पृथक करने की विधि * These authors contributed equally

Medicine
 

Summary

पूर्व vivo फेफड़े छिड़काव (EVLP) मनुष्यों में फेफड़ों प्रत्यारोपण अधिक आसानी से उपलब्ध दाता पूल अंगों का आकलन और विस्तार करने की क्षमता को सक्रिय करने के द्वारा बनने के लिए अनुमति दी गई है। यहाँ, हम एक चूहे EVLP कार्यक्रम और भविष्य के विस्तार के लिए एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य मॉडल के लिए अनुमति देते हैं कि शोधन के विकास का वर्णन है।

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Nelson, K., Bobba, C., Eren, E., Spata, T., Tadres, M., Hayes, Jr., D., Black, S. M., Ghadiali, S., Whitson, B. A. Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program. J. Vis. Exp. (96), e52309, doi:10.3791/52309 (2015).

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Abstract

फेफड़ों के प्रत्यारोपण के लिए उपलब्ध स्वीकार्य दाता फेफड़ों की संख्या की वजह से खराब गुणवत्ता के लिए काफी सीमित है। पूर्व vivo फेफड़े छिड़काव (EVLP) मनुष्यों में फेफड़ों प्रत्यारोपण अधिक आसानी से उपलब्ध दाता पूल अंगों का आकलन और विस्तार करने की क्षमता को सक्रिय करने के द्वारा बनने के लिए अनुमति दी गई है। इस प्रौद्योगिकी का विस्तार होने और, संभावित मूल्यांकन और पूर्व प्रत्यारोपण के लिए घटिया फेफड़ों की गुणवत्ता में सुधार करने के लिए क्षमता में सुधार के रूप में एक महत्वपूर्ण आवश्यकता है। अधिक कड़ाई से इन तरीकों का मूल्यांकन करने के लिए, एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य पशु मॉडल दान में फेफड़ों के सुधार तकनीकों का परीक्षण और प्रबंधन के लिए और साथ ही फेफड़ों प्रत्यारोपण प्राप्तकर्ता करने की अनुमति होगी स्थापित करने की जरूरत है। इसके अलावा, उदा जुड़े विकृतियों के एक EVLP पशु मॉडल, वेंटिलेशन प्रेरित फेफड़ों की चोट (विली), इन विकृतियों के लिए उपचार का मूल्यांकन करने के लिए एक उपन्यास विधि प्रदान करेगा। यहाँ, हम यह मेरे लिए एक चूहा EVLP फेफड़ों के कार्यक्रम और शोधन के विकास का वर्णनभविष्य के विस्तार के लिए एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य मॉडल के लिए अनुमति देते हैं कि thod। हम भी इस EVLP प्रणाली के आवेदन चूहे फेफड़ों में विली करने के लिए मॉडल का वर्णन है। लक्ष्य महत्वपूर्ण जानकारी और 'ज्ञान के मोती "परीक्षण और त्रुटि से उठी और मजबूत और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है कि एक EVLP प्रणाली स्थापित करने के लिए महत्वपूर्ण हैं कि / तकनीकों के साथ अनुसंधान समुदाय को प्रदान करना है।

Introduction

नैदानिक ​​प्रासंगिकता

प्रत्यारोपण एक का इंतजार कर मर दीर्घ प्रतीक्षा सूची समय के लिए अग्रणी राष्ट्रीय स्तर पर उपयोग किया जा करने में सक्षम होने से फेफड़ों या रोगियों के केवल 19% के साथ प्रत्यारोपण के लिए उपलब्ध उपयुक्त फेफड़ों की कमी वर्तमान में है। कमी पुराने दाताओं, आघात, संक्रमण, मल्टी सिस्टम अंग विफलता और फसल दो पर कभी कभी घायल दाता फेफड़ों की वजह से हो सकता है। इसके अलावा, फेफड़ों के वक्ष गुहा और मानक परिवहन और संरक्षण तकनीक के बाहर एक कमजोर अंग गिरावट और अलाभकारी फेफड़ों के लिए नेतृत्व कर सकते है। इसलिए, को बनाए रखने और फेफड़ों की व्यवहार्यता पूर्व vivo में सुधार हाल ही में फेफड़ों प्रत्यारोपण चिकित्सा में एक प्रमुख ध्यान केंद्रित हो गया है।

पूर्व vivo फेफड़े छिड़काव (EVLP)

पूर्व vivo फेफड़ों के छिड़काव (EVLP) लगातार प्रत्यारोपण के लिए मूल्यांकन किया जा रहा अंगों छिड़कना के लिए विकसित किया है और कहा कि सभी मूल्यांकन की अवधि के लिए सक्षम बनाता गया हैफेफड़ों के पुनर्जीवन या reconditioning की क्षमता के लिए OWS। EVLP शरीर के अंग इस्कीमिक समय से बाहर कुल लम्बा और दान में अंगों को आगे की दूरी 3 यात्रा करने की अनुमति दे सकते हैं। आमतौर पर, फेफड़ों 50% 4 30% तक की 50 कुल फेफड़ों की क्षमता का% या प्रेरित ऑक्सीजन के एक अंश के साथ शिखर airway दबाव के 20 CMH 2 ओ (FIO 2) में हवादार रहे हैं। संरक्षण समाधान इंसानों और बड़े जानवरों 5,6 में 40-60 मिलीग्राम / किग्रा (100 मिलीग्राम / किलो की भविष्यवाणी की कार्डियक आउटपुट का लगभग 40%) में perfused है, लेकिन चूहों 7 के लिए हृदय उत्पादन का लगभग 20% पर perfused है। STEEN समाधान का समावेश मानव फेफड़ों फेफड़े के edema 9 के विकास के बिना आरटी वातावरण में यात्रा करने की अनुमति दी गई है। इस अग्रणी काम टोरंटो विश्वविद्यालय के फेफड़ों प्रत्यारोपण कार्यक्रम 10-13 से परिष्कृत किया गया है और प्रत्यारोपण 14,15 के लिए सीमांत दाता फेफड़ों के सुधार के आकलन के लिए मूल्यांकन किया जा रहा है। हालांकि, इष्टतम ventilatioप्रत्यारोपण के लिए सीमांत और / या उप मानक फेफड़ों को पुनर्जीवित करने की जरूरत है और एन छिड़काव स्थितियों में जाना जाता है और वर्तमान में अनुसंधान के एक सक्रिय क्षेत्र है नहीं है।

पृथक फेफड़ों के छिड़काव सिस्टम फेफड़ों की चोट, सांस की बीमारियों को फिर से बनाने के कारण करने के लिए छोटे जानवरों में प्रयोग किया जाता है, और इस्कीमिक क्षति को रोकने के लिए अलग अलग समाधान के साथ फेफड़ों छिड़कना किया गया है। जांचकर्ता इंसानों और बड़े जानवरों 16-18 में इस्तेमाल किया जा सकता है कि EVLP प्रोटोकॉल नकल करने के लिए पृथक फेफड़ों-छिड़काव प्रणाली का उपयोग करके फेफड़ों प्रत्यारोपण के एक छोटे-पशु मॉडल बनाया है। हालांकि, इस प्रयोगात्मक मॉडल मानव शरीर विज्ञान की नकल करने के लिए इस्तेमाल विभिन्न तकनीकों और मापदंडों के संबंध के साथ कई चुनौतियों का सामना किया। विशेष रूप से, EVLP दौरान फेफड़ों व्यवहार्यता को बनाए रखने में कई बारीकियों रहे हैं। इन बारीकियों के कारण कटाई तकनीक, सकारात्मक दबाव वेंटिलेशन सेटिंग्स, perfusate संरचना और प्रवाह की स्थिति और फेफड़ों की केन्युलेशन में मतभेद पैदा कर सकते हैं। वहाँefore, यहाँ लक्ष्य है कि हम एक कृंतक मॉडल में EVLP को लागू करने के लिए एक मजबूत विधि करने के लिए नेतृत्व मिल गया है कि समस्या निवारण और कार्यान्वयन सुझावों में से एक नंबर के साथ अनुसंधान समुदाय को प्रदान करना है।

Protocol

नोट: सभी प्रक्रियाओं इंसानियत की देखभाल और प्रयोगशाला पशुओं के उपयोग (IACUC) के लिए संस्थागत पशु की देखभाल और राष्ट्रीय अनुसंधान परिषद की गाइड की गाइड लाइनों के अनुसार प्रदर्शन किया गया और ओहियो स्टेट यूनिवर्सिटी IACUC समिति द्वारा अनुमोदन आया है।

1. प्रारंभिक सेटअप

  1. EVLP सर्किट की स्थापना की और गर्म (37 डिग्री सेल्सियस) perfusate से पहले पूर्व लगाए फेफड़ों को शामिल करने के लिए इस प्रणाली के माध्यम से घूम (चित्रा 1) है।
  2. गर्म पानी 37 डिग्री सेल्सियस के लिए जैकेट perfusate जलाशय, हीट एक्सचेंजर, और कृत्रिम छाती के लिए इस्तेमाल किया स्नान, और परिसंचारी (चित्रा 1) निर्धारित करें।
  3. एक डे-oxygenation के समाधान भागो (जैसे, 6% ओ 2, 8% सीओ 2, 84% एन 2) वर्तमान में गैस फिल्टर में perfusate के माध्यम से perfusate प्रयोग के लिए ~ 6% भंग ऑक्सीजन है सुनिश्चित करने के लिए काउंटर।
    नोट: यह डे-oxygenated perfusate आकलन ओ सक्षम बनाता हैperfusate, पोस्ट-अंग में पेश ऑक्सीजन को मापने के द्वारा फेफड़ों समारोह च।
  4. (EVLP सर्किट और डेटा-अधिग्रहण / एनालॉग से डिजिटल कनवर्टर बॉक्स करने के लिए, सांस की नली अंतर दबाव transducer, श्वसन प्रवाह अंतर दबाव transducer, फेफड़ों वजन ट्रांसड्यूसर, और पंप की गति ट्रांसड्यूसर डाटा अधिग्रहण कार्यक्रम खोलें और फेफड़े के धमनी दबाव transducer कनेक्ट चित्र 2)।
  5. EVLP सर्किट (चित्रा 3) में ऑपरेटिंग टेबल और ऑपरेटिंग उपकरण सेट करें।
  6. नमूने प्राप्त हो जाएगा अगर EVLP सर्किट के पास तरल नाइट्रोजन के एक छोटे कंटेनर सेट करें।
    नोट: लेखक की प्रणाली को संभावित फेफड़ों घायल हो सकता है कि दबाव के प्रवाह की गतिशीलता में दखल के बिना पूर्व अंग और बाद के अंग perfusate इकट्ठा करने के लिए संशोधित किया गया है।

Anesthetics और हेपरिन, चूहा की anesthetization 2. तैयारी

  1. निम्नलिखित व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण पर रखोसर्जिकल मास्क, सर्जिकल दस्ताने, और डिस्पोजेबल गाउन: चूहों और चूहे के ऊतकों को संभालने से पहले (पीपीई)।
  2. चूहे वजन और वजन रिकॉर्ड है।
  3. 1200 यू / किलो हेपरिन तैयार करें।
  4. पहले ketamine की तैयारी, एक ही सिरिंज में 60 मिलीग्राम / किग्रा ketamine और 5 मिलीग्राम / किग्रा Xylazine दोनों तैयार करें।
  5. Intraperitoneally चूहे में ketamine और xylazine का मिश्रण इंजेक्षन और चूहे के लिए 5 मिनट बेहोश बनने के लिए अनुमति देते हैं।
  6. पैर के अंगूठे चुटकी पलटा जाँच करके उचित anesthetization की पुष्टि करें। चूहा अपने पैर के अंगूठे को वापस लेने नहीं करता है, यह दर्द महसूस नहीं कर रहा है।
  7. , ऑपरेटिंग मेज पर चूहा ले जाएँ लापरवाह स्थिति में सुरक्षित है, और नसबंदी के लिए शराब के साथ स्प्रे।

3. निकालना और चूहा फेफड़ों की प्रारंभिक वेंटिलेशन

  1. 4-20 सेमी लंबी रेशम टांके (पर्याप्त होना चाहिए 3-0 या 4-0) तैयार करें।
  2. डाटा अधिग्रहण कार्यक्रम का उपयोग कर डेटा रिकॉर्डिंग शुरू।
  3. शल्य कैंची पेरिटोनियल सीए में प्रवेश का उपयोग कर, संज्ञाहरण के उचित गहराई के लिए जाँच करेंएक midline laparotomy द्वारा vity और अवर रग Cava में हेपरिन इंजेक्षन।
  4. श्वासनली सामने आ रहा है जब तक गर्दन में manubrium पिछले cranially चीरा ले। वक्ष गुहा (चित्रा -4 ए) टूटना मत करो।
  5. Midline में श्वासनली को पीछे काटना और श्वासनली (4B चित्रा) के लिए एक रेशम सिवनी पीछे स्लाइड।
  6. श्वासनली के पूर्वकाल खंड उठाएँ और श्वासनली पर उच्च उपास्थि के छल्ले, के बीच एक अनुप्रस्थ चीरा बनाते हैं। इस बिंदु (चित्रा 4C) में श्वासनली के पीछे झिल्लीदार भाग के माध्यम से कटौती न करें।
  7. रेशम सिवनी (चित्रा 4D) के साथ ट्रेकिआ प्रवेशनी और सुरक्षित के साथ ट्रेकिआ cannulate। सिवनी संयुक्ताक्षर प्रवेशनी के पलायन को कम करने के लिए निशाना साधना में सुरक्षित है कि सुनिश्चित करें।
  8. वेंटिलेशन सर्किट से श्वासनली प्रवेशनी कनेक्ट करें।
  9. लू ventilating यंत्रवत् शुरू करने के लिए मैकेनिकल वेंटीलेटर पर मुड़ेंNGS।
    नोट: प्रारंभिक सेटिंग्स ओ CMH 2 2 से 4 मिलीग्राम / किलो और सकारात्मक अंत निःश्वास दबाव (झलक) का एक ज्वार की मात्रा होने के लिए चुना गया ये सेटिंग्स प्रारंभिक सेटिंग कर रहे हैं और अंग पूर्व vivo छिड़काव प्रणाली में है एक बार प्रयोगात्मक शर्तों के आधार पर समायोजित किया जा सकता है।
  10. उरोस्थि / xyphoid के माध्यम से वक्ष गुहा दर्ज करें और suprasternal पायदान की ओर cranially जारी है। फेफड़ों को छू से बचने के लिए ध्यान रखना।
    नोट: चूहे फेफड़ों नाजुक है के रूप में, किसी भी अनजाने में गड़बड़ी आघात और फेफड़े के edema (चित्रा 5A) के लिए नेतृत्व कर सकते हैं।
  11. दो retractors का उपयोग करना, ठीक से शरीर रचना विज्ञान (चित्रा 5A) को बेनकाब करने के वक्ष गुहा वापस लेना। एक बार फिर, फेफड़ों को छू से बचने के लिए ध्यान रखना।
  12. मामूली ऊंचाई और कुंद विच्छेदन के साथ थाइमस निकालें।
  13. अवर रग Cava (आईवीसी) या मेसेंतेरिक नस (एमवी) या तो बेनकाब करने के लिए एक तरफ करने के लिए पेट की सामग्री Shift।
  14. चतुर्थ या तो काटकर अलग कर देनासी या एमवी इच्छामृत्यु को उपलब्ध कराने, चूहे रक्तहीन करने के लिए।
  15. फेफड़े के धमनी प्रवेशनी (चित्रा 5 ब) हासिल करने के लिए तैयार करने में फेफड़े के धमनी और महाधमनी के लिए एक रेशम सिवनी पीछे रखें।
  16. सही निलय बहिर्वाह पथ के पूर्वकाल सतह पर एक 2-3 मिमी चीरा और चीरा में और मुख्य फेफड़े के धमनी में प्रवेशनी जगह और रेशम सिवनी (चित्रा 5C) के साथ सुरक्षित है।
  17. (बाएं निलय के लिए उपयोग की अनुमति देने के दिल के शीर्ष आड़ा काट और फेफड़े के धमनी के माध्यम से और बाहर छाती गुहा में दिल के शीर्ष के माध्यम से ~ बह द्वारा एक कम + K इलेक्ट्रोलाइट समाधान के 15 मिलीलीटर फेफड़े vasculature के भीतर किसी भी थक्के फ्लश चित्रा 5D)।
  18. EVLP सर्किट को फेफड़े के धमनी (पीए) प्रवेशनी कनेक्ट करें। पीए प्रवेशनी के लिए सर्किट से आ रही आमद रेखा हृदय और फेफड़ों में प्रवेश के लिए किसी भी हवा से बचने के लिए perfusate साथ primed है सुनिश्चित करें।
  19. चालू करोमुख्य क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला पंप और perfusate फेफड़े के धमनी के माध्यम से और छाती गुहा में बाएं वेंट्रिकल बाहर चलाने के लिए अनुमति देने के लिए गति (2 मिलीग्राम / मिनट ~) एक कम करने के लिए यह निर्धारित किया है। ** महत्वपूर्ण कदम ** के रूप में स्पाइक नहीं करता पीए दबाव सुनिश्चित करें यह एक रुकावट या गरीब केन्युलेशन (चित्रा 6) या तो का एक संकेत है।
  20. क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला पंप बंद करें।
  21. निलय (चित्रा 7) के आसपास, दिल के पीछे एक रेशम सिवनी स्थिति।
  22. माइट्रल वाल्व के माध्यम से सुप्रीम में शल्य चिकित्सा संदंश के एक छोटे से जोड़ी डालने से बाएं आलिंद cannulating की प्रक्रिया शुरू है, और बाएं आलिंद में।
    नोट: यह माइट्रल वाल्व चौड़ा करना और केन्युलेशन की सुविधा होगी। आक्रामक फैलाव, या बहुत गहरी फैलाव, अनजाने में अप्रभावी खरीद प्रतिपादन बाएं आलिंद फाड़ना कर सकते हैं।
  23. दिल से संदंश निकालें।
  24. माइट्रल वाल्व के माध्यम से और पर छोड़ दिया में सुप्रीम में बाएं आलिंद प्रवेशनी डालेंrium।
  25. दिल के पीछे रेशम सिवनी (चित्रा 8) के साथ बाएं आलिंद प्रवेशनी सुरक्षित।
    नोट: यह सीवन केन्युलेशन की सुविधा के लिए "पूर्व बंधे" हो सकता है।
  26. पूर्व vivo फेफड़ों के छिड़काव सर्किट (चित्रा 9A) को फेफड़े के धमनी प्रवेशनी कनेक्ट करें। हार्ट-लंग ब्लॉक पूरी तरह से शरीर से निकाल दिया गया है जब तक EVLP सर्किट करने के लिए बाएं आलिंद प्रवेशनी कनेक्ट न करें।
  27. एक hemostat के साथ घेघा दबाना और घेघा कार्डियोपल्मोनरी संरचनाओं cephalad बढ़ाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, ताकि (दबाना और डायाफ्राम के बीच) दबाना नीचे काटा।
  28. दो टूक आसपास के ऊतकों को काटना और यह घेघा (चित्रा 9B) के माध्यम से उठाया जा रहा है के रूप में हार्ट-लंग ब्लॉक मुक्त करने के लिए उतरते महाधमनी और सहायक जहाजों काटा।
  29. सांस की नली प्रवेशनी के लिए पूरी तरह से मुक्त हृदय फेफड़े ब्लॉक करने के लिए cephalad श्वासनली आड़ा काट।
  30. हार्ट-लंग ब्लॉक निकालें और देसी में जगहEVLP सर्किट (चित्रा 9C) पर gnated स्थान।
  31. बहिर्वाह लाइन के लिए बाएं आलिंद प्रवेशनी कनेक्ट और मुख्य क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला पंप (चित्रा 9D) शुरू करते हैं।

फेफड़ों के 4. पूर्व vivo छिड़काव

  1. जल्दी EVLP तंत्र के ऊपर से वेंटिलेशन लाइन को हटाने और दबाव सेंसर के साथ आवास देते हैं, तो EVLP तंत्र के शीर्ष पर आवास के शीर्ष पर वेंटिलेशन लाइन डालने।
    नोट: यह वेंटिलेशन डेटा दर्ज की गई और दबाव नजर रखी जा करने की अनुमति देगा।
  2. कोई हवाई बुलबुले (यानी, हवा एम्बोली) फेफड़ों के लिए पेश कर रहे हैं इतना है कि बुलबुला जाल perfusate की एक पर्याप्त राशि से भर जाता है सुनिश्चित करें।
  3. धीरे धीरे प्रारंभिक 15 मिनट के दौरान वांछित प्रायोगिक स्तर के लिए वेंटिलेशन और छिड़काव सेटिंग्स बदल जाते हैं। साथ ही, इस प्रारंभिक रैंप अप चरण के दौरान, वांछित दर और / या दबाव के छिड़काव प्रवाह की दर में वृद्धि।
    नोट: डेबूटस्ट्रैपफेफड़ों के स्थान से बाहर तरल पदार्थ की आवाजाही की सुविधा है, जो रुक-रुक कर सांस साँस, उत्पादन और इसलिए शोफ की शुरुआत में देरी करने के लिए वेंटीलेटर आईएनजी, की सिफारिश की है। ये झोंका समारोह के साथ सुसज्जित वेंटिलेटर द्वारा उत्पादित किया जा सकता है।
  4. वेंटिलेशन मापदंडों 2 सेमी एच 2 ओ में 4 मिलीग्राम / किग्रा, झलक का एक ज्वार की मात्रा में कर रहे हैं जब समय के रूप में "टाइम 0" परिभाषित करें, और छिड़काव मापदंडों उनकी उम्मीद के स्तर पर हैं और निरंतर शेष।
  5. यदि आवश्यक हो, तरल नाइट्रोजन में नमूना बंदरगाह, फ्लैश फ्रीज से perfusate नमूने लेने, और नमूने के समय ध्यान दें।
  6. प्रयोग के पूरा होने पर, आगे के अध्ययन के लिए समाधान फिक्सिंग में तरल नाइट्रोजन या जगह में संग्रह और या तो फ्लैश फ्रीज के लिए किसी भी आवश्यक संरचनात्मक टुकड़े को अलग।

Representative Results

डाटा अधिग्रहण कार्यक्रम के माध्यम से एकत्र वास्तविक समय मैकेनिकल डेटा आसानी परिकल्पना के किसी भी संख्या का परीक्षण करने का विश्लेषण किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, चित्रा 10A जानवरों 4 मिलीग्राम / किलो और 2 के एक कम ज्वार की मात्रा / कम झलक CMH 2 ओ के साथ हवादार थे, जहां 60 मिनट में 10 से चूहे प्रयोगों के माध्यम से औसत फेफड़ों के वजन से पता चलता है प्रयोग के दौरान फेफड़ों के वजन में एक बहुत ही मामूली वृद्धि हुई है हालांकि, इस वृद्धि के सांख्यिकीय महत्वपूर्ण नहीं है (एनोवा, पी = 0.92)। चित्रा 10B 12 चूहे प्रयोगों से 60 मिनट के माध्यम से औसत फेफड़े के धमनी दबाव (पीएपी) से पता चलता है। टी रैंकों पर 10 मिनट (एनोवा = के बाद 0 मिनट समय बिंदु पर कम पीएपी सभी प्रयोगों और पीएपी की शुरुआत में इस्तेमाल किया निचले प्रवाह और वेंटिलेशन सेटिंग्स का एक परिणाम है कि कोई सांख्यिकीय महत्वपूर्ण परिवर्तनों के साथ इस समय बिंदु के बाद लगातार बना रहता है, पी = 0.89)। चित्रा 10C 12 चूहे से 60 मिनट के माध्यम से फेफड़े संवहनी प्रतिरोध (पीवीआर) से पता चलता हैप्रयोगों और टी 20 न्यूनतम = के बाद पीवीआर में एक छोटी सी कमी आई है, हालांकि, पीवीआर में कोई सांख्यिकीय महत्वपूर्ण अंतर यह है कि इस प्रयोग के दौरान वहां गया था (रैंकों पर एनोवा, पी = 0.65)। यहाँ दिखाया पीवीआर डेटा की तुलना में, Noda एट अल। चार घंटे के लिए समय के साथ थोड़ा बढ़ाने के लिए पीवीआर दिखाया गया है। हालांकि, उन लेखकों एक के बजाय प्रयोग के शुरू के मानव संसाधन और कोई मानक विचलन मूल्यों 7 प्रदान की जाती हैं पर शुरू पीवीआर में डेटा की रिपोर्ट। Noda एट अल। यह भी तो कोई तुलना चित्रा 10A में यहाँ प्रस्तुत आंकड़ों के साथ बनाया जा सकता है 4 घंटा प्रयोगों के लिए फेफड़े के edema डेटा नहीं दिखा है। Noda एट अल में प्रमुख मतभेद। इस पत्र में दिखाया गया है की तुलना में क्या प्रक्रिया में शामिल हैं: EVLP पहले LPS के समाधान में एक एक घंटा ठंड संरक्षण, चूहों शुरू में उन्हें बेहोश रेंडर करने के लिए isoflurane सहित एक गैस मिश्रण के साथ हवादार थे, perfusate समाधान methylprednisolone के 50 मिलीग्राम और 50 मिलीग्राम के साथ पूरक किया गया था सेफैलोस्पोरिन की कुल FLगणना की कार्डियक आउटपुट का 20%, perfusate नमूने फेफड़ों के 5 मिनट के पूर्व के लिए 100% ओ 2 पर हवादार किया गया था और प्रयोग 4 घंटे के लिए चलाया गया था के बाद ही लिया गया था के रूप में ओउ परिभाषित किया गया था।

Perfusate से प्रयोग के दौरान उठाए गए नमूने भी कई उद्देश्यों के लिए विश्लेषण किया जा सकता है। एक उदाहरण के रूप में, चित्रा 11 में हम 60 मिनट में एक समर्थक भड़काऊ प्रतिक्रिया पैदा कर सकते हैं कि कैसे उच्च ज्वार की मात्रा / उच्च झलक वेंटिलेशन प्रदर्शित करता है। इन प्रयोगों के लिए, चार चूहों से perfusate हानिकारक स्थितियों, यानी, 10 मिलीग्राम / किग्रा और 8 के उच्च झलक CMH 2 हे की उच्च ज्वार की मात्रा के तहत हवादार, समर्थक और विरोधी भड़काऊ साइटोकिन्स IL1β, TNFα और IL4 का उपयोग कर मानक के लिए विश्लेषण किया गया एलिसा तकनीक। साइटोकाइन स्तरों वेंटिलेशन से पहले (0 मिनट) की तुलना में, चित्रा 11 में दिखाया गया है, हानिकारक वेंटिलेशन के 60 मिनट आईएल 1β और TNFα (समर्थक भड़काऊ साइटोकिन्स) एक में एक सांख्यिकीय महत्वपूर्ण वृद्धि हुई एन डी आईएल -4 में कोई परिवर्तन (एक विरोधी भड़काऊ साइटोकाइन) एकाग्रता। इसलिए, इस EVLP प्रणाली आमतौर पर यांत्रिक वेंटीलेशन के दौरान मनाया फेफड़ों की चोट प्रोफाइल को उत्पन्न करने में सक्षम है।

चित्र 1
चित्रा 1. आरेख और छोटे जानवर पूर्व vivo फेफड़ों के छिड़काव (EVLP) सर्किट की तस्वीर। चित्र में पत्र फोटोग्राफ में पत्र के साथ मैच। इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र 2
चित्रा 2. सभी ट्रांसड्यूसर सुरक्षित रूप से नियंत्रण बक्से से जुड़े हैं।"> इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र तीन
चित्रा 3. चूहे ऑपरेटिंग मेज सुरक्षित रूप से पूर्व vivo फेफड़ों के छिड़काव (EVLP) सर्किट से सटे की स्थापना की है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 4
चित्रा 4 (ए) एक चीरा ट्रेकिआ बेनकाब करने के लिए cranially किया जाता है। छाती गुहा संपर्क में नहीं है। (बी) के एक रेशम सिवनी श्वासनली के पीछे रखा गया है। (सी) ट्रेकिआ आंशिक रूप से केन्युलेशन के लिए तैयार करने के लिए काट रहा है। (डी) ट्रेकिआ प्रवेशनी पदों में रखा गया है एन और एक रेशम सीवन के साथ सुरक्षित। इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 5
चित्रा 5 (ए) छाती गुहा दिल और फेफड़ों के लिए उपयोग की अनुमति के लिए वापस खींच लिया है। फेफड़े के धमनी के पीछे सीवन रखने के लिए (बी) तैयार करना। (सी) फेफड़े के धमनी cannulated और पहले से रखा रेशम सीवन के साथ जुड़ा हुआ है। (डी) एक कम + K इलेक्ट्रोलाइट समाधान किसी भी खून के थक्के को हटाने के लिए फेफड़े के धमनी के माध्यम से और बाएं आलिंद बाहर प्लावित है। एक बड़ा देखने के लिए यहां क्लिक करें इस आंकड़े के संस्करण।

> "lways चित्रा 6
केन्युलेशन सही ढंग से प्रदर्शन किया गया था और कोई बड़ी रुकावट है तो फेफड़ों निस्तब्धता। नाटकीय रूप से वृद्धि करने के लिए फेफड़े के धमनी दबाव के कारण हो सकता है जब फेफड़े के धमनी का प्रवाह बढ़ाने से 6 चित्रा, कमी करनी चाहिए दबाव। कृपया यहाँ क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए ।

चित्रा 7
चित्रा 7. रेशम सीवन बाएं आलिंद केन्युलेशन के लिए तैयार करने में पूरे दिल के आसपास रखा गया है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

एन पेज = "हमेशा"> आंकड़ा 8
बाएं आलिंद प्रवेशनी एक रेशम सीवन के साथ जगह में सुरक्षित है 8 चित्रा। इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

9 चित्रा
चित्रा 9. (ए) फेफड़े के धमनी प्रवेशनी पूर्व vivo फेफड़ों के छिड़काव सर्किट से जुड़ा है। (बी) के घेघा clamped है और संयोजी ऊतक दो टूक हार्ट-लंग गुट को दूर करने के विच्छेदित कर रहा है। (सी) हार्ट-लंग गुट छाती गुहा से हटा दिया है और पूर्व vivo फेफड़ों के छिड़काव सर्किट में रखा गया है। (डी) बाएं आलिंद पूर्व vivo फेफड़ों के छिड़काव सर्किट से जुड़ा है। = "https://www.jove.com/files/ftp_upload/52309/52309fig9large.jpg" लक्ष्य = "_blank" href> इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

10 चित्रा
चित्रा पूर्व vivo फेफड़ों के छिड़काव (एन = 10) के 60 मिनट के माध्यम से पुरुष Sprague Dawley चूहों के 10 (ए) के फेफड़े वजन। (बी) के पूर्व vivo फेफड़ों के छिड़काव (एन = 12) के 60 मिनट के माध्यम से पुरुष Sprague Dawley चूहों के पल्मोनरी धमनी दबाव। (सी) पूर्व vivo फेफड़ों के छिड़काव (एन = 12) के 60 मिनट के माध्यम से पुरुष Sprague Dawley चूहों के फेफड़े संवहनी प्रतिरोध, एन एस कोई सांख्यिकीय महत्वपूर्ण अंतर को दर्शाता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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चित्रा 11. प्रभाव perfusate में समर्थक और विरोधी भड़काऊ साइटोकाइन सांद्रता पर एक घंटा उच्च ज्वार की मात्रा में वेंटिलेशन (10 मिलीग्राम / किग्रा) और उच्च झलक (8 CMH 2 हे) के। एन = 4, साथ * सांख्यिकीय महत्वपूर्ण अंतर यह इंगित करता है सम्मान 0 घंटा नमूना (पी <0.05) के लिए। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 12
चित्रा 12. (ए) एक ठीक ventilating और EVLP सर्किट से जुड़ा फेफड़ों perfusing। (ख) उच्च सकारात्मक अंत निःश्वास दबाव (झलक) चोट पर फार्म और कृत्रिम छाती को भरने के लिए बुलबुले के कारण श्वासनली विभाजन पर एक आंसू का कारण बनता है। तों / ftp_upload / 52,309 / 52309fig12large.jpg "लक्ष्य =" _blank "> इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 13
चित्रा 13. (ए) पल्मोनरी धमनी प्रवेशनी। इस प्रवेशनी बाएं आलिंद प्रवेशनी की तुलना में छोटा होता है। (बी) आलिंद प्रवेशनी वाम। इस प्रवेशनी फेफड़े के धमनी प्रवेशनी की तुलना में बहुत बड़ा है। (सी) ट्रेकिआ प्रवेशनी। इस प्रवेशनी रेशम सीवन के साथ ट्रेकिआ हासिल करने में सहायता करने के लिए पसलियों है। श्वासनली में डाला जाता है कि अंत भी थोड़ा श्वासनली में प्रवेशनी डालने में सहायता करने के लिए कहा है। इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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चित्रा 14. (ए) दिल सुप्रीम सही वेंट्रिकल फेफड़े के धमनी cannulate के क्रम में छिन्न होने के बारे में है के रूप में संदंश की एक जोड़ी द्वारा आयोजित किया जाता है। (बी) के छोटे कुंद एंडेड पिक-अप की एक जोड़ी के साथ माइट्रल वाल्व वलय के फैलाव के लिए यह आसान बाएं आलिंद में पथ कल्पना करने के लिए बनाता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Discussion

प्रणाली की निगरानी

क्या बातें प्रयोग अच्छी तरह से चल रहा है, जैसे जब देखो:

Cannulae सर्किट में रखा गया है और फेफड़ों ventilating कर रहे हैं, ठीक से काम कर रहा है व्यवस्था सुनिश्चित करने के लिए कई तरीके हैं। लाइन भर perfusate की कोई लीक नहीं होनी चाहिए। फेफड़े संवहनी प्रतिरोध (पीवीआर) (एक निरंतर प्रवाह संभालने) अपेक्षाकृत स्थिर रहना चाहिए। ऑक्सीजन विनिमय वेंटीलेटर ठीक से काम कर रहा है और गैस का आदान-प्रदान के लिए और अधिक वायुकोष्ठिका भर्ती करने के लिए फेफड़ों विस्तार हो रहा है एक बार में वृद्धि करनी चाहिए। चित्रा 12A ठीक से कृत्रिम छाती के अंदर EVLP सर्किट से जुड़ा फेफड़ों हवादार और perfused से पता चलता है।

क्या बातें प्रयोग अच्छी तरह से नहीं चल रहा है जैसे जब देखो:

एक EVLP प्रयोग की शुरुआत चरणों के दौरान घटना की उच्चतम दर पड़ा है कि कुछ सामान्य मुद्दे हैं। पहला और सबसे आसान Tओ उपाय फेफड़ों से बाहर निकलने लाइन में एक दरार है। इस सर्किट और लगातार घटते जलाशय में स्तर के हिस्से के तहत perfusate पूलिंग का एक पूल से ध्यान देने योग्य है। जाँच करें और फैल क्षेत्र के आसपास किसी भी ट्यूब कनेक्टर्स कसने और एक दरार के लिए ट्यूब खुद का निरीक्षण किया। इस रिसाव फेफड़ों से पहले होता है, यह भी फेफड़ों में बुलबुले परिचय हो सकता है। Perfusate में हवा के बुलबुले ऊतकों को नुकसान में परिणाम और पीवीआर में एक उल्लेखनीय वृद्धि का कारण होगा के रूप में यह रूप में जल्द से जल्द निवारण किया जाना चाहिए। यह भी फेफड़ों या cannulae की ओर से आ रही एक रिसाव हो सकता है। यह एक प्रवेशनी के दोनों slippage या एक दबाव buildup को पैदा कर बाहर निकलने लाइन में एक बाधा की वजह से हो सकता है। दोनों cannulae सुनिश्चित करने के लिए न तो फिसल गई या मुड़ गया है के लिए स्थिति का निरीक्षण किया। पीए दबाव में एक तात्कालिक वृद्धि किसी तरह की एक बाधा हाल ही में हुआ है कि एक स्पष्ट संकेत है क्योंकि पीए दबाव भी इस प्रक्रिया के दौरान निगरानी की जानी चाहिए। चित्रा 12Bकारण उच्च दबाव के उठी कि एक उठी फेफड़ों से पता चलता है। फेफड़ों से ही एक रिसाव भी ऊतक में एक आंसू की वजह से हो सकता है। यह समस्या या मरम्मत योग्य लेकिन repositioning हो सकता है और cannulae retightening इस परिदृश्य में सबसे अच्छा विकल्प है नहीं हो सकता है।

प्रमुख शिक्षा अंक / अवसर:

ट्रायल और पूर्व vivo फेफड़ों के छिड़काव प्रणाली की त्रुटि विकास हमें हम EVLP प्रणाली के कुशल कार्यान्वयन की सुविधा के लिए यहां रूपरेखा है कि कई महत्वपूर्ण मुद्दों की पहचान करने के लिए अनुमति दी गई है। सबसे पहले, खरीद के लिए सम्मान के साथ, यह मानक संवेदनाहारी तकनीक ठीक से आवश्यक है सभी IACUC नीतियों के जानवर (पेरिटोनियम में पर्याप्त संवेदनाहारी, इंजेक्शन) और पालन anesthetize करने के लिए पीछा कर रहे हैं कि महत्वपूर्ण है। (चित्रा 13 ए, बी, और सी में दिखाया गया है) cannulae repetitively फेफड़े vasculat के भीतर किसी भी थक्का और / या मलबे को हटाने के क्रम में प्लावित किया जाना चाहिएure। पशु चयन करने के लिए सम्मान के साथ, हम 250-350 ग्राम वजन Sprague Dawley या लुईस चूहों का उपयोग कर सुझाव देते हैं। वाहिका घायल हुए बिना cannulate करने के लिए छोटे और इसलिए बहुत अधिक कठिन हो जाएगा वाहिकाओं के बाद से करीब 250 ग्राम वजन चूहों cannulating जब विशेष ध्यान रखा जाना चाहिए। छोटे चूहों, या एक माउस मॉडल का उपयोग किया जा रहा है, छोटे प्रवेशनी इस्तेमाल किया जा करने की आवश्यकता हो सकती है।

सिवनी पहले आसपास के प्रावरणी और पूर्व केन्युलेशन को विदारक के बाद श्वासनली के लिए एक रेशम सिवनी पीछे गुजर द्वारा ठीक से सुरक्षित है के रूप में सांस की नली केन्युलेशन आम तौर पर के रूप में लंबे समय चुनौतीपूर्ण नहीं है। प्रवेशनी पारित करने के लिए सीवन के ऊपर एक पूर्वकाल चीरा 1-2 सांस की नली के छल्ले के साथ इस का पालन करें। बेहतर सुरक्षा (चित्रा 4C) के लिए एक नाली के भीतर यह सुरक्षित करने के क्रम में सांस की नली के छल्ले के बीच में वर्ग गांठ बांध। फेफड़े के धमनी (पीए) की केन्युलेशन सांस की नली प्रवेशनी के साथ तुलना में अधिक चुनौतीपूर्ण है। निम्न चरणों के इस अध्ययन में इस्तेमाल किया गयाइस प्रक्रिया के लिए। सबसे पहले, संदंश की एक जोड़ी के साथ दिल सुप्रीम समझ। अनुप्रस्थ साइनस में संदंश की एक और जोड़ी दर्रा और समीपस्थ फिलीस्तीनी अथॉरिटी में प्रवेशनी सुरक्षित करने के लिए एक सिवनी धागे। सही निलय बहिर्वाह पथ (RVOT) (चित्रा 14A) से पहले तुरंत सही वेंट्रिकल काटकर अलग कर देना। RVOT में चीरा के बाद, प्रवेशनी फेफड़े के धमनी बहिर्वाह पथ की ओर निर्देशित किया जाएगा। सही ventriculotomy पहले फेफड़े के धमनी / महाधमनी के पीछे की स्थिति में सीवन के बाद (चित्रा 5C) क्षमता बढ़ जाती है। प्रवेशनी dislodgement को रोकने के लिए सीवन के साथ जगह में सुरक्षित किया जाना चाहिए। पीए प्रवेशनी सही संरचनात्मक अभिविन्यास में नहीं है अगर एक प्रमुख जटिलता हो सकता है। प्रवेशनी बहुत दूर डाला जाता है और केवल एक ही शाखा छिड़कना या मल स्थित छाती गुहा से हटाने पर दिल फेफड़ों नमूना के घुमा के साथ बन जा सकता है। यह आसानी से anatomi की उचित कोण संरक्षित करने के लिए मूल स्थिति में वापस उन्मुख किया जा सकता हैकाल की स्थिति। अंत में, वाम अलिंद (ला) केन्युलेशन प्रक्रिया के सबसे चुनौतीपूर्ण हिस्सा है। ला प्रवेशनी बाएं आलिंद के भीतर रखा जाना चाहिए। ऊतकों बेहद नाज़ुक जा रहा है, तो प्रयोग unsalvageable करना होगा जो फेफड़े के नस व बाएं आलिंद के भीतर एक आंसू को रोकने के क्रम में महत्वपूर्ण बल या घुमा का उपयोग नहीं करने के लिए ध्यान में रखना होगा। पीए प्रवेशनी सबसे अच्छा ला प्रवेशनी से पहले रखा गया है। सुप्रीम को हटाने के साथ एक बाएं ventriculotomy cordae tendinae बाधित और मित्राल पत्रक के माध्यम से आसानी से उपयोग की अनुमति देने के लिए दिखाया गया है। इसके अलावा, ventriculotomy यह आसान चौड़ा करना और माइट्रल वाल्व कल्पना और माइट्रल वाल्व के माध्यम से प्रवेशनी को खिलाने के लिए आसान बनाता है। छोटे कुंद एंडेड पिक-अप की एक जोड़ी के साथ माइट्रल वाल्व वलय के फैलाव ला (चित्रा 14b) में पथ कल्पना करने के क्रम में किया जा सकता है। सिवनी केन्युलेशन से पहले दिल के पीछे रखा जाना चाहिए। इस smal की एक जोड़ी का उपयोग दिल ऊपर उठाने के द्वारा आसानी से किया जा सकता हैएल पिक-अप कुंद समाप्त हो गया और नीचे और आरपार सिवनी रखकर। ला अब cannulated होने के लिए तैयार है। ठीक से बाएं आलिंद में प्रवेशनी की नियुक्ति कल्पना करने के क्रम में पिक-अप के माध्यम से ला प्रवेशनी फ़ीड। वापस बाएं वेंट्रिकल में प्रवेशनी बेदखल करने के लिए नहीं विशेष ध्यान रखना। सिवनी तो कसकर बाएं वेंट्रिकल की मायोकार्डियम साथ सुरक्षित किया जाना चाहिए। बाएं आलिंद के लिए सिवनी सुरक्षित पूरे या प्रवेशनी का हिस्सा रोक देना सकता है।

प्रक्रिया के दौरान, यह कोई हवा तंत्र की आमद खंड में रहते हैं कि महत्वपूर्ण है। किसी भी महत्वपूर्ण हवा एक हवा का आवेश दिए गए दबाव के लिए एक बहुत कम perfusate प्रवाह में परिणाम होगा जो पीवीआर (प्रभावी रूप से एक "हवा-लॉक") में वृद्धि का उत्पादन कर सकते हैं। विभिन्न बिंदुओं प्रणाली के भीतर हवा निकालने के लिए किया जा सकता है। बहिर्वाह अनुभाग के भीतर हवा की उम्मीद है और फेफड़ों पर कोई हानिकारक प्रभाव नहीं होना चाहिए। फेफड़े के उच्च रक्तचाप के लिए एक सुअर का मॉडल किया गया हैएक 8 सप्ताह की अवधि में हवा के निरंतर थोड़ी मात्रा से विकृति विश्राम करने के लिए दिखाया गया है। आसपास के ऊतकों से 19 सूजन के कारण, जबकि वृद्धि हुई हवा छिड़काव की मात्रा कम हो जाती है।

छिड़काव की दीक्षा केन्युलेशन पूरा हो गया है एक बार हो सकता है, लेकिन ट्यूब ला से आने से पहले EVLP लाइन से जुड़ा है। Perfusate किसी भी खून के थक्के बाहर साफ करने के माध्यम से चलाया जाना चाहिए और इस perfusate किसी भी मुद्दे के बिना छाती दीवार में खाली कर सकते हैं। मैनुअल मोड में perfusate पंप स्विचिंग और धीरे धीरे ~ 2 मिलीलीटर प्रवाह की दर बढ़ रही है / मिनट पीए दबाव की करीब से निगरानी के लिए अनुमति देता है। 20-30 CMH 2 हे अधिक दबाव के एक बाधा से संकेत मिलता है और ला बाहर निकलने perfusate के लिए देख रहे हैं यह भी एक संकेत है, लेकिन यह देखने के लिए बहुत मुश्किल हो सकता है कर सकते हैं। दबाव ओ 2 CMH 20-30 खत्म करने के लिए वृद्धि करता है, पंप बंद करो और दोनों cannulations पुनः जाँच। दबाव के आसपास 10-20 CMH 2 हे की अनुमति देने वें स्थिर है एक बारई perfusate 2 मिनट के लिए के माध्यम से और छाती गुहा में चलाने के लिए। इस समय ला से लाइन EVLP सर्किट से जोड़ा जा सकता है। perfusate पंप गति 5-10 मिलीग्राम / मिनट के लिए बढ़ाया जा सकता है। तरल पदार्थ सिर सर्किट के माध्यम से प्रगति के रूप में, की वजह से तरल पदार्थ सिर की ऊंचाई में वृद्धि हुई है और इसलिए स्थिर दबाव के पीए दबाव में वृद्धि नहीं होगी। तरल पदार्थ लाइन में उच्चतम बिंदु पर प्रवाह नहीं कर सकते, तो लाइन के विपरीत छोर पर एक चूषण बल लागू या लाइन के उच्चतम भाग को कम करने का प्रयास भी करने के लिए, यह आवश्यक हो सकता है। इस मुद्दे पर काबू पाने होने के बाद, perfusate किसी भी मुद्दे के बिना प्रसारित करना चाहिए।

कुछ मुद्दों पर वेंटीलेटर के संबंध में निगरानी की जानी चाहिए। फेफड़ों अधिक edematous और वजन बढ़ता बन के रूप में पहले, ब्रांकाई / श्वासनली और हृदय फेफड़े की स्थिति की घुमा हो सकती है। Cannulae इसलिए फेरबदल, एक अपेक्षाकृत करीब शारीरिक स्थिति में रहने के लिए ज़रूरी है या तो या दोनों प्रवेशनीई आवश्यक हो सकता है। दबाव या मात्रा नियंत्रित कृत्रिम सांस के साथ ही सकारात्मक या नकारात्मक वेंटिलेशन इस EVLP प्रणाली के साथ प्रयोग किया जा सकता है। चूहे मॉडल के लिए, हम सकारात्मक दबाव, मात्रा नियंत्रित वेंटिलेशन 4-10 मिलीग्राम / किलो के बीच है और 2-8 CMH 2 ओ के बीच सकारात्मक अंत निःश्वास दबावों (झलक) में ज्वार की मात्रा में अच्छी तरह से काम करता है का उपयोग कर पाया है हालांकि, 8 CMH 2 ओ की एक झलक श्वासनली के विभाजन पर एक संभव टूटना पैदा कर सकता है। एक प्रयोग के बाद श्वासनली के लिए अग्रणी वेंटिलेशन लाइन श्वासनली कूच हो सकता है कि किसी भी ब्रोन्कोएल्वियोलर पानी से धोना (बाल) तरल पदार्थ की साफ किया जाना चाहिए, (बैक-टू-बैक प्रदर्शन किया या यदि प्रयोगों के सेट)। अछूता छोड़ दिया है और पूरी तरह से वेंटिलेशन लाइन को ब्लॉक कर सकते हैं, तो यह तरल पदार्थ कठोर होगा।

perfusate रचना एक सफल EVLP प्रयोग करने के लिए महत्वपूर्ण है। एक 5% dextran के मिश्रण, शारीरिक शर्तों के करीब है कि फेफड़ों के छिड़काव के लिए अनुमति देता है द्रव बी ड्राइव करने के लिए एक स्थिर oncotic दबाव बनाए रखता हैशोफ को रोकने के लिए वाहिका में ACK और फेफड़े वाहिकाओं के भीतर घनास्त्रता को रोकता है। यह चूहों की कुछ प्रजातियों फेफड़े के edema 20 कारण हो सकता है dextran से एलर्जी हो सकती है कि नोट के लिए महत्वपूर्ण है। perfusate की सामग्री इसलिए dextran सामग्री एक confounder नहीं होना चाहिए, इस अध्ययन में सभी प्रयोगात्मक समूहों में अनुरूप था। oncotic दबाव में सुधार या ऊतक शोफ का उत्पादन करने की क्षमता है कि एक महत्वपूर्ण चर रहा है। ठंड स्थिर भंडारण या normothermic perfusions के लिए अनुकूलित कर रहे हैं कि व्यावसायिक रूप से उपलब्ध छिड़काव समाधान फेफड़ों व्यवहार्यता गुना वृद्धि करने के लिए इस प्रणाली में इस्तेमाल किया गया है। हम इन समाधान के कुछ एल्बुमिन होते हैं और एक चिंता का विषय कृंतक फेफड़ों में एक भड़काऊ प्रतिक्रिया ट्रिगर गोजातीय albumin की संभावना है कि ध्यान दें। इष्टतम perfusate रचना जांच के लिए चल रहे एक विषय है, perfusate खाते में oncotic दबाव, आसमाटिक दबाव और बफरिंग क्षमता लेने की जरूरत है। डब्ल्यूई समाधान के लिए एक संशोधित क्रेब्स-Henseleit समाधान या सेल संस्कृति मीडिया पर आधारित होना सलाह देते हैं। oncotic दबाव आवेदन के आधार पर, dextran या एल्बुमिन द्वारा बनाए रखा जाना चाहिए। छिड़काव दबाव और प्रवाह की दर अंग और पूर्व-शारीरिक छिड़काव मापदंडों यांत्रिक आघात के अंग होने का खतरा बना सकते हैं प्रभावित करता है।

प्रयोग के दौरान दृश्य संकेतक:

एक EVLP प्रयोग अच्छी तरह से चल रहा है, तो यह निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है कि वास्तविक समय डाटा से कई दृश्य cues के साथ ही संकेत हैं। फेफड़ों में एक ही आकार रहेगा और हर सांस के बाद ही मात्रा को खंडन करना होगा। यह भी फेफड़ों से ही कोई लीक हो जाएगा। पीवीआर, फेफड़ों के वजन, और अनुपालन अपेक्षाकृत स्थिर रहेगा। ऑक्सीजन उत्पादन स्थिर रहेगा या थोड़ा वृद्धि होगी।

फेफड़ों के एक प्रयोग के दौरान समझौता हो जाता है जब कई दृश्य संकेतक हैं। फेफड़ों edematous एक हो जाता हैएन डी आकार और वजन में तेजी से बढ़ता है। फेफड़ों (सफेद करने के लिए एक तन-गुलाबी) से परिवर्तन और तरल की जेब से रंग ऊतक में पहचाना जा सकता है। Barotrauma से या बढ़ाव से अधिक श्वासनली या फेफड़ों ruptures, तो चोट के बिंदु (चित्रा 12B) से वहाँ बुदबुदाती किया जाएगा। ऑक्सीजन उत्पादन में कमी होगी और पीवीआर और अनुपालन में नाटकीय रूप से के रूप में अच्छी तरह से वृद्धि होगी।

ऐसे कृन्तकों के रूप में छोटे जानवरों पर एक EVLP मॉडल का उपयोग करने की क्षमता के फेफड़ों प्रत्यारोपण के उपचार में सुधार भविष्य के अध्ययन के लिए दरवाजे खोलता है। हालांकि, छोटे पशु मॉडल वास्तव में एक फेफड़ों प्रत्यारोपण की नकल करने के लिए एक बेहतर समझ की आवश्यकता है। इस मॉडल को चिकित्सा उपचार में सुधार और भविष्य फेफड़ों प्रत्यारोपण के अध्ययन के लिए आधारभूत मानकों को परिभाषित करने के लिए भविष्य में इस्तेमाल किया जा सकता है।

Disclosures

कोई नहीं

Acknowledgements

लेखकों सर्किट विधानसभा, संशोधन और छिड़काव सर्किट और XVIVO छिड़काव (डैनियल Martinelli, सीसीपी, CTP) के लिए समस्या निवारण में उनकी सहायता के लिए हार्वर्ड उपकरण, विशेष रूप से स्टेफ़नी Pazniokas, एमएस (फिजियोलॉजी सिस्टम और पुनर्योजी चिकित्सा) की सहायता स्वीकार करना चाहते हैं गैर चिकित्सीय उपयोग फेफड़े plegia प्रदान करते हैं।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
IPL-2 Basic Lung Perfusion System Harvard Apparatus
Tweezer #5 stainless steel, curved 11 cm Kent Scientific Corporation IND500232
Tweezer #5 Dumostar, 11 cm Kent Scientific Corporation INS500085-A
Tweezer #7 Titanium, 12 cm tips curved Kent Scientific Corporation INS600187
McPherson-Vannas Scissors 8 cm, Str 5 mm Kent Scientific Corporation INS14124
Vannas Scissors 8 cm Str 5 mm Kent Scientific Corporation INS14003
Instrument Sterilization Tray 5" x 7" Kent Scientific Corporation INS800101
Heparin 30,000 units per 30 ml APP Pharmaceuticals Supplied from OSU Pharmacy
Ketamine 500 mg per 5 ml JHP Pharmaceuticals Supplied from OSU Pharmacy
Xylazine 100 mg per 1 ml Akorn Supplied from OSU Pharmacy
10 cc insulin syringe 29 G x 1/2" needle B-D 309301
Hyflex NBR Ansell S-17310M Bite proof gloves
BL1500 Sartarius Practum 1102-1S Scale
Large Flat Bottom Restrainer Braintree Scientific Inc FB L 3.375 dia x 8.5, 250-500gm rat  Rat tunnel for injection
Sterling Nitrile Powder-free Exam Gloves, Large Kiberly-Clark 50708
Rapidpoint 405 Siemens blood gas analyzer
Fiberoxygenator D150 Hugo Sachs Elektronik PY2 73-3762
LabChart v7.3.7 ADInstruments
Tracheal cannula Harvard Apparatus 733557
Pulmonary Artery cannula Harvard Apparatus 730710
Left Atrium cannula Harvard Apparatus 730712
Peristaltic Pump  Ismatec ISM 827B
Small Animal Ventilator model 683 Harvard Apparatus 55-000
Ecoline Star Edition 003, E100 Lauda LCK 1879 Water Heater
Tubing Cassette Cole-Parmer IS 0649
Connect kit D150 Cole-Parmer VK 73-3763
PowerLab 8/35 ADInstruments 730045
TAM-A transducer amplifier module type 705/1 Hugo Sachs - Harvard Apparatus 73-0065
TAM-D transducer amplifier type 705/2 Hugo Sachs - Harvard Apparatus 73-1793
SCP Servo controller for perfusion type 704 Hugo Sachs - Harvard Apparatus 732806
CFBA carrier frequency bridge amplifier type 672 Hugo Sachs - Harvard Apparatus 731747
VCM ventilator control module type 681 Hugo Sachs - Harvard Apparatus 731741
TCM time control module type 686 Hugo Sachs - Harvard Apparatus 731750
IL2 Tube set for perfusate Harvard Apparatus 733842
Tube set for moist chamber Harvard Apparatus 73V83157
Tygon E-3603 Tubing 2.4 mm ID Harvard Apparatus 721017 perfusate line entering lung
Tygon E-3603 Tubing 3.2 mm ID Harvard Apparatus 721019 perfusate line leaving lung
low potassium dextran glucose solution flushing the lung

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References

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