
  12. Isoler venstre nyre fra omkringliggende adventia, fett og venstre binyrene i bukhulen ved omsvøp dissekere bindevevet ved hjelp av fin spiss tang. Plasser stengt tips av tang mellom de områdene som Need å bli separert og sakte la forcep tips å åpne for å dissekere plass.
  13. Isoler venstre nyre blodåre ved ligering og deretter dele venstre binyre blodåre og venstre gonadal vene med 9 / O nylon. Plasser sutur nær den renale vene.
  14. Ligere og dividere ureter med 7 / O silke sutur nær blæren forlater suturendene lang. Disse lange suturendene vil bli brukt når nyrene er høstet og er nødvendige for ureteric anastomose.
  15. Å mobilisere og fullt dissekere aorta og vena cava overlegent og dårligere til nyrearterien og venen bruke fin spiss tang for å omsvøp dissekere lymfekar og fett fra fronten og sidene av skipene.
  16. Finn vevet planet mellom aorta og vena cava og sakte spre tang. Sakte åpner tips av de fine tippet tang for å spre vev med minimal smerte.
  17. Knyt en løs 7 / O silke rundt aorta overlegen og dårligere til nyrearterien ved å sende en vinklet bottips tang rundt baksiden av skipene og tegne en sutur gjennom. Disse sting vil bli strammet før nyre gjenfinning å tillate retrograd perfusjon av University of Wisconsin-løsning.

2. Mottaker Forberedelse

Per donor forberedelse, følg trinn 01.02 til 01.08.

  1. Flytt tarmen til operatørens høyre (musens venstre) for å avsløre aorta, vena cava. Dekk tarmen med sterilt saltvann gjennomvåt bomullspinne.
  2. Utfør en riktig nefrektomi ved å ligere høyre nyre arterie og vene sammen med 7/0 silke sutur og deretter dele.
  3. Ligate høyre ureter med 7 / O silke sutur og dividere.
  4. Mobil og fullt dissekere aorta og vena cava inferior i den renale arterie og vene som beskrevet i trinn 1.14 og 1.15. Sikre fullstendig disseksjon mellom aorta og vena cava. Vær nøye med å bevare den interne spermatic arterien som går anterior til vena cava og aorten sammen med det lymfatiske bunten.
  5. Identifiser lumbale fartøy som kjører i retroperitoneum fra vena cava og vene til ryggraden, ligere med 9 / O silke i kontinuitet, er det ikke nødvendig å dele fartøyene.
  6. Identifisere tilstrekkelig plass til å plassere mikrovaskulære klemmer med plass mellom for vaskulære anastomoser.
  7. Administrere intravenøs heparin (5 enheter) via rygg penile blodåre.

3. Donor Nyre Retrieval

Trekk til 7 / O silkeslips som har blitt plassert rundt mindreverdige og overlegen aorta å isolere nyre fra den arterielle sirkulasjonen.

  1. Sette mot retrograd kald 0,2 til 0,5 ml av University of Wisconsin-løsning med en kanyle (31G) i aorta.
  2. Fordel aorta i løpet av suturene, og dele den renale vene på sitt krysset med vena cava for å fjerne nyre og den renale arterie med en lengde på aorta. Dele lumbale fartøyer som oppstår fra aorta, hvis de finnes, without ligation.
  3. Plasser nyrene i kaldt saltvann på en steril vattpinne i en dyrkningsskål.
  4. Avlive donor mus ved cervikal dislokasjon.

4. nyretransplantasjon - Nyre Forberedelse

  1. Lag en aortic patch ved å dele aorta veggen lengde rett overfor nyrearterien. Identifisere eventuelle årehulrom i oppdateringen som må ligert eller unngås når du utfører den arterielle anastomose.
  2. Plasser en 10 / O sutur fra utsiden til innsiden renalåren lumen overlegent og en annen separat sutur inferiorly. Suturene som brukes til å dele opp adrenal venen og gonadal vene kan brukes for å orientere fartøyet.
  3. Plasser nyre i høyre flanke til mottakeren (figur 1.1) og sikre sting er godt posisjonert for å sikre vaskulære anastomoser kan gjennomføres uten sting blir flettet sammen i vattpinner eller andre instrumenter.

5. Nyre Transtering - Vaskulær Anastomose

Påfør mikrovaskulære klemmer først inferiorly så overlegent som omfatter vena cava og aorta.

  1. Gjør en ventomy med en kanyle (31G) ved punktering den fremre vegg av vena cava. Flush blod fra vena cava ved å injisere omtrent 50 pl av 0,9% NaCl.
  2. Widen den venotomy ved hjelp av fin spiss tang ved å åpne dem innenfor venotomy slik at lengden tilsvarer diameteren av donor nyrevenen.
  3. Plasser 10 / O overlegen sutur (som allerede er i lumen av den renale vene) først ved apex av venotomy (figur 1.2) og slutte seg til bakveggen av anastomose i en løpende sutur til mindreverdig apex nås (figur 1.3).
  4. Plasser 10 / O sutur mindreverdig og tie først med en enkel knute (figur 1.4) og deretter binde den løpende sutur fra bakveggen.
  5. Bruke mindreverdig sutur lage forsiden wall av anastomose (figur 1.5) med en løpende sutur og slips til den overlegne sutur slutten på den overlegne apex (figur 1.6).
  6. Opprett en aortotomy ved å plukke opp aorta veggen med pinsett og kutte en elliptisk plaster med en saks (tilnærmet aortotomy bør være en femtedel av omkretsen av aorta og tre ganger den renale arterie lumen i lengde).
  7. Plasser en 10 / O sutur ved den overlegne punktet av aorta plasteret fra utsiden til innsiden (figur 1.7) og passerer gjennom aorta for å binde utenfor karene ved den overlegne apex av aortotomy.
  8. Lag den arterielle anastomose med en løpende sutur starter overlegent (figur 1.8) anastomering donor patch til mottakeren aorta, tar seg ikke å innsnevre anastomosen ved å binde sutur strammer (figur 1.9).
  9. Fjern de underlegne vaskulære klemmer først da den overlegne klemmen til reperfuse nyrene (Figur 1.10 og 1.11). Synlig peristaltikk av ureter kanskje sees dersom tilstrekkelig blodtilførsel til ureter oppnås.

6. nyretransplantasjon - ureteric Anastomose

  1. Dele eventuelle vedlegg i blæren fra bukveggen.
  2. Passere en nål (21G) fra venstre til høyre på blæren gjennom både vegger.
  3. Plasser rette forcep tips i nålen lumen og passerer både tilbake gjennom blæren slik at tang blir nå å gå over fra høyre til venstre ut av venstre side av blæren.
  4. Tegn suturen på donor ureter gjennom blære slik at ureter passerer i den venstre blæren defekten deretter ut av den høyre side.
  5. Suturer adventitia av ureter til adventitia av blæren med tre enkelts avbrutte suturer rundt inngangspunkt med 9 / O sutur nylon på en runde-bodied nål.
  6. Kutt ureter proksimale til ligaturen, og dermed åpne the ureter å tillate urin til å flyte og tillate ureter ende for å trekke inn i kroppen av blæren. Synlig produksjon av urin kan observeres sammen med blødning fra peri-ureter fartøy.
  7. Lukk høyre side blæren defekt med et enkelt avbrutt 9 / O silke sutur.

7. Recovery og postoperativ behandling

Sett på gastrointestinal innvoller i buken i sin opprinnelige orientering og lukk bukveggen ved tilnærmet rectus muskler med 6 / O absorberbare sutur.

  1. Tilnærmet huden med metall hud klipp.
  2. Delvis reversere anestesi med en subkutan injeksjon av atipamazole hydroklorid (10 mL / g).
  3. Administrer analgesi ved subkutan buprenorfin-hydroklorid (0,05 mg / kg), og for fluidstøtte injeksjon 1 ml av subkutan 0,9% NaCl.
  4. Gjenopprette musen i et varmeskap ved 28 ° C i 24 til 48 timer. Observer musen for sykdom opp tilfullføring av forsøket.
  5. Fjern metall hud klipp 7 - 10 dager etter operasjonen.
  6. Når eksperimentet er ferdig avlive musen ved cervikal dislokasjon.
  7. Fjerne og samle kontralaterale nyre og allograft for histologisk analyse.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Nedsatt allograft avvisning kan vurderes ved histologisk analyse av methacarn-fast parafininnstøpte vevssnitt av transplantert nyre (figur 2). Isograft transplantasjon av nyrer mellom syngene muse resulterer i nedsatt iskemisk reperfusjonsskade, men etter 4 uker tubuli har gjenvunnet og er histologisk sammenlignes med innfødte nyrer. Akutt avvisning kan modelleres ved C57BL / 6 nyretransplantasjon inn BALB / c mottakere, innen 1 uke er det diffuse mononukleære celleinfiltrasjon gjennom nyreparenchymet, involverer interstitium, glomeruli og tubuli. Kronisk allograft skade kan modelleres ved C57BL / 6 BM12 nyrer transplantert inn C57BL / 6 mottakere, dette resulterer i de typiske funksjonene som finnes i menneskelig patologi bestående av interstitiell fibrose og gradvis tubule tap. Brutto tubule teller per high-powered feltet (x200 forstørrelse) tillater kvantifisering av den funksjonelle nevronet masse (Fifigur 3), tap av tubuli reflekterer rørformet skade på grunn av avvisning. Interstitiell fibrose kan identifiseres ved hjelp av pan-kollagen flekken picrosirius rød (figur 4). Normal endogen kollagen er observert, men i løpet av kroniske skader nytt kollagen avsettes resulterer i progressiv fibrose. Den kroniske skader blir tydelig mellom 8 og 12 uker etter transplantasjon (figur 5).

En betydelig lærekurve må overvinnes for å etablere modellen (figur 6). Anslagsvis 40 prosedyrer ble utført i gjenvunnet mus før en reproduserbar vaskulær anastomose tid ble nådd med akseptabel overlevelse uten komplikasjoner. Den vanligste årsaken til euthanizing musen skyldtes hind lem lammelse sekundært til lavere lem og ryggmarg iskemi relatert til arteriell trombose, men i vår erfaring systemisk heparization reduserer forekomsten av dette. Mus var rutinemessig monitored henhold til lokalt avtalte kriterier for avslutning av forsøkene. Overlevelse eksperimenter utført i platåfasen av lærekurve resulterte i en gjennomsnittlig vaskulær anastomose tid på 28,9 ± 0,47 min.

Figur 1
Figur 1. diagrammatisk representasjon av vaskulær anastomose teknikk. Blir Donor nyre plassert i den høyre flanken til mottakeren mus. Den giver renalis er anastomosert i en ende-til-side og mote donor renal arterie på en lapp av aorta blir anastomosert til mottakeren aorta.

Figur 2
Figur 2. Representant histologisk rørformet skade i transplantert nyre. Etter fiksering i metyl Carnoyl løsnings vev ble innebygd i parafinfin og vevssnitt av 4μm ble farget av Hemotoxylin og eosin. Ved fire uker etter transplantasjon isograft nyrene ikke oppviser rørformede skade og er sammenlignbare med opprinnelige nyrer i utseende. C57BL / 6 BM12 nyrer transplantert inn BALB / c mottakere gjennomgå akutt rejeksjon med diffuse mononukleær celleinfiltrater (*) og nekrotiske tubuli (**) og tubulitis. C57BL / 6 BM12 nyrer transplantert inn C57BL / 6 resultater i kronisk allograft skade preget av perivaskulær lymfatisk infiltrater (blokk pil ⬆) og interstitiell fibrose og tubulær atrofi (søkk piler ⇧). Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 3
Figur 3. Kvantifisering av rørformet skade i tr ansplanted nyre. Sunn tubuli (definert ved tilstedeværelsen av en intakt basalmembran, intakte tubulære lumen, sunn cytoplasma volum og en opprettholdes apikal microvilli børstesømmen) reflekterer fungerende nevronet masse kan kvantifiseres ved å telle gjennomsnittlig antall tubuli per felt (x200 forstørrelse ) (n = 6, gjennomsnitt av 10 påfølgende felt, ** p <0,01).

Figur 4
Figur 4. Kronisk allograft skade kan identifiseres ved interstitiell fibrose (representative bilder). Kollagen deponering innenfor transplantert nyre er tydelig ved påvisning av picrosirius røde flekker av kollagen. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

gur 5 "src =" / filer / Ftp_upload / 52163 / 52163fig5highres.jpg "/>
Figur 5. Kvantifisering av interstitiell fibrose. Interstitiell fibrose målt ved picrosirius rød positivitet er oppvokst i C57BL / 6BM12 ⇒ C57BL / 6 mottakere tolv uker etter transplantasjon (n = 6, gjennomsnitt på 10 sammenhengende felt, ** p <0,01, * p < 0,05).

Figur 6
Figur 6. læringskurve. Første ikke-utvinning eksperimenter i terminalt anestiserte mus ble utført for å utvikle den kirurgiske teknikken. Dette ble etterfulgt av gjenvinning av eksperimenter for å oppnå et vellykket re-perfusjon transplantert nyre med en overlevende mus uten komplikasjoner.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Den mest beskrevne måte for å utføre den arterielle anastomose er å bruke den distale aorta av donor, med den renale arterie i forlengelse, i en ende-til-side-måte til mottakeren aorta. Vi beskriver bruk av en aorta patch, ligner på 'Carrell patch' speiling som utføres i menneskelig nyretransplantasjon som vi mener er mer praktisk. Selv om rapporter i litteraturen av giver og mottaker operative tid er sparsom tror vi at å benytte en aortic patch til mottaker aorta i stedet for ende-til-side donor aorta til mottaker aorta er å foretrekke. Ved hjelp av en patch negerer behovet for å dissekere alle lumbar giver aorta grener, og også tiden det tar å ligate dem individuelt, som anastomosering en patch naturlig utelukker disse.

Kritiske skritt for å oppnå denne modellen inkluderer å ta vare for å sikre at det ikke er noen andre arterielle andre enn den nyrearterien innenfor den arterielle patch anastomose som lumen devil lekke når mikro-vaskulær klemmer blir fjernet. Sting konstruere anastamoses kan knyttes tett, men være klar over vesken-strengen effekt som kan begrense anastomosen og forårsake iskemi eller forhindre blodstrøm, i praktisk vi har observert at gitt den elliptiske aortotomy er av tilstrekkelig størrelse vesken-streng Effekten er ikke påtruffet. Den venotomy er laget med en nål deretter utvidet ved å strekke med pinsett, tror vi dette er å foretrekke å kutte som strekker seg med pinsett skaper en ring av venøs vev som lett kan sees og bistands suturering å skape en stabil anastomose. Den ureteric anastomose til blæren er en svært viktig komponent for å vurdere, vi argumentere teknikken beskrevet her heller enn en blære-dome til blæren re-konstruksjon som har vært assosiert med urin lekkasje og ureter stenose antagelig på grunn av iskemi. Vår beskrevne teknikk muliggjør en kortere donor ureteric lengde for å bli brukt som det er direkte anastomoseres til bladdER fem. Ved å benytte disse tekniske forbedringene har vi vært i stand til å redusere mengden av tiden det tar å fullføre denne eksperimentell modell. Faktisk med to operatører arbeider samtidig fem resipienter kan utføres per dag med tilstrekkelig tid til å tillate utvinning og overvåking av musene.

En større begrensning av den beskrevne modellen og teknikk i denne artikkelen er at musen er igjen med en av dens opprinnelige nyrer in situ slik at musen er ikke avhengig av nyre for å overleve. Enkelte forfattere har rapportert at fjerning av det andre opprinnelige nyre umiddelbart ved tidspunktet for transplantasjon eller fem til ti dager etter transplantasjon, og dermed forlater mus avhengige av transplanterte nyre. Dette ville tillate overlevelse for å brukes som en eksperimentell utfall samt samplings blod for å måle markører for nyre-funksjon slik som serum kreatinin og urinsyre i blodet. Imidlertid er det ingen forskjell i histologiske utfallved sammenligning av mus avhengig av allograft og de ​​med et enkelt opprinnelig nyre 9. Vår beskrevne protokoll utelukker ikke dette, og faktisk den andre opprinnelig nyren kan bli fjernet ved et gitt tidsintervall. En ytterligere begrensning er at avanserte mikro-kirurgisk kompetanse er nødvendig for å utføre en arteriell og venøs anastomose, skjønt med trening og ved å utnytte den tekniske instruksjon tallet for dette kan overvinnes. Vaskulære komplikasjoner kan oppstå, disse blir nedsatt arterie eller venetrombose, dette alltid fører musen vise tegn på stress, dårlig helse eller spesifikt hind-lem lammelse. Derfor streng styring og overvåking av mus er viktig når du skal bruke denne modellen.

Akutt avvisning av nyretransplanterte har i stor grad blitt behandlet av immunosuppression og induksjonsbehandling tappe sirkulerende lymfocytter, men episoder av celle-mediert avvisning kan fortsatt skje gjennom nyre graftsliv. Derfor studium av de mekanismer som ligger til grunn av dette er fortsatt viktig og kan identifisere nye veier for behandling. I fullstendig MHC mismatch, slik som C57BL / 6 inn i BALB / c, midlere overlevelsestid avhengig av nyretransplantasjon har blitt rapportert å være så lav som 7,4 dager 10. Histologisk akutt cellulære og vaskulær avvisning kan identifiseres ved lymfatisk infiltrasjon, blødning og ødem i interstitium, tubulitis, vaskulitt, med glomerulær og tubulær nekrose. Den kombinerte prosesser som bidrar til kronisk allograft skade har gjort dette området vanskelig å studere. De histologiske funksjoner inkluderer interstitiell fibrose, tubulær atrofi, glomerulosclerosis og intimal spredning. Den progressive skade er forbundet med vedvarende T-celleinfiltrasjon, men det er stadig forstås at mange andre faktorer kan være involvert. Potensielle medierer av vedvarende skade inkluderer supplement deponering på grunn av donorspesifikke antistoffer, B-celler, naturlige drepeceller, makrofager og celler iboende å pode slik som endotel 3. Derfor er denne modellen tillater studiet av disse forskjellige aspekter av avvisning.

Det har vært ca 70 publiserte studier med denne modellen til tross for sin tidlige beskrivelse 4, er dette i forhold til musemodeller av nyre iskemi-reperfusjon skade der det har vært flere hundre artikler. Betydningen av denne musemodell for intra-abdominal nyretransplantasjon er at det gjenskaper prosessen med human nyretransplantasjon direkte, videre det fordeler fra bruken av veldefinerte innavlede mus stammer som kan brukes for å modellere forskjellige mekanismer for avvisning. Derav studier med denne modellen er svært oversett. Andre fremtidige anvendelser av denne modellen inkluderer studere iboende nyreabnormiteter ved transplantere nyrer med spesifikke fenotyper fra knockout modeller i villtype mus eller omvendt villtype nyrer hos genetiskendrede mottakere.

Denne modellen kan med hell replikere prosessen av humant nyre-transplantasjon. Bruken av innavlede mus stammer tillater utvalget av donor-mottakerkombinasjoner av varierende MHC forskjeller. Videre er bruk av mus tillater bruk av forskjellige teknikker inkludert utstansing og induserbare systemer for å undersøke de forskjellige aspektene av avvisning.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har ikke noe å avsløre.

Acknowledgments

Finansiering fra Kidney Research Storbritannia, The Royal College of Surgeons i Edinburgh og The European Society for organtransplantasjon støttet denne studien.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Surgical Instruments
Blunt Dissecting Scissors Fine Science Tools  14072-10 For skin cutting
Curved Castoviejo scissors Fine Science Tools 15017-10 For tissue cutting
Spring Scissors – straight Fine Science Tools 15000-08 For suture cutting
Toothed forceps 1x2 teeth Fine Science Tools 11021-12
2 x Fine Tip forceps (Dumont No.5) Fine Science Tools 11251-20
Angled Fine Tip forceps (Dumont No. 5/45) Fine Science Tools 11253-25 For blunt dissecting
Curved Fine Tip forcep (Dumont No.7) Fine Science Tools 11273-22 Useful to pass around vessels
Curved Crile Haemostat Fine Science Tools 1300-04
Micro clip applicator with lock Fine Science Tools 18056-14
2 x Micro serrefines spring width 2mm, jaw length 4mm Fine Science Tools 18055-04 Microvascular clamps
2 x Colibri 3cm wire retractor Fine Science Tools 17000-03
Castroviejo needle holder with lock Fine Science Tools 120660-01
Wound clip applicator Fine Science Tools 12031-07
7mm wound clips Fine Science Tools 12032-07 Remove 7 to 10 days after surgery
Equipment
OPMI pico microscope Carl Zeiss S100
Thermal cautery unit with fine tip Geiger 150A
Heat electronic pad Cozee Cumfort n/a
Euroklav 23-S Melag n/a Autoclave
Disposable equipment
7/O Silk braided suture Pearsall 30514
10/O Dafilon (polyamide) suture B-Braun  G1118099
6/O Vicryl (plygalectin) Ethicon W9537
Regular bevel needle, 1 inch, 21G Bection, Dickinson and Company 305175 For ureteric anastamosis
Regular bevel needle, 5/8 inch, 25G Bection, Dickinson and Company 305122
Regular bevel needle, 1/2 inch, 30G Bection, Dickinson and Company 304000
Insulin needle 1ml, 29G Bection, Dickinson and Company 324827
Insulin needle 0.3ml, 30G Bection, Dickinson and Company 324826
1 ml syringe slip tip Bection, Dickinson and Company 300184
5 ml syringe slip tip Bection, Dickinson and Company 302187
Wypall paper swabs Kimberley-Clark L40 sterilised by autoclave
Cotton wool buds Johnson and Johnson n/a sterilised by autoclave
Plain drapes Guardian CB03 sterilised by autoclave
Cell culture dish 60mm x 15mm Corning Incorporated 430166
Dispensing Pin B-Braun DP3500L / 413501 Used with NaCl 0.9%
Re-agents and Drugs
(Lacri-Lube) White soft paraffin 57.3%, mineral oil 42.5% and lanolin alcohols 0.2% Allergan Ltd 21956GB10X
(Videne) Povidone-iodine 10% Ecolab Ltd PL 04509/0041
(Vetalar V) Ketamine hydrochloride Pfizer Animal Health Vm 42058/4165 100mg/ml solution (dose 200mg/kg)
(Domitor) Medetomidine hydrochloride  Orion Pharma Vm 06043/4003 1mg/ml (dose 0.5mg/kg)
(Vetergesic) Bupernorphine hydrochloride  Alsto Animal Health Vm 00063/4002 0.3mg/ml (dose 0.05mg/kg)
(Antisedan) Atipamezole hydrochoride Orion Pharma Vm 06043/4004 5mg/ml (dose 2mg/kg)
University of Wisconsin Solution Belzer Bridge to Life n/a dose approximately 500 microlitres/mouse
NaCl 0.9% Baxter FKE1323
Heparin Sulphate non-proprietary n/a 5000units/ml (dose 5units/mouse)

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Guild, W. R., Harrison, J. H., Merrill, J. P., Murray, J. Successful homotransplantation of the kidney in an identical twin. Trans. Am. Clin. Climatol Assoc. 67, 167-173 (1955).
  2. Wolfe, R. A., et al. Comparison of mortality in all patients on dialysis, patients on dialysis awaiting transplantation, and recipients of a first cadaveric transplant. N. Engl. J. Med. 341, 1725-1730 (1999).
  3. Nankivell, B. J., Alexander, S. I. Rejection of the Kidney Allograft. N. Engl. J. Med. 363, 1451-1462 (2010).
  4. Tse, G. H., Hughes, J., Marson, L. P. Systematic review of mouse kidney transplantation. Transplant International. 26, 1149-1160 (2013).
  5. Skoskiewicz, M., Chase, C., Winn, H. J., Russell, P. S. Kidney transplants between mice of graded immunogenetic diversity. Transplant. Proc. 5, 721-725 (1973).
  6. Zhang, Z., et al. Pattern of liver, kidney, heart, and intestine allograft rejection in different mouse strain combinations. Transplantation. 62, 1267-1272 (1996).
  7. Qi, F., et al. Depletion of cells of monocyte lineage prevents loss of renal microvasculature in murine kidney transplantation. Transplantation. 86, 1267-1274 (2008).
  8. Dang, Z., Mackinnon, A., Marson, L. P., Sethi, T. Tubular atrophy and interstitial fibrosis after renal transplantation is dependent on galectin-3. Transplantation. 93, 477-484 (2012).
  9. Jabs, W. J., et al. Heterogeneity in the Evolution and Mechanisms of the Lesions of Kidney Allograft Rejection in Mice. Am. J. Transplant. 3, 1501-1509 (2003).
  10. Lin, T., et al. Deficiency of C4 from Donor or Recipient Mouse Fails to Prevent Renal Allograft Rejection. Am. J. Pathol. 168, 1241-1248 (2006).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics