Busulfan als myelosuppressieve Agent voor het genereren van een stabiel hoog niveau beenmergchimerisme in Muizen

Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.

If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.

 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Peake, K., Manning, J., Lewis, C. A., Barr, C., Rossi, F., Krieger, C. Busulfan as a Myelosuppressive Agent for Generating Stable High-level Bone Marrow Chimerism in Mice. J. Vis. Exp. (98), e52553, doi:10.3791/52553 (2015).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Protocol

OPMERKING: Ethiek Verklaring: Dit protocol is beoordeeld en goedgekeurd door de Animal Care Committee van Simon Fraser University goedgekeurd (UACC; toestaan ​​nummers 1037K-12 en 1060K-03) en is in overeenstemming met de Canadese Raad over Animal Care, de NIH Gids voor de zorg en het gebruik van proefdieren, en de Europese richtlijn EEG.

1. Speciale overwegingen

OPMERKING: busulfan is cytotoxische. Gehanteerd en afgevoerd volgens de veiligheidsinformatieblad en institutionele richtlijnen.

  1. Voer alle technieken aseptisch in een laminaire stroming kap.
  2. Steriliseer instrumenten voor gebruik door wikkelen in een geschikt verpakkingsmateriaal, zoals een schil pakket en autoclaveren.
  3. Hoewel het risico op infectie lager met busulfan conditioning vergelijking met bestraling behandelen dieren slechts in een laminaire stroming kap voor de eerste 2 weken na transplantatie.

2. Conditionering vanOntvanger Muizen

  1. Verdun busulfan tot 3 mg / met steriele fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) ml.
    OPMERKING: Het is belangrijk om een ​​frisse verdunning van busulfan net voor elke dag van de injectie gebruiken.
  2. Dien 20 mg / kg verdunde busulfan aan ontvangende muizen via IP-injectie dagelijks.
  3. Herhaal dagelijks IP injecties van 20 mg / kg busulfan tot een totale dosis van 60-100 mg / kg is geleverd (dwz een 80 mg / kg totale dosis toedienen 20 mg / kg busulfan gedurende 4 opeenvolgende dagen).

3. Isolatie van Donor Bone Marrow Cells

OPMERKING: Dit protocol is met succes gebruikt voor het isoleren en bereiden BM cellen van maximaal 5 donor muizen. Typisch de cel opbrengst per muis is ongeveer 30-40.000.000 BMDCs, wat voldoende is om 12-16 ontvanger muizen te transplanteren. Als er meer donormuizen nodig zijn het protocol moet mogelijk worden aangepast.

  1. Na de laatste dag van busulfan conditionering euthAnizé een GFP donor muis (1-6 maanden oud) met behulp van CO 2 (of door andere euthanasie procedure geaccepteerd bij instelling). Om te voorkomen dat graft complicaties te gebruiken syngeen donoren die hetzelfde geslacht als de ontvangers zijn.
  2. Spray muis met 70% ethanol. Til huid op de buik en met chirurgische schaar een insnijding door de huid van de buikholte het been naar de enkel. Houden van de voet, stevig trek de huid van de enkel in de richting van de heup het blootstellen van de been weefsel.
  3. Trim weg spier- en vetweefsel van het dijbeen naar het heupgewricht bloot.
  4. Terwijl zachtjes te trekken op de voet aan het been te verlengen, drukt u op de schaar tegen het heupgewricht. Juist boven de kop van het dijbeen maar zorg er voor het dijbeen zelf snijden.
  5. Om u te helpen de steriliteit te behouden, houdt het been van de voet en verwijder eventuele resterende weefsel van de botten door te wrijven op het bot oppervlak met geautoclaveerd weefsels.
  6. Scheid de femur en tibia door doorsnijden van het kniegewricht enPlaats het dijbeen in een cultuur schotel met steriele PBS. Incubeer op ijs.
  7. Verwijder de fibula gooi door te snijden op de punten waar de fibula verbinding met de tibia. Plaats de tibia in de cultuur schotel met het dijbeen en incubeer op ijs.
  8. Herhaal stap 3,2-3,7 voor het andere been, en eventueel extra donor muizen. Na verwijdering van de botten, steriliseren chirurgische instrumenten met een hete kraal sterilisator of een nieuwe set van steriele instrumenten voor de volgende stappen.
  9. Voor scheen-, houdt het dijbeen met een pincet en het gebruik van chirurgische schaar zorgvuldig 'scheren' de distale uiteinden van het bot. Verwijder zo weinig van het bot nodig de BM holte bloot.
  10. Vul een spuit met 3 ml steriele PBS en bevestig een 23 G naald. Zorgvuldig droeg de naald in de BM holte en spoel de BM in een steriele cultuur schotel. Zorg ervoor dat u de mergholte schraap met de punt van de naald om de verwijdering van alle gewenste cellen te waarborgen. Na extractie,waarborgen dat de rode BM niet meer zichtbaar en het bot wordt nu wit.
  11. Herhaal stap 3,9-3,10 voor daaropvolgende scheen-, pooling alle BM in dezelfde kweekschaal.
  12. Voor de tibiae, houd de tibia met een pincet en zorgvuldig 'scheren' het einde waar het scheenbeen was verbonden aan de knie voor de BM holte bloot. Maak een tweede snede langs het bot waar de zichtbare rode BM eindigt.
  13. Vul een spuit met 3 ml steriele PBS en bevestig een 25 G naald. Steek voorzichtig de naald in de BM holte (vanaf het einde, dat was verbonden aan de knie) en spoel de BM in de cultuur schotel met de BM van de dijbenen. Schraap de wanden van de BM holte met de naald om alle cellen te verwijderen. Na extractie ervoor dat de rode BM niet meer zichtbaar en het bot wordt nu wit.
  14. Herhaal stap 3,12-3,13 voor daaropvolgende tibiae, pooling alle BM in dezelfde kweekschaal.
  15. Zachtjes vermaal de BM met een 1 ml pipet tip om de c distantiërenells.
  16. Leid de celsuspensie door een 40 uM mand filter in een steriele 50 ml centrifugebuis. Spoel de schaal met PBS om alle resterende cellen af ​​en breng deze door de filter in de centrifugebuis.
  17. Centrifugeer gedurende 5 minuten bij 450 xg bij 4 ° C. Verwijder de bovenstaande vloeistof.
  18. Resuspendeer de pellet in 3 ml erytrocyt lyserende buffer. Incubeer op ijs gedurende 8,5 min.
  19. Voeg ~ 30 ml steriele PBS om de lyserende buffer blussen.
  20. Centrifugeer gedurende 5 minuten bij 450 xg bij 4 ° C. Verwijder de bovenstaande vloeistof.
  21. Resuspendeer de pellet in 1 ml steriel PBS. Houden op het ijs.
  22. Neem een ​​kleine hoeveelheid van het celhomogenaat en verdund met PBS (1: 100 voor 1 muis, 1: 200 voor 2 muizen, etc.) om het aantal cellen te kwantificeren met behulp van een hemocytometer.
  23. Verdun de celsuspensie tot 8 x 10 6 cellen / ml en incubeer op ijs tot injectie.

4. Bone Marrow Transplantation

  1. Fill een 0,5 ml spuit (met een 28 G naald insuline) met 300 pl verdunde celsuspensie voor elke muis worden geïnjecteerd. Zorg ervoor dat alle luchtbellen in de spuit te verwijderen.
  2. Plaats de muis kooi met daarin de geconditioneerde ontvanger muizen op een verwarming pad en laat de staart aderen te verwijden.
  3. Neem een ​​ontvanger muis en plaats in het beveiligingssysteem. Veeg de staart met chirurgische gaasje gedrenkt met 70% ethanol.
  4. Stevig vast te houden de staart en met de schuine kant naar boven, voorzichtig steek de naald in een van de laterale staart aderen en injecteer de celsuspensie.
  5. Houd chirurgische gaas op de injectieplaats tot bloeden stopt vóór het inbrengen van de muis in een nieuwe schone kooi.

5. Het inschatten van de omvang van BM Chimerisme

OPMERKING: Chimerisme niveaus zijn meestal variabele in het perifere bloed op 1 week na BMT, en als zodanig chimerisme niveaus gewoonlijk geschat tenminste 2 weken na BMT. Niveaus van Chimerism moet> 80% GFP + cellen in het perifere bloed te bereiken binnen 3-4 weken na BMT.

  1. Bereid FACS buffer (2 mM EDTA + 2% foetaal runderserum in PBS).
    OPMERKING: FACS buffer kan worden opgeslagen bij 4 ° C gedurende enkele weken.
  2. Plaats de muis op een straatverbod buis en scheren de vacht op het achterste been naar de laterale saphena bloot.
  3. Dunne vacht van de been met vaseline en doorboren de vena saphena met een 25 G naald.
  4. Verzamel ongeveer 50 ui bloed met heparine beklede capillaire buisje. Voeg het bloed naar een micro-centrifugebuis bevattende 1 ml FACS buffer. Meng de buis door omkeren en op te slaan op ijs.
  5. Houd chirurgische gaas op de injectieplaats totdat bloeden stopt alvorens terug te keren muis terug naar de kooi.
  6. Centrifugeer de bloedmonsters gedurende 5 min bij 900 x g. Verwijder de bovenstaande vloeistof.
  7. Re-schorten de pellet in 500 pi van erythrocyten lyseren buffer. Incubeer op ijs gedurende 8,5 min.
  8. Voeg 1 ml FACS buffer om de lyserende buffer blussen.
  9. Centrifugeer de monsters gedurende 5 min bij 900 x g. Verwijder de bovenstaande vloeistof.
  10. Voer een tweede lysis stap in 500 ui van erytrocyt lyserende buffer. Incubeer op ijs gedurende 8,5 min.
  11. Voeg 1 ml FACS buffer om de lyserende buffer blussen.
  12. Centrifugeer de monsters gedurende 5 min bij 900 x g. Verwijder de bovenstaande vloeistof. Controleer of de pellet is nu wit.
    OPMERKING: Als de pellet verschijnt nog steeds rood, kan een extra lysisstap nodig zijn voordat u verder gaat met de volgende stap.
  13. Resuspendeer de pellet in 1 ml FACS buffer. Centrifugeer de monsters gedurende 5 min bij 900 x g. Verwijder de bovenstaande vloeistof.
  14. Resuspendeer de pellet in 300 ui FACS-buffer en gekwantificeerd GFP + cellen middels flowcytometrie (NB: Op dit moment elke gewenste immunokleuring van de cellen kan worden uitgevoerd met standaard technieken voor cytometrische analyse stromen).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

De toediening van 60-100 mg / kg busulfan het algemeen goed getolereerd door muizen. Echter, dieren gewoonlijk afvallen tijdens de conditioneringsfase (~ 5-10%) en daarmee de voeding moet worden aangevuld met behandelt zoals bestraald zonnebloempitten te eten te stimuleren. Niveaus van chimerisme van> 80% GFP + cellen in het perifere bloed en BM consequent haalbaar met 60-100 mg / kg busulfan 7 zijn. Ons laboratorium heeft succes gebruikt dit protocol dan 100 chimere muizen met> 80% GFP + cellen in het perifere bloed en BM genereren, en vrijwel al onze BMTs succesvol bij gebruik syngene donor en ontvanger. Figuur 1 toont de niveaus van chimerisme wekelijkse gekwantificeerd in het perifere bloed van muizen geconditioneerd met 100 mg / kg busulfan ontvangen van een succesvolle syngene BMT (n = 3) en muizen geconditioneerd met 80 mg / kg busulfan ontvangen van een mislukte allogene BMT (n = 3). Chimerisme niveaus> 80% zijn typically ingesteld op 3-4 weken na BMT. Figuur 2 is representatief FACS-gegevens van perifeer bloed dat een succesvolle en mislukte BMT. Figuur 3 toont dat dit chimerisme blijft is voor ten minste een jaar in de BM (n = 3), en die conditionering met drager is niet voldoende om BM chimerisme induceren (n = 3). Hoewel er geen significante verschillen in de niveaus van BM chimerisme bereikt met doses van 60-100 mg / kg busulfan, GFP + cellen accumuleren binnen het CZS in een dosisafhankelijke wijze. Bovendien is deze accumulatie drastisch verhoogd neurodegeneratieve aandoeningen zoals ALS 7. Figuur 4 illustreert GFP + cellen accumulatie in het lumbale gebied van het ruggenmerg in een wild-type (n> 20) en ALS muismodel (n> 20).

Figuur 1
Figuur 1. Ontvanger muizen geconditioneerdmet busulfan en getransplanteerd met GFP + beenmergcellen van een syngene donor bereiken van een hoog opgelopen chimerisme in het bloed. Weekly flowcytometrische gegevens waaruit GFP + chimerisme in het perifere bloed van succes getransplanteerde muizen geconditioneerd met 100 mg / kg busulfan gevolgd door syngene beenmergtransplantatie (zwart) en niet succesvol getransplanteerd muizen geconditioneerd met 80 mg / kg van busulfan gevolgd door allogene beenmergtransplantatie (grijs). De resultaten zijn middel van n = 3 muizen / groep, fout balken geven SEM.

Figuur 2
Figuur 2. Representatieve flowcytometrische gegevens waaruit GFP + cellen in het perifere bloed 3 weken na beenmergtransplantatie bij muizen geconditioneerd met 100 mg / kg busulfan. (A) Scatterplot tonen gating strategie, (B) een mislukte allogenEIC beenmergtransplantatie, en (C) een succesvolle syngene beenmergtransplantatie. De resultaten zijn representatief van n> 3 muizen. Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.

Figuur 3
Figuur 3. Representatieve flowcytometrische gegevens waaruit GFP + cellen in het beenmerg 1 jaar na beenmergtransplantatie. (A) Scatterplot tonen gating strategie, (B) voertuig geconditioneerde muizen, en (C) 100 mg / kg busulfan geconditioneerde muizen. De resultaten zijn representatief van n = 3 muizen. Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.


Figuur 4. Beenmerg afgeleide cellen accumuleren in het CZS busulfan geconditioneerde muizen die een beenmergtransplantatie. Immunohistochemische analyse van secties van het lumbale gebied van het ruggenmerg geïsoleerd uit (A, C) wildtype muizen en (B, D) laat ziektestadium ALS muizen. GFP + cellen worden in het groen weergegeven. De resultaten zijn representatief beelden van n> 20 muizen voor elk model. Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Busulfan conditionering maakt de productie van hoog niveau BM chimerisme in muizen met hematopoietische cellen die gemakkelijk detecteerbaar. Deze conditionering kan worden uitgevoerd zonder bestralingsinstallaties. Bovendien is myelosuppressie met doses busulfan die in dit protocol goed verdragen minimaliseren toxische bijwerkingen veroorzaakt door myeloablatieve doses van bestraling, en kan dus een geschikte techniek BM chimerisme bij jonge, oude of zieke muizen die beter genereren gevoelig voor bestraling myeloablatieve. Sommige RIC protocollen lage, niet-myleoablative dosis totale lichaamsbestraling de nadelige bijwerkingen te minimaliseren, maar deze protocollen moeten nog bestralingsfaciliteiten en, afhankelijk van de dosis van bestraling, kan leiden tot chimerisme niveaus die lager zijn dan die welke met busulfan zijn conditioning 13. Onlangs heeft treosulfan gebruikt voor BM conditionering 8,14. Zoals busulfan, treosulfan conditioning en BMT kan genereren muizen met een hoge mate van chimerisme in de BM 14. Echter, treosulfan niet gemakkelijk bereikbaar in Noord-Amerika, en de dosering van treosulfan nodig vergelijkbaar niveau chimerisme busulfan conditionering bereiken aanzienlijk hoger dan busulfan (~ 5-10 maal) 14. Bovendien is bij deze effectieve doses treosulfan lijkt meer toxische bijwerkingen bij muizen in vergelijking met busulfan (K. Peake, J. Manning, en C. Krieger, ongepubliceerde waarnemingen) hebben. Perifere bloed chimerisme kan ook worden vastgesteld door middel van generatie parabiotic muizen, die operatief betreft de koppeling van de circulatie van een ontvanger muis om een ​​donor muis. Unlike geheel BM transplantaties, parabiosis maakt perifeer bloed chimerisme in een meer fysiologische wijze worden vastgesteld zonder dat er BM-beperkte progenitorcellen in de circulatie, maar parabiosis een technisch uitdagend procedure die alleen resulteert in ~ 50% donorcellen in het peripheral bloed van de ontvanger muizen 15.

Het protocol hier beschreven berust op het gebruik ontvanger als donor muizen die hetzelfde geslacht, alsmede het gebruik van syngene ontvanger en donor muizenstammen, teneinde de mogelijkheid van transplantaatafstoting minimaliseren. Hoewel vele geschikte donor en ontvanger stammen zijn commercieel verkrijgbaar, vaststelling chimerisme mismatched allogene muizen (dwz sterk verschillen MHC haplotype) kan problematisch zijn. In gevallen waarin allogene muizen zijn de enige geschikte muizen, van een vooronderzoek moet eerst op een kleine groep van muizen uitgevoerd om te bepalen of busulfan conditionering kan leiden tot een hoge mate stabiele chimerisme. We hebben enig succes transplanteren donor BMDCs geïsoleerd uit C57BL / 6-GFP muizen in C57BL / 6 had, SJL ontvangers, maar niet alle getransplanteerde muizen gevestigd aanhoudende chimerisme (~ 30%). De toevoeging van cyclofosfamide, een sterk immunosuppressief middel vaak used in combinatie met busulfan klinisch 16, worden gebruikt om het succes van allogene transplantaten te verbeteren. Wanneer echter C57BL / 6-GFP cellen op een gemengde C57BL / 6 in een drievoudige transgeen muismodel van de ziekte van Alzheimer werden getransplanteerd; 129 genetische achtergrond, busulfan en cyclofosfamide conditionering onvoldoende genereren stabiele BM chimeren (Figuur 2B) waren, terwijl stabiel engraftment was mogelijk na letale bestraling. Voor de gevallen waarin allogene transplantaten nodig, bestraling kan een geschikt voorbereidende behandeling als gevolg van de volledige myeloablatie en ernstige immunosuppressie die optreedt.

Een aantal extra maatregelen moeten worden genomen om het chimerisme en de consistentie van dit protocol te maximaliseren. Het is cruciaal dat vers verdunningen van busulfan bereid voor injectie, ideaal vlak voor busulfan toediening en de potentie van busulfan lijkt gereduceerd met langdurigeopslag. Bovendien, wanneer tritureren de BM cellen dissociëren, is het belangrijk om zo zacht doen voorkomen dat de BM cellen beschadigen. Hoewel dit kan leiden tot enige klonten weefsel dat niet geheel losgemaakt, en dus een iets lagere opbrengst, de algehele gezondheid en kwaliteit van de gedissocieerde cellen beter zal zijn. Ook de eventuele stappen die resuspensie van de pellet vereisen, moeten ook voorzichtig worden gedaan.

Hoge niveaus van chimerisme consequent kan worden bereikt met 60, 80 en 100 mg / kg doses busulfan 7 (figuren 1 - 3). Bovendien is er een dosisafhankelijke toename van de accumulatie van GFP + cellen in het CZS van wildtype 8,9 en ALS muizen 7. Wij en anderen hebben ook waargenomen een toename van accumulatie GFP + cellen in het CZS van muismodellen van neurodegeneratie in vergelijking met wildtype muizen 7,8,10. Dodelijke bestraling resulteert in een nog groter aantal GFP + BMDCs vergeleken met 60-100 mg / kg doseringen van busulfan 7, hoewel een recente studie suggereert dat een myeloablatieve dosis busulfan (125 mg / kg) leidt tot een groter aantal GFP + cellen in de hersenen vergeleken met totale lichaamsbestraling 9. Aanwijzingen dat BMDC toegang tot het CZS van letaal bestraalde muizen kan te wijten, ten minste gedeeltelijk, om verstoring van de bloed-hersenbarrière (BBB). Hoewel busulfan lijkt niet de BBB verstoren gebaseerd op de afwezigheid van serumeiwitten (albumine) in het CZS 11, busulfan kan gemakkelijk passeren de BBB 17,18 en dus er is gesuggereerd dat busulfan conditionering openen niche ruimte in het CZS die vervolgens wordt gevuld door BMDCs 8. Interessant is dat de resultaten van Wilkinson et al. Suggereren dat de GFP + cellen accumuleren in het CZS busulfan geconditioneerde muizen door een chemokine recruitment mechanisme terwijl GFP + cellen accumulatie in lethaal bestraalde muizen blijkt het gevolg te inflammatory mechanismen die door de bestraling zelf 9. Treosulfan lijkt niet verzorgen de CNS en dus weinig GFP + cellen binnen het CZS van treosulfan geconditioneerde muizen 8. Het blijft te bepalen van het effect van verschillende doses busulfan kan hebben dan het CNS weefsels, hoewel busulfan is voor de lever, longen en nieren 6 richten. Dat busulfan kan conditioneren andere weefsels moeten in aanmerking worden genomen bij het kiezen van een dosis van busulfan voor nieuwe experimenten.

Hoewel deze busulfan conditionering protocol is relatief eenvoudig uit te voeren, het genereren van muizen met chimère BM is een krachtig instrument dat kan worden gebruikt om hematopoïetische cellen te onderzoeken. Het brede scala van transgene muizen in de handel verkrijgbaar, samen met de mogelijkheid om genetisch ingenieur muizen en BMDCs, drastisch verhoogt het potentieel van dit protocol. Bijvoorbeeld, verschillende muismodellen sprake wanneer GFP-expressie is beperkt totspecifieke celtypen en lineages, zoals CX3CR1-GFP muizen die GFP tot expressie voornamelijk in myelomonocytische afkomstcellen 19. Deze muizen kunnen worden gebruikt als donors waardoor het onderzoek van specifieke hematopoietische celpopulaties in vivo. Een aantal verschillende fluoroforen bestaan ​​ook naast GFP, die kan worden gebruikt om transplantatie en monitoren BMDCs twee (of meer) afzonderlijke donoren, een techniek die kan worden gebruikt voor competitie assays 20. Bovendien is een aantal verschillende transgene muismodellen voor de ziekte bestaan ​​die kunnen worden gebruikt als ontvangers voor de rol van BMDCs bij diverse aandoeningen te onderzoeken. Na de transplantatie, kunnen donor cellen worden geanalyseerd met behulp van immunohistochemie, of geïsoleerd door FACS en onderzocht met behulp van een reeks van biochemische technieken. Bovendien kunnen geavanceerde imaging technologieën, zoals twee-foton microscopie voor levend worden geïmplementeerd in vivo detectie van fluoroforen zoals GFP 21. Uiteindelijkwordt voorzien dat BMDCs genetisch kunnen worden gemanipuleerd en gebruikt om therapeutische moleculen leveren aan weefsels zoals de CNS-busulfan geconditioneerde ontvangers richten.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Busulfex Otsuka Canada Pharmaceutical Inc. DIN 02240602 Dilute busulfan to 3 mg/mL with sterile PBS just prior to use. Busulfan is cytotoxic. Handle and dispose according to the MSDS and institutional guidelines.
ACK Lysing Buffer Life Technologies A10492-01 Other lysis buffer could be substituted but incubation times may need to be adjusted accordingly
Fetal Bovine Serum Life Technologies 12483-020

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Ginhoux, F., et al. Fate Mapping Analysis Reveals That Adult Microglia Derive from Primitive Macrophages. Science. 330, (6005), 841-845 (2010).
  2. Hickey, W. F., Kimura, H. Perivascular microglial cells of the CNS are bone marrow-derived and present antigen in vivo. Science (New York, N. Y.). 239, (4837), 290-292 (1988).
  3. Duran-Struuck, R., Dysko, R. C. Principles of bone marrow transplantation (BMT): providing optimal veterinary and husbandry care to irradiated mice in BMT studies. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science: JAALAS. 48, (1), 11-22 (2009).
  4. Jimenez, M., Ercilla, G., Martinez, C. Immune reconstitution after allogeneic stem cell transplantation with reduced-intensity conditioning regimens. Leukemia. 21, (8), 1628-1637 (2007).
  5. Ellen Nath, C., John Shaw, P. Busulphan in blood and marrow transplantation: dose, route, frequency and role of therapeutic drug monitoring. Current clinical pharmacology. 2, (1), 75-91 (2007).
  6. Galaup, A., Paci, A. Pharmacology of dimethanesulfonate alkylating agents: busulfan and treosulfan. Expert Opinion on Drug Metabolism & Toxicology. 9, (3), 333-347 (2013).
  7. Lewis, C. -A. B., et al. Myelosuppressive Conditioning Using Busulfan Enables Bone Marrow Cell Accumulation in the Spinal Cord of a Mouse Model of Amyotrophic Lateral Sclerosis. PLoS ONE. 8, (4), e60661 (2013).
  8. Capotondo, A., et al. Brain conditioning is instrumental for successful microglia reconstitution following hematopoietic stem cell transplantation. Proceedings of the National Academy of Sciences. 109, (37), 15018-15023 (2012).
  9. Wilkinson, F. L., Sergijenko, A., Langford-Smith, K. J., Malinowska, M., Wynn, R. F., Bigger, B. W. Busulfan Conditioning Enhances Engraftment of Hematopoietic Donor-derived Cells in the Brain Compared With Irradiation. Molecular Therapy. 21, (4), 868-876 (2013).
  10. Lampron, A., Pimentel-Coelho, P. M., Rivest, S. Migration of bone marrow-derived cells into the CNS in models of neurodegeneration: Naturally Occurring Migration of BMDC into the CNS. Journal of Comparative Neurology. 3863-3876 (2013).
  11. Kierdorf, K., Katzmarski, N., Haas, C. A., Prinz, M. Bone Marrow Cell Recruitment to the Brain in the Absence of Irradiation or Parabiosis Bias. PLoS ONE. 8, (3), e58544 (2013).
  12. Ajami, B., Bennett, J. L., Krieger, C., McNagny, K. M., Rossi, F. M. V. Infiltrating monocytes trigger EAE progression, but do not contribute to the resident microglia pool. Nature Neuroscience. 14, (9), 1142-1149 (2011).
  13. Down, J. D., Tarbell, N. J., Thames, H. D., Mauch, P. M. Syngeneic and allogeneic bone marrow engraftment after total body irradiation: dependence on dose, dose rate, and fractionation. Blood. 77, (3), 661-669 (1991).
  14. Van Pel, M., van Breugel, D. W. J. G., Vos, W., Ploemacher, R. E., Boog, C. J. P. Towards a myeloablative regimen with clinical potential: I. Treosulfan conditioning and bone marrow transplantation allow induction of donor-specific tolerance for skin grafts across full MHC barriers. Bone Marrow Transplantation. 32, (1), 15-22 (2003).
  15. Ajami, B., Bennett, J. L., Krieger, C., Tetzlaff, W., Rossi, F. M. V. Local self-renewal can sustain CNS microglia maintenance and function throughout adult life. Nature Neuroscience. 10, (12), 1538-1543 (2007).
  16. Andersson, B. S., et al. Conditioning therapy with intravenous busulfan and cyclophosphamide (IV BuCy2) for hematologic malignancies prior to allogeneic stem cell transplantation: a phase II study. Biology of Blood and Marrow Transplantation. 8, (3), 145-154 (2002).
  17. Hassan, M., et al. Cerebrospinal fluid and plasma concentrations of busulfan during high-dose therapy. Bone Marrow Transplantation. 4, (1), 113-114 (1989).
  18. Hassan, M., et al. In vivo distribution of [11C]-busulfan in cynomolgus monkey and in the brain of a human patient. Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 30, (2), 81-85 (1992).
  19. Jung, S., et al. Analysis of Fractalkine Receptor CX3CR1 Function by Targeted Deletion and Green Fluorescent Protein Reporter Gene Insertion. Molecular and Cellular Biology. 20, (11), 4106-4114 (2000).
  20. Harrison, D. E. Competitive repopulation: a new assay for long-term stem cell functional capacity. Blood. 55, (1), 77-81 (1980).
  21. Evans, T. A., et al. High-resolution intravital imaging reveals that blood-derived macrophages but not resident microglia facilitate secondary axonal dieback in traumatic spinal cord injury. Experimental Neurology. 254, 109-120 (2014).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics