장간막 림프 덕트 유관 쥐 모델 : 창자 림프 약물 운송의 평가에 응용

Immunology and Infection

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Trevaskis, N. L., Hu, L., Caliph, S. M., Han, S., Porter, C. J. The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport. J. Vis. Exp. (97), e52389, doi:10.3791/52389 (2015).

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Abstract

장 림프 시스템은 유체 수송, 지질의 흡수와 면역 기능에 중요한 역할을한다. 림프 장간막 림프절 덕트 수렴 림프관 및 일련의 노드를 통해 소장에서 직접 흐른다. 장간막 림프절 덕트의 캐 뉼러 따라서 소장에서 흐르는 장간막 림프절의 수집을 할 수 있습니다. 장간막 림프 및 지단백 분획 (지질, 친 유성 분자와 아포 단백질) (사이토 카인과 장 호르몬 등의 유체, 펩타이드 및 단백질) 면역 세포 (99 % 림프구), 수성 부분의 세포 부분으로 구성되어 있습니다. 장간막 림프절 덕트 삽관 모델 따라서 림프계를 통해 농도 및 소장에서 다양한 요인의 이송 속도를 측정하는데 사용될 수있다. 다른 도전에 대한 응답에서 이러한 요소의 변경 (예를 들면, 다이어트, 항원, 약물)과 질병 (예를 들어, 염증성 장 질환, HIV는 당뇨병)도 수 b전자는 결정. 관심을 확대 영역은 장 지질 흡수 경로와 연관 경구 투여 친 유성 약물과 전구 약물의 흡수에 림프 수송의 역할이다. 여기에 우리가 설명, 세부 사항, 장 배달 다음 몇 시간 동안 림프 시스템을 통해 속도와 지질 및 약물 수송의 정도의 평가를 할 수있는 장간막 림프절 덕트 유관 쥐 모델. 방법은 림프 다른 파라미터의 측정에 용이하게 적응할 수있다. 우리는 실험 성공을 확인하고 얻은 데이터를 해석하는 방법에 대한 교육을 제공하기 위해이 복잡한 수술 방법을 설정할 때 발생할 수있는 문제에 대한 자세한 설명뿐만 아니라, 실패와 성공의 실험에서 대표 데이터를 제공합니다.

Introduction

림프는 각 소장 융모 1에 포함 된 단일 lacteals에서 유래 단방향 프로세스를 통해 소장에서 흐른다. Lacteals 따라서 유체, 거대 분자 및 세포 림프 형성에 상대적으로 투과성 lacteals에 이러한 요소의 항목으로 시작한다. lacteals의 초기 림프 이후 림프 미세 혈관의 네트워크, 수집 (구 심성) 림프관, 장간막 림프절 궁극적으로 사후 노드 (원심성) 림프 혈관의 시리즈를 통해 소장에서 흐른다. 노드 내 림프 교환 혈액에서 노드를 입력 노드에 상주 면역 세포뿐만 아니라 물질로 발생하는 수질 부비동의 시리즈를 통해 전달합니다. 소장에서 흐르는 모든 림프 결국 원심성 장간막 림프절 덕트 및 이후 치스 테르 나디 라티 나에 chyli에 수렴한다. 치스 테르 나디 라티 나에 chyli 또한 림프 꼬리 주변 조직을 배출, intest를 수집원고 판은, 간 및 요추 지역과는 종격동과 몸의 뇌 부분에서 림프와 함께 흉부 림프 덕트를 결합한다. 흉부 림프 덕트는 왼쪽 경정맥과 쇄골 하 정맥의 교차점에 정맥 시스템에 직접 림프를 비 웁니다. 장간막 림프절에서 직접 림프 덕트의 수집을 가능하게 기재되어있는 프로토콜, 따라서 장 림프계를 통해 전신 (일반)에 순환 부위에서 직접 천이 다양한 인자의 분석을 용이하게한다.

장내 림프계에 할당 중요한 생리 학적 기능은 유체 밸런스를 유지하기 위해 지질 친 유성 분자의 흡수를 용이하게하기 위해, 적절한 면역 반응을 활성화한다. 종양 세포와 바이러스는 2-4 및 주요 변경 사항은 여러 가지 염증 및 대사 병리 5-7 림프관 내에서 발생하는 장 림프관을 통해 전파. 수장간막 다양한 세포 및 분자의 농도 및 전송 속도의 장 림프관을 통한 벌크 유체 흐름의 분석뿐만 아니라 정량을 가능 장간막 림프절 내에 덕트 nulation은 림프를 수집한다. 다양한 문제 (예를 들면, 다이어트, 항원, 약물)과 질병 모델에 대한 응답으로 농도 또는 이러한 요소의 대중 교통에 대한 변경 사항은 (예를 들어, 대장염, HIV, 당뇨병)도 평가 될 수있다. 이 광범위하게 분석하고 여기에 비교 될 수있다 각 림프 구성 요소를 설명하는 것은 불가능 동안, 장간막 림프절은 단순하게 수성, 지질 및 세포 단계로 구성된다. 성상에 대한 관심의 구성 요소는 항원 또는 tolerogens 8, 사이토 카인 및 비만 세포 매개 (9), 및 인크 레틴 10 대사 매개 면역 메신저로 펩타이드 및 단백질을 포함한다. 포스트 마디 장간막 림프절의 세포 분획 lymphocyt의 (99 %), 거의 전적으로 구성되어ES (11). 다양한 면역 세포 (수지상 세포, 비만 세포, 등)은 사전 마디 장간막 임파선를 입력하지만 노드 (12) 내에 남아있다. 심성 림프 세포 내의 관심있는 경우, 장간막 림프절의 제거를 통해 이러한 세포를 수집 할 수있다 장간막 림프절 덕트 (12)의 삽관 전에 몇 일 노드. 이러한 방식으로, 구 심성, 원심성 및 림프 도관에 직접 연결되고 심성 림프에서 임파구는 장간막 림프절 도관에 직접 전달한다. 장 림프관 통과 다양한 면역 세포의 표현형 및 운송 따라서 검사 할 수있다. 아마도 현재까지 장간막 림프절을 수집하기위한 인용 가장 일반적인 이유는, 그러나, 처리 장내 흡수식이 지질 친 유성 분자 (10)의 수송을 연구하는 것이다.

섭취 후,식이 지질은, 예를 들면, 트리글리 세라이드의 지방산과 모노 글리세리드, phosp로 (소화지방산 및 리소 인지질, 지방산 및 콜레스테롤 등) 콜레스테롤 에스테르로 holipid 담즙에서 양친의 첨가를 통해 작은 미셀 포성 구조로 장내 루멘 내에 분산 (인지질, 콜레스테롤 및 담즙 염)과의 작용 췌장 효소 (10, 13). 여기에서 그들은 장 세포로 흡수된다. 흡수 성분의 비율은, 흡수성 세포 (장 세포) 내 트리글리 세라이드, 인지질 및 콜레스테롤 에스테르를 형성하기 위해 재 에스테르 화. 이러한 재 - 에스테르 화 된 지질은 담즙 분비, 점막 지질 풀 또는 장내 혈액 (13)로부터 공급 외생 섭취 지질 성분 및 내인성 지질 성분의 조합으로부터 조립된다. 여기에서, 에스테르 화 지질 어느 장 세포 내에 저장되어 있거나 함께 다양 아포 단백질과 다른 분자와의 친 유성 장내 지단백질 (칠로 마이크론, 초 저밀도 지단백질 (VLDL)) (조립 (10, 13). 장 lacteals이 장 모세 혈관보다 자신의 항목 침투성이 더으로 장 세포를 종료 한 후, 지질 단백질은 특히 장간막 림프 시스템을 통해 전신 순환 장에서 수송된다. 흡수 된 지질 성분의 비율은 또한, 관련되지 않은 단일 지단백질 모세 혈관과 간문맥 통해 체순환으로 소장에서 반송 14 분자이다. 그러나, 일반적으로, 간문맥 수송로 짧고 중간 사슬 길이 지질의 흡수에만 상당한 플레이어이다.

장간막 림프절의 컬렉션은 따라서 소장에서 지질 단백질 및 관련 구성 요소 (지질, 친 유성 분자, 아포 단백질)의 전송에 대한 평가를 할 수 있습니다. 지단백질 정량화 및 장간막 임파선 지단백질, 일반적 nascen에 유리하게 특성화 될 수있다t 상태 그들은 광범위하게 이러한 지단백 리파제 (15) 전신 효소에 의해 수정되지 않은 때문이다. 장간막 림프절 삽관 된 래트 모델은 아마도 역사적으로 가장 광범위 소장에서 지질 / 지단백 교통 분석에 기술 된 반면, 관심을 확대 영역은 지용성 약물, 전구 약물 및 다른 생체이 13,16의 수송 림프관의 역할은 여기에서 설명하는 모델의 초점이다. (일반적으로 긴 사슬 중성 지방> 50 ㎎ / g에서 로그 P> 5 용해도의 예외가 분명 있지만) 친 유성 약 17, 18, ​​19 및 기타 생체이 13, 16하나를 수동적으로 또는하여 장 림프관에 액세스 할 수 있습니다 드럭 적극적으로 장 지단백 전송 경로 (19)에 통합.

쥐 장간막 림프절 삽관 기술은 이렇게 많은 응용 프로그램이 있습니다. 볼만 등 알. 먼저 techniq 설명변형 모델의 다음 번호가 설명 되었기 때문에 단말. 1948 20 래트에서 장간막 림프절 덕트 cannulate한다. 쥐 다양한 마취제 (21, 22)로 마취 할 때 예를 들어, 수집이 발생할 수 있습니다, 또는 의식 상태에있는 동안은 (23, 24)를 이동 15 자유롭게을 억제. (- 5 ㎖ / hr로 대개 0) 25 래트 재수 다른 솔루션과 같은 위장, 소장 또는 비경 다른 속도로 지질 및 약물 제제와 같은 다른 물질을 투여 할 수있다. 몇몇 연구에서는 흉부 림프 덕트보다는 장간막 림프절 덕트 흉부 림프 덕트는 서로 림프를 받으면이 관심 요인에 따라, 소장에서 운송 과대 수도 있지만, 림프관을 통해 소장에서 전송을 추정 삽관 지역 22, 26. 림프 삽관 모델은 쥐 15,27, 미니 PI 등 여러 가지 다른 종에서 기술 된GS 12,28, 29, 돼지 30(31). 그러나, 래트 모델은 가장 널리 일관 인용. 의식이 25 림프의 수집 뒤에 또는 2215,27을 마취 장간막 림프절 덕트의 삽관에 대한 자세한 프로토콜은 이전에 출판되었으며, 관심있는 독자는 이러한 프로토콜에 관한 것이다. 이 프로토콜은 시각화 형식으로 기술을 보여 처음이다.

림프 삽관 된 래트 모델은, 비용면에서 수술 윤리적 고려 용이성 큰 동물 모델에 비해 이점을 갖는다. 마우스 모델에 비해 마우스 모델은 트랜스 제닉 동물 (27)에서 더 상세한 연구를 가능하게하더라도, 장간막 림프절 삽관 수술은 또한 쥐 쉽다. 그럼에도 불구하고, 쥐 모델, 생리의 차이와 관련된 특히, 그 한계 extrapolat의 몇 가지 제한 사항이 있습니다다른 전임상 및 임상 상황에 이온. 예를 들어, 쥐 담즙 흐름에 상수 및 높은 종 식품 반면 식품 섭취 또는 지질 독립적 담즙 흐름 (32)를 자극한다. 이것은 큰 종과 인간에서 볼 반영 쥐의 대표 사전 및 식후 환경을 얻기에 어려움을 만듭니다. 현실적인 인간의 투여 량의 투여 25을 형성 한 후 림프 전송을 평가할 때 약물 전달 연구의 경우, 큰 종은 또한 바람직 할 수있다. 최근 연구에서, 장간막 림프절에서 지질 전송 속도는 종 (27)에 걸쳐 지질 전송 데이터를 외삽에 자신감을 제공하는 등가 질량과 지질의 종류를 투여 한 후 종 (마우스, 쥐, 개)에 걸쳐 유사한 것으로 밝혀졌다. 그러나, 동물의 크기 (즉, 개> 쥐> 마우스)의 순서로 순위 모델 지용성 약물, 할로 판 트린의 전송. 스케일링 인자 따라서 EX해야 할 수도다른 종 쥐에서 임파 약물 전송 데이터인지 추정.

림프 삽관 모델의 제한은, 일반적으로, 림프관은 용기 (33)를 캐 뉼러를 한번 변경되는 압력 구배에 반대 보낸 림프 흐름 및 전송을 수정할 수 림프관부터 직접 해당 수동 림프 컬렉션이다. 림프 삽관 모델은 기술에 익숙하지 않은 실험실에서 파악하는 작업이 쉽지 않을 수도 있습니다. 대체 모델은 따라서 설명되었다. 예를 들면, 지질 단백질 및 친 유성 분자로서 장내 림프계를 통해 요인 통과 간접적 혈액의 컬렉션을 통해 연구되어왔다. 그러한 모델 오랄 존재 관리 및 억제제의 부재 다음과 같은 지질 및 / 또는 약물의 혈중 농도를 비교 포함한다 (예를 들면, 콜히친, 플루 L81, 사이클로 헥시) 림프 전송 블록 34 장 지질 단백질 생산. 장점혈액 샘플 수집을 통해 간접적으로 림프 전송을 정량화 모델의 침습 수술이 35 필요하지 않습니다으로는 인간의 림프 수송의 어떤 평가를 할 수 있다는 것입니다. 그러나, 림프 교통 억제제는 특정하지 않은 및 림프관을 통해 수송된다 요인이 희석과 같은 평가를 복잡하게 전신 순환에 수정됩니다. 체외 대안도 설명 하였다. 예를 들어, 카코 -2 세포 또는 격리 장 세포 배양 물보다 상세히 림프관 36-38 입력 분자의 장내 분비를 연구하기 위해 사용되어왔다. 인간의 장내 미세보다 잘 나타내는 고급 체외 모델은 최근 39 설명했다. 이 모델에서 림프관 내피 세포층 림프관으로 소장에서 물질 전달의보다 상세한 분석이 가능 카코 -2 세포와 공 배양된다. 그러나, vitr에서오 전지 시스템은 교환 흐름을 부족 및 장 루멘과 기본 혈액과 림프 혈관 공급 즉, 상호 연결을 전송합니다. 대안적인 접근법에서, Kassis는 외. 혈관 수축, 림프 흐름 및 장간막 림프관 33 형광 지질 농도 사이의 양적 비교를 가능 시츄 촬상 시스템의 듀얼 채널 (고속 명 시야 화상과 형광)을 설치했다. 시험 관내 시스템에서의 상기 이상이 모델의 이점은 림프관을 통한 면역 세포의 통로의 정확한 추적을 가능하게한다는 것이다. 대량 지질 (또는 약물) 전송의 절대 측정은, 그러나, 아직 이미징 방법을 사용하여 설립. 시험관과 실리에 구체적으로도 40 ~ 42을 게시 한 장 림프관을 통해 친 유성 약물 수송의 정도를 예측하기 위해 접근되지 않습니다. (C)의 여러 예를 들어, 생체 친 화성플라즈마 카일로 마이크론에 대한 ompounds 생체 (41)에서의 림프 전송으로 합리적으로 상관 관계가 밝혀졌다. 이어서, 동일 그룹들은 다수의 물리 화학적 특성에 기초하여 40 킬로 미크론 치료약 친 화성을 ​​예측하기 실리 모델을 확립. 홀름 등. 또한 명백한 분자량 디스크립터 (42)의 기초 림프 친 유성 화합물의 수송을 예측 모델에 실리 비교적 복잡한 설립. 이러한 모델은 알려지지 약물 수송 림프관의 정도를 예측하기위한 유용한 방법을 제공 할 수있다. 약물 및 다른 실험실에 걸쳐 광범위한 모델 검증 그러나, 정확성 및 재현성을 확인하기 위해 필요할 것이다.

장간막 림프절 덕트 삽관 따라서 직접 소장 및 인자 (세포 단백질의 복소 배열의 운송 속도를 배수 림프절의 내용을 검사 할 수있는 유일한 수단 남아생체 내 상황에서 림프 펩타이드, 지질, 약물). 여기에서 우리는 장간막 림프절 및 마취 쥐 전신 혈액의 수집을 가능하게하는 장간막 림프절 덕트 및 경동맥 동맥 삽관을위한 프로토콜을 설명합니다. 대표 데이터는 모델 장간막 림프계를 통해 소장에서 지질 및 약물 수송을 검사 할 수있는 방법을 보여준다. 이 모델과 문제 해결 가이드를 확립 발생할 수있는 문제에 대한 논의가옵니다. 설립되면 모델은 장 림프 전송을 조사하는 강력한 도구입니다.

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Protocol

이 논문에 기술 된 연구는 지역의 동물 윤리위원회의 승인을하고, 연구 및 교육 지침에 동물의 관리에 대한 호주와 뉴질랜드위원회에 따라 실시 하였다. 모든 동물의 절차를 시작하기 전에 적절한 권한 로컬 기관 / 조직을 통해 얻을 수 있는지 확인합니다. 모든 동물 수술과 마찬가지로 수술은 무균 조건에서 윤리적이고 성공적인 결과를 보장하기 위해 필요한 경우 마취제, 진통제와 항생제 투여되어, 적절히 훈련 된 운영자에 의해 수행되어 있는지 확인합니다.

1. 준비 일 수술 전에

  1. 필요한 경우 수술 전에 쥐에게 밤을 고속으로. 쥐를 확인하는 것은 물에 무료로 액세스 할 수 있습니다.
  2. 준비 솔루션은 쥐에 투여한다.
    1. 멸균 식염수 또는 링거 용액으로 재수 솔루션을 준비합니다.
    2. 준비심미적 솔루션은 필요에 따라. 여기에 기술 된 실험에 사용 마취제 "케타민 100 mg을 1.9 ㎖ / ㎖, 크 실라 100 ㎎ / ㎖, 0.5 ㎖, ml의 아세 프로 마진 10 ㎎ / 0.2 ㎖의 생리 식염수를 2.5 ㎖의 결합에 의해"칵테일 1 "제조 이루어져 케타민 100 ㎖ ㎎ / 0.1 ml의 아세 프로 마진 10 ㎎ / ㎖ 1 ㎖ 이루어진 칵테일 2 ". 주 : 오랜 기간 동안, 수술 적 단계의 마취를 제공 할 수있다 흡입 이소 플루 란으로 또는 세보이 바람직 할 수있다.
    3. 임의로, 예를 들면, 지질 에멀젼에 약물을 함유하는 제형을 제조. 저장 및 투여 기간 동안 제제의 안정성을 보장하기 위해 적합한 안정성 시험을 수행한다.
      주 : 제형 및 약물의 정확한 본질은 림프 약물 수송 연구 목적 각 연구에 따라 달라질 투여되는 제제 및 약물 admini의 함수로서 림프 약물 수송의 효율을 평가하기 위해 가장 자주stered.
      1. 앞서 설명한 바와 같이 43도 4 및도 5에 여기 대표적인 실험에 사용 제형을 제조한다. 간략하게, 인산 완충 생리 식염수 (PH 6.9)에 5 mM의 나트륨 타우로 콜산으로 이루어지는 성상 5.6 ㎖에 분산하기 전에 14 C 올레산 (μCi를 2-5) 및 40 mg의 올레산으로 할로 판 트린 (200 μg의)를 통합한다.
      2. 2 모노 올레 인을 함유하는 제제의 경우, 올레산 위상 함유 할로 판 트린과 동시에 수성 상에, 다른 구성 요소와 함께 2 모노 올레 인 7.1 mg의 추가. 2 모노 올레 비교적 불안정 1- 모노 올레로 isomerises으로 래트에게 투여 직전에 2 모노 올레 인을 함유하는 제형을 준비한다.
      3. 그 후 실온에서 2 분 동안 초음파에 의해 제제를 유화.
        참고 : 43 이전에 설명한 바와 같이)의 에뮬레이션을 육안 검사에 의해 I 제형의 안정성을 모니터링편광 하에서 시온의 제조 직후 및 상 변화 및 ​​/ 또는 분리의 표시를 제공하기 위해 동적 광산란을 사용하여 투여 후 에멀젼 상 분리하지 않은 것, ⅱ) 입자 크기 분석을 보장하고, 할로 판 트린 농도 ⅲ) 분석에 사용하기위한 검증 된 HPLC 분석.
  3. 림프 캐 뉼러를 세척하는 식염수에 항응고제 10 ㎎을 함유 용액 / ml의 EDTA 멸균 또는 10 IU / ml의 헤파린을 준비합니다. 경동맥 캐뉼라를 플러시 식염수 10 IU / ㎖ 헤파린 - 2.5을 함유하는 항 - 응고제 용액을 제조 하였다.
  4. 장간막 림프절 덕트 (0.8 mm 외경 0.5 mm의 ID), 경동맥 (0.96 mm의 OD, 0.58 mm ID 또는 0.8 mm OD 0.5 mm의 ID) 및 십이지장 (0.96 mm 외경, 0.58 mm의 ID에 삽입 폴리에틸렌 캐 뉼러를 준비 )
    1. 림프 CANN 15 CM - 경동맥 및 십이지장 정맥 10 30 CM - 필요한 길이 (일반적으로 25 캐 뉼러를 잘라울라)와 () 그림 1 참조 멸균 수술 블레이드를 사용하여 캐 뉼러의 끝에서 경사를 놓습니다.
      참고 :이 캐뉼라를 삽입의 용이성을 증가시키고 정맥 폐색 후 삽입의 발생을 줄일 수 있습니다.
    2. 크기로 절단 한 후, 다시 자체에 캐 뉼러의 작은 부분을 반복 밝거나 핫 플레이트로 가열하여 십이지장 정맥에 J 모양 기준점 (그림 1 참조).
  5. (단계 1.3에서 준비) 항응고제 솔루션을 포함하는 25 G 바늘과 주사기에 림프 정맥을 연결합니다. 항 응고제 용액으로 림프 캐 뉼러를 입력하고 정맥 O에서 솔루션을 떠나 / N은 ​​림프를 수집하는 동안 림프 정맥에 혈전 형성의 발생을 줄일 수 있습니다.
  6. 림프 및 혈액 샘플 수집을위한 튜브를 준비합니다. 림프 및 혈액 샘플 수집을 위해 림프 수집 튜브, 라벨 튜브를 사전 무게 항응고제 솔루션을 추가합니다. 충분한 항응고제 오디오 솔루션을 추가수집 된 림프 나 혈액에서 20 IU / ml의 헤파린 - 이온 살균 물에 1 ㎎ / ㎖ EDTA의 최종 농도 10을 달성했다.

수술 절차를 시작하기 2. 준비 직전

  1. 그들은 특허 있는지 확인하기 위해 멸균 식염수 또는 항 응고제 용액으로 세척하여 모든 캐 뉼러를 확인합니다.
  2. 수술에 대한 쥐를 준비합니다.
    참고 : 장간막 림프절 덕트 먹은 또는 장간막 림프절 밀키 이상 지질 로딩 불투명 한대로 기름의 복용량을 투여 한 쥐에서 더 볼 수 있습니다. 앞서 개시 수술 2 시간 - 올리브유 또는 대두유 0.5로서 - (1 ㎖를 0.1 주위)의 일부 운영자들은, 특히 수술 새로운 그 때문에 래트 오일 미리 투여한다 때 쉽게 장간막 림프절 덕트 cannulate 찾을 . 그러나, 미리 투여 오일은 오일 량을 미리하는 것이 이상적하지 않을 수 있도록 림프 지질, 지용성 약물 및 기타 요인의 림프 전송에 영향을 미치는실험 목적에 따라.
    1. 수술 및 샘플 수집 기간 동안 쥐를 마취.
      1. 예를 들어, 칵테일 1.5 ㎖ / kg의 피하 주사를 통해 마취를 개시 I 25 G 바늘에 부착 한 ML의 주사기를 이용하여 쥐의 목 뒤쪽에 피부 주름으로한다 (단계 1.2.2부터). (단계 1.2.2에서) 칵테일 2의 0.44 ㎖ / ㎏ 25 G 바늘에 부착 된 1 ML의 주사기를 사용하여, 필요에 따라 대략 각 시간의 복강 내 주사를 통해 마취를 유지한다.
      2. 수술 마취의 깊이 호흡, 수염 운동, 근육 및 다리의 곤란 등의 자극에 대한 반응을 관찰하여 충분한 지 확인 시작하기 전에. 필요에 따라 추가 마취를 관리.
    2. 경동맥 동맥 정맥에 대한 림프 및 십이지장 삽관의 복부의 오른쪽을 포함 외과 영역에서 모피, 목과 왼쪽 쇄골 부위를 면도기.
    3. 무균 povidine 요오드 용액이나 클로르헥시딘 용액과 70 % 에탄올 스크럽을 사용하여 수술 영역을 청소합니다. 70 % 에탄올로 최종 클렌징으로 마무리, 각 지역이 3 번 반복합니다.
  3. 가열 수술 패드 (37 ° C) 이상 깨끗한 시트에 지느러미로 누워있는 동물을 놓습니다.

장간막 림프 덕트 3. 캐 뉼러

  1. 우측 운영자쪽으로 향하게하여 동물을 놓습니다. 또는 필요에 따라 수술 현미경의 도움없이 수술을 수행합니다.
  2. 직선 4cm 절개가 약 2cm 갈비뼈 (늑골 마진) 아래의 오른쪽 측면에 중간 선 (xyphoid 과정)에서 연장 멸균 메스 블레이드를 이용하여 복부 근육 벽의 상단 레이어를 엽니 다 (그림 2B 참조).
  3. 작은 쌍의 오른쪽 측면에 정중선에 측면 4-5mm 복부 근육 벽의 나머지 층을 엽니 다외과 위의 (그림 2B 참조).
  4. 왼쪽 복부 근육 벽에서 소장을 후퇴 2 사용 장소에 보관 - 생리 식염수로 포화 멸균 거즈의 3 조각.
  5. 장간막 림프절 덕트의 시각화를 완화 오른쪽 신장의 수준에서 쥐의 등 아래에 수평으로 배치 된 10 ML의 플라스틱 주사기를 통해 쥐를 다리.
  6. - (도 2C를 참조 맥동 어두운 붉은 혈관) 장간막 동맥의 권리 신장에 수직 즉시 주동이와 평행 직경 1mm 선박 약 0.5 : 장간막 림프절 덕트를 찾습니다.
    참고 : 비 금식 또는 오일 프리 투여 된 쥐에서 선박이 불투명 한 흰색과 아주 반투명 인 금식 쥐보다 더 쉽게 시각화 할 수 있습니다.
  7. 둘째, 작은 액세서리 림프 덕트인지 확인하기 위해 큰 장간막 림프절 덕트 및 장간막 동맥에 바로 꼬리 영역을 검사현재. 본 경우에는, 덕트를 절단하고 superglue으로 폐색 또는 도관 주위의 봉합을 묶어서 덕트를 통해 림프의 유동을 차단하는 부위에서 흐르는 림프의 전체 볼륨은 장간막 림프절 덕트로부터 수집되는 것을 보장하기 위해.
  8. 오른쪽 신장의 하부 여백 조갑 신장 지방 상을 통해 직선 포셉 쌍을 전달하고 장간막 림프절 덕트와 평행 한 방향으로 즉시 대정맥 아래 결합 조직 층, 관통.
  9. 집게의 끝이 림프 정맥의 보류를 가지고 한쪽 끝을 즉시 장간막 림프절 덕트에 인접하고 오른쪽 신장의 수준에서 동물로부터 exteriorised 서로 근교 신장 지방 베드를 당겨 사용.
  10. 무딘 절개에 의해 결합과 지방 조직의 층 위에 놓인에서 장간막 림프절 덕트를 분리합니다. 구멍을 뚫거나 림프 덕트 손상되지 않도록주의하십시오.
  11. 림프 덕트를 분리 한 후, 작은 호를 만들마이크로 가위, 보석상의 집게의 날카로운 끝이나 25 G 바늘 하나와 림프 덕트 르. 완전히 선박을 절단하지 않도록주의하십시오.
  12. 림프 정맥이 완전히없는 공기 갭 항 응고제 용액 (주사기를 사용하여 25 G 바늘) 충전되어 있는지 확인합니다. 포셉의 작은 쌍의 도움으로 작은 구멍을 통해 장간막 림프절 덕트 내부에 4mm - 림프 정맥에게 약 2를 삽입합니다.
  13. 몇 분 림프 정맥을 준수하십시오. 삽관이 성공한 경우 뉼러의 자유 단부로부터 수집 장 림프의 유동을 점진적으로 관찰한다. 3.12 - 삽관에 실패하면, 반복 3.8 단계를 반복합니다.
  14. 삽관이 성공적이면, 림프 덕트 내로 진입 구멍 위에 수의학 접착제의 작은 방울을 배치하여 캐 뉼러를 고정. 초과 수의학 접착제의 응용 프로그램을 통해 선박을 막다 않도록주의하십시오.
  15. 수의학 접착제가 설정 기다리고, obser 동안삽관 절차가 성공적으로 완료되었는지 확인하기 위해 몇 분 동안 림프의 흐름을했습니다. 삽관의 특정되면 성공 신중 복강에 넣고 거즈 조각을 제거하고 원래의 위치에 배치 소장.
  16. 항응고제를 포함하는 림프 포집 관을 배치 림프 자유 유동을 수집하는 캐 뉼러의 단부 (단계 1.6 참조).
  17. 다음으로, 재수 솔루션 및 / 또는 제제의 주입을위한 십이지장을 cannulate.

십이지장 4. 캐 뉼러

  1. 수분 보충 용액으로 가득 주사기 (예를 들어, 10 ㎖)에 십이지장 정맥을 연결합니다.
  2. 당기 부드러운 아래에 배를 밝혀 소장의 섹션 (자세한 혈관과) 밝은 분홍색으로 십이지장을 확인합니다.
  3. 약 2cm 위장과 십이지장 (유문)의 접합 아래 십이지장에있는 작은 구멍 구멍을 사용하여멸균 23 G 바늘.
  4. 구멍 구멍을 통해 십이지장 정맥의 J 모양의 후크 끝을 삽입합니다. 시아 노 아크릴 레이트 접착제 한 방울 제자리에 고정합니다.
  5. 주입 펌프에 공급 된 수분 보충 주사기로 정맥을 연결하여 쥐의 수화를 개시합니다. 문헌에 따르면 재수 속도 범위는 0.5-3 ㎖ / 시간 15, 25.
  6. 림프 십이지장 삽관의 종료 후, 봉합으로 복근 벽에 절개를 닫는다. 이어서 절개면을 따라 조직 접착제 (시아 노 아크릴 레이트) 몇 방울을 도포하고, 함께 절개 양쪽 피부를 집어 피부 절개를 닫는다.

경동맥 5. 캐 뉼러

경동맥 삽관 전 또는 장간막 림프절 덕트 삽관 후에 수행 될 수있다. 일부 운영자들은 종래 PO 작아 지도록 림프 덕트 cannulating로 경동맥을 선호 cannulate동물을 이동하는 경우에 잠재적 인 림프 정맥을 빠지.

  1. 동맥에 삽입하는 튜브의 부분을 식별 할 베벨 끝에서 경동맥 동맥 정맥에 2.5 cm를 표시를합니다. 항 응고제 용액으로 가득 주사기에 부착 된 23 또는 25 G 바늘에 (베벨이없는 즉,) 캐 뉼러의 다른 쪽 끝을 연결하고 항응고제 솔루션은 공기 갭이 존재하지 않는 확인한와 캐 뉼러를 입력합니다.
  2. 삽관을 용이하게하기 위해, 운영자 향하게 뻗어 목과 머리와 지느러미 드러 누움에 마취 된 쥐를 놓습니다. 일부 사업자는 쥐의 꼬리가 운전자쪽으로 가리키는이 기술을 수행하는 것을 선호합니다.
  3. 시상면에서 기관의 왼쪽 위의 피부 층을 1.5 cm 길이의 절개 - 1 놓습니다.
  4. 기본적인 쌍의 목 근육을 노출 무딘 팁 집게를 사용하여 피하 결합 조직의 해부.
  5. 목 근육의 t 후퇴O (~ 1cm 피부 표면과 펄스 아래) 왼쪽 경동맥을 알 수있다. 무딘 절개하여 동맥에서 위에있는 결합 조직을 청소합니다.
  6. 조심스럽게 인접한 미주 신경 트랙이 손상되지 않도록주의하면서 무딘 조직 집게를 사용하여 동맥 ~ 1cm 부분을 분리합니다. 개방과 주변 조직과 미주 신경에서 잘 나오도록 동맥 중 어느 쪽을 따라 수직으로 무딘 팁 집게를 폐쇄하여이 작업을 수행합니다.
  7. 좋은 팁 집게를 사용하여, 경동맥 아래에 두 개의 실크 봉합사 스레드와 분리 된 동맥 부분의 양쪽 끝 부분에 배치합니다. 쥐의 심장과 쇄골 (그림 3A)로부터 작업자와 멀리에 봉합에 가장 가까운을 묶어.
  8. 동맥 (그림 3B) 아래에 똑바로 잘 팁 포셉 한 쌍을 배치하여 동맥을 통해 혈액의 흐름을 막다.
  9. 미세한 팁 홍채 가위를 사용하여 동맥 (약 1/3의 상면에 작은 절개를 배치길 아래로 고립 된 지역의 상단에서). 헤파린 식염수 동맥의 표면에 어떤 기록 된 혈액을 세척하고 부드럽게면 정보를 사용하여 닦아주십시오.
  10. 곡선 팁 포셉 한 쌍의 동맥에 정맥의 끝을 삽입합니다. 일단 삽입 혈류를 폐색 직선 미세한 팁 집게를 제거하고 캐 뉼러를 삽입 뒤로 다른 누설 혈액을 중지 동맥 내부 캐 뉼러를 보유하는 두 집게 쌍, 하나를 사용하여 동맥에 캐뉼라 2.5 cm를 전진.
  11. 동맥 내부의 정맥을 보유하고 혈액의 흐름을 막다 단계 5.8에서 동맥 아래에 배치 된 직선 미세 팁 집게를 제거하는 작은 동맥 클램프를 사용합니다.
  12. 캐 뉼러에 항 응고제 용액을 주입하고 소량의 혈액 (그림 3C)를 다시 그려 정맥의 ​​개통을 확인합니다. 이어서 항응고제 용액으로 세척 한 후 캐 뉼러 라이터의 불꽃이나 캐 뉼러를 이용하여 플러그 단부를 밀봉.
  13. 일 타이단계 5.8에서 동맥 아래에 배치 두 봉합과 장소에 전자 정맥.
  14. 동맥 클램프를 제거하고 동맥과 정맥 주위에 세 번째 봉합을 확보. 봉합 상처 목을 닫습니다.

6. 후 수술 기간 및 제제 주입

  1. 마취하고 가열 패드의 쥐를 유지하기 위해 계속합니다.
  2. 삽관 완료 후 적어도 0.5 시간 동안 십이지장에 수분 보충 용액의 주입을 통해 쥐를 재수. 삽관 다음과 같은 초기 기간 동안 - (0.5 ㎖ / 시간 ~ 0.1) 곧 일정한 기준에 증가 림프 유량 감소를 관찰 (0.4-2.5 ㎖ / 시간이 재수 속도에 따라 다름).
  3. 회복 기간 후, 캐 뉼러를 통하여 십이지장 (지질, 약물 등을 포함하는) 관심 제형 달이다. 선택적으로, 제제의 유량을 조절하는 주입 펌프를 사용한다. 참고 : 프로토콜이 여기에 설명에서 동물 anaes 남아수술과 림프 수집 기간 동안 thetised 추가 진통이 요구되지 않도록 마취 euthanised된다. 프로토콜은 수정과 동물은 적절한 마취 및 수술 후 관리가 필요합니다 후 의식을 회복하기 위해 사용할 수있는 경우.
  4. 제제 주입 완료시 탈수를 방지하기 위해, 십이지장 내로 생리 식염수와 1.5-3 ㎖ / hr의 속도로 쥐를 재수 계속.
  5. 필요에 따라 하복부에 부드러운 아래쪽으로 밀어 넣기를 통해 방광에서, (단계 2.3에 따라) 온도를 유지하기 위해 37 ℃ 가열 수술 패드에 명시 소변을 쥐을 유지하고 단계 2.2에 따라 (안과 연고마다 시간을 다시 적용하기 위해 계속합니다. 3). 동물이 시술 후 의식을 회복하는 경우 정기적 인 자세 변경하는 것이 좋습니다.

림프 및 혈액 샘플 7. 컬렉션은 지질 및 약물 흡수를 평가하기 위해

  1. 지속적으로 림프를 수집항응고제를 포함하는 튜브. 필요한 시간 간격 변경 튜브 (예를 들면, 시간별).
  2. 설정된 시점에서 혈액 샘플을 수집.
    1. 다시 대략 밀폐 단부로부터 2cm를 캐 뉼러를 절곡하여 캐뉼라를 통한 혈류를 폐색. 밀봉 단부를 절단 또는 캐뉼라 플러그를 제거함으로써 캐 뉼러 개봉.
    2. 전체 혈액이 정맥을 채울 때까지 빈 주사기를 사용하여, 캐 뉼러로부터​​ 헤파린 염수를 철회.
    3. 새로운 빈 주사기를 사용, 항응고제를 포함하는 튜브에 혈액과 장소의 원하는 볼륨을 철회.
    4. 제 주사기를 사용, 불필요한 혈액 손실을 감소시키기 전에 샘플링 취한 혈액을 대체. 그것이 직립 공기 방울이 뉼러를 입력하지 않도록 채 주입 전에 주사기를 쓸어.
    5. 주사기를 사용하여, 항응고제 용액으로부터 제거 래트 혈액의 체적을 대체. 어떤이 응고 할 수 나머지으로 잔여 혈액이 정맥에서 볼 수 없는지 확인과 정맥을 차단합니다.
    6. 벤드는 정맥 봉인 끝에서 약 2cm 혈액 흐름을 차단하고 주사기를 제거합니다. 라이터의 불꽃 뉼러 플러그를 사용하여, 캐 뉼러를 봉인.
  3. 쥐로부터 혈액 및 림프의 수집 완료시> 100 ㎎ / kg 나트륨 펜토 바르비 복강 투여를 통하여 쥐를 안락사.
  4. 각각의 시간주기 동안 수집 된 림프의 질량을 측정하여 림프 유량을 결정한다.
  5. 지질 및 약물 흡수 효율을 평가하기 위해, 예를 들어, HPLC, HPLC-MS 또는 상업용 키트를 사용하기 위해, 혈액 및 림프 사용 약물과 지질의 농도를 측정한다.
  6. 수집 된 측정 농도 및 림프의 볼륨의 제품과 림프 약물과 지질의 대량 수송을 계산합니다.

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Representative Results

대표적인 실험의 결과는도 4 및도 5에 도시되어 장간막 림프절 삽관 모델을 이용하여 장내 전달 다음 림프계를 통해 누적 범위와 지질 및 약물 수송 속도를 정량화한다.이 실험에서, 모델 친 유성 200 μg의를 포스페이트 완충에 5.6 ㎖의 5 mM의 나트륨 타우로 콜산에 분산 및 7.1 mg의 2 모노 올레 인 - 약물 할로 판 트린 40 mg의 올레산 (5 μCi를 14 C-올레산 2 포함) 아세트산 함유 제제에서 2 시간 동안 쥐의 십이지장 내로 투여했다 식염수의 pH가 6.9. 제제 투여 후 래트를 2.8 ㎖ / 십이지장 내로 주입 된 생리 식염수와 시간의 속도로 재수 화 하였다. 림프는 10 시간 동안 매 시간을 변경 튜브에 지속적으로 수집 하였다. 모두 동일한 COMPON 함유 제제에 대한 전술 한 프로토콜에 따라, 제형을 제조하고, 실험을 수행그것을 제외하고 엔트는 2 모노 올레 인 (43)을 포함하지 않았다.

1.3 ㎖ / 시간 -도 4에 도시 된 바와 같이,이 실험 조건에서 성공적 삽관 랫트 림프 평균 유속 0.4 사이이다. 삽관 다음 3 시간 후 증가 - 일부 랫트 림프 유량은 제 1 약간 낮았다. 이것은 일반적으로 림프 삽관 다음 볼 수 있습니다. 또한 실패한 실험 림프 유속도 4에 도시되어있다. 이 경우, 유량은 수령 기간에 걸쳐 성공적인 실험에서 본 것보다 실질적으로 낮은 남았다. 마찬가지로, 중성 지방 및 할로 판 트린의 누적 림프 전송은 실패한 실험 (그림 5A와 B)에 실질적으로 낮았다. 성공적인 군에서 평균 누적 할로 판 트린 수송 용량이 15.1 %이고, 누적 트리글리세리드 수송 61 mg을 10 시간에 걸쳐 투여하고, R의 비율이었다림프으로 반송 adiolabelled 외인성 지질 용량은 54 % (도 5C)이었다. 이러한 값은 2 모노 올레 인 43 (표 1)의 유무를 제외하고 동일한 성분을 함유 유사한 제형 앞서 본 것과 크게 다르지 않다. 이 모노 글리세 라이드의 공급원의 부재하에 지방산을 함유하는 제형이 모노 글리세 라이드를 포함 할 수있는 것들에 유사한 림프 지질 및 약물 수송을 지원할 수 있다는 것을 시사한다. 이 결과는 토론 섹션에서 추가로 설명된다.

그림 5D는 할로 판 트린과 투여 후 시간이 지남에 따라 림프의 중성 지방 전송 속도에 대한 대표적인 데이터를 보여줍니다. 림프에 모두 중성 지방 및 약물의 전송 속도는 지질 및 약물 투여 후 몇 시간 봉우리 다음 기준 수준으로 회복. 바와 같이, 약물, 배 운반 속도 장 림프 지질 및 약물 수송 실험에서 일반적입니다약물로서 트리글리세리드 전송에 보이는 각 시간주기 동안 미러 림프에서 t는 트리글리세리드가 풍부한 지질 단백질과 연관 림프로 반송된다.

그림 1
그림 1. 경동맥 동맥 또는 정맥 림프의 경 사진 팁의 형태, 십이지장 정맥의 J 모양의 경 사진 팁의 도식 표현입니다.

그림 2
그림 (A) 림프 덕트를 cannulate하기 위해 준비 면도 복부, (B) 복부 근육 벽이 직선 4cm 절개가 림프 덕트에 액세스 할 수 오른쪽 측면에 중간 선에서 연장 개방, 그리고 2. 사진 (C ) 노란색 원 장간막 림프절 덕트 () 오른쪽 신장에 수직. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 3
그림 동맥 아래에 배치 직선 미세 팁 포셉 한 쌍 가려 묶었 운영자, (B) 격리 경동맥 혈류에 가장 가까운 하나에 두 개의 실크 봉합사와 격리 (A) 경동맥 3. 사진,(C) 대신에 정맥 및 개통과 경동맥 다시 소량의 혈액을 그리기에 의해 확인된다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 4 "SRC ="/ 파일 / ftp_upload / 52389 / 52389fig4highres.jpg "/>
시간. 쥐를 통해 장간막 림프절 유량 (μL / 시간) 그림 4. 대표 데이터는 200 μg의의 할로 판 트린, (2 μCi를 14 C-올레산) 40 mg의 올레산 및 7.1 mg의 2 모노 올레 인 5.6에 포함 된 제제를 투여 하였다 2 시간 - 0 내지 인산 완충 생리 식염수에 5 mM의 타우로 콜산 나트륨 (PH 6.9) ml의. 표시된 데이터 n에 대해 SEM ± 평균이다 = 3 성공적인 실험 (폐쇄 원, ●)이고, n은 1 실패 결과 (오픈 삼각형, Δ).

그림 5
장간막 림프절로 지질 및 약물 수송도 5 대표 데이터. (A) 모델 약물 할로 판 트린 (HF, % 도즈), (B) 트리글리세리드 (TG, mg) 및 (C) 외인성 지방산 (% 도스 누적 수송E)과의 이송 속도 (D) TG (㎎ / h) 및 Hf로 μCi를 14이 200 μg의의 할로 판 트린, 40 mg의 올레산 (함유 제제의 투여 후 시간 경과 장간막 림프절로 (% 투여 량 / HR) C-올레산) 0 내지 인산 완충 생리 식염수에 5.6 ㎖의 5 mM의 타우로 콜산 나트륨 (PH 6.9)에 7.1 mg의 2 모노 올레 인 - 2 시간. 표시된 데이터 n에 대해 SEM ± 평균이다 = 4 성공적인 실험 (폐쇄 원, ●)이고, n은 1 실패 결과 (오픈 삼각형, Δ). 외인성 지방산 수송은 실패한 실험으로 측정했지만 실패 실험에서 일반적으로 낮되지 않았습니다. 실패한 실험의 데이터는 명확성을 위해 패널 D에서 생략되어있다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

m없이onoolein 2 monolein으로
평균 SEM 평균 SEM
할로 판 트린 (% 용량) 15.1 0.8 (15) 1.6
중성 지방 (MG) 67 4 (61) (6)
총 지방산 (μmol) (261) (16) (248) (23)
외인성 올레산 (μmol) (82) (5) (65) (6)
내인성 지방산 (μmol) (180) (17) 183 (28)

40 mg의 올레산을 함유하는 제제의 림프 덕트 유관 쥐 장간막하는 200 μg의 할로 판 트린의 투여 후 10 시간 이상 누적 림프 전송 데이터 표 1. 비교 (containin와 7.1 mg을 2 모노 올레 인. 데이터없이 인산염 완충 생리 식염수 (PH 6.9)에 5 mM의 나트륨 타우로 콜산 유화 g 1 μCi를 14 C-올레산)는 N = 4 쥐에 대해 ± SEM을 의미 나타냅니다. 통계 학적으로 유의 한 차이는 두 그룹 사이에 볼 수 없습니다.

2 모노 올레 백본에 부착 올레산이 림프로 측정 외인성 올레산 수송 차지하지 않으므로 이는 내인성 지방산 수송의 정확한 측정하지 2- 모노 올레 투여 군.

B-2 모노 올레없이 투여 그룹 및 할로 판 트린 총 지방산 전송에 대한 데이터는 이전 기준 (43)의도 5에 게시하고, 테이블 형식으로 여기에 재생된다.

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Discussion

쥐 장간막 림프절 삽관 모델은 다양한 물질로 도전하는 농도와 다양한 세포와​​ 소장에서 림프에 응답하여 발생하는 이들에 대한 변경 (예 : 지질 및 약물 등) 분자의 전송 속도를 직접 정량화 할 수 있습니다 (다이어트 항원 약물, 제형 등) 10,27 질병 (암, 바이러스, 대장염, 인슐린 저항성 등) 5-7. 림프 수집 성분은 또한 상기 추가의 실험에 이용 될 수있다. 예를 들어, 셀 (44), 분획 지질 단백질과 림프 또는 지질 단백질이나 세포와 같은 구성 요소는, 약물, 방사능 표지 및 형광 프로브를 포함하여 마커로드 배양 할 수있다. 이는 더 직접적으로 그 기능, 신진 대사, 통관 및 / 또는 조직 처분 패턴 45-47을 평가받는 동물로 재 주입 할 수 있습니다. 랫트 림프 삽관 모델 OTH 여러가지 장점을 갖는다어 시험관, 현장에서, 실리코, 그리고 생체 내 모델 도입에 설명 된 그. 가장 중요한 것은, 삽관 림프액의 구성 요소의 전체 부피에 직접 액세스 할 수있는 유일한 방법이다. 숙련 된 작업자의 손에서 수행되면 모델은> 80 %, 강력한 재현성 실험 성공률이 달성 될 수있다. 그러나, 수술 기법은 초기에 특히 기술에 익숙하지 않은 실험실에서 마스터 어려울 수있다.

몇 가지 단계는 장간막 림프절 삽관 모델의 성공에 매우 중요합니다. 첫 번째는 수술 도구 및 정맥 유형과 준비의 올바른 선택입니다. 우리 연구소는 차원 OD 0.8 × 0.5 mm ID와 PE의 캐 뉼러를 사용합니다. 그러나, 다른 실험실은 동일한 차원 (15)의 PVC 캐 뉼러 성공을 경험했다. 캐 뉼러의 팁 베벨도 방지 할 수 항응고제에 미리 담금의 폐쇄, 그리고 내 혈전의 형성, 캐 뉼러 후 삽입 (단계 3.13). 일부 사업자가 특히 중요한 발견 수술 절차의 첫 번째 단계는 림프 덕트 (단계 3.10) 위의 결합과 지방 조직의 층을 청소 관리를하고있다. 이것은 조직 및 림프 덕트 사이보다는 림프 덕트 내로 캐 뉼러의 삽입을 피하는 것을 돕는다. 림프 덕트 약하고 손상되기 쉽다 그러나,이 세정 공정은 곤란하다. 다른 현미경이 필요하지 않지만 일부 찾을 경우,이 단계 및 캐 뉼러의 삽입이 가장 성공적 수술 현미경의 도움으로 완성된다. 덕트 내로 캐 뉼러를 삽입 할 때, 방향 및 비스듬한 선단에 대하여 삽입 깊이는 용기 벽 (단계 3.12)에 의해 폐색되는 캐 뉼러를 방지하기 위해 몇 가지 고려를 필요로한다. 각각의 오퍼레이터는 자신의 개인 선호도를 찾는 경향이있다. 또한 중요한 것은 위성 내의 기포 형성의 방지는nnula 삽입하는 동안 에어 갭은 림프의 자유로운 흐름 (단계 3.12)에 압력을 다시 적용 할 때. 마지막으로, 장소에있는 정맥을 확보하기 위해 동물 접착제의 응용 프로그램은 정맥 팁 (단계 3.14) 축소 및 폐색하는 선박을 일으킬 수있는 덕트의 상부에 직접 배치 접착제로서 덕트에 삽입 점 이하이어야한다.

수술이 성공인지 여부에 쉬운 초기 가이드 림프의 유량이다. 정맥이 장소 림프가되면 일반적으로 처음 30 분에 천천히 흐르기 시작하고 증가한다. 일반적으로 쥐에 성공 삽관을위한 유량> 250g 첫 번째 시간에서> 0.1 ㎖ / 시간이며, 그림 4에 도시 한 바와 같이 한 후 정상 상태에서> 0.4 ㎖ / 시간으로 증가. 물론이에 따라 다를 수 있지만 .이있을 수 있기 때문에 실험 조건, 문제의 관점에서, 아니 림프가 캐 뉼러 또는 유량 흐르지 않기하다면 낮은 :

    캐 뉼러는 덕트에 제대로 삽입되지 않았습니다
  1. 캐 뉼러는 덕트에 있지만 혈관벽 측 교합
  2. 캐 뉼러는 덕트에 있지만 잘못된 위치에 적용되는 접착제에 의해 폐색
  3. 캐 뉼러는 덕트이고 뉼러에 기포 유동 둔화
  4. 혈전이 정맥 내에 형성했다

조심 검사는 일반적으로 기본 요소를 보여준다. 오퍼레이터 뉼러 처음에 올바르게 배치되지 믿는다면 다시 삽입이 필요 후 (즉, 림프 결코 흐르는 않았다). 캐 뉼러가 올바른 위치에있는 것으로 나타나는 경우 확인 첫 번째 요소 기포 또는 혈전의 존재 여부이다. 기포는 일반적 림프 흐름 일시적 느린 흐름을 캐 뉼러를 통해 통과 할 것이다. 그것은, 예를 들면, 25에 부착 G 바늘을 사용하여 캐 뉼러 다시 그려 1ml를 주사기를 기포 또는 혈전을 제거하는 것이 가능할 수도. 더 기포 나 응고가없는 경우는 래트를 다시 위치 및 / 또는 회전 또는 약간 뉼러 당기려고하는 것이 유용 할 수있다. 이것은 때때로이 혈관 벽에 차단되지 않도록 캐 뉼러를 다시 정렬 할 수 있습니다. 때때로 또는 정맥의 작은 움직임이없는 접착제를 제거하는 림프는 다시 흐를 수 있습니다. 모든 다른 실패 할 경우, 정맥은 다시 삽입해야합니다. 정맥이 첫 번째 시도에서 제대로 삽입되지 않았을 때 우리의 경험에서 실험은 성공적이지 수 있습니다. 그러나, 수술 구출이 가능합니다. 발생할 수있는 또 다른 합병증으로 인해 쥐 사이의 해부학 적 차이에 삽관의 어려움이다. 예를 들어, 장간막 림프절 덕트 가끔 불편한 방향으로 통과 또는 장간막 림프절 큰 덕트 장간막 동맥의 반대측 액세서리 림프 덕트가있다. 마찬가지로 (소장에서 흐르는 림프의 전체 볼륨의 컬렉션을 필요 실험에서) 림프관을 통한 장내에서 총 지질 및 약물 수송을 평가할 때, 액세서리 림프 도관 모두가 우수한 림프 림프 덕트로 지향되도록 흡장 될 필요가있다. 이를 달성하기 어렵지만 액세서리 덕트 주위에 봉합 매 또는 액세서리 덕트 절단 의학적 접착제 (단계 3.6)로 폐색에 의해 시도 될 수있다. 액세서리 림프 도관의 존재는 림프 약물 수송 실험 결과 실험 실패 주요 요인 중의 하나이다. 부속 용기가 완전히 폐색되지 않는 경우, 림프 흐름과 지질 및 약물 수송 예상보다 훨씬 낮다.

여기에 제시된 프로토콜에서 동물 림프 수집 기간 동안 마취 남아있다. (오히려 후술 모델보다 의식) 마취 된 래트 모델은 수술로 실험 처리량을 증가시키고 실험은 오히려 수일 이상과 수술 성공 R 통해 수행 될 수있다그것은 고정 된 동물에서 정맥 개통을 유지하는 것이 더 쉽습니다로 먹었다는 더 크다. 마취 이론적 위 배출, 장내 지질 처리 및 림프 흐름 및 전송을 줄일 수있다. 우리의 경험에서, 그러나, 림프 지질 및 약물 수송은 계면 활성제와 분산 분해 사전 및 사전 분산 차량 (예를 들면, 지방산과 모노 글리세리드 미셀 시스템 내에서 (바이 패스 위 비우는에) 직접 십이지장으로 약물을 투여 마취 된 쥐에서 유사하다 ) 등가 트리글리세리드 21,23,27에 위장에 구강 투여를 통해 약물을 투여 민감한 래트에 비해. 사실, 지난 10 년 동안 우리 실험실에서 장 림프 약물 수송 실험의 대부분은 인해 달성 될 수있는 더 높은 처리량으로 마취 모델에서 수행되었다. 이 실험에서는 주로 지방산 (예 : 올레산) 산 (43)과 계면 활성제를 함유하는 제형의 약물을 투여 하였다.지방산 장 림프 지단백질에 혼입되기 이전에 합성 트리글리세리드 이는 중성 지방의 글리세롤 골격 (예 2 모노 글리세리드 또는 글리세롤 -3- 포스페이트)를 형성하는 구성 요소의 소스를 필요로한다. 이것은 소스 글리세롤의 부재하에 지방산의 투여 감소 림프 전송 이어질 수 있음을 시사. 지방산 그러나, 투여는 투여 외인성 지방산 및 지질 및 림프 약물 수송 43 내인성 지질의 기여의 직접 계산을 가능하게한다. 또한, 모노 글리세리드 2 비싼하고 용이 장내 루멘에 글리세롤 소화 -1- 모노 글리세리드로 isomerises 일반적으로 불안정하다. 여기에보고 된 연구에서 우리는 더욱 그 림프 지질을 보여 약물 수송 중 하나 홍보에 지방산 (예 : 올레산) 및 계면 활성제 (담즙 염)과 모델 약물 할로 판 트린의 투여 것과 동일 제제esence 또는 글리세롤 모노 올레 소스 2 (표 1)의 유무. 글리세롤의 내인성 원천, 따라서 등가 림프 흐름과 지질 및 글리세롤 공급원의 부재하에 지방산 (예 : 올레산)이 모델은 약물의 투여 후 약물 수송을 지원하기에 충분한 나타난다. 이것은 대표적인 림프 전송 데이터가 간단한 지방산 제형으로 수득 될 수 있다는 확신을 제공한다.

필요한 경우 마취 된 모델은 쉽게 의식적인 모델로 확장된다. 의식이있는 모델에서 제형에 직접 위장 gavaged 될 수 있거나 또는 십이지장 내로 정맥 내 주입, 직접적인 비교는 생리 학적으로 더 중요한 것으로 간주 될 수있는 비 림프 삽관 의식 동물 및 결과 실시 약동학 연구로 이루어질 수있다. 의식이있는 동물에서 허용 긴 기간은 DR에 대한보다 완전한 약동학 프로파일 수집을 허용하는 장점을 갖는다마취 실험에서, 혈액 프로파일 특히 긴 반감기 약에 대해 종종 불완전 반면 혈액 UG 농도,. 전술 한 바와 같이, 그러나, 의식 림프 유관 연구의 성공률은 낮고 실험을 완료하는 데 시간이 더 오래 걸립니다. 문헌에 기술 된 의식 림프 삽관 모델의 두 종류가있다. 림프 삽관 수술 후 의식 억제 모델 (15)에서, 동물은 단순히 그것의 전면에 온과 포집 관 외면 내로 삽입 림프 뉼러와 실험의 나머지 적당한 구속에 배치. 동물 후 의식을 회복하고 수술의 O / N 복구 할 수 있습니다. 이 모델 성공률은 숙련 작업자의 손에 아주 좋은하지만 림프 수집에 필요한 시간을 장시간 억제하는 동물 윤리 클리어런스를 얻기 어려울 수있다. 또 다른 모델은 림프가 수집되는 영역입니다의식이 자유롭게 이동 쥐. 이 모델은 이전 25 자세히 설명하고있다. 이 모델에서 긴 캐 뉼러는 장간막 림프절 덕트, 십이지장 및 경동맥 동맥에 삽입됩니다. 캐 뉼러는 다음 목 뒤쪽에서 표면화 및 회전 시스템을 통해 배치, 피부 아래에 터널링된다. 쥐가 마구 회전에 부착 의식을 회복하고 수술의 O / N 복구 할 수에 배치됩니다. 동물은 신진 대사 케이지과 림프와 혈액 샘플 내에서 자유로운 이동이 케이지 외부 외면 캐 뉼러를 수집 할 수 있습니다.

장간막 림프절 삽관은 초기 상태로 림프 구성 요소의 직접 평가를 가능하게하는 유일한 도구 남아있다. 수술 큰 동물 및 결과 27 종에 걸쳐 상당히 필적 나타나는 것보다, 모델 저렴 작고 큰 동물보다 덜 복잡 같이 림프 삽관 래트에서 자주 기술된다. 래트 모드L은 실험적인 필요성과 성공률에 따른 경험 운영자의 손에 높은 변형 될 수있다. 모델은 상세히, 장 림프 성분의 대사 또는 함수에 조사하는 시험 관내 또는 생체 내 연구에서 서로 결합 될 수있다. 일단 장간막 림프절 유관 쥐 모델에 따라서 농도, 전송, 기능 (전신 순환에 결국 흐름 많은 경우에) 림프 시스템에 장에서 직접 전달하는 다양한 매개 변수의 신진 대사를 평가하는 강력한 도구입니다 설립했다.

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
Sterile saline Baxter healthcare AHB 1307 Any brand can be used. Example here is Baxter 100 ml saline bags, box of 50
70 % ethanol in water Any Any brand can be used
Chlorhexidine gluconate solution (Microshield 4) Livingstone International JJ60243L Any brand can be used. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
=JJ60243L
Betadine solution Livingstone International BU0510 Any brand can be used. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
=BU0510
Ilium Ketamil (Ketamine 100 mg/ml) PROVET VICTORIA  KETA I 1 http://www.provet.com.au/
Ilium Xylazil (Xylazine 100 mg/ml) PROVET VICTORIA  TRO-3828 http://www.provet.com.au/
ACP 10 Injection (Acepromazine 10 mg/ml) PROVET VICTORIA  VTG-DACP010020 http://www.provet.com.au/
Sodium pentobarbitone PROVET VICTORIA  24529 Any brand can be used. Example here is Lethabarb® 325 mg/ml sodium pentobarbitone, Virbac Animal Health. http://www.provet.com.au
Heparin (35000I.U. in 35 mL) Sigma Pharmaceuticals 337220 http://sigmaco.com.au/
Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) disodium salt dihydrate Sigma-Aldrich E1644 Any brand can be used. Example here is disodium salt of EDTA from Sigma. 
Polyethylene (PE) cannula o.d. 0.96 mm x i.d. 0.58 mm Microtube extensions PE8050 Any brand can be used. Example here is PE tubing 0.96 x0.58 mm, 30 m
Polyethylene (PE) cannula o.d. 0.8 mm x i.d. 0.5 mm Microtube extensions PE9658 Any brand can be used. Example here is PE tubing 0.8 x0.5 mm, 30 m
Ruler Any Any brand can be used
Markers Any Any brand can be used
Cigarette lighter Any Any brand can be used
Veterinary adhesive Any Any brand can be used
23 gauge needles Livingstone International DN23GX0.75LV Any brand can be used. Example here is Livingstone Disposable Needle, Sterile, 23GX0.75inch, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=
6&search=DN23GX0.75LV
25 gauge needles Livingstone International DN25GX1.0LV Any brand can be used. Example here is Livingstone Disposable Needle, Sterile, 25GX1.0inch, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search=
DN25GX1.0LV
1 ml syringe Livingstone International T3SS01TA Any brand can be used. Example here is Terumo syringe 1 ml Slip Tuberculin 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
=T3SS01TA
10 ml syringe Livingstone International T3SS10SA Any brand can be used. Example here is Terumo syringe 10 ml Slip 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
=T3SS10SA
Gauze swabs Livingstone International GSC075 Any brand can be used and cut to required size. Example here is gauze swabs cotton filled 7.5x7.5 cm, 8 ply. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
=GSC075
Cotton buds Livingstone International CTAST075DP Any brand can be used. Example here is Livingstone cotton applicator plastic double tipped. 75MM. 100/PK. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
=CTAST075DP
Heating pad Ratek WT1 Any brand that keeps temperature at 37C can be used. Example here is Ratek warming tray.
Surgical light Harvard Apparatus 72-0215 with 72-0267 Any brand can be used. Example here is Harvard apparatus V-Lux 1000 Cold Light Source with Bifurcated Gooseneck Light Guide, Black, 4.7 mm fiber diameter (each arm). http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_50601_
-1_HAI_ProductDetail and  http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_35487_
-1_HAI_ProductDetail___
Surgical microscope Zeiss 495005-0014-000 Any brand can be used. Example here is Zeiss Stereomicroscope Stemi 2000-C with Stand S Double Spot and KL 300 LED. https://www.micro-shop.zeiss.com/?l=en&p=us&f=e&i=10143
Silk suture Livingstone International DTSK163019F4 Any brand can be used. Example here is  

3/8 Circle Reverse Cut Silk Suture 3/0 Thread 19mm. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
=DTSK163019F4
Scalpel blades Fine Science Tools (FST) 10020-00 Any brand can be used. Example here is FST Scalpel Blade #20. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=191
Scalpel handle Fine Science Tools (FST) 10004-13 Any brand can be used. Example here is FST Scalpel Handle #4. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=298&CategoryId=51
1 x Small surgical scissors Fine Science Tools (FST) 14060-09 Any brand can be used. Example here is FST Fine Scissors, 9 cm with 21 mm cutting edge, sharp, straight. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=40&CategoryId=17
2 x Forceps with serrated curved tip Fine Science Tools (FST) 11001-13 Any brand can be used. Example here is FST 13 cm standard pattern forceps with curved 2.8x1.4 mm tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=405&CategoryId=32
1 x Iridectomy scissors Fine Science Tools (FST) 15000-08 Any brand can be used. Example here is FST Vannas Spring Scissors - 2.5mm Cutting Edge, Straight. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=17&CategoryId=16 
1 x Forceps with straight serated tip Fine Science Tools (FST) 11650-10 Any brand can be used. Example here is FST Graefe 10 cm straight with serrated 1 x 0.99 mm tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=390&CategoryId=32
1 x Forceps with smooth sharp straight fine tip Fine Science Tools (FST) 11251-10 Any brand can be used. Example here is FST Dumont #5 forceps straight 11cm with 0.08 x 0.04mm tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=335&CategoryId=29
1 x Forceps with smooth fine curved forceps Fine Science Tools (FST) 11063-07 Any brand can be used. Example here is FST Delicate Forceps 9 cm with smooth 0.4 x 0.3mm tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=360
2 x Hemostats Fine Science Tools (FST) 13010-12 Any brand can be used. Not all operators use the hemostats. Example is FST 12 cm Micro-Mosquito Hemostats with 20 mm length x 1.3 mm width serrated, straight tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=377&CategoryId=33
1 x Suture needle holder Fine Science Tools (FST) 12001-13 Any brand can be used. Example here is FST 13cm Hasley Needle Holder with 16 mm length x 1.9 mm width tip. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=254&CategoryId=70
1 x Artery clamp Fine Science Tools (FST) 18050-28 Any brand can be used. Example here is FST Bulldog Serrefines straight, 28 mm long, 9x1.6 mm jaw dimension with medium clamp press. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=270&CategoryId=82
Oleic acid Sigma Aldrich O1008 When required, any brand can be used. Example here is 99% pure oleic acid. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/o1008?lang=en&region=AU
14C-oleic acid Perkin  NEC317050UC  Any brand can be used. Example here is Oleic Acid, [1-14C]-, 50µCi (1.85MBq). http://www.perkinelmer.com/Catalog/Product/ID/NEC317050UC
Sodium taurocholate Sigma Aldrich T4009 Any brand can be used. Example here is taurocholic acid sodium salt hydrate ≥95% (TLC) . http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t4009?lang=en&region=AU
Halofantrine Glaxo Smith Kline Halofantrine was kindly provided as a gift from Glaxo Smith Kline
Sodium phosphate monobasic Sigma Aldrich 71507 Any brand can be used. Example here is sodium phosphate monobasic monohydrate, BioXtra, for molecular biology, >99.5%. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/71643?lang=en&region=AU
Sodium phosphate dibasic Sigma Aldrich 71643 Any brand can be used. Example here is sodium phosphate dibasic dihydrate, BioUltra, for molecular biology, >99%. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/71507?lang=en&region=AU

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References

  1. Barrowman, J. A., Tso, P. Gastrointestinal lymphatics. Comprehensive Physiology. 1733-1777 (2010).
  2. Karaman, S., Detmar, M. Mechanisms of lymphatic metastasis. J Clin Invest. 124, (3), 922-928 (2014).
  3. Mossel, E. C., Ramig, R. F. A lymphatic mechanism of rotavirus extraintestinal spread in the neonatal mouse. J Virol. 77, (22), 12352-12356 (2003).
  4. Pantaleo, G., et al. Hiv-Infection Is Active and Progressive in Lymphoid-Tissue during the Clinically Latent Stage of Disease. Nature. 362, (6418), 355-358 (1993).
  5. Chakraborty, S., Zawieja, S., Wang, W., Zawieja, D. C., Muthuchamy, M. Lymphatic system: a vital link between metabolic syndrome and inflammation. Annals of the New York Academy of Sciences. 1207, R94-R102 (2010).
  6. Dixon, J. B. Lymphatic lipid transport: sewer or subway. Trends Endocrinol Metab. 21, (8), 480-487 (2010).
  7. Weid, P. -Y., Rehal, S., Ferraz, J. G. Role of the lymphatic system in the pathogenesis of Crohn's disease. Current Opinion in Gastroenterology. 27, (4), 335-341 (2011).
  8. Wang, Y., et al. Chylomicrons promote intestinal absorption and systemic dissemination of dietary antigen (ovalbumin) in mice. PloS one. 4, (12), e8442 (2009).
  9. Ji, Y., et al. Activation of rat intestinal mucosal mast cells by fat absorption. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 302, (11), G1292-G1300 (2012).
  10. Kohan, A., Yoder, S., Tso, P. Lymphatics in intestinal transport of nutrients and gastrointestinal hormones. Ann N Y Acad Sci. 1207, Suppl 1. E44-E51 (2010).
  11. Trevaskis, N. L., Charman, W. N., Porter, C. J. Targeted drug delivery to lymphocytes: a route to site-specific immunomodulation. Mol Pharm. 7, (6), 2297-2309 (2010).
  12. Rothkotter, H. J., Huber, T., Barman, N. N., Pabst, R. Lymphoid cells in afferent and efferent intestinal lymph: lymphocyte subpopulations and cell migration. Clin Exp Immunol. 92, (2), 317-322 (1993).
  13. Trevaskis, N. L., Charman, W. N., Porter, C. J. Lipid-based delivery systems and intestinal lymphatic drug transport: a mechanistic update. Adv Drug Deliv Rev. 60, (6), 702-716 (2008).
  14. Mansbach, C. M., Dowell, R. F., Pritchett, D. Portal transport of absorbed lipids in rats. Am J Physiol. 261, (3 Pt 1), G530-G538 (1991).
  15. Kohan, A. B., Howles, P. N., Tso, P. Methods for studying rodent intestinal lipoprotein production and metabolism. Curr Protoc Mouse Biol. 2, 219-230 (2012).
  16. Porter, C. J., Trevaskis, N. L., Charman, W. N. Lipids and lipid-based formulations: optimizing the oral delivery of lipophilic drugs. Nat Rev Drug Discov. 6, (3), 231-248 (2007).
  17. Trevaskis, N. L., et al. The role of the intestinal lymphatics in the absorption of two highly lipophilic cholesterol ester transfer protein inhibitors (CP524,515 and CP532,623). Pharm Res. 27, (5), 878-893 (2010).
  18. Choo, E. F., et al. The Role of Lymphatic Transport on the. Systemic Bioavailability of the Bcl-2 Protein Family Inhibitors Navitoclax (ABT-263) and ABT-199. Drug Metabolism and Disposition. 42, (2), 207-212 (2014).
  19. Han, S., et al. Targeted delivery of a model immunomodulator to the lymphatic system: comparison of alkyl ester versus triglyceride mimetic lipid prodrug strategies. J Control Release. 177, 1-10 (2014).
  20. Bollman, J. L., Cain, J. C., Grindlay, J. H. Techniques for the collection of lymph from the liver, small intestine, or thoracic duct of the rat. J Lab Clin Med. 33, (10), 1349-1352 (1948).
  21. Porter, C. J., Charman, S. A., Charman, W. N. Lymphatic transport of halofantrine in the triple-cannulated anesthetized rat model: effect of lipid vehicle dispersion. J Pharm Sci. 85, (4), 351-356 (1996).
  22. Boyd, M., Risovic, V., Jull, P., Choo, E., Wasan, K. M. A stepwise surgical procedure to investigate the lymphatic transport of lipid-based oral drug formulations: Cannulation of the mesenteric and thoracic lymph ducts within the rat. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 49, (2), 115-120 (2004).
  23. Porter, C. J., Charman, S. A., Humberstone, A. J., Charman, W. N. Lymphatic transport of halofantrine in the conscious rat when administered as either the free base or the hydrochloride salt: effect of lipid class and lipid vehicle dispersion. J Pharm Sci. 85, (4), 357-361 (1996).
  24. Caliph, S. M., Charman, W. N., Porter, C. J. Effect of short-, medium-, and long-chain fatty acid-based vehicles on the absolute oral bioavailability and intestinal lymphatic transport of halofantrine and assessment of mass balance in lymph-cannulated and non-cannulated rats. J Pharm Sci. 89, (8), 1073-1084 (2000).
  25. Edwards, G. A., Porter, C. J., Caliph, S. M., Khoo, S. M., Charman, W. N. Animal models for the study of intestinal lymphatic drug transport. Adv Drug Deliv Rev. 50, (1-2), 45-60 (2001).
  26. Noguchi, T., Charman, W. N. A., Stella, V. J. Lymphatic Appearance of Ddt in Thoracic or Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rats. International Journal of Pharmaceutics. 24, (2-3), 185-192 (1985).
  27. Trevaskis, N. L., et al. A mouse model to evaluate the impact of species, sex, and lipid load on lymphatic drug transport. Pharm Res. 30, (12), 3254-3270 (2013).
  28. Kota, J., et al. Lymphatic absorption of subcutaneously administered proteins: influence of different injection sites on the absorption of darbepoetin alfa using a sheep model. Drug Metab Dispos. 35, (12), 2211-2217 (2007).
  29. McHale, N. G., Adair, T. H. Reflex modulation of lymphatic pumping in sheep. Circ Res. 64, (6), 1165-1171 (1989).
  30. White, D. G., Story, M. J., Barnwell, S. G. An Experimental Animal-Model for Studying the Effects of a Novel Lymphatic Drug Delivery System for Propranolol. International Journal of Pharmaceutics. 69, (2), 169-174 (1991).
  31. Khoo, S. M., Edwards, G. A., Porter, C. J., Charman, W. N. A conscious dog model for assessing the absorption, enterocyte-based metabolism, and intestinal lymphatic transport of halofantrine. J Pharm Sci. 90, (10), 1599-1607 (2001).
  32. Kararli, T. T. Comparison of the gastrointestinal anatomy, physiology, and biochemistry of humans and commonly used laboratory animals. Biopharm Drug Dispos. 16, (5), 351-380 (1995).
  33. Kassis, T., et al. Dual-channel in-situ optical imaging system for quantifying lipid uptake and lymphatic pump function. J Biomed Opt. 17, (8), 086005 (2012).
  34. Dahan, A., Hoffman, A. Evaluation of a chylomicron flow blocking approach to investigate the intestinal lymphatic transport of lipophilic drugs. Eur J Pharm Sci. 24, (4), 381-388 (2005).
  35. Xiao, C., Lewis, G. F. Regulation of chylomicron production in humans. Biochim Biophys Acta. 1821, (5), 736-746 (2012).
  36. Seeballuck, F., Ashford, M., O'Driscoll, C. The Effects of Pluronic® Block Copolymers and Cremophor EL on Intestinal Lipoprotein Processing and the Potential Link with P-Glycoprotein in Caco-2 Cells. Pharmaceutical Research. 20, (7), 1085-1092 (2003).
  37. Levy, E., Mehran, M., Seidman, E. Caco-2 cells as a model for intestinal lipoprotein synthesis and secretion. The FASEB Journal. 9, (8), 626-635 (1995).
  38. Cartwright, I. J., Higgins, J. A. Isolated rabbit enterocytes as a model cell system for investigations of chylomicron assembly and secretion. Journal of Lipid Research. 40, (7), 1357-1365 (1999).
  39. Dixon, J. B., Raghunathan, S., Swartz, M. A. A Tissue-Engineered Model of the Intestinal Lacteal for Evaluating Lipid Transport by Lymphatics. Biotechnology and Bioengineering. 103, (6), 1224-1235 (2009).
  40. Gershkovich, P., et al. The role of molecular physicochemical properties and apolipoproteins in association of drugs with triglyceride-rich lipoproteins: in-silico prediction of uptake by chylomicrons. Journal of Pharmacy and Pharmacology. 61, (1), 31-39 (2009).
  41. Gershkovich, P., Hoffman, A. Uptake of lipophilic drugs by plasma derived isolated chylomicrons: Linear correlation with intestinal lymphatic bioavailability. European Journal of Pharmaceutical Sciences. 26, (5), 394-404 (2005).
  42. Holm, R., Hoest, J. Successful in silico predicting of intestinal lymphatic transfer. International Journal of Pharmaceutics. 272, (1-2), 189-193 (2004).
  43. Trevaskis, N. L., Porter, C. J., Charman, W. N. Bile increases intestinal lymphatic drug transport in the fasted rat. Pharm Res. 22, (11), 1863-1870 (2005).
  44. Miura, S., et al. Increased proliferative response of lymphocytes from intestinal lymph during long chain fatty acid absorption. Immunology. 78, (1), 142-146 (1993).
  45. Caliph, S. M., et al. The impact of lymphatic transport on the systemic disposition of lipophilic drugs. J Pharm Sci. 102, (7), 2395-2408 (2013).
  46. Caliph, S. M., Trevaskis, N. L., Charman, W. N., Porter, C. J. Intravenous dosing conditions may affect systemic clearance for highly lipophilic drugs: implications for lymphatic transport and absolute bioavailability studies. J Pharm Sci. 101, (9), 3540-3546 (2012).
  47. Trevaskis, N. L., et al. Tissue uptake of DDT is independent of chylomicron metabolism. Arch Toxicol. 80, (4), 196-200 (2006).

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