Scarless घाव मरम्मत की एक माउस भ्रूण त्वचा मॉडल

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Medicine

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Walmsley, G. G., Hu, M. S., Hong, W. X., Maan, Z. N., Lorenz, H. P., Longaker, M. T. A Mouse Fetal Skin Model of Scarless Wound Repair. J. Vis. Exp. (95), e52297, doi:10.3791/52297 (2015).

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Abstract

Introduction

भ्रूण त्वचा के घाव हमल एक में देर तक तेजी से और scarlessly चंगा। भ्रूण scarless घाव की मरम्मत सामान्य ऊतक वास्तुकला और समारोह के उत्थान की विशेषता है। scarring के phenotype के लिए एक scarless से संक्रमण मनुष्यों में और चूहों 2,3 में भ्रूण दिन 18 (E18) के आसपास गर्भावस्था की तीसरी तिमाही में होता है। वयस्क की तुलना में, भ्रूण घाव की मरम्मत तेजी से epithelialization, संयोजी ऊतक बयान, और fibroblast प्रवास की विशेषता है।

कई अध्ययनों से जल्दी भ्रूण के विकास के दौरान scarless घाव भरने की घटना के लिए संभव स्पष्टीकरण की पेशकश की है। शोथ वयस्क घाव की मरम्मत की एक बुनियादी घटक है; हालांकि, भ्रूण घाव तीव्र सूजन 4 की कमी की विशेषता है। इस चाहे भ्रूण चरणों के दौरान प्रतिरक्षा प्रणाली के कार्यात्मक अपरिपक्वता का परिणाम अस्पष्ट बनी हुई है। एक ताजा अध्ययन में सुझाव दिया है कि बहुतायत, चटाई में मतभेदurity, और E18 भ्रूण त्वचा बनाम E15 में मस्तूल कोशिकाओं के समारोह में कम से कम माउस तीन में एक scarless फेनोटाइप से संक्रमण के लिए जिम्मेदार हो सकता है। अन्य अध्ययनों के गुण और भ्रूण और वयस्क घाव मैक्रोफेज की बहुतायत में मतभेद भ्रूण घाव की मरम्मत 5 के दौरान सामान्य बाह्य मैट्रिक्स (ईसीएम) के सुधार के लिए जिम्मेदार हैं कि मंज़ूर।

भ्रूण और वयस्क विकास के दौरान पर्यावरणीय कारकों में अंतर भी घाव की मरम्मत प्रभावित कर सकता है। Longaker और उनके सहयोगियों ने भ्रूण से घाव द्रव 6 तरल पदार्थ घाव वयस्क में कोई नहीं की तुलना में Hyaluronic एसिड उत्तेजक गतिविधि का उच्च स्तर के पास दिखाया। नतीजतन, भ्रूण घाव वातावरण में hyaluronic एसिड, सेल गतिशीलता और प्रसार के लिए अनुकूल एक microenvironment को बढ़ावा देता है कि एक ग्लाइकोसमिनोग्लाइकन, का उच्च स्तर जल्दी भ्रूण के विकास के दौरान देखा scarless phenotype के लिए जिम्मेदार हो सकता है। Feta तथ्य यह है कि सबूत बिंदु के अन्य लाइनोंएल घाव वातावरण अपेक्षाकृत hypoxemic और वृद्धि कारकों 7 में अमीर बाँझ एमनियोटिक द्रव में डूबे हुए है। हालांकि, कोई निश्चित जवाब तंतुमय की मरम्मत करने के लिए scarless उत्थान से संक्रमण से चलाता है कि embryogenesis दौरान एक महत्वपूर्ण घटना या कारक के लिए प्रदान किया गया है।

भ्रूण में scarless उपचार के लिए तंत्र जिम्मेदार समझना एक सटीक और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य मॉडल जरूरी। यहाँ हम विस्तार E16.5 (scarless) और E18.5 (scarring के) माउस भ्रूण की पीठ में भ्रूण scarless घाव भरने की एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य मॉडल। साथ ही, इस मॉडल की मामूली बदलाव ऐसे भ्रूण घाव और त्वचा 8,9 के जीन की अभिव्यक्ति विश्लेषण के रूप में आगे के अध्ययन के एक नंबर प्रदर्शन करने के लिए उपयोग किया जा सकता है। ठीक समय समाप्त हो गर्भधारण इस भ्रूण scarless घाव भरने मॉडल के सफल आवृत्ति के लिए महत्वपूर्ण हैं कि यह देखते हुए, हम superovulation का समय समाप्त हो गर्भधारण के लिए भी विस्तार से हमारे प्रोटोकॉल।

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Protocol

नोट: इस पत्र में वर्णित सभी प्रक्रियाओं प्रयोगशाला पशु की देखभाल पर स्टैनफोर्ड प्रशासनिक पैनल (APLAC) द्वारा स्थापित दिशा निर्देशों के अनुसार किया जाता है।

1. समय गर्भधारण - Superovulation तकनीक (चित्रा 1)

नोट: मुख्यतौर E16.5 और E18.5 पर भ्रूण सर्जरी के लिए माउस भ्रूण के गर्भावधि उम्र समय महत्वपूर्ण महत्व का है। Superovulation प्रेरित करने के लिए गर्भवती घोड़ी सीरम (पीएमएस) और मानव chorionic gonadotropin (एचसीजी) इंजेक्शन का उपयोग कर माउस गर्भधारण के समय के लिए हमारे प्रोटोकॉल इस खंड हम विस्तार से।

  1. 1:00 और 1 दिन के लिए 3:00 बजे के बीच 100 μl पीबीएस के एक मात्रा में पीएमएस के 3.0-5.0 अंतरराष्ट्रीय इकाइयों (आइयू) के साथ मादा चूहों (पिंजरे प्रति <5) intraperitoneally (आईपी) इंजेक्षन।
  2. 00:00 और दिन 3 (पैंतालीस पीएमएस इंजेक्शन के बाद घंटा 47) के 14:00 के बीच, 100 μl पीबीएस के एक मात्रा में एचसीजी के 3.0-5.0 आइयू के साथ मादा चूहों आईपी इंजेक्षन।
    नोट: एचसीजी इंजेक्शन लाती है ovulation के लगभग 12 घंटे बाद इंजेक्शन।
  3. इसके तत्काल बाद एचसीजी इंजेक्शन के बाद, 8-16 हफ्तों के आयु वर्ग के पुरुषों के साथ महिलाओं के दोस्त।
    नोट: हम आम तौर पर अलग-अलग पुरुषों के एक पिंजरे में दो महिलाओं को जगह है।
  4. भ्रूण उम्र E0.5 के रूप में - (10:00 6:00) और रिकार्ड 4 दिन की सुबह पर पुरुषों से अलग महिलाओं।
    नोट: योनि प्लग इस समय की जाँच की जा सकता है; हालांकि, एक योनि प्लग का अवलोकन गर्भावस्था की गारंटी नहीं है और कोई प्लग मनाया जाता है जब महिलाओं के गर्भवती बन सकता है। गर्भावस्था 4 दिन की सुबह योनि प्लग के लिए जाँच, गर्भावधि उम्र E16.5 और E18.5 में दृश्य निरीक्षण और / या टटोलने का कार्य द्वारा आम तौर पर मानने योग्य है कि यह देखते हुए सख्ती जरूरी नहीं है। हमारे अनुभव में, और तनाव पर निर्भर करता है, सुपर ovulated महिलाओं का लगभग 30-50% यहाँ वर्णित तकनीक का उपयोग कर गर्भवती हो गई।

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चित्रा Superovulation तकनीक के लिए 1. योजनाबद्ध। चूहों में superovulation का समय समाप्त हो गर्भधारण के लिए योजनाबद्ध दिखा प्रक्रिया। इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

2. Murine भ्रूण सर्जरी E16.5 और E18.5 भ्रूण पर (पृष्ठीय लोग घायल हो गए) (चित्रा 2)

  1. प्रक्रिया से पहले, 70% isopropyl शराब के साथ ऑपरेटिंग कमरे और उपकरणों के सभी सतहों को साफ। इसके अलावा, उन्हें autoclaving द्वारा प्रक्रिया में उपयोग किया जाएगा कि सभी शल्य चिकित्सा की आपूर्ति और उपकरणों बाँझ। कुछ संस्थानों गर्म मनका नसबंदी के बाद के उपयोग की अनुमति दे सकता। आपरेशन के अनुसार, धुंध और शल्य चिकित्सा उपकरण शामिल है कि बाँझ पैक का उपयोग करें।
  2. प्रति मिनट 1 एल में रखरखाव संज्ञाहरण द्वारा पीछा मिनट प्रति 2 एल में 2.5% isoflurane / ऑक्सीजन के मिश्रण के तहत गर्भवती माताओं में संज्ञाहरण (भ्रूण उम्र E16.5 या E18.5) प्रेरित।
  3. चुनावफर्म उचित anesthetization, माउस के गहरे पेडल सजगता दबा रहे हैं सुनिश्चित करने और प्रवण स्थिति में माउस जगह है।
  4. Puralube प्रक्रिया के दौरान आंख में जलन या सूखापन को रोकने के लिए इस तरह के रूप में एक पशु चिकित्सक नेत्र मरहम लागू करें।
  5. अब से 30 सेकंड (2A चित्रा) के लिए लोमनाशक क्रीम का एक प्रकाश आवेदन प्रशासन द्वारा पेट तैयार करें।
  6. Povidone आयोडीन और शराब (चित्रा 2B और 2C) के साथ सड़न रोकनेवाला सर्जरी के लिए पेट की तैयारी।
  7. Microsurgical कैंची (चित्रा 2 डी और 2 ई) का उपयोग कर खुर्दबीन के नीचे midline laparotomy प्रदर्शन करते हैं।
  8. धीरे सर्जरी (चित्रा 2 एफ) के लिए चयनित गर्भाशय और भ्रूण बेनकाब।
  9. एक कुंद टिप सुई का उपयोग गर्म (38 डिग्री सेल्सियस) फॉस्फेट बफर खारा (पीबीएस) के साथ शल्य चिकित्सा क्षेत्र की सिंचाई
    नोट: एक ध्यान से एक बड़े बोर सुई की नोक झुकने से बनाया जा सकता है। (चित्रा 2 जी और 2H)।
  10. अनुमति है कि एक तरीके से भ्रूण स्थित करेंपीठ के लिए पूरा उपयोग है।
  11. इरादा पृष्ठीय लोग घायल हो गए (चित्रा 2I) की साइट overlying गर्भाशय के माध्यम से 7-0 नायलॉन सीवन का उपयोग कर एक पर्स स्ट्रिंग सिलाई गुजरती हैं। स्थिति पर्स छोड़ दिया है या रीढ़ की हड्डी के अधिकार के लिए पीठ के एक क्षेत्र पर स्ट्रिंग, और बड़े रक्त वाहिकाओं से रहित गर्भाशय की दीवार के एक क्षेत्र में।
  12. पर्स स्ट्रिंग (चित्रा 2J) के केंद्र में गर्भाशय की दीवार और एमनियोटिक थैली के माध्यम से एक 3 मिमी चीरा बनाओ।
  13. गर्म (38 डिग्री सेल्सियस) पीबीएस के साथ चीरा साइट की सिंचाई।
  14. Microsurgical कैंची का प्रयोग, भ्रूण की पीठ में, एक भी पूर्ण मोटाई excisional घाव, लंबाई में लगभग 1 मिमी काट दिया।
  15. धीरे धब्बा चीरा साइट कपास की नोक applicator के साथ सूखी।
  16. घाव के स्थान (चित्रा 2K) को चिह्नित करने के घाव साइट में 3 μl मात्रा भारत स्याही subcutaneously इंजेक्षन।
  17. स्याही घाव साइट के भीतर बनाए रखा गया है सुनिश्चित करने के लिए गर्म (38 डिग्री सेल्सियस) पीबीएस के साथ सिंचाई।
  18. शल्य चिकित्सा सहायक मेरे पास हैnject पर्स स्ट्रिंग के रूप में एमनियोटिक थैली में कुंद-टिप 10 जी सिरिंज के माध्यम से गर्म (38 डिग्री सेल्सियस) पीबीएस (चित्रा 2L) बंद कर दिया है। पर्स स्ट्रिंग बंद होने के पूरा होने (चित्रा 2 एम) nears के रूप में सिरिंज वापस लेना।
  19. धीरे उदर गुहा (चित्रा 2N) में गर्भाशय वापसी।
  20. एवर्ट त्वचा और पेरिटोनियम।
  21. गर्म (38 डिग्री सेल्सियस) पीबीएस के साथ उदर गुहा शल्य चिकित्सा सहायक की सिंचाई की है।
  22. त्वचा और पेरिटोनियम स्टैपल करके जल्दी बंद पेट (चित्रा 2O) बंद कर दिया। मानक बंद होने के दो परतों में किया जाता है; पेरिटोनियम और दूसरी परत में एक परत, चमड़े के नीचे ऊतक और त्वचा में पेट की मांसपेशियों। तत्काल त्याग और भ्रूण की कटाई के लिए, हमारे प्रदर्शन एक परत में बंद करने से पता चलता है।
  23. 30 मिनट के लिए या जानवर sternal अवलंबन बनाए रखने के लिए पर्याप्त होश आएगा जब तक 37 डिग्री सेल्सियस पर सेट एक गर्म इनक्यूबेटर में निगरानी में पशु रखें।
  24. रेत न करेंयह पूरी तरह से प्रक्रिया से बरामद किया है जब तक अन्य जानवरों की कंपनी के लिए पशु कलश।
  25. संज्ञाहरण से और बाद में 48 घंटा के दौरान awaking पर, buprenorphine के चमड़े के नीचे इंजेक्शन (0.05 मिलीग्राम / किग्रा) दर्द आकलन के आधार पर जरूरत के रूप में analgesia के लिए हर 12 घंटा प्रशासन। जरूरत के रूप में अतिरिक्त पोस्ट ऑपरेटिव दर्द से राहत के लिए चमड़े के नीचे इंजेक्शन के माध्यम से Carprofen (5 मिलीग्राम / किग्रा) प्रशासन।
  26. पिंजरे में जानवरों लौटें और भोजन और पानी यथेच्छ के साथ उन्हें प्रदान करते हैं।
  27. दर्द की अभिव्यक्ति के लिए बारीकी से निगरानी।
  28. 48 घंटा के बाद सर्जरी, isoflurane और फसल घायल भ्रूण की अधिक मात्रा के साथ गर्भवती मां बलिदान। ऐसा करने के लिए आदेश में, 5% या अधिक करने के लिए isoflurane एकाग्रता को समायोजित करने और सांस लेने की समाप्ति के बाद एक मिनट के लिए जोखिम बनाए रखें। गर्भाशय ग्रीवा अव्यवस्था के साथ इच्छामृत्यु की पुष्टि करें। उम्र से मिलान नियंत्रण के लिए एक unwounded भ्रूण हार्वेस्ट। देर भ्रूण जैसे IACUC सिफारिशों के अनुरूप इच्छामृत्यु का एक अलग तरीका है चाहिए डेकैपिटेशन, गर्भाशय ग्रीवा अव्यवस्था, या रासायनिक इंजेक्शन।

चित्रा 2
चित्रा 2. योजनाबद्ध Murine भ्रूण सर्जरी के लिए। E16.5 और E18.5 माउस भ्रूण में लोग घायल हो गए पृष्ठीय के लिए सामान्य चरणों। (ए) माउस पेट के Depilation। (बी और सी) माउस पेट की तैयारी। (डी) माइक्रोस्कोप शल्य चिकित्सा के लिए इस्तेमाल किया गर्भाशय के माध्यम से पर्स स्ट्रिंग सिवनी की प्रक्रिया। (ई) Midline laparotomy। (एफ) गर्भाशय का एक्सपोजर। कुंद टिप सुई (G) निर्माण। गर्म नमक के साथ गर्भाशय की (एच) सिंचाई। (मैं) निर्माण। (जे) चीरा दीवार और 1 मिमी पूर्ण मोटाई excisional घाव पीढ़ी। (कश्मीर) भारत स्याही के चमड़े के नीचे इंजेक्शन। (एल और एम) पर्स स्ट्रिंग सिवनी की क्लोजर। (एन और ओ)पेट की क्लोजर। इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Representative Results

Histologic विश्लेषण के लिए, E16.5 और E18.5 माउस भ्रूण की पृष्ठीय त्वचा में त्वचीय घाव 48 घंटा पीएफए ​​4% में तय के बाद लोग घायल हो गए, और आयल एम्बेडेड काटा जाना चाहिए। फ्लोरोसेंट ट्रांसजेनिक मॉडल में, अक्तूबर के साथ cryopreservation उपयुक्त हो सकता है। सेलुलर और संयोजी ऊतक वास्तुकला कल्पना करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है कि कई दाग रहे हैं। Hematoxylin और eosin नीले नाभिक और इओसिनोफिलिक संरचनाओं (अर्थात्।, कोशिका द्रव्य और बाह्य कोलेजन) लाल, गुलाबी, और नारंगी रंग के विभिन्न रंगों के धब्बे कि एक दो रंग के दाग है। मैलोरी की Trichrome एनिलिन नीला, एसिड fuschin और नारंगी जी, संयोजी ऊतक आसपास से कोशिकाओं भेद के लिए सबसे उपयुक्त से मिलकर तीन रंग के दाग है।

चित्रा 3
चित्रा 3. scarless E16.5 भ्रूण घावों की वीडियो। (ए) hematoxylin और eosin दाग पुनःveals पूरा reepithelialization और भड़काऊ कोशिकाओं की संख्या में एक हल्के वृद्धि वर्तमान (तीर)। बार = 25; (100x, बार = 100 माइक्रोन) (बी) के eosin दाग regenerating बालों के रोम (तीर) (400x के आसपास भारत स्याही (तीर) से पता चलता है । बार = 25 माइक्रोन); माइक्रोन) (सी) मैलोरी की Trichrome दाग एक बाल कूप (400x की उपस्थिति के साथ एक ठीक जालीदार त्वचीय कोलेजन पैटर्न का पता चलता है। Colwell एट अल। 10 से अनुमति के साथ पुनर्प्रकाशित इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

पृष्ठीय excisional घावों को उचित आकार (1 मिमी) और गहराई (पूर्ण मोटाई) के होते हैं, hematoxylin और eosin धुंधला भड़काऊ की संख्या में कम से कम जख्म, पूरा reepithelialization, और केवल एक छोटे से वृद्धि के साथ कि E16.5 त्वचा भर देता है खोलेगा कोशिकाओं (चित्रा 3A)। इसके अलावा, इन wounडी एस लगभग सामान्य त्वचा वास्तुकला के साथ ठीक है और चोट की साइट के भीतर बालों के रोम regenerating शामिल करना चाहिए (तीर; 3B चित्रा)। हौसले से बनाया घाव को भारत स्याही का उचित आवेदन चोट की साइट (; 3B चित्रा तीर सिर) पर स्याही बयान में परिणाम चाहिए। अंत में, Trichrome धुंधला unscarred डर्मिस (चित्रा -3 सी) के ठीक एक जालीदार त्वचीय कोलेजन पैटर्न विशेषता प्रकट करना चाहिए।

चित्रा 4
चित्रा 4. Scarring E18.5 भ्रूण घावों की वीडियो। (ए) hematoxylin और eosin दाग चोट के स्थल पर डर्मिस में eosin धुंधला में वृद्धि (तीर) से पता चलता है। (200x, बार = 50 माइक्रोन) (बी) के मैलोरी की Trichrome दाग घने त्वचीय कोलेजन (तीर) (400x से पता चलता है; बार = 25 माइक्रोन)। Colwell एट अल से अनुमति के साथ पुनर्प्रकाशित।10

E16.5, hematoxylin और पृष्ठीय घाव E18.5 पर बना है और चोट (चित्रा -4 ए) के स्थल पर सामान्य त्वचा वास्तुकला के नुकसान के साथ एक घने निशान प्रकट करना चाहिए 48 घंटा के बाद लोग घायल हो गए काटा की eosin धुंधला पर किए गए घावों की तुलना में। (तीर, चित्रा 4 बी) इसी तरह, Trichrome धुंधला बेतरतीब कोलेजन बयान के एक घने पैटर्न का पता चलता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

यहाँ प्रस्तुत शल्य प्रोटोकॉल पहले हमारी प्रयोगशाला में 10 से 2006 में प्रकाशित भ्रूण murine scarless चिकित्सा की एक excisional मॉडल का वर्णन है। Excisional लोग घायल हो गए 11 अन्य स्थापित मॉडलों के अलावा, भ्रूण murine scarless उपचार के incisional मॉडल के रूप में अच्छी तरह से 12,13 मौजूद हैं। बंदर, भेड़, खरगोश, ओपस्सम, और चूहे में भ्रूण scarless घाव भरने की जांच 14-17 सूचित किया गया है। हालांकि, चूहों की वजह से उनके अपेक्षाकृत कम प्रति-दिन पिंजरे लागत और अच्छी तरह से विशेषता जीनोम को भ्रूण scarless घाव भरने की खोज के लिए एक आदर्श मॉडल का प्रतिनिधित्व करते हैं। इसके अलावा, समारोह के अस्थायी और स्थानिक आनुवंशिक नुकसान / लाभ ठीक scarless मरम्मत के तंत्र को समझने के लिए murine ट्रांसजेनिक प्रणालियों की पेशकश के अवसरों का उपयोग कर भ्रूण के विकास के दौरान हासिल की जा सकती है।

इन फायदों के बावजूद, चूहों की वजह से उनके छोटे आकार के लिए भ्रूण सर्जरी के दौरान कुछ तकनीकी चुनौतियों प्रस्तुत करते हैं। दियाएक गर्भवती मां पर संज्ञाहरण के तनाव, महान देखभाल isoflurane / ऑक्सीजन का स्तर प्रशासित किया जा रहा है पर नजर रखने के लिए लिया जाना चाहिए। प्रति मिनट 1 एल में रखरखाव संज्ञाहरण द्वारा पीछा मिनट प्रति 2 एल में 2.5% isoflurane / ऑक्सीजन का एक मिश्रण सावधानी से पालन किया जाना चाहिए। इस महत्वपूर्ण कारक में विचलन या उतार चढ़ाव काफी रुग्णता को प्रभावित कर सकते हैं। पर्स स्ट्रिंग सिवनी के उचित स्थान सर्जरी का सबसे तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण पहलू का प्रतिनिधित्व करता है। सही ढंग से इस सिलाई जगह करने में विफलता एमनियोटिक द्रव और पीबीएस के बाद बंद की लीक में परिणाम होगा। गर्भाशय में तरल पदार्थ की एक अपर्याप्त मात्रा भ्रूण को आघात में परिणाम होगा और समय से पहले गर्भाशय संकुचन उत्पन्न हो सकता है। इस कारण से, गर्भाशय के उद्घाटन के अवसर पर खो एमनियोटिक द्रव के प्रतिस्थापन भी इस शल्य चिकित्सा मॉडल में एक महत्वपूर्ण कदम है। केयर पर्स स्ट्रिंग बंद हो गया है के रूप में लगातार गर्म पीबीएस बेदखल करने के लिए लिया जाना चाहिए। इन कारकों में महत्वपूर्ण समस्या निवारण आवश्यक है और हम इन विवरण के लिए है कि ध्यान पर जोरएक सफल सर्जरी की संभावना बढ़ जाएगी। हालांकि, यहां तक ​​कि अनुभवी शल्य हाथों से उन E16.5 भ्रूण में लगभग 40% की रुग्णता दर के लिए योजना बनानी चाहिए।

भ्रूण scarless घाव भरने को समझना विकास के वयस्क चरणों के दौरान fibrogenic व्यवहार के vivo मॉडुलन के उद्देश्य से translational चिकित्सा के लिए मूल्य रखती है। वयस्क त्वचा की तुलना में, भ्रूण त्वचा एक विकासशील डर्मिस, कम तन्य शक्ति, नवजात बालों के रोम, और अलग अलग ईसीएम घटकों 2,4 है। भ्रूण त्वचा वयस्क त्वचा 4,9 की तुलना में वयस्क त्वचा, कम और कम परिपक्व मस्तूल कोशिकाओं, Keratins 8 और 19, और hyaluronic एसिड के उच्च स्तर की अभिव्यक्ति की तुलना में मैं टाइप करने के लिए कोलेजन प्रकार III के एक ऊंचा अनुपात है। भ्रूण में scarless चिकित्सा अंतर्निहित तंत्र का गूढ़ रहस्य करके, हम एक पुनर्योजी फेनोटाइप की ओर वयस्क में फाइब्रोसिस के लिए जिम्मेदार आणविक और सेलुलर रास्ते रास्ते पर लाना शुरू कर सकते हैं। उद्भव ओमाउस में च अनुरेखण वंश और अन्य आनुवंशिक उपकरण भ्रूण scarless घाव भरने की जांच के लिए होनहार नए रास्ते खोल दिया है। रुग्णता और भ्रूण सर्जरी के साथ जुड़े समयपूर्व गर्भाशय के संकुचन की स्वाभाविक उच्च दर को देखते हुए, भ्रूण scarless त्वचा की जांच विवो में उपचार के लिए एक सटीक और repeatable शल्य मॉडल की आवश्यकता घाव। यहाँ हम विस्तार E16.5 (scarless) और E18.5 (scarring के) माउस भ्रूण की पीठ में भ्रूण scarless घाव भरने की एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य मॉडल।

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Acknowledgments

यह काम (एचपीएल) के एनआईएच अनुदान R01 GM087609, (MTL करने के लिए) (एचपीएल) के एंथोनी शू, एनआईएच अनुदान U01 HL099776 के सम्मान में इंग्रिड लाइ और बिल शू से एक उपहार, Hagey प्रयोगशाला के लिए से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था बाल चिकित्सा पुनर्योजी चिकित्सा और (MTL और एचपीएल के लिए) ओक फाउंडेशन। GGW मेडिसिन के स्टैनफोर्ड स्कूल, स्टैनफोर्ड चिकित्सा वैज्ञानिक प्रशिक्षण कार्यक्रम के द्वारा समर्थित है, और NIGMS प्रशिक्षण अनुदान GM07365 गया था। MSH सीआईआरएम क्लीनिकल फैलो प्रशिक्षण अनुदान TG2-01159 द्वारा समर्थित किया गया। WXH सरनौफ कार्डियोवास्कुलर फाउंडेशन से धन के द्वारा समर्थित किया गया।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
7-O MONOSOF Suture eSuture SN-1647G
Surgical Forceps Kent Scientific INS650916
Micro-scissors Kent Scientific INS600127
Autoclip 9 mm Texas Scientific Instruments 205060
Insulin Syringe Thermo Fisher Scientific 22-272-382
Black Pigment AIMS 242
BD Safety-Lok 3 ml Syringe BD Biosciences 309596
Phosphate Buffered Saline Life Technologies 10010-049
OPMI-MD Surgical Microscope Carl Zeiss Surgical Inc
Pregnant Mares Serum (PMS) Millipore 367222
Human Chorionic Gonadotropin (HCG) Sigma-Aldrich CG10
Povidone Iodine Prep Solution Dynarex 1415
Nair (depilatory cream) Church and Dwight Co. 22600267058

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References

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