Phenotyping माउस पल्मोनरी फंक्शन

Biology

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Limjunyawong, N., Fallica, J., Ramakrishnan, A., Datta, K., Gabrielson, M., Horton, M., Mitzner, W. Phenotyping Mouse Pulmonary Function In Vivo with the Lung Diffusing Capacity. J. Vis. Exp. (95), e52216, doi:10.3791/52216 (2015).

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Abstract

माउस अब फेफड़ों के रोगों की एक किस्म मॉडल इस्तेमाल किया प्राथमिक जानवर है। ऐसे विकृतियों आबाद कि तंत्र का अध्ययन करने के लिए, प्ररूपी विधियों वैकृत परिवर्तन यों कर सकते हैं की जरूरत है। इसके अलावा, माउस मॉडल को translational प्रासंगिकता प्रदान करने के लिए, इस तरह के मापन आसानी से इंसानों और चूहों दोनों में किया जा सकता है कि परीक्षण किया जाना चाहिए। दुर्भाग्य से, वर्तमान साहित्य में फेफड़ों के समारोह के कुछ प्ररूपी माप मनुष्य के लिए सीधे आवेदन कर सकते है। एक अपवाद नियमित तौर पर मनुष्यों में किया जाता है कि एक माप है जो कार्बन मोनोआक्साइड, के लिए diffusing क्षमता है। वर्तमान रिपोर्ट में, हम जल्दी और आसानी से चूहों में इस diffusing के क्षमता को मापने के लिए एक साधन का वर्णन है। प्रक्रिया एक एक मिनट गैस विश्लेषण समय के बाद एक anesthetized माउस में दरियाफ्त गैसों के साथ संक्षिप्त फेफड़ों मुद्रास्फीति, शामिल है। हम वातस्फीति, फाइब्रोसिस, गंभीर फेफड़ों की चोट, और इन्फ्लूएंजा और सहित कई फेफड़ों विकृतियों का पता लगाने के लिए इस विधि की क्षमता का परीक्षण कियाफंगल फेफड़ों में संक्रमण है, साथ ही युवा पिल्ले में निगरानी फेफड़ों परिपक्वता। परिणाम महत्वपूर्ण सभी फेफड़ों विकृतियों में कम हो जाती है, साथ ही फेफड़ों परिपक्वता के साथ diffusing के क्षमता में वृद्धि दिखा। फेफड़ों diffusing क्षमता की यह माप इस प्रकार मौजूदा वैकृत फेफड़ों के मॉडलों के अधिकांश के साथ प्ररूपी संरचनात्मक परिवर्तन का पता लगाने के लिए अपनी क्षमता के साथ व्यापक आवेदन किया है कि एक फेफड़े के कार्य परीक्षण प्रदान करता है।

Introduction

माउस अब फेफड़ों के रोगों की एक किस्म मॉडल इस्तेमाल किया प्राथमिक जानवर है। ऐसे विकृतियों underly कि तंत्र का अध्ययन करने के लिए, प्ररूपी विधियों यह वैकृत परिवर्तन यों कर सकते हैं की जरूरत है। वेंटिलेशन यांत्रिकी मापा जाता है जहां कई माउस अध्ययन कर रहे हैं हालांकि, इन मापों आम तौर पर सामान्य रूप से मानव में किया फेफड़े के कार्य के मानक के मूल्यांकन से संबंधित नहीं हैं। यह मानव रोग के लिए माउस मॉडल में परिणाम के अनुवाद की सुविधा हो सकती चूहों और मानव विषयों में बराबर माप प्रदर्शन करने की क्षमता है, क्योंकि दुर्भाग्यपूर्ण है।

मानव विषयों में सबसे आम है और आसानी से किए गए माप की एक कार्बन मोनोऑक्साइड (DLCO) 1,2 के लिए diffusing क्षमता है, लेकिन इस माप केवल शायद ही कभी माउस मॉडल में किया गया है। प्रक्रियाओं अक्सर बोझिल कर रहे हैं या अनुरोध कर सकते हैं क्योंकि यह 3-7 सूचित किया गया है, जहां उन अध्ययनों में, भाग में, कोई अनुवर्ती अध्ययन नहीं किया गया हैजटिल उपकरण uire। एक और दृष्टिकोण के प्रति जागरूक चूहों में सीओ प्रसार को मापने के लिए सक्षम होने का लाभ दिया है, जो एक स्थिर राज्य प्रणाली में एक सीओ rebreathing विधि का उपयोग करने के लिए है। हालांकि यह विधि बहुत बोझिल है, और परिणाम माउस का वेंटिलेशन के स्तर के रूप में अच्छी तरह से 2 हे और सीओ 2 सांद्रता 8,9 के साथ भिन्न हो सकते हैं। इन कठिनाइयों इसके कई फायदे के बावजूद, चूहों में फेफड़ों विकृतियों का पता लगाने की क्षमता diffusing के नियमित प्रयोग रोका गए लगते हैं।

चूहों में क्षमता diffusing की माप के साथ समस्याओं को दरकिनार करने के लिए, एक सरल साधन का ब्यौरा चूहों में यह उपाय करने के लिए हाल ही में 10 सूचित किया गया है। प्रक्रिया जल्दी पूरी प्रेरित गैस के बराबर मात्रा नमूने द्वारा पवित्र वायुकोशीय गैस के नमूने की कठिन समस्या समाप्त। एक बहुत प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य माप में इस प्रक्रिया का परिणाम है, देहात के एक मेजबान के प्रति संवेदनशील है कि कार्बन मोनोऑक्साइड (DFCO), के लिए प्रसार कारक करार दियाफेफड़ों फेनोटाइप में thologic बदलता है। (सीओ 9 / सीओ सी) / (NE 9 / पूर्वोत्तर ग), सी और नौ सबस्क्रिप्ट इंजेक्ट अंशांकन गैसों की सांद्रता और एक 9 सेकंड सांस पकड़ समय के बाद हटा दिया गैसों का उल्लेख कर जहां - DFCO इस प्रकार एक के रूप में गणना की है क्रमशः। DFCO 1 सभी सह का पूरा तेज दर्शाती है, और 0 सीओ का कोई तेज दर्शाती के साथ, 0 और 1 के बीच होती है, जो एक आयामरहित चर है।

इस प्रस्तुति में हम इस diffusing क्षमता माप कैसे बनाने के लिए दिखाने के लिए, और यह लगभग सभी वातस्फीति, फाइब्रोसिस, गंभीर फेफड़ों की चोट, और वायरल और फंगल संक्रमण सहित मौजूदा माउस फेफड़ों के रोग मॉडल, की में परिवर्तन करने के लिए दस्तावेज़ कैसे इस्तेमाल किया जा सकता है।

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Protocol

नोट: सभी पशु प्रोटोकॉल जॉन्स हॉपकिन्स विश्वविद्यालय पशु की देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया।

1. पशु तैयारी

  1. नीचे 2.3 कदम के रूप में रेखांकित ketamine और xylazine के साथ उन्हें anesthetizing द्वारा, DFCO माप के लिए 6 C57BL 6 / नियंत्रण चूहों तैयार करें।
  2. नियंत्रण के लिए के रूप में एक ही प्रक्रिया का उपयोग करके तालिका 1 में दिखाया अलग फेफड़ों विकृतियों के साथ अन्य चूहों के सभी तैयार करें। इन मॉडलों में से प्रत्येक स्थापित करने की जरूरत विशिष्ट विवरण प्रासंगिक संदर्भों में पाए जाते हैं। नियंत्रण चूहों और अन्य वैकृत साथियों में उन की उम्र के सभी 6-12 हफ्तों हैं।

कार्बन मोनोऑक्साइड के लिए प्रसार फैक्टर 2. मापन (DFCO)

  1. नाइट्रोजन, ऑक्सीजन, नियोन, और कार्बन मोनोऑक्साइड के लिए चोटियों को मापने के लिए मशीन के साथ आपूर्ति गैस chromatograph मॉड्यूल को निर्धारित करें। इस आवेदन के इस्तेमाल के लिए ही नीयन और सीओ डेटा।
    नोट: इस साधन एक आणविक एस का उपयोग करता हैएक 12.00 माइक्रोन फिल्म, 320.00 माइक्रोन आईडी और 10 मीटर लंबाई के साथ वाहक गैस के रूप में हीलियम के साथ ieve स्तंभ,। chromatograph स्तंभ 0.8 मिलीलीटर की मात्रा है, लेकिन हम नमूना के साथ जोड़ने ट्यूबिंग की पर्याप्त समाशोधन सुनिश्चित करने के लिए 2 मिलीलीटर का इस्तेमाल किया।
  2. प्रत्येक प्रयोगात्मक दिन की शुरुआत में, चूहों से नमूने का माप करने से पहले, लगभग 0.5% पूर्वोत्तर, 0.5% सीओ युक्त गैस मिश्रण बैग से सीधे एक 2 मिलीलीटर नमूना लेते हैं, और हवा शेष है, और जांच करने के लिए इस नमूने का उपयोग गैस chromatograph।
  3. Ketamine (90 मिलीग्राम / किग्रा) और xylazine (15 मिलीग्राम / किग्रा) के साथ चूहों anesthetize, और पलटा गति की अनुपस्थिति से संज्ञाहरण की पुष्टि करें। सूखापन को रोकने के लिए आंखों पर पशु चिकित्सा मरहम लागू करें। (बहुत युवा चूहों में वयस्कों में 18 जी या 20 जी) एक ठूंठ सुई प्रवेशनी के साथ चूहों Tracheostomize।
    नोट: DFCO संज्ञाहरण के बाद कम से कम 10 मिनट में पूरा कर लिया है और किसी भी यांत्रिक वेंटीलेशन या अन्य प्रक्रियाओं से पहले है।
  4. 6 सप्ताह की आयु से अधिक से अधिक चूहों में, एक 3 मिलीलीटर सिरिंज टी का उपयोगओ गैस मिश्रण बैग से गैस की 0.8 मिलीलीटर वापस ले लें। सांस की नली प्रवेशनी के लिए सिरिंज कनेक्ट और जल्दी से फेफड़ों बढ़ा देते हैं। एक metronome का उपयोग करना, 9 सेकंड गिनती, और फिर जल्दी से 0.8 मिलीलीटर (exhaled हवा) वापस ले लें।
  5. इस वापस ले लिया 0.8 मिलीलीटर कमरे में हवा के साथ 2 मिलीलीटर हवा exhaled पतला, यह कम से कम 15 सेकंड के लिए आराम करने के लिए अनुमति देते हैं। फिर विश्लेषण के लिए गैस chromatograph में पूरी नमूना इंजेक्षन।
  6. यह पहली DFCO नमूना विश्लेषण करते हुए, गैस मिश्रण बैग से एक दूसरे 0.8 मिलीलीटर के साथ माउस फेफड़ों फुलाना, और फिर पहला नमूना के समान इस नमूने की प्रक्रिया। दो DFCO माप औसत।
    नोट: 0.8 मिलीलीटर एक मात्रा बहुत युवा चूहों के फेफड़ों में मापन करने के लिए बहुत बड़ी है, क्योंकि उम्र के 2 हफ्तों के रूप में के रूप में युवा चूहों में माप के लिए, 0.4 मिलीलीटर की मात्रा का उपयोग करें। यह 6 सप्ताह से अधिक उम्र के चूहों के लिए 0.8 मिलीलीटर मात्रा का उपयोग करने के लिए बेहतर है, और 0.4 मिलीलीटर मात्रा कुछ चूहों के लिए आवश्यक है, यह अध्ययन किया जा रहा पलटन में सभी चूहों के लिए लगातार इस्तेमाल किया जाना चाहिए।
  7. DFCO की गणना(सीओ 9 / सीओ सी) / (NE 9 / पूर्वोत्तर ग), सी और नौ सबस्क्रिप्ट इंजेक्ट अंशांकन गैसों की सांद्रता और क्रमश: एक 9 सेकंड सांस पकड़ समय के बाद हटा दिया गैसों का उल्लेख कर जहां - एक के रूप में।
  8. विश्लेषण और एक तरह से एनोवा के साथ मतभेदों की तुलना और सभी पलटन चूहों में एकाधिक तुलना के लिए Tukey के सुधार के साथ महत्व स्तर का आकलन करें। पी <0.05 के रूप में महत्वपूर्ण मूल्य पर विचार करें।
    नोट: यहां इस्तेमाल चूहों के सभी यहां बताया नहीं कर रहे हैं, जो फेफड़ों वेंटिलेशन, यांत्रिकी, फेफड़ों के पानी से धोना, या ऊतक विज्ञान के कई बाद माप शामिल प्रयोगात्मक अध्ययन का हिस्सा थे। विधि नियंत्रण चूहों में ऊपर किया गया था के रूप में सभी प्रयोगात्मक मॉडल में ही है, क्योंकि इसके अलावा, विभिन्न वैकृत मॉडल से ही परिणाम प्रस्तुत कर रहे हैं। इन मॉडलों पर अधिक जानकारी के पूरक तालिका में प्रस्तुत किया है।
  9. गहरी anesthe द्वारा जानवरों Euthanizeघरेलू जरूरत से ज्यादा गर्भाशय ग्रीवा अव्यवस्था या कत्ल के द्वारा पीछा किया। जहां जरूरत है, आगे जीवविज्ञान या histologic प्रोसेसिंग और विश्लेषण के लिए मृत चूहों से फेफड़ों की कोशिकाओं और / या ऊतकों को हटा दें।

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Representative Results

चित्रा 1 वहाँ Aspergillus और इन्फ्लूएंजा संक्रमण दोनों के साथ महत्वपूर्ण कम हो जाती है, साथ ही तंतुमय, emphysematous में महत्वपूर्ण घटने थे, और तीव्र समूहों ए, बी, सी, डी, ई, और एफ में वयस्क चूहों से DFCO माप से पता चलता है फेफड़ों की चोट मॉडल। चित्रा 2 2-6 हफ्तों से चूहों की उम्र के रूप में समय के साथ DFCO में समूह जी विकासात्मक परिवर्तन को दर्शाता है। इस समय के पाठ्यक्रम पर फेफड़ों के विकास के साथ एक मामूली लेकिन महत्वपूर्ण वृद्धि हुई थी। एक छोटे मुद्रास्फीति की मात्रा का उपयोग करने का प्रभाव भी छह सप्ताह का समय बिंदु पर काफी स्पष्ट था। वहाँ महिलाओं के एक से थोड़ा अधिक DFCO है करने के लिए एक प्रवृत्ति थी, लेकिन इस 5 सप्ताह का समय बिंदु पर केवल महत्वपूर्ण था।

गट पैथोलॉजी या हालत कमेंट्स
एक C57BL 6 / नियंत्रण (8-10 सप्ताह), एन = 6 स्वस्थ चूहों </ टीडी>
बी C57BL / 6 चूहों intranasally इन्फ्लुएंजा ए वायरस (PR8) का 25 TCID50 दिया, एन = 10 इन्फ्लुएंजा मॉडल, 6 और 8 दिनों के अध्ययन के बाद संक्रमण
सी C57BL / 6 चूहों 5.4 यू अग्नाशय इलास्टेज intratracheally दिया, एन = 6 वातस्फीति मॉडल 10,13 21 दिनों इलास्टेज चुनौती के बाद अध्ययन
डी C57BL / 6 चूहों 0.05 यू bleomycin intratracheally दिया, एन = 6 फाइब्रोसिस मॉडल 14 bleomycin चुनौती के बाद 14 दिनों का अध्ययन
CFTR अशक्त नियंत्रण और उन Aspergillus fumigatus (तनाव AF293) की एयरोसोल साँस लेना से संक्रमित, एन = 6 फफूंद संक्रमण मॉडल 11,17 फंगल संक्रमण के बाद 12 दिनों का अध्ययन
एफ 3 माइक्रोग्राम प्रति / जी BW के LPS (Escherichia कोलाई) दिया C57BL / 6 चूहों intratracheally, एन = 6 गंभीर फेफड़ों की चोट (अली) मॉडल 15 अध्ययनLPS के अपमान के बाद दिन के 1 और 4 पर
जी प्रत्येक उम्र में C57BL उम्र के 2 से 6 सप्ताह में 6 / पुरुष चूहे, एन = 5 फेफड़ों के विकास मॉडल

तालिका 1: DFCO मापा गया था जहां विभिन्न माउस मॉडल की लिस्ट।

चित्रा 1
चित्रा 1:। नियंत्रण C57BL / 6 चूहों (ग्रुप ए) में DFCO के मापन और 5 अलग अलग वैकृत मॉडलों में से प्रत्येक में PR8 इन्फ्लूएंजा 21 दिनों intratracheal इलास्टेज के बाद (ग्रुप बी), के बाद परिणाम 6 और 8 दिनों कर रहे हैं दिखाया (समूह सी), 14 दिनों के intratracheal bleomycin (ग्रुप डी) के बाद 12 दिन LPS टपकाना (समूह एफ) के बाद CFTR अशक्त चूहों (ग्रुप ई), और एक और 4 दिनों में Aspergillus संक्रमण के बाद। * पी <नियंत्रण बनाम 0.01 इंगित करता है, # 6 और बीच पी <0.01 इंगित करता है8 दिन इन्फ्लूएंजा चूहों और 1 और 4 दिन LPS चूहों, और + पी <नियंत्रण बनाम 0.05 इंगित करता है।

चित्रा 2
चित्रा 2: 6 सप्ताह की आयु के माध्यम से 2 से पुरुष C57BL / 6 चूहों में DFCO का मापन (ग्रुप जी) माप 0.4 मिलीलीटर की एक मुद्रास्फीति की मात्रा के साथ सभी चूहों में बनाया है, और छह सप्ताह पुरानी चूहों में एक दूसरे माप था। 0.8 मिलीलीटर के साथ बनाया है। 0.4 मिलीलीटर की मात्रा के साथ, 4, 5, और 6 सप्ताह (पी <0.05) में दो सप्ताह पुरुष और उन के बीच DFCO में उल्लेखनीय वृद्धि थे।

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Discussion

वर्तमान काम में, हम माउस फेफड़ों की गैस का आदान प्रदान करने की क्षमता यों के लिए एक नया मीट्रिक परिभाषित किया। यह मीट्रिक diffusing क्षमता, वह यह है कि फेफड़ों का प्राथमिक कार्य है कि उपायों एक आम नैदानिक ​​माप, गैस का आदान प्रदान करने के लिए अपनी क्षमता के अनुरूप है। diffusing क्षमता आसानी से और जल्दी से चूहों और इंसानों दोनों में किया जा सकता है कि केवल फेफड़ों कार्यात्मक माप है। चूहों में फेफड़ों की बीमारी का पता लगाने के लिए, एक प्रमुख उद्देश्य नियंत्रण और प्रयोगात्मक साथियों के बीच फेफड़ों के समारोह में परिवर्तन यों की है। इस लक्ष्य को प्राप्त करने के लिए, हम परिभाषित और फेफड़ों के विकास के साथ कार्यात्मक परिवर्तन सहित चूहों में फेफड़ों की बीमारी का सबसे आम मॉडलों के अधिकांश में प्ररूपी परिवर्तन, quanitfying की अपनी क्षमता का प्रदर्शन करने के लिए DFCO उपयोग किया है।

शारीरिक और उपकरण मृत अंतरिक्ष में अमिश्रित प्रेरित गैस के प्रभाव आईजीएन है कि चूहों में DFCO माप सरल दृष्टिकोण में निहित एक धारणा यह हैored। हालांकि, के रूप में पहले 10 में वर्णित है, 0.8 मिलीग्राम मुद्रास्फीति की मात्रा का उपयोग सभी मापन में एक छोटे लेकिन लगातार त्रुटि का परिचय। इस त्रुटि की भयावहता मुद्रास्फीति और मृत अंतरिक्ष संस्करणों के सापेक्ष आकार के एक समारोह है। वर्तमान दृष्टिकोण में, इस त्रुटि stopcocks या टी कनेक्टर्स में मृत अंतरिक्ष को नष्ट करने से कम से कम है, और वीडियो में दिखाया गया है, बस सिरिंज मुहर और गैस हस्तांतरण की सुविधा के लिए एक उंगलियों का उपयोग करता है। यह प्रक्रिया माप के बीच एक उच्च repeatability में यह परिणाम है। युवा चूहों में आवश्यक छोटे मुद्रास्फीति की मात्रा का प्रभाव प्रारंभिक 0.4 मिलीलीटर परीक्षण तुरंत प्रत्येक माउस में एक 0.8 मिलीलीटर परीक्षण के साथ पीछा किया गया था, जहां चित्रा 2 में दिखाया गया है छह सप्ताह पुरानी चूहों में स्पष्ट कर दिया गया है। में DFCO मूल्य अन्य समूहों में C57BL / 6 चूहों के लिए रेंज में था मिलीलीटर 0.8, लेकिन साथ 0.4 मिलीलीटर के साथ माप लगातार छोटा होता है। इस तथ्य का प्रत्यक्ष मिसाल है कि छोटी मात्रा के साथ, recovereडी 9 सेकंड नमूना बस नियंत्रण गैस की सांद्रता के होते हैं, जो मृत अंतरिक्ष हवा, का एक बड़ा अंश है। यह इस तथ्य के करीब पूर्वोत्तर एकाग्रता में परिवर्तन लाता है यह जो सीओ एकाग्रता में एक छोटे आंशिक परिवर्तन, के रूप में ही प्रकट होता है। सीओ / पूर्वोत्तर के एक बढ़ा अनुपात के साथ, गणना DFCO (1 - इस अनुपात) इस प्रकार छोटा होता है।

चित्र 1 में दिखाया फेफड़ों विकृति विज्ञान के कई मॉडल में, DFCO में मनाया एक महत्वपूर्ण घटने लगी थी। DFCO इन विभिन्न मॉडलों में कम हो जाती है क्यों हालांकि, कई अलग अलग कारण हैं। Bleomycin की एक खुराक की वजह से फाइब्रोसिस में, सूजन और क्षमता 16 diffusing में कमी आती है कि प्रसार बाधा का एक मोटा होना नहीं है। वातस्फीति में, सतह क्षेत्र का एक नुकसान सीधे प्रसार के लिए सतह क्षेत्र और नष्ट दीवारों में किया गया था कि केशिकाओं में रक्त की मात्रा दोनों में कमी करने के लिए कार्य करता है। Elastas के साथ कोई खुराक-प्रतिक्रिया संबंधोंई यहां प्रस्तुत कर रहे हैं, लेकिन अप्रकाशित डेटा emphysematous क्षति के स्तर के साथ DFCO का एक अच्छा संबंध को दर्शाता है। इन्फ्लूएंजा संक्रमण के साथ, प्रसार बाधा का एक मोटा होना और फेफड़ों की समेकित unventilated क्षेत्रों में वृद्धि हुई है, दोनों का एक परिणाम के रूप में की संभावना क्षमता diffusing वहाँ कम है। यहां इस्तेमाल PR8 इन्फ्लूएंजा मॉडल में, यह (8 दिन में DFCO में आगे महत्वपूर्ण कमी के रूप में परिलक्षित) समय के साथ बिगड़ जाती है, और चूहों आम तौर पर CFTR अशक्त चूहों में दिन 10 के आसपास में मर जाते हैं, एक छोटे DFCO आधारभूत में वहां गया था C57BL6 नियंत्रण के साथ संरचनात्मक मतभेद हो सकता है, लेकिन इन चूहों, एक मिश्रित आनुवंशिक पृष्ठभूमि 17 पर किया जाता है। हालांकि, Aspergillus संक्रमण DFCO में एक और पर्याप्त महत्वपूर्ण कमी के कारण होता है, और फंगल संक्रमण के साथ इस गिरावट के लिए कारणों इन्फ्लूएंजा के साथ उन लोगों के लिए इसी तरह की संभावना है। का कारण बनता है कि तीव्र सूजन में LPS के परिणामों के एक काफी डि का edematous उमड़ना से होने की संभावना DFCO कमी आई है,ffusion बाधा और तरल पदार्थ से भरा फेफड़ों की unventilated क्षेत्रों के। इस्तेमाल किया LPS की खुराक के साथ, DFCO में कमी दिन 4 या 5 में सबसे बड़ा है और उसके बाद 10 दिन से नियंत्रण करने के लिए वापस ठीक हो जाए (डेटा) नहीं दिखाया।

युवा चूहों में फेफड़ों के विकास के साथ DFCO में बदलाव के विश्लेषण के लिए, 0.4 मिलीलीटर मुद्रास्फीति मात्रा स्पष्ट रूप से प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य मापन की अनुमति दी है, और फेफड़ों तक पहुँच वयस्क परिपक्वता के रूप में क्षमता (चित्रा 2) diffusing में एक धीमी वृद्धि को दिखाने के लिए सक्षम था। गणना DFCO कम में एक छोटे 0.4 मिलीलीटर मुद्रास्फीति की मात्रा का उपयोग कर के प्रभाव की उम्मीद थी, लेकिन बड़े 0.8 मिलीलीटर मात्रा छोटे चूहों में इस्तेमाल नहीं किया जा सकता है भी क्या है। लेकिन विकास या विकृति के साथ परिवर्तन अभी भी 0.4 मिलीलीटर की मात्रा के साथ reproducibly पता लगाने योग्य होना चाहिए।

अंत में, इस वीडियो और साथ पांडुलिपि मनुष्यों में मापा जा सकता है क्या करने के लिए इसी तरह की है कि चूहों में एक कार्यात्मक माप प्राप्त करने के लिए कैसे पता चलता है। मैट्रिक एक दर्शाता हैफेफड़ों की साख आमतौर पर सबसे अधिक अध्ययन किया विकृतियों के कारण फेफड़ों के संरचनात्मक परिवर्तन की एक किस्म के साथ गैस विनिमय करने के लिए। कार्बन मोनोऑक्साइड (DFCO) के लिए इस प्रसार कारक अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है, और युवा या पुराने चूहों में सबसे प्रयोगात्मक प्रेरित विकृतियों के साथ कार्यात्मक और संरचनात्मक परिवर्तन का पता लगाने के लिए काफी संवेदनशील है। यह फेफड़ों के रोग का आकलन करने के लिए मनुष्यों में किए गए इसी तरह के मापन के लिए सीधे अनुरूप तथ्य यह है कि, यह माउस फेफड़ों विकृतियों phenytype करने के लिए एक बहुत ही प्रासंगिक मीट्रिक प्राप्त करने के लिए एक सरल तरीका है।

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Disclosures

ब्याज, और कुछ भी नहीं है की कोई संघर्ष का खुलासा करने के लिए।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Gas Chromatograph Inficon Micro GC Model 3000A Agilent makes a comparable model
18 G Luer stub needle Becton Dickenson Several other possible vendors
3 ml plastic syringe Becton Dickenson Several other possible vendors
Polypropylene gas sample bags SKC 1 or 2 L capacity works well Other gas tight bags will work well
Gas tank, 0.3% Ne, 0.3% CO, balance air; (size ME) Airgas, Inc Z04 NI785ME3012 This is the standard mixture used for DLCO in humans
25 TCID50/mouse of influenza virus A/PR8 diluted in phosphate buffered saline.
Porcine pancreatic elastase Elastin Products, Owensville, MO 5.4 U
Bleomycin APP Pharmaceuticals, Schaumburg, IL 0.25 U
Escherichia coli LPS Sigma L2880 3 μg/g body weight; O55:B5
Aspergillus fumigatus (isolate Af293) conidia were collected from mature colonies grown on potato dextrose agar.

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References

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