התאמת שיטות סנונית Videofluoroscopic אדם מחקר כדי לזהות ולאפיין בליעה במודלי Murine מחלות

Medicine
 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Lever, T. E., Braun, S. M., Brooks, R. T., Harris, R. A., Littrell, L. L., Neff, R. M., Hinkel, C. J., Allen, M. J., Ulsas, M. A. Adapting Human Videofluoroscopic Swallow Study Methods to Detect and Characterize Dysphagia in Murine Disease Models. J. Vis. Exp. (97), e52319, doi:10.3791/52319 (2015).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

מחקר זה הותאם videofluoroscopic אדם בליעת מחקר שיטות (VFSS) לשימוש עם דגמי מחלה עכבריים לצורך קידום מחקר הבליעה translational. תוצאות מוצלחות תלויות בשלושת מרכיבים קריטיים: חדרי בדיקה המאפשרים האכלה עצמית בעמידה בלתי מרוסן בחלל מצומצם, מתכונים שלהסוות את הטעם / ריח מרתיע של סוכנים בניגוד אוראליים, זמינים מסחרי, ופרוטוקול בדיקת צעד-אחר-צעד ש מאפשר כימות של פיזיולוגיה סנונית. חיסולו של אחד או יותר ממרכיבים אלה יהיה השפעה לרעה על תוצאות המחקר. יתר על כן, יכולת רמת האנרגיה של מערכת השיקוף תקבע איזה לבלוע פרמטרים יכולים להיחקר. רוב מרכזי המחקר fluoroscopes אנרגיה גבוהה מיועד לשימוש עם אנשים ובעלי חיים גדולים יותר, וכתוצאה מכך איכות תמונה ירודה במיוחד כאשר בודקים עכברים ומכרסמים קטנים אחרים. למרות מגבלה זו, זיהינו שבעה VFSפרמטרים S שהם לכימות באופן עקבי בעכברים בעת שימוש פלואורוסקופ אנרגיה גבוה בשילוב עם פרוטוקול VFSS העכברי החדש. לאחרונה הושגו מערכת שיקוף אנרגיה נמוכה עם יכולות רזולוציה הדמיה וגדלה גבוהות במיוחד, שנועדה לשימוש עם עכברים ומכרסמים קטנים אחרים. עבודה ראשונית באמצעות מערכת חדשה זו, בשילוב עם פרוטוקול VFSS העכברי החדש, זיהתה 13 פרמטרים סנונית שהם כימות באופן עקבי בעכברים, שהוא כמעט כפול המספר שהושג באמצעות (כלומר, אנרגיה גבוהה) קונבנציונלית fluoroscopes. זיהוי של פרמטרים סנונית נוספים צפוי כפי שאנו לייעל את היכולות של מערכת חדשה זו. תוצאות עד כה להדגים את התועלת של שימוש במערכת שיקוף אנרגיה נמוכה כדי לזהות ולכמת שינויים עדינים בפיזיולוגיה סנונית שאחרת עשויה להתעלם בעת השימוש בfluoroscopes אנרגיה הגבוהה כדי לחקור מודלים עכבריים מחלה.

Introduction

בליעה (בליעת ירידת ערך) היא סימפטום נפוץ של מצבים רפואיים רבים המשפיעים על אנשים בכל הגילים. דוגמאות כוללות שבץ, מחלת פרקינסון, מחלת אלצהיימר, שיתוק מוחין, ניוון שרירים, טרשת לרוחב amyotrophic (ALS), מחלה באטן, סרטן ראש והצוואר, לידה מוקדמת, והזדקנות מתקדמת. בליעה מתאם גבוהה עם תמותה, בדרך כלל כתוצאה של תת תזונה חמורה או דלקת ריאות שמתפתחת כאשר מזון / נוזל / רוק חיידקים-לאדן הוא להישאף לריאות 1-4. מצבו הרפואי מתיש ומסכנות חיים זה משפיע על יותר מ -15 מיליון בני אדם בכל שנה בארצות הברית לבדה 3. למרות השכיחות הגבוהה ותוצאות שליליות נלוות, אפשרויות טיפול הנוכחיות לבליעה מוגבלות לפליאטיבי (ולא מרפא) מתקרב, כגון שינוי תזונה (למשל, הימנעות consistencies מזון / נוזל הספציפי), שינויים ביציבה (למשל, tucking הסנטר כאשר בליעה), גישות מוטוריות (למשל, תרגילים לחיזוק שרירי בחלל הפה, הלוע, גרון ו), גישות חושיות (למשל, טעם יישום, טמפרטורה, ו / או גירוי מכאני), וצינור האכלה (לדוגמא, תזונה ולחות מנוהלת באמצעות צינור nasogastric (NG) או צינור percutaneous גסטרונומית אנדוסקופית (PEG)). טיפולים אלה משמשים רק טיפול סימפטומטי ולא כמיקוד הגורמים הבסיסיים של הבעיה. ואכן, מכשול עיקרי לגילוי רומן, טיפולים יעילים לבליעה הוא מהמנגנונים פתולוגיים האחראים, אשר צפוי שונים לכל מחלה הידע המדעי המוגבל.

אבחון הפרעת בליעה הוא בעיקר נעשה באמצעות הליך רדיוגרפי נקרא מחקר videofluoroscopic בליעה (VFSS), הידוע גם במחקר סנונית בריום שונה. במהלך שנות 30 פלוס העבר, בדיקת אבחון זה כבר נחשבה זהב סטנדרטי עבור evaluating פונקצית סנונית 5-7. בדיקה זו כרוכה בצורך בסבלנות לשבת או לעמוד בדרכה של קרן רנטגן של מכונה שיקוף בזמן בליעת מזון וסדירויות נוזל מעורבבת עם חומר ניגוד אוראלי מרצון, בדרך כלל 8,9 בריום סולפט או iohexol 10. כמטופל בולע, ניתן לראות מזון ונוזלים המכילים חומר ניגוד בזמן אמת באמצעות צג מחשב בעת נסיעה מן הפה אל הקיבה. מבני רקמות רכים הם גם נראים לעין וניתן להעריך ביחס למבנה ותפקוד. חולים מתבקשים לבצע כמה סנוניות של כל מזון ועקביות נוזלית, אשר כולם וידאו המוקלט לצפייה שלאחר מכן וניתוח מסגרת לפי מסגרת לכמת את הנוכחות ואת מידת הבליעה. רכיבים פיסיולוגיים רבים של בליעה הם בדרך כלל מנותחים, כגון נקודה אנטומיים ההדק של סנונית בלוע, זמן מעבר בולוס דרך הלוע והוושט, במידה ומשך larynהעלאה גאל, מיקום וכמות משקעי פוסט-סנונית, ומופע של וסיבה פיזיולוגית לשאיפה 7,11.

היבטים של פרוטוקול VFSS אדם הותאמו לאחרונה ללימוד חולדות באופן חופשי-מתנהגים; עם זאת, תוצאות היו מוגבלות בגלל החולדות לא נשארו בתחום videofluoroscopic מבט במהלך בדיקת 12. VFSS שעד עתה לא ניסה עם עכברים. הסתגלות מוצלחת של פרוטוקול VFSS האנושי לשימוש עם עכברים וחולדות הייתה לספק שיטת מחקר חדשנית לחקור מאות עכברי קיימים כיום (עכבר וחולדה) מודלים של מחלות שידועות כגורמים לבליעה בבני אדם. שיטה זו חדשה (המכונה מעתה כVFSS עכברי) הייתה לכן לזרז זיהוי ואימות של מודלים עכבריים של בליעה המתאימים לחוקר את המנגנונים הנוירו-פיסיולוגיים הבסיסיים בתוך רקמת שרירים, עצבים, והמוח שפתולוגי ותורם לבליעה iבני אדם n. יתר על כן, VFSS העכברי יאפשר זיהוי של מדדים אובייקטיביים (סמנים ביולוגיים) של פונקצית סנונית / תפקוד לקוי שניתן להשוות באופן ישיר עם בני אדם. אז סמנים ביולוגיים videofluoroscopic בין מינים אלה יכולים לשמש כמדדי תוצאת רומן לכמת את יעילות טיפול בניסויים פרה-קליניים בעכברים וחולדות, שהיה טובים יותר לתרגם לניסויים קליניים עם אנשים.

לשם כך, פרוטוקול VFSS העכברי הוקם באמצעות ~ משני מינים 100 עכברים. כל העכברים היו או C57 או זני C57 / SJL היברידי. עכברי C57 לא עברו שינוי גנטי, ואילו C57 / SJL היה מתח הרקע למושבה של SOD1-G93A המהונדס (או SOD1) עכברים, מודל החיה הנפוצה ביותר של ALS. המושבה SOD1 הייתה 50-50 תמהיל משוער של מהונדס (כלומר, מושפע-ALS) עכברים והמלטת nontransgenic (כלומר, לא נפגע).

פרוטוקול VFSS העכברי מורכב משלושה מרכיבים:

  1. מתכונים שלהסוות את הטעם / הריח מרתיע של סוכנים בניגוד אוראליים ולייצר radiodensity מספיק כדי לאפשר הדמיה מספקת של בליעה,
  2. פרוטוקול בדיקת צעד-אחר-צעד הממקסם עמידת בעלי חיים, ממזער את זמן בדיקה כולל וחשיפה לקרינה, ומאפשר כימות של מספר פרמטרים סנונית לכל שלב בבליעה (כלומר, אוראלי, בלוע, וושט).

ההשפעה המשולבת מייצרת מתח נמוך, סביבה נוחה, האכלה עצמי בדיקה המאפשרת הערכה של האכלה טיפוסית והתנהגויות בליעה של עכברים.

Protocol

פרוטוקול VFSS העכברי כדלקמן פרוטוקול ועדת טיפול ושימוש בבעלי חיים מוסדיים (IACUC) אושר והנחיות NIH.

1. צ'יימברס תצפית Construct מפוליקרבונט Tubing והיריעות (איור 1)

  1. חותך צינורות רחבים 5 סנטימטר, רבועים פוליקרבונט (~ עובי דופן 2 מ"מ) לתוך 16 אורכי סנטימטר באמצעות מכונת טחינה ידנית. רוב העכברים כראוי יתאימו לממדים אלה, שהתוצאה בתא מבחן צר המאפשר הליכה ולהסתובב כרצונכם. עובי דופן של ~ 2 מ"מ מספק קשיחות נאותה ללא התעלמות מקרן רנטגן באופן משמעותי.
    1. שני סוגים של תאים חיוניים לפרוטוקול זה: "צינורות זרבובית", שנועדו להעברת נוזלים דרך זרבובית, ו" צינורות אוורור ", שנועדו להעברת נוזלים באמצעות וו-קערה.
      1. ל" צינורות זרבובית ", לעשות חור מלבני קטן (12 x 8 מ"מ) בחלקו העליון של צינור אחד ליד קצה אחד באמצעות מאך טחינה ידניine. חור זה משמש כדי לספק פתרונות שתייה באמצעות זרבובית צינור קשית במהלך אוויר התנהגותיות ובדיקות VFSS.
      2. ל" צינורות אוורור ", תרגיל 9 חורי אוורור קטנים בחלק העליון של צינור אחד ליד קצה אחד. צינור זה משמש במהלך בדיקת VFSS עם וו-קערה במקום צינור קשית.
      3. ניתן להשתמש בצינורות זרבובית כאשר אספקת נוזל באמצעות וו-קערה; עם זאת, הפתיחה בתקרת התא חייבת להיות חסומה כדי למנוע התנהגויות חקרניות מסיחות את הדעת על ידי עכברים (ראה שלב 6.2.2).
  2. יריעות פוליקרבונט Cut (עובי 3/4 ") לסוף כמוסות (50 x 50 מ"מ, 2 לכל צינור) באמצעות מכונת כרסום ממוחשבת, המכונות גם מכונה ממוחשבת שליטה מספרית (CNC).
    1. חריץ מיל אחד מלבני (19 x 6 מ"מ) ליד קצה אחד של הפנים הפנימיות של כל קצה כובע. השתמש בחריץ זה כדי לאבטח וו-קערה לעכברים לשתות מבמהלך בדיקת VFSS.
    2. טחנת 5 חורי אוורור עגולים (קוטר 6 מ"מ) דרך כל כובע בסוף.
    3. חור מיל אחד קטן עגול (5 מ"מ קוטר) ועד לסוף-הכובע, ישירות מעל החריץ המלבני. השתמש החור הזה כדי לספק נוזל לתוך היתד-הקערה במהלך בדיקת VFSS.
    4. על פניו החיצונית של קצה הכובע, טחנת 9/16 "קוטר counterbore שהוא 1/4" עמוק סביב החור הקטן הזה.
    5. מיל משם 2 מ"מ לאורך ההיקף של הפנים פנים של הסוף-הכובע עד לעומק של 7 מ"מ לעשות צעד שמכניס בקלות לתוך קצה הצינורית.
    6. מיל חריץ 1 מ"מ לצעד של הסוף-הכובע כדי להתאים O-טבעת, אשר הכרחית כדי למנוע את הסוף-הכובע מלנפול קצה הצינורית.
    7. לעגל קצוות חשופים ופוע כל הפינות של סוף הכובעים-מנת למנוע לעיסה על ידי עכברים.
  3. הפוך וו-קערות מיריעות פוליקרבונט באמצעות מכונה CNC. ממדים כלליים צריכים להיות 24 x 19 x 6 מ"מ 3, עם דיכאון 10 x 3 מ"מ 2 קערה בצורה בקצה אחד. אחד וו-קערה היא needeד לכל צינור. Peg-קערות צריכים להכניס בנוחות לתוך החריץ המלבני בסופו של הכובעים (איור 2).

איור 1
איור 1:. תצפית צ'יימברס תאי תצפית נועדו לשמור על בעלי חיים מתנהגים בחופשיות בתחום השיקוף של השקפה. תמונות אלו מראות רכיבי תא חיוניים לביצוע VFSS. "צינור זרבובית", שנועד להעברת נוזלים דרך זרבובית: למעלה. תחתון: "צינור אוורור", שנועד להעברת נוזלים באמצעות וו-קערה. שני כובעי הסוף-ניתנים להחלפה בין צינורות זרבובית ואוורור.

איור 2
איור 2:. Peg-קערות כל יתד-קערה תינעל חריץ בפרצוף הפנימי של כל קצה כובע. משמאל:רכיבים מפורקים. רכיבים הורכבו: התיכון. מימין:. פנים חיצוניים של קצה כובע אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

בקבוקי Tube הקשית 2. Construct מצנטריפוגה צינורות, פקקי סיליקון, ופיות מתכת (איור 3)

  1. השתמש דקור פקק (5/16 ") כדי להפוך את חור במרכז דרך כל פקק סיליקון.
  2. החל כמה טיפות של שמן מינרלים לתוך החור משעמם והכנס ידני זרבובית מתכת לסוף הרחב של הפקק. פיות כדור-נקודה ישר הם העדיפו כי פיות פתוחות ישר לגרום לדליפה והתזת חומר הניגוד בתוך חדר התצפית, שיכול להפריע להדמיה במהלך בדיקה של מוגזמות.
  3. התאם את אורך הזרבובית כך שהוא מכסה את כל אורכו של פקק סיליקון ומשתרע כ 3 סנטימטר מעבר לקצה הרחב של הפקק.
  4. הכנס את הקצה הצר של כל פקק (המכיל צינור קשית) לתוך צינור צנטריפוגות 30 מיליליטר.
  5. ודא שאורך הזרבובית הוא נאות על ידי הכנסתו דרך החור המלבני בחלק העליון של חדר התצפית. טיפ הזרבובית צריך לנוח כ 1 סנטימטר מתקרת החדר, שהוא מספיק ארוך לעכברים בוגרים בריאים להגיע.
    הערה: אורכים ארוכים יותר לגרום לעכברי שתייה תוך כדי סיבוב / הטיית הראש, שמטשטש ויזואליזציה של בליעה במהלך VFSS.
  6. להאריך את אורך הזרבובית כדי להתאים עכברים צעירים, זני עכבר בגודל קטנים יותר, ומודלי מחלה עכבר שלא יכול להגיע לזרבובית בשל ירידת ערך רכב של הגפיים.
  7. שטוף את הפיות שנעשו לאחרונה לפני השימוש כדי להסיר שמן מינרלים, סיליקון פסולת ומזהמים אחרים במהלך טיפול.

איור 3
איור 3: קשית. Tube בקבוקי שמאל: רכיבים מפורקים. רכיבים הורכבו: התיכון. מימין:. שתיית עכבר מצינור קשית בחדר תצפית אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

3. לבנות מערכת אספקת מזרק לשימוש עם Peg-קערות (איור 4)

  1. השתמש במחרטה לעשות מתאמים לחיבור צינורות פוליאתילן (PE) לסוף הכובעים-קאמרי תצפית, תיארה כדלקמן.
    1. לחתוך "חומר מוט שרף acetal קוטר 1/4 1 ל" 1/2 סעיפי אורך, המכונים במסמך זה כלמתאמי צינור (או מתאמים).
    2. בקצה אחד של כל מתאם, להפחית "סעיף אורך בקצה ל3/16" 1/2 קוטר, ייקרא להלן הקצה הצר.
    3. ל3/4 "סעיף אורכו של כל מתאם (כלומר, 1/2" שנשאר סוף הקוטר), חריצי מכונה למרתקים ידני במהלךדואר. סעיף זה נקרא הקצה הרחב במסמך זה.
    4. בסופו של הרחב של כל מתאם, לקדוח חור במרכז שהוא "קוטר ו 1" 0.098 עמוק.
    5. תרגיל ולקדד את החלק הנותר של החור במרכז בכל מתאם ל0.096 "לספק התאמה הדוקה על צינורות PE.
  2. חותך צינורות PE (240 PE, מ"מ קוטר 1.67 פנימי) באורך הרצוי באמצעות מספריים. אורך 3-4 מטר מספיק מגדיל את המרחק בין החוקר ופלואורוסקופ במהלך בדיקת VFSS כדי לשפר את בטיחות קרינה.
    הערה: אורכים ארוכים יותר יהיו לנצל נפח גדול יותר של פתרון חומר הניגוד במהלך בדיקת VFSS, אולי גדולה יותר מהמתכון 30 מיליליטר הסטנדרטי.
  3. הכנס 15 מחט G-קהה שקצה לקצה אחד של צינור PE באופן מלא. הראוי צריכים להיות הדוק.
  4. הכנס את הקצה (חינם) השני של צינור PE דרך החור במרכז של צינור המתאם, החל משעת tהוא קצה רחב.
  5. משוך את צינורות PE מתוך הקצה הצר של המתאם, כך שהוא מרחיב ~ 2 מ"מ.
  6. הכנס את הקצה הצר של המתאם (עם ~ צינורות PE 2 מ"מ המשתרעים מזה) לסוף-הכובע של צינור תצפית; זה צריך להתאים בנוחות לתוך חור counterbored ממוקם ישירות מעל הוו-הקערה.
  7. התאם את אורך צינורות PE בקצה הצר של המתאם כך שהוא בקושי משתרע מעל לדיכאון הקערה בוו-הקערה.
  8. ממלאי מזרק 10 מיליליטר (ללא מחט מחוברת) עם מים מכוס ולהסיר את כל בועות אוויר.
  9. צרף את המזרק המלא עד סוף המחט של צינורות PE.
  10. לאט לאט לדחוף את בוכנת המזרק כדי לספק מים ליתד-הקערה בחדר התצפית. עצור כאשר היתד-הקערה כמעט מלאה. הימנע ממילוי יתר, דבר שיגרום להתזה בשתייה.
  11. אם היתד-הקערה לא ממלאת כראוי, להתאים את האורך של צינור PE הארכה מעל הוו-הקערה.
  12. במהלך הארכת PEצינורות יהיו לפתות את העכברים ללעוס אותו במהלך בדיקה, ולא לשתות מהוו-הקערה.
  13. אם צינורות PE לא יוארך רחוק מספיק, נוזל יפעל על הרצפה של חדר התצפית ולא ממלא את היתד-הקערה.
  14. לאחר שימוש, לנתק את המזרק ולשטוף את מערכת אספקת המזרק שלמה עם מים וסבון. השתמש במזרק 10 מיליליטר לדחוף אוויר דרך צינורות PE כדי להסיר מים. לעקר ידי מעוקר לפי צורך.

איור 4
איור 4:. מזרק משלוח מערכת שמאל: רכיבים מפורקים. רכיבים הורכבו: התיכון. מימין:. שתיית עכבר מוו-קערה בחדר תצפית אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

4. לבנות Sciss ממונעאו הרם טבלה למיקום מרוחק של לשכת התצפית (איור 5)

  1. לבנות מעלית מספריים עם פלטפורמת 12 סנטימטרים x 12 אשר יכול להעלות ולהוריד בשיעור של 5 סנטימטר כדי להתאים עכברי צפייה בתפקידים שונים בתחום השיקוף של השקפה. חומר מעלית צריך להיות מתכת או פלסטיק על מנת להקל על ניקוי עם חומרי חיטוי.
  2. מנועי צעד הר כדי להתאים את הגובה ומיקום אורך של המעלית.
  3. זוג מנוע צעד הראשון למנגנון מעלית מספריים לשלוט בגובה על ידי תרגום משקוף. צימוד זה יכול להיות תשלובת בורג או מתלה-ואברה להוביל.
  4. זוג מנוע צעד השני למסגרת מעלית מספריים כדי לשלוט בעמדה האורך ידי תרגום כל מסגרת מעלית ביחס לשולחן. צימוד זה יכול להיות תשלובת בורג או מתלה-ואברה להוביל.
  5. חוט מערכת שליטה מרחוק למנועי צעד כדי לאפשר התאמה של עמדת תצפית הקאמרית במהלך הדמיה תוך מזעור investigaחשיפה לקרינת טור.
  6. ממשק כפתורי שלט רחוק כף יד עם שבב מיקרו כדי לשלוט בהפעלה והכיוון של כל מנוע צעד.

איור 5
איור 5:. לוח Lift מספריים בשליטה מרחוק משמאל: מבט מצד של שולחן מעלית מספריים. מימין: שולחן מעלית עם חדר תצפית ממוקם בפלואורוסקופ. שולחן המעלית מתאים את העמדה של חדר התצפית כדי לשמור על עכברים בשדה הראייה. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

.5 בצע אוויר התנהגות לפני VFSS בדיקות כדי לוודא השתתפות מקסימלי

  1. 1-2 שבועות לפני VFSS בדיקות, עכברים כפופים ללילה אחד (12-16 שעות) תקופת ויסות מים כדי לגרום לצמא, במהלכן מים המנוכים מכלוב בבית. המטרה של ויסות המים היא לבעלי החיים להיות צמאים, לא מיובשים. בעלי חיים צריכים להישאר ערניים ומגיב. מסגרת זמן וזמן זה היא חיונית כדי למנוע התייבשות, שעלולה להתרחש כתוצאה מפרקי תקנה 2 מים בתוך השבוע 1 (כלומר, אחד לאוויר התנהגותיות ואחר לבדיקת VFSS).
  2. הנח "צינור זרבובית" יחיד (עם קצה אחד נסגר על ידי סוגרות) על רצפת כלוב בבית המכיל חומר מצעים טרי. הסוף הסגור צריך להיות הקרוב ביותר לפתיחת הזרבובית בתקרת החדר. צעד זה מבטיח אוורור נאות בזמן שנת עכברים מרובה הצטופפה בתוך הלילה קאמרי עומק. הסוף הפתוח מאפשר עכברים להיכנס באופן חופשי / לצאת מהחדר.
  3. הסר חומר העשרה אחר (למשל, nestlet וצריף), כדי לעודד עכברים לחקור ולישון בחדר הלילה (איור 6). צעד זה מבטיח עכברים שהם הסתגלו להיותו בתא לתקופות ממושכות לפני בדיקת VFSS.
  4. לספק גלולה אחת סטנדרטי מזון לכל עכבר על רצפת הכלוב לאכילה הלילה; לא מספק מים או מקורות הידרציה אחרים.
  5. השתמש במסנן עליון סטנדרטי להכיל את העכברים בכלוב לילה, כממדים של חדר התצפית למנוע מכסה חוט סטנדרטי מההתאמה בכלוב. אחסן את המכסה הוסרה חוט (המכיל מזון ובקבוק מים) בחלק העליון של ראש המסנן להכביד על המכסה ולמנוע עכברים לברוח.
  6. בצע את טעם בדיקה למחרת בבוקר, כפי שתואר להלן.
    1. הפוך פתרון מבחן בטעם שוקולד בבקבוק צינור קשית 30 מיליליטר, ללא הוספת חומר ניגוד (כלומר מים תחליף, לiohexol). מתכון זה מתואר בטבלה 1. הפוך בקבוק אחד בכל כלוב כדי להיבדק.
    2. הסר את תא התצפית ולהחליף את המכסה החוט סטנדרטית. מציע שוקולד בטעםפתרון (בטמפרטורת חדר, ~ 22 מעלות צלזיוס) במשך 2 דקות לכל כלוב, מוחדר דרך מכסה החוט.
    3. להעריך את טעם על ידי התבוננות התנהגויות שתייה במהלך תקופת בוחן 2 דקות.
    4. ציון טעימות על פי הקריטריונים הבאים:
      1. חביון עד משקאות העכבר הראשונים בזרבובית לפחות 5 שניות ללא הפרעה.
      2. אחוז של עכברים לכלוב ששותים פתרון.
      3. מספר העכברים שבו זמנית לשתות בזרבובית.
    5. הפתרון ידוע כטעים אם רוב העכברים בכל כלוב יש התקפים מרובים (sec> 5) הארוך של שתייה ואם עכברים מרובים לשתות בו זמנית מהזרבובית (איור 7).
    6. אם הפתרון בטעם השוקולד הוא לא טעים, לחזור על בדיקות את טעם עם משפרי טעם אחרים בריכוזים שונים לזהות פתרון מועדף יחיד.
    7. מציע עד ארבעה פתרונות שונים (בריכוזים שונים) אחד בכל פעםכדי אקראי לכלובים מרובים של עכברים ביום בדיקה אחת, ללא תקופת מתנה או פתרון כישלון. משפרי טעמים מתאימים לשקול לעכברים כוללים סוכר, גבינה, חמאת בוטנים, טעמי פירות ואגוזים שונים, וחלב.
      הערה: אל תבצע את טעם בדיקה יותר מפעם אחת בשבוע על מנת למנוע התייבשות מפרקי הסדרת מים חוזרים ונשנים.
    8. זה עלול לקחת מספר שבועות כדי לזהות את הפתרון המועדף עבור כל זן של עכברים בהצלחה. המטרה היא לזהות טעמי מועמד שיביאו ל( sec> 5) מרובה ארוך התקפי שתייה על ידי עכברים מייד (<30 שניות) לאחר חשיפה, ככישורים אלה נחשבים חיוניים להשגת תוצאות מוצלחות VFSS.
  7. לאחר פתרון טעם מועדף מזוהה, להחזיר את חדר תצפית לכל כלוב בבית כדי להמשיך אוויר התנהגות, תאר כדלקמן.
    1. צרף אחד קצה כובע לתא התצפית בסוף קרובחור סגלגל (זרבובית).
    2. מציע עכברים הפתרון בטעם השוקולד במשך 2-3 שעות על ידי החדרת צינור בקבוק קשית דרך החור הסגלגל בחלק העליון של החדר. צעד זה מבטיח כי כל העכברים הורגלו שתייה עמוקה בתוך חדר התצפית.
    3. הסר את מכסה התיל כדי להכיל את תא התצפית.
    4. מניחים גלולה מזון 1 לכל עכבר על רצפת כלוב הצריכה כרצונך מודעה בתקופת המבחן.
    5. לכסות את הכלוב עם ראש מסנן סטנדרטי למניעת עכברים לברוח ליתרת תקופת אוויר ההתנהגות. אחסן את המכסה הוסרה חוט (המכיל מזון ובקבוק מים) בחלק העליון של ראש המסנן להכביד על המכסה.
  8. לספק כרצונך מים ומזון מודעה בכלוב בבית כאשר אוויר התנהגות הושלם.
  9. לשטוף את תאי תצפית (צינורות וכובעים-סוף) ובקבוקי צינור קשית (פיות וצינורות צנטריפוגה) עם מים וסבון; לעקר ידי מעוקר לפי צורך. הימנע מבאמצעות אצטון כדי לנקות את הצינורות כפי שגורם לאפקט ערפול קבוע שהופך את הצינור אטום ולא שקוף.

איור 6
איור 6:. עכברים היכרות תצפית צ'יימברס עכברים הם באופן טבעי נוטה לחפש מחסה בחללים קטנים. כתוצאה מכך, הם נכנסים באופן חופשי ולחקור את צינור התצפית כאשר היא ממוקמת בכלוב בבית. רוב העכברים נמצאים ישנים בחדר בבוקר. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

<td> סירופ שוקולד
מרכיבים פתרון שוקולד (לטעימות בדיקה) שוקולד בטעם-Iohexol (לVFSS בדיקה)
3 מיליליטר 3 מיליליטר
Iohexol (350 יוד מ"ג / מיליליטר) 0 מיליליטר 15 מיליליטר
מים (DI או מסונן) נפח להתאים ל -30 מיליליטר סופי (27 מיליליטר) נפח להתאים ל -30 מיליליטר סופי (12 מיליליטר)
נפח סופי 30 מיליליטר 30 מיליליטר

טבלה 1: מבחן פתרון מועדף על ידי C57 וזני עכבר C57 / SJL בטעם שוקולד.

איור 7
איור 7:. את טעם בדיקת מחוון אחד העדפת טעם במהלך בדיקה את הטעם הוא מספר העכברים שבו זמנית לשתות מזרבובית יחידה בכלוב בבית. תמונה זו מראה ארבעה עכברים בו זמנית שתיית פתרון בטעם שוקולד, שזוהה כמשפר טעם מועדף על ידי זני C57 וC57 / SJL.

6. VFSS בדיקת הכנה

  1. עכברים כפופים לתקופת ויסות מים למשך לילה (כלומר, לעכב מים ל12-16 שעות), כמתואר בשלב 5 לעיל.
    1. הנח "צינור אוורור" יחיד (עם קצה אחד נסגר על ידי סוגרות) על רצפת כלוב בבית המכיל חומר מצעים טרי. הסוף הסגור צריך להיות הקרוב ביותר חורי האוורור בתקרת החדר. צעד זה מבטיח אוורור נאות בזמן שנת עכברים מרובה הצטופפה בתוך הלילה קאמרי עומק. הסוף הפתוח מאפשר עכברים להיכנס באופן חופשי / לצאת מהחדר.
  2. למחרת בבוקר, להסיר תאי תצפית מלוכלכים מכלובים ולשטוף בקצרה במים ברז ויבש לחלוטין בהכנה לבדיקת VFSS.
    1. הסר ונקי רק חדר אחד בכל פעם, כדי למנוע ערבוב בין תאי כלובים, אשר יכולה לגרום להתנהגויות חקרניות מוגזמות שלהתערב באופן משמעותי עם בדיקות VFSS.
    2. אם "צינורות זרבובית" במקום של "צינורות אוורור" לבדיקת VFSS, להכניס תקע סיליקון לתוך הפתח הזרבובית של תקרת חדר תצפית למניעת התנהגויות גישוש (איור 8).
    3. לייבל כל תא (לדוגמא, עם מספר הכלוב בבית) כדי למנוע בלבול.
      הערה: השתמש בסמן יבש למחוק לתייג כל צינור ניקה לפני הצבתו בחזרה בכלוב בבית. יש להימנע סמן קבע כי הוא נספג על ידי חומר הצינור ולא לשטוף, אפילו עם אלכוהול או אצטון.
  3. הכן את הפתרון בטעם שוקולד iohexol (או פתרון טעים אחר).
    1. מתכון לעשות אחד (30 מיליליטר) של פתרון המבחן (טבלת 1) לכמה כלובים.
    2. אמצעי זהירות לIOHEXOL: בקבוקים שלא נפתח iohexol חנות בטמפרטורת חדר, מוגן מפני אור. שימוש פתח בקבוקי iohexol בתוך 24שעות, כפי שהצמיגות והטעם עשויה להשתנות בתוך יום או ימים לאחר חשיפה לאוויר. לחלופין, להקפיא aliquots של חד-מנות (15 מיליליטר) בצינורות צנטריפוגה לאחסון לטווח ארוך. פתרונות בדיקת iohexol מוכנים יש להשתמש תוך כמה שעות על מנת להבטיח טריות ולמנוע הימנעות על ידי עכברים. לנהל פתרונות iohexol בטמפרטורת חדר, כדי למנוע בלבול המחקר בשל תופעות טמפרטורה על תפקוד סנונית. אין להקפיא כל פתרון מבחן מוכן שנותר, כטעם השוקולד הופך מרים עם הקפאה ותוצאות בהימנעות על ידי עכברים.
  4. הכן את סביבת השיקוף.
    1. השתמש חילוף תא תצפית (ריק) ויתד-קערה (או זרבובית צינור קשית) כדי לקבוע את הגובה האופטימלי ומיקום בתוך אלומת פלואורוסקופ המאפשרת הדמיה של שתייה במטוס לרוחב (האופקי).
    2. הגדר את קצב פריימי השיקוף 30 פריימים לשנייה; שיעורי מסגרת (אך לא נמוכים יותר) גבוהים יכולים לשמש אם זמין.
    3. ENsure שסמן כיול radiopaque ממוקם כראוי על המצלמה פלואורוסקופ / גלאי כך שהוא נראה על צג התצוגה במהלך המבחן כולו. צעד זה הוא הכרחי כדי לאפשר כיול של מדידות אורך משמשות לכימות פרמטרים סנונית.

איור 8
איור 8:. סיליקון Plug עת שימוש Peg-קערות משמאל: התוספת סיליקון. מימין: התוספת סיליקון נמשכת דרך הפתח צינור קשית בחלק העליון של חדר התצפית. תקע זה מונע עכברים מלהפוך מוסח על ידי פתיחת הזרבובית בעת שימוש בוו-קערה ולא צינור קשית במהלך בדיקת VFSS. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

7. VFSS בדיקה של עכברים

  1. הרם את התא מחוץ לכלוב ועדינות לצרף קצה כובע 2 nd (עם וו-קערה המצורפת, אם צינור קשית לא ישמש), נזהר שלא לצבוט את העכבר (במיוחד הזנב).
    הערה: גישה זו מצמצמת את התגובה של עכבר לחץ עקב טיפול, אשר חשובה במיוחד עבור עכברים שנבדקים בפעם הראשונה.
  2. עם בדיקות חוזרות ונשנות, ניתן שידלו עכברים בקלות להיכנס לחדר כשהיא ממוקמת מולם בתוך הכלוב, או כאשר הושעתה על ידי הזנב על פתיחת התא.
  • מקם את תא התצפית (המכיל את העכבר) בתוך המכונה השיקוף להתחיל בדיקות VFSS במישור הרוחבי (כלומר, קרן רנטגן האופקי).
  • לספק את פתרון iohexol בטעם השוקולד (טבלת 1) באמצעות וו-קערה או בקבוק צינור קשית.
    1. אם אתם משתמשים בוו-קערה, לספק את הפתרון באמצעות מערכת אספקת המזרק המתוארת בשלב 3 לעיל. מערכת זו מאפשרת מילוי מהיר וקל של PEG-הקערה לפי צורך.
    2. אם אתם משתמשים בבקבוק צינור קשית, להכניס את צינור הקשית דרך הפתח הסגלגל בחלק העליון של חדר התצפית. הטה את הבקבוק כך שהזרבובית מופנה לכיוון מרכז התא.
  • התחל הקלטת videofluoroscopy כאשר העכבר מתחיל לשתות.
    1. להתאים את המיקום של חדר התצפית (באמצעות שולחן מעלית מספריים בשלט הרחוק המתוארים בשלב 4), כך שמנגנון הבליעה גלוי בשדה הראייה.
    2. להשהות את ההקלטה בכל פעם שהעכבר הופך מהוו-הקערה או זרבובית כדי למזער את משך הזמן של חשיפה לקרינה.
    3. לחדש את ההקלטה כאשר תשואות העכבר כדי הזרבובית או וו-קערה.
    4. למלא את היתד-הקערה לפי צורך.
    5. להפסיק בודק אם העכבר לא שותה תוך 5 דקות. המטרה היא להקליט כמה לוןg (5 שניות>) התקפים של שתייה רצופה, אשר אופיינית עבור רוב העכברים בתוך 2 דקות הראשונות של בדיקה.
    6. חזור עכברי noncompliant לכלוב בבית (בלי מים) לבדיקה חוזרת במועד מאוחר יותר באותו היום; לא יעלה על תקופת ויסות מים 24 שעות. עכברים שנותרו noncompliant לשלושה ניסויים יוסרו מן המחקר.
  • במידת הצורך, לשנות את מיקום פלואורוסקופ לבדוק עכברים במטוס הגבי-הגחון (כלומר, קרן רנטגן האנכי). מטוס זה משמש לזיהוי סטיות בזרימת בולוס דרך הלוע והוושט בבליעה.
  • כאשר בודקים עכברים מרובים מאותה כלוב בבית:
    1. נקה את היתד-הקערה (וקצה צינור PE) או זרבובית צינור קשית עם מגבת נייר יבשה בין עכברים.
    2. נקה את חדר התצפית לפי צורך בין עכברים כדי להסיר כל iohexol ניתז על חדר הקירות. יש לשטוף את התא במים ברז ויבש במגבת נייר.
  • כאשר בודקים עכברים הלוך ושובכלוב בבית שונה ma:
    1. השתמש בוו-קערה חדשה (או לשנות את זרבובית צינור הקשית). אחרת, עכברים עלולים להיות מוסחים על ידי הריח של עכברים אחרים ששתו מאותו הוו-הקערה או צינור קשית. הוו-הקערות וצינורות קשית צריכים להיות מסומנים כדי למנוע בלבול.
  • כאשר בדיקה של כל העכברים בכלוב אחד הושלמה, לספק מים ומזון בכלוב בבית.
  • לשטוף את תאי התצפית (צינורות וכובעים-סוף), וו-קערות, מערכת אספקת המזרק, ובקבוקי צינור קשית (פיות וצינורות צנטריפוגה, אם משתמש בו) עם מים וסבון; לעקר ידי מעוקר לפי צורך.
  • השלך כל פתרון iohexol שנותר כפי שהורה הנחיות בטיחות; רשות ניקוז עשויה להיות מקובלת ברוב המתקנים.
  • 8. ניתוח וידאו

    1. השתמש בתוכנת עריכת וידאו המאפשרת ניתוח מסגרת לפי מסגרת של הקלטות videofluoroscopy לכמת את הפרמטרים הסנונית של עניין (טבלה 2). לזהות לפחות שני בודקים מיומנים לנתח כל וידאו בצורה עיוורה: סוקר ראשי וביקורות של אחד או שתיים משני.
      1. סוקר ראשי: צפה בכל וידאו כדי לזהות ולנתח 3-5 התקפי שתייה ארוכים (כ -5 שניות). קריטריון זה מבוסס על מחקרי סנונית שאינו רדיוגרפי פורסמו עם עכברים 13,14 וVFSS עם חולדות הראו כי 12 3-5 צעדים לפרמטר סנונית מספיקים עבור ניתוחים סטטיסטיים.
      2. ביקורות המשניות: באופן עצמאי לנתח 3-5 צעדים לפרמטר סנונית לכל עכבר שהיו תחילה זוהה ונותח על ידי הסוקר הראשי.
    2. לזהות פערי סוקר עבור כל עכבר. Re-לנתח את כל הסתירות כקבוצת מבקר להגיע ל -100% הסכמה.
    3. ממוצע 3-5 קונסנסוס הערכים (כלומר, אינו שנוי במחלוקת) לכל פרמטר לבלוע כדי לקבל את ממוצע הערך עבור כל עכבר לשימוש בניתוחים סטטיסטיים. כאשר פחות מ 3 measures מתקבל לפרמטר סנונית אחת לעכבר נתון, הזן ערך חסר (כלומר, לא אפס) בבסיס נתונים הסטטיסטי לפרמטר הסנונית המקביל.

    פרמטרי סנונית תיאור
    Inter-סנונית מרווח (ISI) מספר מסגרות וידאו בין שתי סנוניות רצופות, ללא הפרעה. מסגרת ההתחלה לחישוב ISI היא "מסגרת השאר" שמקדימה את ההעברה גלויה של בולוס מvalleculae לוושט באופן מיידי. המסגרת הסופית היא "מסגרת השאר" של הסנונית הבאה. מספר המסגרות בין שתי הסנוניות רצופות מחולק אז על ידי 30 מסגרות לשנייה (fps) להמיר לזמן (שניות).
    לסת טיול שיעור (Equivalent Lick Rate) הלשון היא לא ברורגלוי במהלך VFSS להתיר כימות של שיעור ללקק; עם זאת, שיעור טיול לסת ניתן לכמת בקלות. במהלך ליקוק, הלסת חייבת לפתוח להתיר את הלשון כדי לבלוט מהפה. לכן, מספר מחזורי לסת הפתוח / סגור (טיול) לשנייה (30 מסגרות), בעוד ששתייה היא שווה ערך לשיעור ללקק. כל מחזור טיול לסת מתחיל עם הלסת פתחה מקסימאלי (שעולה בקנה אחד עם בליטת לשון) ומסתיימת כאשר הלסת חוזרת לנפתחה עמדה מקסימלי. המחזורים הבאים של סגירת הלסת ופתיחה מחדש נספרים כפרקי לסת טיול בודד.
    לסת טיול מרחק מרחק הלסת פותחת במהלך מחזורי טיול לסת, למדוד במ"מ בין הלסת ושיניים החותכות בלסת תחתונות,.
    יחס ליק-סנונית מספר מחזורי טיול לסת המתרחשים במהלך כל ISI (כלומר, בין שתי סנוניות רצופות, ללא הפסקה).
    סנונית שערי מספר הסנוניות המתרחשות במהלך כל פרק 2 שניות של שתייה רצופה בזרבובית.
    בלוע Transit Time (PTT) הזמן שלוקח בולוס לבליעה דרך הלוע. מסגרת ההתחלה זהה למסגרת התחלת ISI (כלומר, "מסגרת השאר" שמקדימה את ההעברה גלויה של בולוס מvalleculae מייד). המסגרת הסופית היא כאשר הזנב של בולוס עבר את החוליה 2 nd צוואר רחם (C2), המהווה את ציון הדרך אנטומיים הברורה ביותר בעמוד השדרה הצווארי של העכבר לחלוטין. מספר המסגרות בין מסגרות ההתחלה וסיום מחולק אז על ידי 30 fps והמיר לאלפיות שניים (אלפיות שני).
    מהירות בולוס דרך הלוע מהירות בולוס בלוע נמדדת ביחס לPTT (שתואר לעיל). שימוש בתוכנת ImageJ, המרחק (מ"מ) מvalleculae לחולית C2 נמדד, בקנה המידה באמצעות סמן כיול. distanc זהדואר (מ"מ) מחולק לאחר מכן על ידי PTT (אלפיות שני) כדי לקבוע את מהירות בולוס (מ"מ / אלפיות שני).
    הוושט Transit Time (ETT) מסגרת התחלת ETT זהה למסגרת PTT הסוף (שתוארה לעיל). מסגרת סוף ETT היא כאשר בולוס נכנס לקיבה, אשר מוגדרת כהיעלמותו של בולוס מהוושט לחלוטין. מספר המסגרות בין מסגרות ההתחלה וסיום ETT מחולק אז על ידי 30 fps והמיר לmsec.
    מהירות בולוס דרך הוושט מהירות בולוס הוושט נמדדת ביחס לETT (שתואר לעיל). שימוש בתוכנת ImageJ, המרחק (מ"מ) נמדד הוא מחולית C2 לצומת גסטרו, טיפס באמצעות סמן כיול. מרחק זה (מ"מ) מחולק לאחר מכן על ידי ETT (אלפיות שני) כדי לקבוע את מהירות בולוס (מ"מ / אלפיות שני).
    בולוס המהיר דרך לוע והוושט פרמטר זה משמש כאשר C2 הוא לא ציון דרך האנטומי גלויה בקלות; ומכאן,לא ניתן להבחין בין בלוע ושלבי הוושט של בליעה. במקרים כאלה, מהירות בולוס דרך הלוע והגרון בשילוב לפרמטר סנונית אחת. מסגרת ההתחלה זהה למסגרת התחלת PTT (כלומר, "מסגרת השאר" שמקדימה את ההעברה גלויה של בולוס מvalleculae מייד). המסגרת הסופית היא זהה למסגרת סוף ETT (כלומר, כאשר בולוס נכנס לגמרי הקיבה). מספר המסגרות בין שני אירועים אלה מחולק על ידי 30 fps והמיר לmsec.
    פינת בולוס השימוש בתוכנת ImageJ, אזור בולוס נמדד לפי "מסגרת השאר" vallecular לפני תחילת סנונית בלוע, בקנה מידה באמצעות סמן כיול.
    פינת שאריות בלוע אזור שאריות בלוע נמדד באמצעות תוכנת ImageJ, טיפס באמצעות סמן כיול.
    נפח של נוזלי consumed הנפח של הנוזל נצרך מבקבוק צינור קשית קשה לאמוד עקב דליפה מהזרבובית. עם זאת, נפח הנוזל נצרך מוו-קערה ניתן לחשב באופן מדויק יותר באופן הבא: 1) לקבוע את הצפיפות (כלומר, יחס בין משקל לעוצמת קול) של הנפח המכויל של נוזל שהיה מנוהל בוו-הקערה, 2 ) לקבוע את המשקל של היתד-הקערה המכילה את הנוזל שיורית, 3) להיכנס לערכים אלה למשקל לממיר נפח (למשל, http://www.thecalculatorsite.com/conversions/weighttovolume.php.

    טבלה 2: לבלוע פרמטרי כימות במהלך Murine VFSS.

    Materials

    Name Company Catalog Number Comments
    Polycarbonate tubing for observation chambers McMaster-Carr 3161T41 Body of observation tubes, 2"X2" diameter, 0.080" thick wall
    Polycarbonate sheet  for observation chambers McMaster-Carr 9115K71 End-caps for observation tubes, 2"x12"x3/4"
    Polycarbonate sheet  for observation chambers McMaster-Carr 8574K281 Peg-bowls for observation tubes
    Silicone O-rings  for end-caps of observation chambers McMaster-Carr 9396K108 S1138 AS568-029, pack of 25
    http://www.mcmaster.com/#o-rings/=t0wt5r 
    Silicone stoppers for observation chambers McMaster-Carr 2903K22 Package of 10 stoppers to plug the oval opening in the top of the observation chamber when using a peg-bowl
    http://www.mcmaster.com/#catalog/120/3803/=t0y5at
    Centrifuge tubes for sipper tube bottles Evergreen Scientific 222-3530-G80 30 ml freestanding centrifuge tubes, with caps, sterile
    https://www.evergreensci.com/labware-catalog/tubes-and-vials/30-and-50-ml-centrifuge-tubes/ 
    Silcone stoppers for sipper tube bottles Saint-Gobain Performance Plastics DX263031-10  Number 31D, size: 26 mm bottom, 32 mm top, 30 mm high; 10 pack; 
    http://www.labpure.com/en/Products.asp?ID=179&PageBrand=STOPPERS
    Stopper borers for sipper tube bottles Thomas Scientific 3276G40 Cork Borer Set that ranges from 3/16-15/16 inch 
    http://www.thomassci.com/Supplies/Corks/_/CORK-BORER-SET-316-1516-IN?q=Humboldt
    Drinking tubes for sipper tube bottles Ancare TD-100  2 1/2” long drinking tubes with 5/16” opening, straight ball-spout
    http://www.ancare.com/products/watering-equipment/open-drinking-tubes/straight-tubes-ball-point 
    Iohexol for making oral contrast agent solution GE Healthcare 350 mg iodine per ml
    http://www3.gehealthcare.com/en/products/categories/contrast_media/omnipaque 
    Chocolate syrup for flavoring oral contrast agent Herseys
    10 ml syringe for syringe delivery system Becton, Dickinson and Company 309604 Luer lock tip syringe without needle, 100 per box
    http://www.bd.com/hypodermic/products/syringeswithoutneedles.asp
    Catheter tubing for syringe delivery system Becton, Dickinson and Company 427451 Polyethylene Tubing (Non-Sterile) (PE 240) 100'
    http://www.bd.com/ds/productCenter/427451.asp 
    Needle for syringe delivery system Becton, Dickinson and Company 427560 15-gauge needle, fits into PE 240 catheter tubing
    http://www.bd.com/ds/productCenter/427560.asp 
    Delrin acetal resin rod for syringe delivery system McMaster-Carr 8576K15 1/2 inch diameter, black
    http://www.mcmaster.com/#catalog/120/3609/=t0wvaf 
    Acrylic sheeting for scissor lift Ponoko Laser cut
    http://www.ponoko.com 
    3D printed ABS frame Engineering Rapid Prototyping Facility, University of Missouri
    Brass rods for scissor lift Amazon TTRB-03-12-03 made into axles
    http://www.amazon.com/Brass-Seamless-Round-Tubing-Length/dp/B000FN898M
    Drawer slide for scissor lift Richelieu 10292G116 Attaches to base of scissor lift
    http://www.lowes.com/pd_380986-93052-T35072G16_0__?productId=50041754
    28BYJ-48 stepper motor for scissor lift 2 each
    ULN2003 Darlington transistor array for scissor lift Toshiba ULN2003APG Used as stepper drivers (2 each)
    ATTINY85 microcontroller for scissor lift Atmel ATTINY85-20PU 2 each
    http://www.taydaelectronics.com/attiny85-attiny85-20pu-8-bit-20mhz-microcontroller-ic.html
    Nylon spur gear McMaster-Carr 57655K34 2 each
    http://www.mcmaster.com/#57655k34/=t0yaqz
    Nylon spur gear rack McMaster-Carr 57655K62 2 each
    http://www.mcmaster.com/#57655k62/=t0ybh9
    4-40 nylon machine screws McMaster-Carr 95133A315 Lift assembly
    http://www.mcmaster.com/#95133a315/=t0yd8q
    4-40 nylon hex nuts McMaster-Carr 94812A200 Lift assembly
    http://www.mcmaster.com/#94812a200/=t0ye29
    Buna-N O-Ring AS568A Dash No. 104 McMaster-Carr 9452K318 Lift assembly
    http://www.mcmaster.com/#9452k318/=t0yem7

    DOWNLOAD MATERIALS LIST

    References

    1. Shigemitsu, H., Afshar, K. Aspiration pneumonias: under-diagnosed and under-treated. Curr Opin Pulm Med. 13, (2), 192-198 (2007).
    2. Gresham, S. L. Clinical assessment and management of swallowing difficulties after stroke. Med J Aust. 153, (7), 397-399 (1990).
    3. Marik, P. E., Kaplan, D. Aspiration pneumonia and dysphagia in the elderly. Chest. 124, (1), 328-336 (2003).
    4. Marik, P. E. Pulmonary aspiration syndromes. Curr Opin Pulm Med. 17, (3), 148-154 (2011).
    5. Logemann, J. A., Larsen, K. Oropharyngeal dysphagia: pathophysiology and diagnosis for the anniversary issue of. Diseases of the Esophagus. Dis Esophagus. 25, (4), 299-304 (2012).
    6. Logemann, J. A. Swallowing disorders. Best practice & research Clinical gastroenterology. 21, (4), 563-573 (2007).
    7. Martin-Harris, B., Jones, B. The Videofluorographic Swallowing Study. Physical Medicine and Rehabilitation. Clinics of North America. 19, (4), 769-785 (2008).
    8. Dietsch, A. M., Solomon, N. P., Steele, C. M., Pelletier, C. A. The effect of barium on perceptions of taste intensity and palatability. Dysphagia. 29, (1), 96-108 (2014).
    9. Stokely, S. L., Molfenter, S. M., Steele, C. M. Effects of barium concentration on oropharyngeal swallow timing measures. Dysphagia. 29, (1), 78-82 (2014).
    10. Harris, J. A., et al. The Use of Low-Osmolar Water-Soluble Contrast in Videofluoroscopic Swallowing Exams. Dysphagia. (2013).
    11. Hillel, A., Miller, R. Bulbar Amyotrophic Lateral Sclerosis: Patterns of Progression and Clinical Management. Head & Neck. 11, 51-59 (1989).
    12. Russell, J. A., Ciucci, M. R., Hammer, M. J., Connor, N. P. Videofluorographic assessment of deglutitive behaviors in a rat model of aging and Parkinson disease. Dysphagia. 28, (1), 95-104 (2013).
    13. Lever, T. E., et al. An animal model of oral dysphagia in amyotrophic lateral sclerosis. Dysphagia. 24, (2), 180-195 (2009).
    14. Lever, T. E., et al. A mouse model of pharyngeal dysphagia in amyotrophic lateral sclerosis. Dysphagia. 25, (2), 112-126 (2010).
    15. Ciucci, M. R., et al. Tongue force and timing deficits in a rat model of Parkinson disease. Behavioural Brain Research. 222, (2), 315-320 (2011).
    16. Ciucci, M. R., Schaser, A. J., Russell, J. A. Exercise-induced rescue of tongue function without striatal dopamine sparing in a rat neurotoxin model of Parkinson disease. Behavioural Brain Research. 252, 239-245 (2013).
    17. Plowman, E. K., Kleim, J. A. Behavioral and neurophysiological correlates of striatal dopamine depletion: A rodent model of Parkinson’s disease. Journal of Communication Disorders. 44, (5), 549-556 (2011).
    18. Sugiyama, N., et al. A novel animal model of dysphagia following stroke. Dysphagia. 29, (1), 61-67 (2014).
    19. Bachmanov, A. A., Reed, D. R., Li, X., Beauchamp, G. K. Genetics of sweet taste preferences. Pure Appl Chem. 74, (7), 1135-1140 (2002).
    20. Ishiwatari, Y., Bachmanov, A. A. NaCl taste thresholds in 13 inbred mouse strains. Chem Senses. 37, (6), 497-508 (2012).
    21. Pinhas, A., et al. Strain differences in sucrose- and fructose-conditioned flavor preferences in mice. Physiol Behav. 105, (2), 451-459 (2012).
    22. Midkiff, E. E., Bernstein, I. L. The influence of age and experience on salt preference of the rat. Dev Psychobiol. 16, (5), 385-394 (1983).
    23. Niimi, K., Takahashi, E. Differences in saccharin preference and genetic alterations of the Tas1r3 gene among senescence-accelerated mouse strains and their parental AKR/J strain. Physiol Behav. (2014).
    24. Weijnen, J. A. Licking behavior in the rat: measurement and situational control of licking frequency. Neurosci Biobehav Rev. 22, (6), 751-760 (1998).
    25. Weijnen, J. A. Lick sensors as tools in behavioral and neuroscience research. Physiol Behav. 46, (6), 923-928 (1989).
    26. Kobayashi, M., et al. Electrophysiological analysis of rhythmic jaw movements in the freely moving mouse. Physiol Behav. 75, (3), 377-385 (2002).
    27. Dantas, R., et al. Effect of swallowed bolus variables on oral and pharyngeal phases of swallowing. 258, G675-681 (1990).
    28. Johnsson, F., Shaw, D., Gabb, M., Dent, J., Cook, I. Influence of gravity and body position on normal oropharyngeal swallowing. American Journal of Physiology. 35, (5), G653-G658 (1995).
    29. Han, T. T., Paik, N. -J., Park, J. W. Quantifying swallowing function after stroke: A functional dysphagia scale based on videofluoroscopic studies. Archives of Physical Medicine and Rehabilitation. 82, (5), 677-682 (2001).
    30. Molfenter, S. M., Steele, C. M. Kinematic and temporal factors associated with penetration-aspiration in swallowing liquids. Dysphagia. 29, (2), 269-276 (2014).
    31. Kendall, K. A., McKenzie, S., Leonard, R. J., Goncalves, M. I., Walker, A. Timing of events in normal swallowing: A videofluoroscopic study. Dysphagia. 15, 74-83 (2000).
    32. Choi, K. H., Ryu, J. S., Kim, M. Y., Kang, J. Y., Yoo, S. D. Kinematic analysis of dysphagia: Significant parameters of aspiration related to bolus viscosity. Dysphagia. 26, 392-398 (2011).
    33. Molfenter, S. M., Steele, C. M. Variation in temporal measures of swallowing: Sex and volume effects. Dysphagia. 28, 226-233 (2013).
    34. Alves, L. M. T., Secaf, M., Dantas, R. Effect of a bitter bolus on oral, pharyngeal, and esophageal transit of healthy subjects. Arquivos de gastroenterologia. 50, (1), 31-34 (2013).
    35. Dalmazo, J., Aprile, L. R. O., Dantas, R. O. Esophageal contractions, bolus transit and perception of transit after swallows of liquid and solid boluses in normal subjects. Arquivos de gastroenterologia. 49, (4), 250-254 (2012).
    36. Kahrilas, P. J., Dodds, W. J., Hogan, W. J. Effect of peristaltic dysfunction on esophageal volume clearance. Gastroenterology. 94, (1), 73-80 (1988).
    37. German, R. Z., Crompton, A. W., Levitch, L. C., Thexton, A. J. The mechanism of suckling in two species of infant mammal: Miniature pigs and long-tailed macaques. Journal of Experimental Zoology. 261, (3), 322-330 (1992).
    38. Herring, S. W., Scapino, R. P. Physiology of feeding in miniature pigs. Journal of Morphology. 141, (4), 427-460 (1973).
    39. Gordon, K. R., Herring, S. W. Activity patterns within the genioglossus during suckling in domestic dogs and pigs: Interspecific and intraspecific. Brain, Behavior, and Evolution. 30, (5-6), (1987).
    40. Hiiemae, K. M., Palmer, J. B. Food transport and bolus formation during complete feeding sequences on foods of different initial consistency. Dysphagia. 14, (1), 31-42 (1999).
    41. Thexton, A. J., Crompton, A. W., German, R. Z. EMG activity in the hyoid muscles during pig suckling. Journal of Applied Physiology. 112, 1512-1519 (2012).
    42. Thexton, A. J., Crompton, A. W., German, R. Z. Transition from suckling to drinking at weaning: A kinematic and electromyographic study in miniature pigs. Journal of Experimental Zoology. 280, (5), 327-343 (1998).
    43. Goldfield, E. C., Richardson, M. J., Lee, K. G., Margetts, S. Coordination of sucking, swallowing, and breathing and oxygen saturation during early infant breast-feeding and bottle-feeding. Pediatric Research. 60, (4), 450-455 (2006).
    44. Ottaviano, F. G., Linhares Filho, T. A., Andrade, H. M., Alves, P. C., Rocha, M. S. Fiberoptic endoscopy evaluation of swallowing in patients with amyotrophic lateral sclerosis. Braz J Otorhinolaryngol. 79, (3), 349-353 (2013).
    45. Inamoto, Y., et al. The effect of bolus viscosity on laryngeal closure in swallowing: kinematic analysis using 320-row area detector CT. Dysphagia. 28, (1), 33-42 (2013).
    46. Spalding, J. F., Thomas, R. G., Tietjen, G. L. Los Alamos National Laboratory. Rein, S. erene Los Alamos, N.M. (1982).
    47. Palomba, S., Di Cello, A., Riccio, E., Manguso, F., La Sala, G. B. Ovarian function and gastrointestinal motor activity. Minerva Endocrinol. 36, (4), 295-310 (2011).
    48. Alves, L. M., Cassiani Rde,, Santos, A., M, C., Dantas, R. O. Gender effect on the clinical measurement of swallowing. Arq Gastroenterol. 44, (3), 227-229 (2007).
    49. Logemann, J. A., Pauloski, B. R., Rademaker, A. W., Kahrilas, P. J. Oropharyngeal swallow in younger and older women: videofluoroscopic analysis. J Speech Lang Hear Res. 45, (3), 434-445 (2002).

    Comments

    0 Comments


      Post a Question / Comment / Request

      You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

      Usage Statistics