Nær infrarød (NIR) Lys Øker Uttrykk for en markør av mitokondrienes funksjon i mus Vestibulær Sensory Epitel

1Discipline of Physiology, University of Sydney, 2Discipline of Biomedical Science, University of Sydney
Published 3/14/2015
0 Comments
  CITE THIS  SHARE 
Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Summary

Mitokondriell dysfunksjon er et kjennetegn på mobil senescens. Dette papiret bruker ikke-invasiv nær-infrarødt (NIR) behandling for å bedre mitokondriefunksjonen i den aldrende mus vestibular sensorisk epitel.

Cite this Article

Copy Citation

Zhang, L., Tung, V. W., Mathews, M., Camp, A. J. Near Infrared (NIr) Light Increases Expression of a Marker of Mitochondrial Function in the Mouse Vestibular Sensory Epithelium. J. Vis. Exp. (97), e52265, doi:10.3791/52265 (2015).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Strategier for å dempe nedgangen i balanse funksjon med økende alder er hovedsakelig fokusert på fysisk terapi omfatter balanser oppgaver og mosjon. Men disse tilnærmingene ikke de underliggende årsakene til balanse nedgang. Ved hjelp av mus, ble virkningen av nær infrarødt lys (NIR) på metabolismen av cellene i det vestibulære sensorisk epitel vurdert. Data som samles inn, viser at denne enkle og trygge inngrep kan beskytte disse sårbare cellene fra de skadelige effektene av naturlig aldring. mRNA ble ekstrahert fra den isolerte perifer vestibular sensorisk epitel (Crista ampullaris og utricular makula) og deretter transkribert til et cDNA-bibliotek. Dette bibliotek ble så undersøkt for ekspresjon av stedsnærværende antioksydant (SOD-1). Antioksidant-genekspresjon ble så brukt til å kvantifisere cellulær metabolisme. Hjelp transcranial levering av NIR i ung (4 uker) og eldre (8-9 måneder) mus, og en kort behandling regime (90 sek / dag for fem days), antyder dette arbeidet Nir alene kan være tilstrekkelig til å forbedre mitokondriell funksjon i det vestibulære sensorisk epitel. Siden det er for øyeblikket ingen tilgjengelige, rimelige, ikke-invasive metoder for behandling for å bedre vestibulære hår celle funksjon, gir bruk av ekstern NIR stråling en potensiell strategi for å motvirke effekten av aldring på cellenes stoffskifte inthe vestibular sensorisk epitel.

Introduction

Degressiv ytelse og påfølgende fall er vanlig, og dessverre ofte definerende trekk ved naturlig aldring en. Virkningen av denne nedgangen kan være både fysisk og sosialt, og reduserer livskvaliteten for eldre mennesker. Som svar har fysisk behandling og rehabilitering vært fokus for forskning på fossen, men har ikke vært assosiert med jevn reduksjon i utbredelsen av gjentatte fall. Samtidig, arbeid undersøke endringer i perifer eller sentral vestibulære systemet (systemet ansvarlig for å opprettholde balanse) er mangelvare, og potensielle terapeutiske strategier rettet mot disse systemene og de underliggende årsakene til ubalanse begrenset.

Nyere arbeider på alders assosiert nevrodegenerative lidelser inkludert aldersrelatert makuladegenerasjon 2-4, Alzheimers sykdom modellene 5-8, og Parkinsons sykdom 9-12 har vist nervecellene effekter av simple non-invasiv anvendelse av nær infrarød (NIR) lys. Videre, i den vestibulære systemet, NIR har vært brukt for å øke aktiviteten av vestibulære primære afferente neuroner in vitro 13. Mens mekanismen av NIR lys ikke er godt forstått, har de fleste studier ved hjelp av NIR antydet at NIR stimulerer mitokondriene kompleks IV (cytokrom c oksidase) 14-17 til rette for cellenes stoffskifte. I det vestibulære sensorisk epitel intradermal plate av type I hårceller er tett i mitokondriene 18 og kan derfor representere et område av handlingen for terapeutisk NIR behandling.

Her, en kort, ikke-invasiv behandling regime av transcranially anvendt NIR som kan brukes til å måle cellulær metabolisme (og dermed, mitokondriell funksjon) i mus vestibulære sensorisk epitel er beskrevet. Også diskutert er en forberedelse av det vestibulære sensorisk epitel og det er vist at NIR øker uttrykk for en ubiquitooss antioksidant (peroksyddismutase 1) i sensorisk epitel - tidligere vist seg å være viktig for cochlea hår celle overlevelse 19.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Etikk Uttalelse: Alle prosedyrer beskrevet nedenfor ble godkjent av University of Sydney Animal Ethics Committee.

1. Dyr

MERK: 1 og 8 - 9 måneder gamle mus (C57 / BL6) ble hentet fra Animal Resources Centre (Perth, Australia). Mus ble plassert i Bosch gnager Facility ved University of Sydney.

  1. Huset mus i standard muse bur på en 12/12 timers lys / mørke syklus med tilgang til mat og vann ad libitum.
  2. Divide mus i hver aldersgruppe i nær infrarødt (NIR) behandlet, eller humbug behandlet (kontroll) grupper for sammenligning.

2. Nær Infrarød (NIR) Bestråling og Sham Treatment

  1. Barbere pelsen på hodet og nakkeregionen av musen med en elektrisk barber så tett som mulig for å hindre rask gjenvekst av hår før ferdigstillelse av behandlingsregime. For å opprettholde det patogen-fri status av musene ved å bruke 70% etanolå rengjøre instrumenter mellom barbering dyr og F10 veterinær desinfeksjonsmiddel mellom dyr fra separate bur. Gjør dette 2 - 3 dager før begynnelsen av behandlingen så dyr er ikke over-håndteres.
  2. Beherske mus ved å holde den proksimale enden av halen og la den slappe av i håndflaten eller benk topp, slik som å redusere stress som kan føre til falske resultater.
  3. Hold NIR (670 nm) LED (Light Emitting Diode) i 1 - 2 cm vekk fra konkurranseutsatt (barbert) område og slå på enheten for 90 sek (figur 1A).
    MERK: temperaturendring som et resultat av 90 sek eksponering ble målt som <0,2 ° C i 100 ml vann.
  4. Gjenta trinn 02.02 til 02.03 for humbug behandling gruppen av dyr, men la enheten slått av (figur 1B).
  5. Gjenta trinn 02.02 til 02.03 for NIR-blokkert behandling gruppe dyr, men dekker enheten med aluminiumsfolie.
  6. Gjenta trinn 02.02 til 02.05 hver dag kl omtrentelige 24 timers mellomrom for fem påfølgende dager.
  7. Pakk det vestibulære sensorisk epitel (3 cristae og en utricular makula) fra begge ørene på den femte dagen etter behandling (se kapittel 3 nedenfor).

3. Tissue Utvinning 20

  1. Forbered 300 ml av en glycerol-basert kunstig cerebrospinalvæske (ACSF) bestående av (i mM): 26 NaHCO3, 11 glukose, 250 glycerol, 2,5 KCl, 1,2 NaH 2PO 4, 1,2 MgCl2, og 2,5 CaCl2. Før tilsetningen av CaCl2, gass løsningen med karbogen (95% O2 og 5% CO2) for å etablere en pH-verdi på 7,4 og unngå utfelling av kalsium (uklarhet). Avkjøl løsningen i en -80 ° C fryser i 45 minutter, slik at en is oppslemming dannes.
  2. Forberede RNA isolering lysisbuffer i merkede skrue topp mikrorør (stopper popping av lokkene når tube trykkforandringer mellom fryse og tining i flytende nitrogen) i henholdtil instruksjonene fra produsenten eller vanlige lab praksis. Har flytende nitrogen klar i en aluminiums dewar kolbe.
    MERK: Bruk verneklær og eyeware ved håndtering av flytende nitrogen. Sørg for at flytende nitrogen brukes i et godt ventilert rom som volumet av sin gassform er omtrent 700 ganger så stor som sin flytende form og kan forårsake kvelning.
  3. Dypt bedøver mus med ketamin (400 mg / kg) via en intra-peritoneal injeksjon. Tillate den bakbenet refleks til helt avta som indikasjon på at mus er fullt bedøvet.
  4. Halshogge mus med skarpe rustfritt stål saks og gjør et snitt langs sagittal hud av skallen bruker et barberblad (avrundet # 22). På dette punktet og gjennom trinn 03.05 til 03.09, holde hodeskalle, hjerne, og underliggende vestibular apparat så kjølig som mulig ved regelmessig bruk av iskald ACSF over vev.
  5. Ved hjelp av den spisse arm av standard mønster saks lage en small snitt i skallen på Lambda og kutt langs sagittal sutur.
  6. Forsiktig gli en arm av et grunt Rongeurs under parietal bein holder bladet så nær som mulig til den nedre overflate av benet uten å dra hjernen. Sikre og dra vekk issebeinet sidelengs og nakkeknøl posteriorly til hjernen er utsatt.
  7. Bruk en liten rustfritt stål stekespade og løft hjernen bort fra fremre og midtre skallegrop å eksponere Nervus vestibulocochlearis (CN VIII). Transekt nerve for å hindre unødvendig spenning på den primære afferente axoner som direkte innerverer vestibular hårcellene.
  8. Fjern hjernen i toto etter tran av CN VIII.
  9. Observere den benete labyrinten som inneholder sneglehuset og de perifere vestibulære organer i midten skallegrop. Lag to små snitt ved siden av hver benete labyrinten og avgiftsdirektoratet hele strukturen ved å holde den fremre halvsirkelformet kanalen og trekke senerealliert.
  10. Umiddelbart dyppe utskårende labyrinter i en skål inneholdende dissekere iskald ACSF-løsning (som beskrevet i trinn 3.1) under kontinuerlig perfusert med karbogen.
  11. Under en stereomikroskop, hold nede labyrinten av sneglehuset og fest den til bunnen av fatet med pinsett.
    1. Bruk rette fin pinsett til å klø en liten åpning i benet over fremre halvsirkelformet kanalen (SSC) ampullen.
    2. Forsiktig forstørre åpningen ved å nå rett under beinet og flicking utover vekk fra ampullen. Utvise forsiktighet her for å ikke presse tang inn i åpningen og skade den skjøre membranøs labyrint under. Fortsett på denne måten til utricle, anterior og lateral ampullae er alle utsatt. Hvis det er mulig å fjerne den bakre ampulla også.
  12. Ved hjelp av fine tang, forsiktig løft utricle og ampullae bort fra den benete labyrinten til de er helt løsrevet. Der det er mulig, holde demmot deres halvsirkelformede kanaler for å unngå skade på sensorisk epitel. I noen tilfeller kan den proksimale del av den halvsirkelformede membrankanalen må kuttes med iris saks for å frigjøre ampullae fra benet.
  13. Ta et godt tak vestibular organer mellom tuppen av tang og sted inn i lysisbuffer forberedt tidligere i trinn 3.2. Virvle tang rundt i buffer for å sikre vestibular organer har løsrevet fra pinsett. Sjekk dette er tilfelle ved å bringe pinsett under stereomikroskop.
    1. Skru på microtubule lokket og fryse prøven i flytende nitrogen umiddelbart.

4. RNA Utvinning og RT-PCR

  1. Følg standard metoder for messenger RNA (mRNA) utvinning i henhold til produsentens instruksjoner eller foretrukne lab protokoller.
    MERK: En kommersiell kit som utnyttet carrier RNA til å isolere små avlinger av mRNA ble brukt i detteprotokoll. Lavere elueringsvolumene kan brukes for å øke sluttkonsentrasjoner på mRNA.
    MERK: Negative "no enzym" kontroller (NEC) og "ingen DNA mal" kontroller (NTCS) må også fylles ut for å sikre gyldigheten av observerte effekter.
  2. Anvende standard metoder for revers transkripsjon av mRNA til komplementær DNA (cDNA) og forsterkning av målgener 21-23.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Å sammenligne effekten av Nir behandling i ung (4 uker) og eldre (8-9 måneder) mus vi målt uttrykk for antioksidant superoksyddismutase 1 (SOD-1) i ung (n = 16) og eldre (n = 20) mus som var NIR-behandlede, narrebehandlede eller NIR-blokkert. Figur 2 viser en betydelig økning i β-aktin normalisert SOD-1-ekspresjon av mer enn to ganger i små NIR-behandlede dyr sammenlignet med unge sham-behandlede dyr (p <0,01) og unge NIR-blokkerte dyr (p <0,01). Eldre NIR-behandlede dyr viste også mer enn en 2-fold oppregulering av SOD-1 sammenlignet med eldre NIR-blokkerte dyr (p <0,05).

Figur 1
Figur 1. Nir Treatment. (A) Nir LED-enhet holdt 1-2 cm over det barberte området på hodet av musen for 90 sek per dag i 5 påfølgende dager i bestråling treated mus. (B) Nir LED-enhet holdt over humbug-behandlede mus på samme måte, men med enheten slått av for varigheten av 90 sek. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 2
Figur 2. Analyse av SOD-en genekspresjon etter fem sammenhengende dager av NIR behandling (90 sek / dag). Den vestibulære sensorisk epitel ble høstet på den femte dagen og bestemt antioksidant genet undersøkt for bruk av RT-PCR. SOD-1 genet ble normalisert til β-aktin baseline og densitometry utført med ImageJ v1.48. Betydelig oppregulering (p <0,01) av SOD-1-ekspresjon ble observert hos unge NIR-behandlede dyr sammenlignet med både unge narrebehandlede og unge NIR-blokkerte kontroller (4 uker). Betydelig økning (p &# 60; 0,05) i SOD-ett uttrykk ble også observert i eldre NIR-behandlede dyr sammenlignet med eldre NIR-blokkerte dyr (8-9 måneder). Alle grafer viser ganger endring av SOD-en genuttrykk i forhold til den unge humbug-behandlet kontroll. Data representerer middelverdi ± SD. Alle data ble analysert ved hjelp av enveis ANOVA og statistisk signifikans bestemmes ved hjelp av Tukey multiple sammenlignings post-hoc test. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

De representative resultater som er beskrevet her viser at korte transcranial levering av NIR-lys (90 sek / dag i 5 dager) er tilstrekkelig til å heve nivåene av antioksidant ekspresjon i eldre mus sammenlignet med sham-behandlede mus. Mens utstrålt varme vil kunne representere en kilde for mitokondriell og / eller neuronal aktivering, som rapportert for rotte-vestibular afferenter 24 - vår måling av varmen som avgis av NIR LED-enheten var <0,2 ° C i løpet av 90 sek, og som sådan er lite sannsynlig å forårsake endringene er beskrevet her. Videre, i motsetning til rapporten fremhevet ovenfor, NIR behandling som brukes her ble ikke påføres direkte på sensorisk epitel eller vestibulær afferente nevroner, og som sådan er også lite sannsynlig å påvirke termo sensitive kanaler (f.eks TRPV4). Endelig har tidligere arbeidet ved hjelp av samme NIR enhet i andre områder av hjernen antydet at varmen var ikke kilden til observerte forskjeller 7,9.

Mens disse results viser en opp-regulering av cellulære responser til alder-assosiert oksidativt stress på genetisk nivå, er det ikke klart hvorvidt disse endringene blir videre uttrykt på proteinnivå, eller viktigere, enten de er reflektert i den totale balansen ytelsen til mus. I tillegg er den oppregulering vist for enkeltstedsnærværende antioksidant. Det er sannsynlig at flere markører for cellenes stoffskifte er berørt av denne behandlingen regime. Videre, ettersom mRNA ble ekstrahert fra det vestibulære anordningen i toto (dvs., hårceller, støttelegemer, vestibulare afferenter og epitel alle tilstedeværende) er det ikke mulig å relatere observerte endringer i cellulær metabolisme i respons til NIR lysbehandling til en bestemt vestibulære hår celle eller primære afferente type. Viktigere er imidlertid ved hjelp av den beskrevne preparat tilstrekkelig mRNA kan ekstraheres fra en enkelt mus for å tillate fremtidig korrelative studier mellom cellulær metabolisme og adferdsanalysen av balanse performance.

Den høye intensitet LED-enhet som brukes her avgir omtrent 5 J / cm2 per 90 sek behandling-på totalt 25 J energi i løpet av 5 dager. Selv om fordelen ved bruk av lang bølgelengde lys (inkludert NIR) er pene, kan det ikke antas at den fulle 25-J av NIR-lys blir levert til den vestibulære sensorisk epitel. I mus, må lyset penetrerer i det minste 1 mm gjennom lag av mykt vev og ben, som beskytter den perifere vestibulære apparater og hjernen. Hos mennesker dette strekker til centimeter. Dermed pene av lys representerer en begrensning av den beskrevne teknikken i forhold til oversettelse av NIR lys behandlingsstrategier inn i klinisk setting. Nyere arbeid men har ansatt optiske fibre å levere NIR lys til dype strukturer i hjernen inkludert basalgangliene 25, og sanseorganer inkludert cochlea 26. Basert på dette, og plasseringen av den perifere vestibulære apparat i tilknytning tilcochlea (og klinisk tilgang til det via mastoid prosess), er det mulig å foreslå at i det menneskelige, direkte stimulering av det vestibulære sensorisk epitel kunne oppnås gjennom en liten optisk fiber utløst av en ekstern enhet - beslektet med et cochlea implantat 27 .

Flere forhold kan endres i protokollen beskrevet ovenfor for å tilpasse seg til interesse av etterforskeren. For det første bølgelengde som brukes her (670 nm) kan utvides til å omfatte lengre bølgelengder i det infrarøde området som tidligere er rapportert i andre sensoriske systemer og dyremodeller. Sekund, kan behandlingsregimer også varieres avhengig av om kortsiktig eller langsiktig respons er aktuelle. Her har en meget kort behandlingsregimet ble benyttet, men dette kan utvides til lengre varighet, eller enda kortere varighet for å måle dynamikken i NIR-induserte endringer.

Den største utfordringen med denne protokoll er å opprettholde levedyktigheten av vevetunder vev utvinning. Gitt den tiden som kreves for å fjerne den benete labyrinten og avgiftsdirektoratet membran labyrinten fra det, er det avgjørende å redusere metabolsk sammenbrudd. Dette oppnås ved å bade vevet i iskald ACSF gjennom hele fremgangsmåten, og denne løsningen kontinuerlig perfusert med karbogen. I tillegg, ved enden av disseksjon prosedyre, videre vevsnedbrytning kan stanses ved bruk av flytende nitrogen til å blinke fryse ekstrahert vev. Når det er hensiktsmessig, kan den frosne vev tines og mRNA hentet for videre genet analyse.

Selv om metodene som er beskrevet her ikke beskriver hele virkningen av Nir lysbehandling på cellenes stoffskifte i det vestibulære sensorisk epitel, kan videre anvendelse av denne strategien endres til å inkludere andre alders assosiert markører for mitokondriefunksjon 28,29 og / eller cellulær metabolsk fornærmelser som hypoksi 30. Til syvende og sist, til evnen til å beskrive vestibular cellulær metabolsk profil av en person mus vil tillate etterforskningen av sammenhengene mellom balanse ytelse og subcellulære prosesser under aldring, og virkningen av legemiddel inkludert NIR behandling.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne erklærer de har ingen konkurrerende økonomiske interesser.

Acknowledgements

Forfatterne ønsker å erkjenne Dr. Paul Witting og Ms Genevieve Fong for deres hjelp med mRNA ekstraksjon og PCR, og Garnett Passe og Rodney Williams Memorial Foundation for støtte.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Quantum WARP 10 Quantum Devices 2070N030-A
Screw top microtubules Quality Scientific Plastics 520-GRD-Q
Ketamine Parnell, Alexandria Australia
Standard pattern scissors FST 14001-12
Carbon steel surgical blades #22 Livingstone SBLDCL 22
Friedman-Pearson rongeurs FST 16221-14
Stereo microscope Leica Microsystems A60S
Dumont #5 SF forceps FST 11252-00
Isolate II RNA Micro Kit Bioline BIO-52075

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Agrawal, Y., Carey, J. P., Della Santina,, C, C., Schubert, M. C., Minor, L. B. Disorders of balance and vestibular function in US adults: data from the National Health and Nutrition Examination Survey, 2001-2004. Archives of internal medicine. 169, 938-944 (2009).
  2. Bessho, K., et al. Effect of subthreshold infrared laser treatment for drusen regression on macular autofluorescence in patients with age-related macular degeneration. Retina. 25, 981-988 (2005).
  3. Olk, R. J., et al. Therapeutic benefits of infrared (810-nm) diode laser macular grid photocoagulation in prophylactic treatment of nonexudative age-related macular degeneration: two-year results of a randomized pilot study. Ophthalmology. 106, 2082-2090 (1999).
  4. Rodanant, N., et al. Predictors of drusen reduction after subthreshold infrared (810 nm) diode laser macular grid photocoagulation for nonexudative age-related macular degeneration. American journal of ophthalmology. 134, 577-585 (2002).
  5. De Taboada, L., et al. Transcranial laser therapy attenuates amyloid-beta peptide neuropathology in amyloid-beta protein precursor transgenic mice. Journal of Alzheimer's disease : JAD. 23, 521-535 (2011).
  6. Grillo, S. L., Duggett, N. A., Ennaceur, A., Chazot, P. L. Non-invasive infra-red therapy (1072 nm) reduces beta-amyloid protein levels in the brain of an Alzheimer's disease mouse model. TASTPM. Journal of photochemistry and photobiology. B, Biology. 123, 13-22 (2013).
  7. Purushothuman, S., Johnstone, D. M., Nandasena, C., Mitrofanis, J., Stone, J. Photobiomodulation with near infrared light mitigates Alzheimer's disease-related pathology in cerebral cortex - evidence from two transgenic mouse models. Alzheimer's researc., & therapy. 6, 2 (2014).
  8. Sommer, A. P., et al. 670 nm laser light and EGCG complementarily reduce amyloid-beta aggregates in human neuroblastoma cells: basis for treatment of Alzheimer's disease. Photomedicine and laser surgery. 30, 54-60 (2012).
  9. Moro, C., et al. Photobiomodulation preserves behaviour and midbrain dopaminergic cells from MPTP toxicity: evidence from two mouse strains. BMC neuroscience. 14, 40 (2013).
  10. Peoples, C., et al. Photobiomodulation enhances nigral dopaminergic cell survival in a chronic MPTP mouse model of Parkinson's disease. Parkinsonis., & related. 18, 469-476 (2012).
  11. Shaw, V. E., et al. Neuroprotection of midbrain dopaminergic cells in MPTP-treated mice after near-infrared light treatment. The Journal of comparative neurology. 518, 25-40 (2010).
  12. Ying, R., Liang, H. L., Whelan, H. T., Eells, J. T., Wong-Riley, M. T. Pretreatment with near-infrared light via light-emitting diode provides added benefit against rotenone- and MPP+-induced neurotoxicity. Brain research. 1243, 167-173 (2008).
  13. Rajguru, S. M., et al. Infrared photostimulation of the crista ampullaris. The Journal of physiology. 589, 1283-1294 (2011).
  14. Chung, H., et al. The nuts and bolts of low-level laser (light) therapy. Annals of biomedical engineering. 40, 516-533 (2012).
  15. Desmet, K. D., et al. Clinical and experimental applications of NIR-LED photobiomodulation. Photomedicine and laser surgery. 24, 121-128 (2006).
  16. Huang, Y. Y., Chen, A. C., Carroll, J. D., Hamblin, M. R. Biphasic dose response in low level light therapy. Dose-response : a publication of International Hormesis Society. 7, 358-383 (2009).
  17. Rojas, J. C., Gonzalez-Lima, F. Low-level light therapy of the eye and brain. Eye and brain. 3, 49-67 (2011).
  18. Vranceanu, F., et al. Striated organelle, a cytoskeletal structure positioned to modulate hair-cell transduction. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109, 4473-4478 (2012).
  19. Johnson, K. R., et al. Separate and combined effects of Sod1 and Cdh23 mutations on age-related hearing loss and cochlear pathology in C57BL/6J mice. Hearing research. 268, 85-92 (2010).
  20. Tung, V. W., Di Marco, S., Lim, R., Brichta, A. M., Camp, A. J. An isolated semi-intact preparation of the mouse vestibular sensory epithelium for electrophysiology and high-resolution two-photon microscopy. Journal of visualized experiments : JoVE. e50471 (2013).
  21. Kirby, J., Menzies, F. M., Cookson, M. R., Bushby, K., Shaw, P. J. Differential gene expression in a cell culture model of SOD1-related familial motor neurone disease. Human molecular genetics. 11, 2061-2075 (2002).
  22. Parry, S. N., Ellis, N., Li, Z., Maitz, P., Witting, P. K. Myoglobin induces oxidative stress and decreases endocytosis and monolayer permissiveness in cultured kidney epithelial cells without affecting viability. Kidney and Blood Pressure Research. 31, 16-28 (2008).
  23. Saee-Rad, S., et al. Analysis of superoxide dismutase 1, dual-specificity phosphatase 1, and transforming growth factor, beta 1 genes expression in keratoconic and non-keratoconic corneas. Molecular vision. 19, 2501-2507 (2013).
  24. Albert, E. S., et al. TRPV4 channels mediate the infrared laser-evoked response in sensory neurons. Journal of neurophysiology. 107, 3227-3234 (2012).
  25. Moro, C., et al. Photobiomodulation inside the brain: a novel method of applying near-infrared light intracranially and its impact on dopaminergic cell survival in MPTP-treated mice. Journal of neuroscience. 120, 670-683 (2014).
  26. Moreno, L. E., et al. Infrared neural stimulation: beam path in the guinea pig cochlea. Hearing research. 282, 289-302 (2011).
  27. Curthoys, I. S. A red thread as a guide in the vestibular labyrinth. The Journal of physiology. 589, 1241-1241 (2011).
  28. Chakrabarti, S., et al. Mitochondrial Dysfunction during Brain Aging: Role of Oxidative Stress and Modulation by Antioxidant Supplementation. Aging and disease. 2, 242-256 (2011).
  29. Petrosillo, G., De Benedictis, V., Ruggiero, F. M., Paradies, G. Decline in cytochrome c oxidase activity in rat-brain mitochondria with aging. Role of peroxidized cardiolipin and beneficial effect of melatonin. Journal of bioenergetics and biomembranes. 45, 431-440 (2013).
  30. Zhu, H., Sun, A., Zou, Y., Ge, J. Inducible metabolic adaptation promotes mesenchymal stem cell therapy for ischemia: a hypoxia-induced and glycogen-based energy prestorage strategy. Arteriosclerosis, thrombosis, and vascular biology. 34, 870-876 (2014).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Video Stats